Reguli de protecie a muncii n laboratorul de microbiologie

n laboratorul de microbiologie se lucreaz cu material infecios:

Pentru a preveni rspndirea germenilor din materialul infecios, precum si pentru a evita
suprainfectarea acestor materiale cu germeni strini, trebuie respectate anumite reguli de ordine
interioar:
Este strict interzis accesul persoanelor strine n laborator
Intrarea n laborator si participarea la lucrrile practice se va face numai dup
audierea si nsusirea regulilor de protecie a muncii (dovedit prin semntur pe un proces
verbal)
Intrarea n laboratorul de microbiologie necesit purtarea obligatorie a echipamentului de
protecie (halat cu mneci lungi). Se recomand ca echipamentul de protecie s fie pstrat
separat de hainele utilizate n exterior.
Toate produsele biologice vor fi considerate ca potenial infectante.
Consumarea de alimente si buturi, ducerea minilor la fa n timpul lucrului, fumatul n
laborator sunt strict interzise.
Este interzis introducerea n gur a oricrui obiect din laborator.
Este interzis aducerea n laborator a obiectelor de uz personal:
ohainele, servietele, genile, vor fi lsate n vestiarul special amenajat
oeste permis aducerea n laborator a materialelor de scris si a lucrurilor de
valoare, acestea din urm fiind asezate n laborator n locuri special amenajate.
Este interzis intrarea n laborator n lipsa unui cadru didactic
Nu este permis fuga sau mersul rapid prin laborator
Lucrul n laboratorul de microbiologie implic contact cu material infecios! Pentru a
preveni accidentele de lucru, este necesar urmarea strict a metodelor de lucru si a regulilor de
dezinfecie si antisepsie:
onsmnrile se fac la flacr, flambndu-se gtul recipientelor la deschidere si
la nchidere
oansa si acul de platin se sterilizeaz nainte si dup folosire prin nclzire la
rosu, iar portansa se va flamba
opipetele si lamele de sticl contaminate nu se vor decontamina la flacr, ci se
scufund dup folosire n recipiente cu soluie dezinfectant existente la
mijlocul fiecrei mese. Tot n aceste recipiente se vor introduce lamele si
lamelele de sticl folosite
opipetarea cu gura este interzis. n vederea pipetrii se vor folosi dispozitive de
pipetare adecvate
ocutiile Petri, eprubetele, sau alte recipiente si materialele contaminate se
introduc dup lucru n gleata de infecte care va fi autoclavat
omanipularea aparatelor se va face respectnd instruciunile de folosire specifice
oatenie la manipularea substanelor caustice si inflamabile
on cazul rspndirii accidentale a materialului infecios, va fi anunat cadrul
didactic care conduce lucrrile si care va indica msurile de dezinfecie

Dup terminarea lucrului minile se antiseptizeaz prin introducerea lor ntr-o substan
antiseptic (cloramin, bromocet) pentru cteva minute, apoi se spal cu ap cald si spun.
Fiecare student are obligaia de a-si supraveghea spaiul de lucru, pstrnd ordinea si
curenia:
ofiecare student si va alege locul de lucru la nceputul primei lucrri practice,
loc pe care si-l va pstra pn la ncheierea semestrului/anului universitar
oorice alterare a suprafeei de lucru sau a diferitelor obiecte adiacente spaiului
de lucru propriu produs exclusiv din vina studentului, va fi penalizat prin
amend si/sau absen nemotivat n ziua respectiv
oorice alterare existent a zonei de lucru va fi consemnat cadrului didactic la
nceputul lucrrii practice

RECOLTAREA I MANIPULAREA PROBELOR BIOLOGICE I

PATOLOGICE ( SNGE, URINA, MATERII FECALE, LCR, EXSUDAT)
Informaii generale
Recoltarea i transportul produselor patologice, etape ale diagnosticului microbiologic, sunt
efectuate de catre medicul clinician i/sau asistent. Rezultatele investigaiilor microbiologice
depend n mare masur de calitatea recoltrii.
Ghidul trebuie cunoscut si respectat de intreg personalul deoarece rezultatul primit de la
laborator reflect calitatea recoltarii. In plus, la recoltare se va ine cont i de urmtoarele
aspecte:
- recoltarea se face dupa o prealabil pregatire a pacientului; pacientul trebuie s fie informat n
legatu cu analiza ce urmeaza a se face i cu modul corect de recoltare;
- recipientele pentru recoltare sunt sterile, de unic folosinta i adaptate investigaiei;
- se recolteaz produsul patologic naintea administrarii antibioticului;
- se recolteaz din zone i n momentul n care este cel mai probabil a gsi bacteria care a produs
infecia;
- probele trimise la laborator trebuie s reprezinte realul produs patologic (ex.: sputa, nu saliva
etc);
- se recolteaz o cantitate suficient de produs patologic;
- n seciile din spital suprafaa pe care sunt puse recipientele cu produse patologice va fi total
separat de masa de tratament;
- este obligatorie prezenta n locurile de recoltare a containerelor cu perei rigizi pentru
depozitarea
temporar a deeurilor nepatoare;
- exteriorul recipientului trebuie dezinfectat dac a fost contaminat n timpul recoltrii;
- se noteaz pe recipient numele pacientului i proveniena sa, tipul produsului patologic, data i
ora
recoltrii;
- fiecare produs patologic va fi insoit de un buletin ce conine informaii despre proba recoltat
i
pacient (vezi cererea de analize pentru microbiologie);
- transportul se face cat mai repede la laborator pentru a preveni degradarea produsului patologic;
- se vor folosi medii de transport care asigura o bun supravieuire a bacteriilor.

Mai jos sunt sintetizate modul de recoltare si transport al celor mai frecvente produse
patologice, in functie de situsul anatomic.
1. Abces deschis:
- mod de recoltare - dezinfectati cu alcool etilic 70% sau betadina. Daca este necesar, irigai
leziunea cu o soluie salin non-inhibitorie. Aspirai cu o seringa steril (de preferat) sau profund
din leziune cu un tampon steril.
- cantitate - > 1 ml sau 2 tampoane din acelai loc.
- transport - < 2 ore.
- observaii - se recomand recoltarea cu seringa steril prin aspiraie sau biopsie. Dac se
recolteaz cu tamponul, este obligatorie recoltarea a dou tampoane din profunzimea leziunii (1
tampon pentru nsmanare i 1 tampon pentru frotiul Gram). Se va folosi mediul de transport
Stuart sau Amies. Sistemul anaerob de transport este obligatoriu pentru a asigura supravietuirea
bacteriilor anaerobe implicate n procesul infectios. Aceleai recomandri la recoltare se aplic
pentru: vezicule, pustule, plgi, furuncule, arsuri, ulcere de decubit, fistule etc.
2. Abces nchis:
- mod de recoltare - aspirai cu o seringa sterila. Transferai imediat tot materialul intr-un sistem
anaerob.
- cantitate - > 1 ml.
- transport - < 2 ore, sistem anaerob de transport.
- observaii - n caz de gangren se recolteaza i hemocultura n acelai timp.
3. Cavitate bucal:
- mod de recoltare - curatai cu grij marginea gingiei i suprafaa dintelui, pentru a ndeprta
saliva i resturile alimentare. Folosii un scaler periodontal i indeprtai secreia din leziuni.
Transferai aseptic ntr-un sistem anaerob de transport.
- transport - sistem anaerob de transport < 2 ore.
- observaii - leziunile periodontale trebuie procesate numai n laboratoarele dotate pentru
izolarea si identificarea agentilor specifici.
4. Exsudat nazal:
- umeziti tamponul in ser fiziologic steril. Inserati 2 cm si rotiti tamponul.
- cantitate - un tampon pentru fiecare nara.
- transport - < 2 ore.
- observatii - exsudatul nazal este recomandat in principal pentru depistarea purtatorilor de
Stafilococcus aureus.
5. Exsudat faringian:
- mod de recoltare - deprimati baza limbii cu un apasator steril. Stergeti cu tamponul ferm, dar nu
brutal, amigdalele si peretele posterior al farigelui - zone inflamate, ulcerate, depozite purulente.
- cantitate - un tampon.
- transport - < 2 ore.
- observatii - recoltarea se face inainte de ingestia alimentelor sau toaleta cavitatii bucale. Se
evita atingerea tamponului de baza limbii sau palatul moale. Se va preciza in biletul de trimitere
suspiciunea clinica de candidoza. Se recolteaza doua tampoane de la nivelul depozitului
pseudomembranos. Se va preciza in biletul de trimitere suspicinea clinica de angina si stomatita
Vincent. Se vor recolta doua tampoane din acelasi loc. Se va preciza in biletul de trimitere daca
identificarea S.aureus este in scop epidemiologic (purtator).
6. LCR:

- mod de recoltare - dezinfectati cu betadina, 3 badijonari succesive; respectati timpul de actiune

al antisepticului.
- transport - < 15 minute.
- observatii - se recolteaza concomitent si hemocultura.
7. Materii fecale - Coprocultura:
- mod de recoltare - coprorecoltor cu mediul de transport CARY BLAIR.
- cantitate - 5-10 g.
- transport - < 1 ora (daca nu se recolteaza in recipient cu mediul Cary Blair).
- observatii - recoltarea se face inaintea inceperii tratamentului cu antibiotice. Din scaunul
proaspat emis se recolteaza portiuni cu mucus, sange. Cand acestea lipsesc, se recolteaza boluri
fecale din trei locuri diferite. Prelevare cu sonda Nelaton: se adapteaza o seriga cu care se fac 1-2
aspiratii. Tampon rectal: tamponul se umezeste in solutie salina izotona (nu geluri lubrifiante!),
se introduce prin sfincterul anal 1,5 cm prin rotire lenta. Mentionati suspiciunea clinica pentru
care solicitati coprocultura.
8. Ochi - conjunctiva:
- mod de recoltare - cate un tampon separat pentru fiecare ochi. Tamponul este umezit in ser
fiziologic steril. Rotiti tamponul si insamantati-l direct pe mediile de cultura.
- transport - insamantare directa pe mediile de cultura (chocolate, gelozasange), frotiuri pentru
examenul microscopic direct. Placile insamantate se trimit la laborator < 15 min.
- observatii - se recolteaza inainte de: toaleta fetei, terapie antimicrobiana topica sau sistemica.
Se recolteaza de la nivelul ambelor conjunctive. Ochiul neinfectat serveste drept control.
Insamantarea se face imediat, majoritatea germenilor avand viabilitate redusa.
9. Ochi - cornee:
- mod de recoltare - raclat din mai multe arii ale ulcerului cornean. Solutie anestezic local.
- transport - nsamnare direct pe mediile de culturi (BHI, chocolate), frotiuri pentru examenul
microscopic direct. Placile nsamantate se trimit la laborator < 15 min.
10. Sange - hemocultura:
- mod de recoltare - dezinfectati locul venopunctiei cu betadina, 3 badijonari succesive,
concentric, din centru spre periferie. Permiteti antisepticului sa actioneze. Nu palpai locul
venopunctiei. Indeprtai iodul cu alcool 70%.
- transport - flacoane pentru sistemul automat (ex.: BactAlert). Dezinfectai capacele de cauciuc
cu alcool 70%. Inoculai fiecare flacon fr a depasi semnul de pe eticheta. Transportati imediat.
- observatii - Sepsis acut: 3 seturi, 3 venopunctii separate, la interval de 10 minute, inainte de a
incepe antibioticoterapia. Endocardita acuta: 3 seturi, 3 venopunctii separate in primele 1-2 ore
de evolutie; incepeti terapia. Endocardita subacuta: 3 seturi, 3 venopunctii separate la interval de
15 minute in prima zi. Daca rezultatul la 24 ore este negativ, recoltati inca trei seturi. Endocardita
n timpul tratamentului cu antibiotice: 3 seturi, 3 venopunctii separate, zilnic, 3 zile succesiv. Se
recolteaza imediat inaintea inceperii urmatoarei doze de antibiotic. Nu se recolteaza cand
concentratia serica a antibioticului este maxima.Febra de origine necunoscuta: 2-3 seturi,
venopunctii separate la cel putin o ora interval. Daca rezultatul la 24-36 ore este negativ, se
repeat recoltarea. NU SE RECOLTEAZA DE LA NIVELUL CATETERULUI !!!
11. Sputa:
- mod de recoltare - se va efectua periajul dinilor, cltirea energic a gurii i gargar cu ap.
Pacientul tueste i expectoreaz ntr-un recipient steril (cu gatul larg si cu un capac care se
inchide ermetic).
- cantitate - > 3 mL.

- transport - < 2 ore.

- observatii - se recolteaza sputa sub directa indrumare a asistentei. Se explica pacientului
diferenta dintre a expectora si a scuipa. Sputa se recolteaz dimineaa cnd pacientul face
toaleta bronhiilor.
12. Secreie traheal:
- mod de recoltare - secretie aspirat n recipient steril.
- cantitate - > 3 mL.
- transport - < 2 ore.
- observatii - se aspira cu ajutorul unei sonde de unica folosinta, atraumatic, aseptic. Se va
efectua preoxigenarea bolnavului cu fracie inspiratorie Fi O2 = 1, timp de trei minute.
13. Ureche - secreie otica interna:
- mod de recoltare - timpan perforat: se colecteaza fluidul cu un tampon flexibil cu ajutorul unui
speculum auditiv.
- cantitate - tampon cu mediu de transport sau sistem anaerob. Obligatoriu se recolteaza dou
tampoane din acelasi loc.
- transport - < 2 ore.
- observatii - in cazul secretiei aspirate sau biopsiei se foloseste sistemul de transport anaerob.
Culturile de la nivel nazofaringian sau exsudat faringian nu sunt predictive pentru agenii
etiologici n otita medie.
14. Ureche - secretie otica externa:
- mod de recoltare- cu un tampon umezit se cur conductul auditiv extern. Cu un al II-lea
tampon se recolteaz prin rotire ferm.
- cantitate - obligatoriu se recolteaza 2 tampoane.
- transport- < 2 ore.
- observaii - pentru secreia otic extern se va efectua rotirea riguroas a tamponului.
15. Urina - urocultura:
- mod de recoltare - toaleta locala riguroas cu apa i sapun. Splai minile. Recoltai din jetul
mijlociu, fr intreruperea fluxului. Nu contaminai recipientul.
- transport - recipient steril cu gtul larg (exclus eprubete), se transporta n < 2 ore.
- observaii - prima urina de dimineata sau la cel putin 4 ore de la ultima miciune; naintea
nceperii tratamentului cu antibiotice. In cazul urmririi eficienei tratamentului cu antibiotice,
recoltarea se repet dupa 48-96 ore. Dat fiind intermitena n eliminare, se recomand 3 recoltari
succesive. Controlul se va efectua dupa 3-5 zile de la ntreruperea tratamentului.
16. Urina - cateter vezical:
- mod de recoltare - dezinfectati cu alcool 70% capatul distal al cateterului. Recoltati cu ac si
seringa sterile.
- cantitate - 5 mL.
- transport - < 1 ore (urocultor steril).
- observaii - mentinerea sistemului de drenaj n circuit nchis. Nu se desface jonctiunea cateter
tub drenaj pentru recoltare. Nu se colecteaz din sacul colector pentru urocultur. Din sering se
trece urina n urocultor n condiii aseptice.
17. Tract genital feminin - vaginite:
- mod de recoltare - secretia acumulata n fundul de sac vaginal posterior este detasat cu ajutorul
unei valve.
- cantitate - 3 tampoane i 2 lame.
- transport - < 2 ore.

- observaii - in cazul suspiciunii infectiei cu Trichomonas vaginalis, un tampon se imerseaz n

tub steril cu 1 ml soluie salin izoton (37C), pentru examen microscopic (preparat proaspat
ntre lam-lamel).
18. Tract genital feminin - endocervicite:
- mod de recoltare - stergei suprafata exocolului cu 2-3 comprese sterile pentru a indeparta
secretiile stagnante. Recoltati prin rotirea usoara a 2 tampoane introduse succesiv in endocol.
- cantitate - un tampon si 2 lame - sistem anaerob de transport.
- transport - < 2 ore.
- observatii - tamponul cu mediul de transport se foloseste pentru insamantare. Lamelele se
folosesc pentru examenul microscopic colorat.
19. Tract genital feminin - bartolinite:
- mod de recoltare - prelevati secretia purulenta de la nivelul orificiului conductului glandular.
- cantitate - > 1 mL.
- transport - sistem anaerob.
20. Tract genital feminin - endometrite:
- mod de recoltare - badijonati cu alcool iodat exocolul si canalul cervical; introduceti un cateter;
aspirati lichidul endometrial.
- observatii - puroiul aspirat prin punctie (abces) se insamanteaza pe medii aerobe si anaerobe.
21. Tract genital masculin - uretra:
- mod de recoltare - prelevati pe tampon scurgerea uretrala spontana sau provocata. Prelevati
intrauretral cu tamponul: introduceti bland tamponul, rotiti-l, lasati-l doua secunde si retrageti-l.
- cantitate - tampon cu mediu de transport - doua lame pentru examenul microscopic.
- transport - < 2 ore.
- observaii - examinarea uretrei i prelevarea probelor se fac la cel puin dou ore dup miciune.
Pacienii cu scurgere discret vor reduce lichidele pan n ziua urmatoare i prelevarea se face
inainte de miciunea matinal. In cazul suspiciunii infeciei cu Trichomonas vaginalis, prelevarea
se va face naintea miciunii matinale; tamponul se imerseaz n tub steril cu 1 ml soluie salin
izoton (37C), pentru examen microscopic fr ntrziere. Probele destinate cultivrii
gonococilor se nsamanteaz imediat pe medii speciale, la 37C.
22. Tract genital masculin - prostata:
- recoltati secretie pe tampon sau in recipient steril.
- cantitate - tampon cu mediu de transport - doua lame pentru examenul microscopic.
- transport - < 2 ore.
- observatii - sunt relevante probele obtinute imediat inainte si dupa masajul prostatic.