LUCRAREA PRACTICA NR.

5
DOZAREA
HEMOGLOBINEI.
DETERMINAREA
HEMATOCRITULUI. INDICI ERITROCITARI. VITEZA DE
SEDIMENTARE A HEMATIILOR (VSH). METODE DE
DETERMINARE. VARIATII FIZIOLOGICE SI PATOLOGICE.
BULETINE DE ANALIZA SI INTERPRETARE

DETERMINAREA HEMOGLOBINEI
Hemoglobina (Hb) este o hemoproteina alcatuit dintr-o
component proteic globina i o grupare prostetic hemul, acesta din
urm fiind o metaloporfirin ce conine fier bivalent. n mod normal, n
eritrocite se gsete hemoglobina sub urmtoarele forme:
oxihemoglobina, hemoglobina redus i n cantiti foarte mici
carboxihemoglobina i methemoglobina.
Hemoglobina se poate determina cantitativ sau calitativ.
1. DETERMINRI CANTITATIVE
Deoarece hemoglobina se obine foarte greu n stare pura , pentru
dozarea ei se folosesc metode care o msoar indirect.
Metodele de determinare pot fi clasificate astfel:
1. Gazometrice O2 ( Van Slyke) , ( 1 g Hb = 1,34 ml O2 )
- CO
2. Densimetrice ( Van Slyke)
3. Chimice ( dozarea fierului : 1 mg Fe =0,288 g Hb )
4. Colorimetrice:
a. hematina alcalin (King)
- acid ( Sahli ,Fisher)
b. oxihemoglobina ( Hellinge, Colleman)
c. hemoglobina redus ( Heilmeyer )
d. cianhematina
e. cianmethemoglobina ( Drabkin )
f. spectrofotometrice ( Atlas, Colleman, Beckman )
Metoda Sahli ( colorimetrie vizual )
Principiul metodei

Hemoglobina ,n prezena acidului clorhidric N / 10 se transform n

clorhidrat de hematin a carei culoare brun va fi comparat cu cea a unui
etalon (standard) .

1.
2.
3.
4.

5.
6.
7.
8.

Materiale necesare
hemoglobinometru Sahli alctuit din :
suport de ebonit ;
doua baghete de sticl colorat cu rol de etalon ( culoarea
corespunde unei soluii de clorhidrat de hematin 1% obinut
dintr-un snge al carui coninut n Hb este de 16% n 100ml) ;
eprubeta de dozare prezint doua tipuri de gradaii : pentru
exprimarea procentual ( uniti Sahli ) i n grame Hb% .
Suportul de ebonit are un perete posterior de sticl alb mat
facilitnd compararea culorilor . Aparatului i sunt anexate :
a. pipeta capilar pentru recoltarea sngelui cu volumul
de 0,02ml (20mm cubi ) ;
b. pipeta pentru ap distilat ;
c. bagheta de sticla pentru omogenizare ;
acidclorhidric N/10;
ap distilat ;
ace sterile ,vat , alcool.
Tehnica de lucru
Se pipeteaz n eprubeta de dozare a aparatului Sahli acid
clorhidric N/10 pn la diviziunea 10% ( 2 g ) ;
Se recolteaz snge capilar ( 0,02 ml) cu ajutorul pipetei de
hemoglobin ;
Se terge partea extern a pipei;
Se introduce vrful pipetei n fundul tubului gradat i se sufl
sngele din pipet , n acidul clorhidric ,uor, fr a se forma bule
de aer;
Se cltete pipeta prin splare de 2-3 ori cu HCl din eprubeta de
dozare ;
Se agit eprubeta pentru a se omogeniza amestecul;
Se las n repaus 3-5 min., timp n care produce hemoliza total i
formarea clorhidratului de hematin de culoarea brun ;
Se dilueaz treptat amestecul , prin pipetarea apei distilate ,pna la
obinerea identitii de culoare cu etalonul;compararea i citirea
(meniscul inferior) se face n lumin, pe fondul alb realizat de
sticla mat .

V.N. =

Brbai...13 17 g%
Femei...12 16 g%

Indicatii:
- impreuna cu Ht si numarul de eritrocite, in diagnosticarea si
monitorizarea anemiei sau policitemiei
Valori patologice:
1. Scaderea hemoglobinei: se evalueaza impreuna cu numarul de
eritrocite si hematocritul- anemie
2. Cresterea hemoglobinei in policitemie
Hemoglobina scade n anemii(sub12 g%)
Hemoglobina creste in poliglobulii sau policitemii(peste 17 g%)

DETERMINAREA HEMATOCRITULUI (Ht)

Hematocritul reprezinta raportarea procentuala a volumului
eritrocitar fata de cel al sangelui integral. In practica, pentru determinare
se separa sangele recoltat pe anticoagulant prin centrifugare in cele doua
componente, eritrocite si plasma,si se evalueaza raportul dintre ele.
Metoda Macrohematocritului
HT=VG/VST x 100
Materiale necesare:
-sange venos, 1,8ml , recoltat pe anticoagulant;
-tuburi de hematocrit Wintrobe,din sticla, cu fund plat,de 100 mm
lungime si 2,5-3mm diametru,divizate in 100 de parti egale( 0-100 );
-centrifuga;
- materiale necesare recoltarii sangelui prin punctie venoasa;
- pipete Pasteur.
Tehnica de lucru
Sangele facut incoagulabil este introdus intr-un tub Wintrobe (pana
la diviziunea 100) cu ajutorul unei pipete Pasteur si centrifugat la 3000
turatii/min. , timp de 30 minute. Dupa centrifugare, continutul tubului va
avea urmatorul aspect: coloana eritrocitara va fi dispusa spre fundul
tubului (recunoscuta cu usurinta dupa culoarea rosie), plasma(galbenacitrin) va fi situata deasupra coloanei celulare, iar in limita de separare
dintre cele doua se va observa un strat subtire cenusiu-rosiatic, format din
leucocite si trombocite, care insa nu depaseste 1% din total. Aceasta
dispozitie in trei straturi dupa centrifugare si la ordinea mentionata mai
sus este dictata de densitatile diferite ale plasmei(1030),
eritrocitelor(1090), leucocitelor si trombocitelor.

Se citeste valoarea exprimata in procente a inaltimii pachetului de

eritrocite, inaltimea coloanei de sange fiind de 100%.
Cifra obtinuta reprezinta valoarea aproximativa a hematocritului
venos,pentru obtinerea valorii reale fiind necesare cateva corectii.
Valoarea reala a hematocritului venos va fi data de formula:
V.N. = 36 50%
Hematocritul scade real n anemii(apare datorit scderii
vol.globular), dupa hemoragii (faza II), stri caectice, ciroze i aparent
dup perfuzii cu plasm sau substitueni, hiperhidratare (prin
hemodilutie)(crete vol. sanguin total).
Hematocritul este normal in hemoragii (faza I), dupa transfuzii cu
snge integral, HTA.
Hematocritul crete aparent n hemoconcentraie (diaree,
vrsturi ,deshidratri- scade vol.sanguin total) i real n
poliglobulii(crete vol. globular).

Indicatii:

Pentru
stabilirea
diagnosticului
de
process
inflamator( infectii, traumatisme, neoplasme, arsuri, leucemii,
tuberculoza)
- Este un test nespecific de inflamatie
boli autoimune, discrazii sanguine
- monitorizarea evolutiei si tratamentului unui sindrom inflamator,ca
de exemplu- arterita temporala, polimialgie reumatica, artrita
reumatoida, reumatism articular acut, lupus eritematos sistemic,
boala Hodgkin, tuberculoza, endocardita bacteriana
Variatii patologice:
1. VSH crescut indica un proces de infectii sistemice
Boli de colagen: poliartrita reumatica
Infectii, pneumonii, sifilis, tuberculoza, endocardita
bacteriana subacuta, osteomielita
Boli inflamatorii: boala inflamatorie pelvina acuta, guta,
artrita
Boli neoplazice, metastaze, leucemii
Boli renale cu azotemie nefrita, nefroza
Cresterea imunoglobulinelor serice, mielom multiplu,
macroglobulinemie
Intoxicatii acute cu metale grele
Traumatisme
Necroze tisulare, infarct miocardic acut, postoperator
Toxemie, hipo-/hipertiroidism
Anemie acuta sau in bolile cronice
2. VSH scazut:
Policitemia vera