Cursul 7

16.11.2011

ENZIME
Caracteristici generale ale enzimelor
nsuiri caracteristice enzimelor
Complexul ES
Centrul activ al enzimelor

Caracteristici generale ale

enzimelor

Ce sunt enzimele ?
catalizatori ai reaciilor chimice din
organismele vii

nsuirile comune cu catalizatorii

acioneaz n concentraii foarte mici;
nu se consuma n cursul reaciei;
nu modific constantele de echilibru ale reaciilor
pe care le catalizeaz;
grbesc numai atingerea strii de echilibru
pentru reaciile termodinamic posibile.

nsuiri caracteristice enzimelor

A.Sunt macromolecule proteice
B. Au eficien catalitic mult mai mare
C.Au specificitate
D. Activitatea lor poate fi reglat

A.Cu excepia ribozimilor (ARN)

enzimele sunt invariabil

proteine

 Structur:
a. enzime cu structura strict proteic:
ribonucleaza
chimotripsina
lizozimul din mucusul nazal i lacrimi;

b. enzime cu structura heteroproteic:

parte proteica numit apoenzim

partea neproteic numit cofactor:

coenzim = component neproteic organic,
legat slab necovalent de apoenzim;
grupare prostetic = component organic
legat puternic de apoenzima (ex. hemul)
metal- legat permanent sau temporar

B.Enzimele asigur viteze mari reaciilor

reaciile enzimatice sunt de 106 - 1012 ori mai rapide ca cele neenzimatice
a.hidratarea CO2 este catalizat de anhidraza carbonic , cea mai
activ enzim:

105 molecule/ secund

CO2 + H2O

reacia este de 107

H2CO3

ori mai rapid dect reacia necatalizat

b.descompunerea H2O2 catalizat de Fe3+ i de

catalaz:

2 H2O2

2 H2O + O2

activitatea catalazei este de

mare ca a Fe3+

2x10 6 ori mai

C.Specificitate
1. de reacie
2. de substrat:

-absolut
-relativ: -de grup
-mai larg

3. stereospecificitate

1.Specificitate de reacie
Substrat + Reactant
clasificarea enzimelor:
Oxido-reductaze;
Transferaze;
Hidrolaze;
Liaze;
Ligaze.

Produi

2.Specificitate de substrat
(selectivitate n alegerea substratului)
a.Specificitate absolut
E utilizeaz ca S un singur compus chimic:
-ureaza catalizeaz hidroliza ureei:

H2 N

CO

NH2 + 2 H2O

CO2 + 2 NH3

-acetilcolinesteraza catalizeaz hidroliza esterului colinei cu acidul

acetic:

H3 C COO CH2 CH2

H2O

N+(CH3 )3
-anhidraza carbonic

H3 C COOH + H2 C
HO

CH2
N+(CH3 )3

b.Specificitate relativ:
de grup
E catalizeaz un tip de reacie pentru o familie de compui

R CH2 OH

Alcool dehidrogenaza
NAD+

R CH

NADH + H+

Enzima are afinitate mare pentru alcoolul etilic

Vitamina PP
CONH2

CONH2

COOH

O
N
Acidul nicotinic
(niacina)

N
Amida acidului nicotinic
(niacinamida)

H2 C

O-

OH OH

O
O

NH2
N

P O
O

H2 C

OH OR
Nicotinamid-adenin dinucleotid (NAD+)

(R = H formeaz NAD+ ; R = -PO3H2 formeaz NADP+)

b.Specificitate relativ
mai larg
Glicozidazele

HO

CH2-OH
O

CH2-OH
O

OH

HO
CH2-OH
O

CH2-OH
O
O

OH

OH

(H, OH)

OH

OH

OH

(H, OH)

OH

OH

CH2-OH
O
OH

HO

HOH2C
2

OH

O
H

HO

CH2 OH

O
HO

Proteazele

Pepsin
NH CH CO

NH CH CO

R2

R3

R3 = fenilalanin, tirozin
metionin, leucin

Tripsin
NH CH CO

NH CH CO

R2

R3

R2 = lizin, arginin

Chimotripsin
NH CH CO

NH CH CO

R2

R3

R2 = Phe, Tyr, Trp

Carboxil esterazele

O
R

C
O

R1

3.Specificitate stereochimic
Enzimele disting
-un enantiomer levogir de cel dextrogir;
-un izomer cis de cel trans.
COOH
HO

Lactat dehidrogenaza

CH3
Acid L-lactic

COOH
C

NAD+

NADH + H+

CH3
Acid piruvic

COOH
CH2

succinatdehidrogenaza

C
C

CH2
COOH
Acid succinic

COOH

FAD

FADH2

HOOC

Acid fumaric

acidul maleic (izomerul cis) nu se obine nici n urme:

Vitamina B2
Conine heterociclul numit izoaloxazin NH

CH2
H3C

H3C

CH CH CH CH2 O

P O

OH OH OH

O-

O-

O H2 C

N
O

N
N

OH OH

NH

adenozin

O
lumicrom
lumiflavin
riboflavin

(H)
(H)
(H)

flavin adenin mononucleotid (FMN)

flavin adenin dinucleotid (FAD)

(OH)
(H)

adenozin 5`-monofosfat
(AMP)

 6.Activitatea catalitic a enzimelor poate fi

modulat de anumii ageni reglatori.

Centrul activ al enzimelor

reprezentare reacii enzimatice :

E + S

ES

E + Produsi

Ce este centrul activ al enzimelor ?

Enzimele sunt macromolecule
care prezint
Centrul activ = entitate tridimensional
unde se leag substratul

 Centrul activ al enzimelor =

o regiune restrns din protein
cu structur
chimic i
geometric
bine determinate

Cine confer structura Centrului Activ ?

natura resturilor aminoacidice i
organizarea secundar,
teriar i
cuaternar a proteinei.

Centrului activ al chimotripsinei

S
A
S

B
S S
-chimotripsina contine 5 legturi disulfurice

His - 57 din lanul B;

Ser - 195 din lanul C;
Asp - 102 din lanul B.

S
C
S

Structura tridimensional a chimotripsinei

Triada Asp-His-Ser

 Centrul activ
conine resturi aa
ce creaz o entitate tridimensional
complementar cu substratul

Centrul activ al enzimelor

centru de legare prezint resturi aminoacidice care
asigur legarea substratului
centru catalitic prezint resturi aa responsabile de
catalizarea propriu-zis
Resturile de aa din situsurile catalitice ale enzimelor
sunt: Cys, Ser, His, Tyr, acid Glu i Asp, Lys cu
gruprile funcionale:
OH,

SH,

NH3+,

COO-

HN

NH

imidazol

Complexul enzim substrat

(ES)
structuri labile, cu o via foarte scurt
ntre E i S se stabilesc:
- fore necovalente (puni de hidrogen,
interaciuni hidrofobe, interaciuni electrostatice)
sau
-covalente reversibile
Complementaritatea chimic i geometric
determin legarea E-S

Modelul clasic (lact cheie)

al CA al enzimei n raport cu structura substratului,
propus de Emil-Fischer

Substrat

Enzim
Modelul lact cheie

Este un model rigid.

Complexul ES

Modelul dinamic centrul indussau

complementaritate indus,
produs de Koshland, este acela de mna n mnu

Modelul indus presupune o flexibilitate a

zonei n care se afl centrul activ

Substrat

Complexul ES
Enzim
Modelul centrului indus

 Curs 8

23.11.2011

energia liber de activare

Factori care influenteaza activitatea enzimelor
Ecuatia Michaelis Menten
Ec LB
Inhibitia activitatii

Cum acioneaz enzimele ?

Mecanismul de aciune privit din 2 perspective:
modificarea energiei n timpul reaciei;
rolul centrului activ n realizarea catalizei din punct
de vedere chimic

 Ce este energia liber de

activare ?

 Toate reaciile chimice sunt nsoite de variaii

ale energiei
In organismele vii temperatura i presiunea ==
constante

Energia liber de reacie G caracterizeaz reaciile

din lumea vie

 Reaciile posibile termodinamic decurg cu

scderea energiei libere a reactanilor
Gprodui Greactani <0

reacie exergonic, G<0

reacie endergonic, G>0

Cum se modific energia n timpul reaciei ?

Virtual, toate reaciile chimice au o barier energetic ce separ
rectanii de produi

Aceast barier numit energie liber de activare este

diferena dintre energia reactanilor i energia intermediarului
care se produce n timpul formrii produsului.

A
T
B

Energia liber

Energia liber de activare

a reactiei (necatalizate)

Stare de tranzitie
(reactie necatalizat)

Stare initial

Stare de tranzitie
(reactie catalizat)

Energia liber de activare

a reactiei (catalizate)

Reactanti A + B

Energia total
eliberat

Stare final
Produsi C + D

Durata reactiei

 Enzima nu modific energia liber a reaciei

catalizate (G0), a reactanilor sau produilor, i deci
nu modific echilibrul reciei (constanta de echilibru)

Enzima furnizeaz o cale de reacie alternativ, prin

micorarea energiei libere de activare (ca urmare
a micorrii entropiei substratului)

Formarea strii de tranzitie

Mecanisme chimice folosite de centrul

activ pentru a transforma

Substrat

Produi

 Centrul activ al E stabilizeaz starea T* a

substratului

Cataliza covalent

Enzime care formeaz intermediari covaleni enzim-substrat:

Clasa serinei
Tripsina, Chimotripsina, Elastaza, Acetilcolinesteraza

Clasa cisteinei
Gliceraldehid 3P-dehidrogenaza, Papaina

Clasa histidinei
Glucozo 6-fosfataza, Succinil~CoA sintetaza

Clasa lizinei
D-aminoacid oxidaza, Transaldolaza

Triada Asp-His-Ser

Cataliza acido-bazic
Enzimele conin grupri funcionale care pot
aciona ca donori sau ca acceptori de protoni:
amino, carboxil, sulfhidril, imidazol, hidroxilul
fenolic.

hidroliza esterilor carboxilici i fosforici, reacii de

izomerizare

Glucozo-6-fosfat izomeraza

Exist un factor de tensiune n cataliza

enzimatic ?

 legarea S la E poate deforma att enzima ct i

substratul
centrul activ al unor enzime este relativ nepolar

Cinetica enzimatic
Cinetica studiaz reaciile chimice:
desfurarea n timp a reaciei;
factori care influeneaz viteza reaciilor;
etapele intermediare prin care trec
reactanii pn devin produi.

 Cum caracterizm cinetic o reacie

chimic ?

 Prin viteza de reacie

 Viteza unei reacii = variaia n timp a

concentraiei reactanilor sau a
produilor de reacie.

B
d[A]
v
dt

ecuaii cinetice

d[B]
v
dt

Ce postuleaz Legea cinetic ?

Viteza de reacie este proporional cu

produsul concentraiilor reactanilor

 Pentru o reacie:
A
Produi

Pentru o reacie:
A+B
Produi

V = K [A]

V = K [A][B]

K = constanta de vitez sau viteza specific

(V de reacie la concentraii 1M ale reactanilor)

Activitatea enzimatic
U.I. (unitatea internaional) = activitatea enzimei care
transform 1 mol substrat/minut n cond standard de pH,
temperatur, cofactori
Activitatea molecular = nr. molecule de S transformate n
produs de ctre o molecul de E /secund.
Activitatea specific = nr. de uniti de activitate enzimatic /
mg de protein total.
Constanta catalitic (turn-over number) = nr. de transformri
S
P catalizate de fiecare CA al E n unitatea de timp.

Factorii care influeneaz

activitatea enzimatic

Temperatura;
pH;
[E];
[S];
prezena inhibitorilor

Temperatura
T optim = temp. la care activitatea enzimelor
este maxim
activitatea
enzimatic
%

100
50

20

40 Toptim 60
temperatura

pH
pH-uri extreme denatureaz enzimele
Variaii mici de pH n zona de stabilitate a enzimei
modific v.
amilaza salivara
Pepsina

Fosfataza
alcalin

[E]
[S] = constant, v este proporional cu
cantitatea de enzim
activitatea
enzimatic
%

concentratia enzimei

Ecuaia Michaelis Menten

E+S

K1

ES

K2

K3

E + Produs

V = f([s]) la [E], temp., pH = constante

activitatea
enzimatic
vmax

saturatie

vmax
2
KM

concentratia substratului

Michaelis i Menten au introdus

parametrii cinetici KM i Vmax

K1
E+S

K2
Etapa rapid

ES

K3

Etapa lent

Unde E, ES i S sunt n echilibru

[Etotal]=[ES]
Vmax=K3[Etotal]

La echilibru
v 1 = v 2 + v3
K1[E][S] = K2[ES] + K3[ES]
K1[E][S] = [ES](K2 + K3)

E + Produs

KM
KM este o msur a afinitii dintre E i S
afinitile enzimelor pentru substraturile lor
sunt cu att mai mari
cu ct valorile KM sunt mai mici

[E ][S] K 2 K 3

KM
[ ES]
K1

Ecuaia Michaelis - Menten

Ecuaia de vitez a reaciilor enzimatice cu un singur
substrat sau ecuaia lui Michaelis-Menten

Vmax .[ S ]
K M [S ]

reprezentare grafic v = f([S]) este un arc de hiperbol.

activitatea
enzimatic
vmax

saturatie

vmax
2
KM

concentratia substratului

Vmax Vmax [S]

2
K M [S]

K M [S]

KM este numeric egal cu [S]

la care viteza reaciei este semimaxim

Ecuaia Lineweaver Burk

Ecuaia Michaelis-Menten inversat este ecuaia unei drepte.

Vmax .[ S ]
K M [S ]

1 KM 1
1

V Vmax [ S ] Vmax

1/V
Panta = KM/Vmax
1/Vmax

- 1/KM

1/[S]

Inhibiia activitii enzimelor

scderea activitii catalitice a enzimei
n prezena unui compus chimic denumit

inhibitor

Inhibitorii pot fi:

endogeni (metabolii)
exogeni (substane toxice,medicamente)

Inhibiia poate fi:

- ireversibil
- reversibil

Inhibiia ireversibil
legturi covalente ntre E i I

E + I

EI

Cnd [I] = [E]

activitatea catalitic a enzimei

este redus la zero.

 diizopropil-fluorofosfatului (DIFP)
inhib acivitatea serin enzimelor

NH CH

NH

CO

CH2
OH
+
F

CH3
HC
CH3

P
O
DIFP

CH CO
CH2

- HF
CH3
O CH
CH3

CH3
HC
CH3

O
O

P
O

CH3
O CH
CH3

acetilcolinesteraza este foarte sensibil

la aciunea
DIFP

DIFP este utilizat ca paralizant

 Hemoproteinele (citocromi, hemoglobina)

sunt inactivate de ctre:

CO

CN

care se leag de ionul de Fe2+ din hem

Inhibiia reversibil
E + I

EI

Ce efecte are Ic
asupra celor doi parametrii cinetici
vmax i
KM ?

 Inhibiia reversibil poate fi:

Competitiv
Necompetitiv
Uncompetitiv

Inhibiia reversibil competitiv

Ic este analog structural al S
se leag n centrul activ al enzimei
prin aceleai grupri ca S;

 ntr-un sistem cu: E, S i Ic au loc reaciile:

E+S
+
I

EI

ES

E + Produsi

 reacia enzimatic atinge Vmax

dar la concentraii mari de S.
aparent creste KM,
deci afinitatea enzimei pentru S scade i
nu se modific Vmax;
activitatea
enzimatic

+ Ic

1/V

vmax

saturatie
+ Ic

vmax

1/Vmax

2
KM K `
M

concentratia substratului

- 1/KM

- 1/KM` 0

1/[S]

Ic (compui naturali sau de

sintez)
Acizii dicarboxilici: oxalic, malonic,
malic, oxaloacetic, pirofosfat sunt inhibitori
competitivi ai succinat dehidrogenazei
(SD).
COOH
CH2

Succinat dehidrogenaz

CH2
COOH
Acid succinic

COOH

FAD

FADH2

HOOC

Acid fumaric

Sulfanilamida
Folat sintetaza, la bacterii este pclit i sintetizeaz un
intermediar cu sulfanilamid n locul acidului para-aminobenzoic care nu se poate transforma n acid folic.
Cum acidul folic este indispensabil bacteriilor, acestea
mor.
NH2

NH2

SO2 NH2 Sulfanilamida

COOH Acid p-aminobenzoic

OH
N
5

N
H2 N

10
9
CH2 NH

COOH
CO

NH CH
CH2
CH2

N
acid p-aminobenzoic

pterina
acid pteroic

COOH
acid glutamic

Analogi structurali ai bazelor

purinice i pirimidinice

se utilizeaz n chimioterapia cancerului.

inhib sinteza de acizi nucleici,
mpiedicnd diviziunea celular care este
mult mai rapid n tumori

Metotrexat

analog al acidului folic se folosete n

chimioterapia leucemiilor.
NH 2
N

N
H 2N

N
H

COO-

O
CH2 N
R

N
H

R=H
aminopterin
R= -CH3 metotrexat

CH

O
CH2 C

O-

Inhibiia reversibil
necompetitiv
Substratul i inhibitorul necompetitiv (In)
nu sunt analogi structurali
nu au dimensiuni comparabile
In nu se leag n centrul activ

E+S
+
I

ES
+
I

EI + S

ESI

E + Produsi

activitatea
enzimatic

1/v

vmax
v`max

+ Ic

vmax / 2

+ Ic

1/v`max

v`max / 2

1/vmax
KM

concentratia substratului

- 1/KM

1/[S]

Se modific Vmax
KM nu se modific n prezena inhibitorului

 grupri - SH libere (nu din centrul activ), pot

lega slab:
Ag+
Hg2+
Pb

care micoreaz sau chiar anuleaz

activitatea enzimelor

aa se explic efectul otrvitor al unor metale grele

Pb inhib ferochelataza

Inhibiia reversibil uncompetitiv

Un astfel de inhibitor modific i
KM i
Vmax

E+S

ES
+
I
ESI

E + Produsi

Curs 9
30.11.2011
Enzime alosterice
Reglarea cantitativ a enzimelor
Reglarea eficienei catalitice
Complexe multienzimatice
Antienzime
Izoenzime

Enzime alosterice
Sunt proteine oligomere (dimeri, tetrameri,
etc.)

Au mai multe centre de legare pentru S

(cte un centru pentru fiecare subunitate).

 Curbele v = f([S]) sunt sigmoide

Vmax se atinge atunci cnd toate centrele

active sunt ocupate cu S

 Parametrii cinetici pentru enzimele oligomere

sunt:
-Vmax i
-S0,5(S50) concentraia substratului pentru
care reacia are o vitez semimaxim

activitatea
enzimatic
vmax
vmax / 2

KM

concentratia substratului

Aspectul sigmoid al curbei v = f([S]) reflect o

modificare a afinitii enzimei pentru substrat

 Enzimele care dau curbe v=f([s])

sigmoide sunt denumite
alosterice

Liganzii fixai pot fi:

identici (de ex. Substraturi n ambele centre)
sau
diferii

 centru izosteric

leag substratul

centru alosteric (allos=altul)

(poate fi situat pe acelai lan polipeptidic dar n regiune
diferit)

leag un efector alosteric

 Activatori alosterici
Inhibitori alosterici

activitatea
enzimatic 100
%
50

vmax
3

1 2

KM

[S]

 Dup natura centrelor de legare i a liganzilor

pentru aceste centre, efectele alosterice sunt:
Efecte homotrope (presupun cooperarea
ntre dou centre izosterice
Efecte heterotrope (cooperare ntre un
centru izosteric i un centru alosteric)

 Alosteria
capacitatea unor liganzi de a modifica funciile
unor proteine
prin
inducerea unor tranziii alosterice (modificri
conformaionale).

Caracteristici eseniale pentru Enzimele

alosterice:
-catalizeaz etape cheie din cile metabolice;

ireversibile, cu Go < 0
-au structur cuaternar

 Dou Modele explic

mecanismul de aciune
al Enzimelor Alosterice
1.modelul concertat (simetric)
2.modelul secvenial

Modelul simetric
Subunitile dimerului, pot avea dou
conformaii;
-R (relaxat) cu afinitate mare pentru
substrat
-T (tensionat) cu afinitate mic pentru
substrat.

Modelul impune simetria dimerului,

care exist numai n forma R sau T.

 La enzimele heterotrope:
Activatorii stabilizeaz starea R
Efectorii negativi stabilizeaz starea T

Modelul secvenial

admite interacia strii R cu starea T

Legarea lui S la primul monomer se face
cu dificultate

 Ce tip de cooperare am ntlnit la

realizarea rolurilor Hemoglobinei ????

Hemoglobina fixeaz
O2 prin cooperativitate (homotrop)
coordonat de factorii: H+; CO2; 2,3-DPG
(heterotrop)

Reglarea activitii enzimelor

Viteza reaciilor enzimatice cheie din cile
metabolice depinde de:
cantitatea de enzim;

eficiena enzimelor

Reglarea cantitii de enzim

prin dinamica proceselor de biosintez
i de degradare

Aminoacizi

Ks
Kd

Proteine

Enzimele constitutive: Ks = Kd
Catalizeaz procese fundamentale pentru
existena celulei.
Se gsesc n celule n cantiti relativ
constante.
Ele nu sufer fluctuaii mari n raport cu
factorii de mediu.

 Enzimele inductibile: Ks > Kd

Sunt implicate n ci catabolice.
se sintetizat numai n prezena substratului
Substratul acioneaz ca un inductor,
accelernd sinteza enzimelor.

 Enzimele represibile: Ks < Kd

Sunt implicate n procese anabolice
Sinteza lor este ncetinit de produsul final al
reaciei catalizate;
Represia se face de obicei, prin intermediul
complexelor corepresori - aporepresori.

 Controlul degradrii proteinelor (enzimelor)

-se face independent de controlul sintezei;
-se face prin intermediul ubiquitinei;
-este proces dependent de ATP.

Reglarea eficienei catalitice a enzimelor

Factorii ?????

 Activitatea unor Enzime alosterice depinde de concentraia

substratului:
A

E1

E2

E3

Reglarea printr-un intermediar (feed forward stimulare):

E1

E2

E3

Produsi

Glucoz
ATP

ADP

Glucozo-6-fosfat
2

Etapa hexozelor

Fructozo-6-fosfat
ATP

ADP

Fructozo-1,6-bisfosfat
4

Gliceraldehid-3-fosfat

Dihidroxiaceton-fosfat

H3PO4

NAD+
5

NADH + H+

1,3-Bisfosfoglicerat
ADP
ATP

6 Fosforilare la nivel de substrat

3-Fosfoglicerat
7

2-Fosfoglicerat
8

H2O

Fosfoenolpiruvat
ADP

9 Fosforilare la nivel de substrat

ATP

Piruvat

Etapa triozelor

activitatea
enzimatic
vmax
vmax / 2

KM

concentratia substratului

Glucoz + ATP

Glucozo-6-P + ADP

Hexokinaza:
-prezent n toate esuturile extrahepatice,
-are afinitate mare pentru glucoza (KM = 0,15 mM)
-esuturile preiau glucoza din snge la orice valoare
a glicemiei
Glucokinaza:
-prezent numai n ficat
-are afinitate mic pentru glucoza (KM = 10 mM)
- este activ dup ingestia de glucide

CH=O
H

OH

HO

OH

C
H2C

OH
OH

Glucoz

H2C

CH=O

ATP ADP
Hexokinaza
Mg2+

HO

OH Glucozo-6-fosfat

OH

OH

OH

OH

HO

C
H2C

OH

izomeraza

OPO 3 H 2

Glucozo-6-fosfat

H2C

OPO 3 H 2

Fructozo-6-fosfat

 Reglarea activitii enzimelor alosterice prin produsul final

(inhibiie de tip feed back)

E1

E1

E2

E2

E3

Produsi

E3

P1

E4

P2

Reglarea covalent
Apare la organismele superioare
i presupune activare prin
ruperea unor legturi covalente

Conversia are loc prin:

fosforilare-defosforilare;
nucleotidilare

enzime interconvertibile

activare prin proteoliz

proces unidirecional

Enzime interconvertibile prin fosforilare

<==> defosforilare
Fosforilrile:
-sunt catalizate de kinaze
(reglate hormonal, interconvertibile fosfo-defosfo);
-sunt ireversibile;
-necesit ATP
Defosforilrile:
-sunt ireversibile;
-se fac hidrolitic n prezena unor fosfataze;
-fosfatazele sunt supuse unui control hormonal.

ATP

proteinkinaze

Enzim (Ser-OH)

ADP

Enzim (Ser-OP)

forma defosfo

forma fosfo

fosfataze
Pi

H 2O

 enzime active n forma fosforilat

glicogen fosforilaza implicat n catabolismul
glicogenului

Enzime active n forma defosfo

glicogen sintaza implicat n proces anabolic

activarea este implicat ntr-o cascad de evenimente

declanate de legarea unui hormon la o membran celular

Reglarea covalent prin

proteoliz
Proenzimele (zimogenii)
sunt produse la locul de sintez n form
inactiv
activarea se face la locul de aciune.

 Activarea se face
sub influena factorilor de mediu i
Autocatalitic
printr-un proces ireversibil de rupere a unor legturi
peptidice specifice.

De ce este necesar existena

zimogenilor ?
se obin foarte rapid
prin transformri minore
cantiti mari de enzime active.

 Enzimele proteolitice digestive

secretate de stomac: pepsinogenul
secretate de pancreas: tripsinogenul,
chimotripsinogenul, proelastaza,
procarboxipeptidaza
Enzimele coagulrii sngelui
(secretate de ficat n form de proenzime)
Enzimele sistemului complement

 a.Enzimele proteolitice digestive

hidrolizeaz proteine:
Transformarea
HCl
pepsinogen
pepsina
(- segment terminal (44 aminoacizi) cu
caracter bazic)

 Transformarea
Tripsinogen
enteropeptidaz

tripsin

(denumire veche enterokinaz)

(fragment N-terminal de 6 aminoacizi din tripsinogen)

Tripsina activeaz tripsinogenul, chimotripsinogenul,
proelastaza, i procarboxipeptidaza.
Zimogenii pancreatici se activeaz cnd coninutul
stomacal a ajuns n duoden.

 Transformarea
chimotripsinogen

chimotripsin

este activat de tripsin

se face prin ndeprtarea a dou dipeptide
Chimotripsina cuprinde trei lanuri peptidice i
cinci puni de sulf.

Centrului activ al chimotripsinei

S
A
S

B
S S
-chimotripsina contine 5 legturi disulfurice

His - 57 din lanul B;

Ser - 195 din lanul C;
Asp - 102 din lanul B.

S
C
S

Structura tridimensional a chimotripsinei

In intestin
Tripsinogen

Enteropeptidaz

Chimotripsinogen

Chimotripsin
Procarboxipeptidaza A

Tripsin
Carboxipeptidaza A

Procarboxipeptidaza B

Carboxipeptidaza B

 Enzimele coagulrii i fibrinolizei.

Exist dou ci iniiate de activatori diferii
care converg ntr-o cale final comun
calea intrinsec, cu participare de factori
sanguini;
calea extrinsec, la care particip i factori
de origine exclusiv tisular.

Calea intrinsec
Calea extrinsec

Kalikrein, Kininogen

Traum tisular
Factor XII

Factor XIIa
Factor tisular

Factor XI

Factor XIa
Factor VIIa

Factor IX

Factor VII

Factor IXa
VIIIa
VIII

Factor X

Factor X
Factor Xa
Va
V

Protrombina
II

Trombin

Fibrinogen
I

Fibrin

Factor XIII

Factor XIIIa

Retea stabilizat de fibrin

Iniierea procesului de coagulare este urmat de

activarea n cascad a factorilor de coagulare
Care sunt avantajele unui rspuns reglator n
cascad ?
-o cantitate foarte mic de iniiator declanaz un
rspuns amplu.
-fiecare etap a cascadei amplific rspunsul

 Fibrinoliza. Componenii necesari

dezagregrii chiagului se gsesc n snge
n form inactiv i se activeaz proteolitic
Factor tisular
Plasminogen

Plasmin
Cheag de fibrin

Peptide solubile

Care dintre urmtoarele enzime proteolitice este

activat prin hidroliza acid a proenzimei
inactive?

a. tripsina

b. chimotripsina

c. elastaza

d. pepsina

e. carboxipeptidaza

 Antienzime (antiproteaze) = proteine

reglatoare
Serpinele sunt inhibitori de serin proteaze
Se leag necovalent n centrul activ al serin
proteazelor:

Antienzimele

 antitrombina III

 1 antiproteaza
(denumit i 1 antitripsina)

 inhibitorul pancreatic al tripsinei

inhibitorul proteinei C (proteina C este o
serin proteaz plasmatic dependent de
vitamina K, activat de trombin, care
transform factorii activi VIIIa i Va ai
coagulrii n forme inactive).

Antitrombina III:
-prezent n plasm;

-inactiveaz trombina i ali factori ai coagulrii: IXa, Xa, XIa

Cine mrete viteza de formare a complexelor ireversibile

ntre antitrombina III i serin proteazele coagulrii ?
Heparina

 1-antiproteaza:
-protein plasmatic;
-este 1-globulin
inhib elastaza, tripsina i alte proteaze

 1-antiproteaza sintetizat
de ficat
de monocitele i macrofagele alveolare
are rol n protejarea esuturilor de aciunea elastazei

Elastaza = enzim proteolitic distructiv, secretat de

neutrofilele activate poate distruge elastina din pereii
alveolelor pulmonare

 O deficien la nivelul 1-antiproteazei poate

duce la instalarea emfizemului pulmonar

 Inhibitorul pancreatic al tripsinei:

-este o protein cu masa mic, produs de
pancreas.
-se leag de tripsin, prevenind distrugerea
pancreasului.

Izoenzimele
Izoenzimele:
- proteine oligomere
-catalizeaz aceeai reacie n toate
esuturile;
-difer prin:
structur
distribuie tisular.

 Diferenele structurale pot influenta

proprietile fizico-chimice:
pH izoelectric
mobilitate electroforetic
masa molecular

 difereniere prin nsuirile catalitice:

afiniti diferite fa de acelai substrat;
sensibiliti diferite la aciunea unor efectrori
alosterici;
_

specificiti distincte pentru coenzime

Izoenzimele LDH (lactat dehidrogenaza)

enzim intracelular

LDH are structur cuaternar omogen sau

heterogen;
lanuri M (muscle)
LDH = tetramer
lanuri H (heart).

 LDH are cinci izoenzime:

H4,
H3M,
H2M2,

HM3,

sau
dup mobilitatea electroforetic
LDH1

LDH5

M4

 Reacia catalizat:
Lactat dehidrogenaza
H3 C

H3 C

CH COOH

OH
Acid L-lactic

NAD+

NADH + H+

COOH

O
Acid piruvic

Izoenzimele LDH au afiniti diferite pentru

piruvat (sau lactat):
H4 i H3M
inim
afinitate mic pentru piruvat
(l transform greu n lactat)

M4 i M3H
muchi scheletici i ficat
afinitate mare pentru piruvat

 Determinarea activitii enzimelor serice

poate fi folosit n clinic pentru stabilirea
originii esutului lezat

Izoenzimele creatin kinazei

(creatin fosfokinaza)
Creatin kinaza:
-enzim intracelular;
-dimer format din dou subuniti:
B (de la brain)
M (de la muscle)
Are trei izoenzime:
MM (prezent n muchi i miocard)
BB (prezent n creier i muchi)
MB (prezent n urme numai n miocard).

 reacia catalizat este reversibil:

Creatin + ATP

Fosfo-creatin + ADP

Creterea activitii creatin kinazei-MB n ser,

indic lezarea miocardului
(infarct de miocard)

Activitatea CK2
n plasm la 24
ore dup infarct

Ore
Infarct

Activitatea LDH
n plasm la 36 40 ore de la
infarct

Complexe multienzimatice
Asamblri de proteine ntr-un complex, cu
scopul de a crete eficiena global a
procesului.
Rolul lor:
cataliza coordonat a unei succesiuni de
reacii;
minimalizarea unor reacii secundare.
Exempl: acid gras sintaz, complexul piruvat
dehidrogenazei, etc.

Curs 10
Denumirea enzimelor
Clasificarea enzimelor
Lipide
AG
TG
Fosfatide

7.12.2011

Clasificarea i denumirea
enzimelor
Denumirea enzimelor
se pot utilza trei modaliti:
-adugarea sufixului az la numele
substratului (zaharaz, ureaz, glucozidaz)
-denumire dup aciunea specific a enzimei
(guanilat ciclaz, lactat dehidrogenaz, glutation
reductaz)
-denumiri particulare fr legtur cu reacia
catalizat: pepsin, chimotripsin, tripsin.

 Numele enzimei cuprinde:

-denumirea substratului,
-tipul reaciei catalizate,
-coenzima
Fiecare enzim este codificat de patru cifre, care
definesc:
-clasa;
-subclasa;
-sub-subclasa;
-numrul de ordine al enzimei din ir.

Clasificarea enzimelor
Sunt 6 clase de enzime dup tipul de reacie
catalizat:
1.Oxidoreductaze
2.Transferaze
3.Hidrolaze
4.Liaze
5.Izomeraze
6.Ligaze

Oxidoreductazele catalizeaz reacii redox

(transfer de electroni sau de hidrogen)
Subclase:
Dehidrogenazele catalizeaz
transferul de hidrogen
de la substrat (SH2)
pe o coenzim redox
(NAD+; NADP+; FMN; FAD):

SH2 + Co

Sox + CoH2

Vitamina PP
CONH2

CONH2

COOH

O
N
Acidul nicotinic
(niacina)

N
Amida acidului nicotinic
(niacinamida)

H2 C

O-

OH OH

O
O

NH2
N

P O
O

H2 C

OH OR
Nicotinamid-adenin dinucleotid (NAD+)

(R = H formeaz NAD+ ; R = -PO3H2 formeaz NADP+)

H3C

H3C

Vitamina B2
Conine heterociclul numit izoaloxazin
NH2
N

CH2

CH CH CH CH2 O
OH OH OH

P O

O H2 C
-

OH OH

NH

adenozin

O
(H)
lumicrom
(H)
lumiflavin
riboflavin
flavin mononucleotid (FMN)
flavin adenin dinucleotid (FAD)

(H)

(OH)
(H)

adenozin 5`-monofosfat
(AMP)

 Reductazele catalizeaz transferul de hidrogen de

la o coenzima redus (adesea NADPH) la un
acceptor:

Sox + CoH2

SH2 + Co

 Oxidazele catalizeaz
transferul de echivaleni reductori de la un substrat
la dioxigen,
reducndu-l fie la ap, fie la peroxid de hidrogen:

SH2 + 1/2 O2

Sox + H2O

SH2 +

Sox + H2O2

O2

 Peroxidazele catalizeaz transferul de echivaleni

reductori de la un substrat la un peroxid (HOOH sau ROOH)

SH2 +

HOOH

Sox + 2 H2O

2G-SH + HOOH G-S-S-G + 2 HOH

glutation peroxidaz

 Dioxigenazele ncorporeaz dioxigenul n molecula

de substrat (care cuprinde o legtur dubl):

CH CH

+ O2

CH O + O

CH

H3 C

CH3

CH3

H3 C

CH3

CH3

-caroten

CH3

caroten dioxigenaza
H3 C

CH3
CH

CH3

CH3

CH3

Retinal (retinalaldehid)
Oxidare

Reducere

H3 C

CH3

O2 n prezenta srurilor biliare

CH3

CH3

H3 C

CH3

CH3

H3 C

CH3

CH3

CH2 OH
CH3

Retinol (Vitamina A1)

CH3

COOH
CH3

Acid retinoic

 Monooxigenazele ncorporeaz numai un atom de

oxigen n substrat, celalalt atom al dioxigenului este
redus la ap.
Multe monooxigenaze sunt hidroxilaze care implic
participarea sistemului redox:
NADP+ - (NADPH+ H+)
R-H + O2 + (NADPH + H+)

R-OH + H2O + NADP+

R1

Transferazele
catalizeaz reacii de transfer a unei grupri de la un donor ctre un
acceptor

AX + BY

AY + BX

Subclase:
Aminotransferaze (transaminaze) catalizeaz transferul
unei grupri amino ntre un amino i un cetoacid.
Coenzima participant este piridoxal fosfatul.
CH COOH + R2

NH2

COOH

R1

C
O

COOH + R2

CH COOH
NH2

HC

HC
CH2 OH

HO

ATP

ADP

HO

CH2 O P

O-

OH3 C

HO

piridoxal-kinaza

N
Piridoxal
H2 C NH2
CH2 OH

N
H3 C
Piridoxamina

ATP

ADP

H3 C

HO

N
Piridoxalfosfat
O
H2 C NH2
CH2 O P
O-

piridoxamin-kinaza
N
H3 C
Piridoxaminfosfatul

O-

COOH
H3 C CH COOH +
NH2

Alanin

COOH
GPT

CH2
CH2
C

H3 C C
O

COOH

Acid-cetoglutaric

COOH

Acid piruvic

CH2
CH2
HC

NH2

COOH

Acid glutamic

COOH

COOH

COOH

COOH

CH2

CH2

CH2

CH2

HC

NH2

COOH

Acid aspartic

GOT

CH2
C

COOH

Acid-cetoglutaric

COOH

Acid oxaloacetic

CH2
HC

NH2

COOH

Acid glutamic

 Aciltransferazele catalizeaz transferul restului acil

de pe compui cu potenial chimic ridicat
(R-CO~SCoA), pe acceptori potrivii cu formare de
esteri, amide, anhidride:
R-CO~S-CoA + R1-OH

R-CO-OR1 + CoA-SH

Coenzima A - SH
Acid pantotenic

NH CO
CH2

CH2

CH2 NH

C
O

CH C

CH2 O

CH3

ONH2

CH2
O

SH
ADP

Tioetanolamina

OH CH3

P O
O

H2 C

N
O

OH O

P
O-

O-

 Fosforil transferazele (kinaze)

catalizeaz transferul resturilor fosforil
de pe ATP
pe substraturi:

Glucoz + ATP

Glucozo-6-P + ADP

CH=O
H

OH

HO

OH

C
H2C

OH
OH

Glucoz

H2C

CH=O

ATP ADP
Hexokinaza
Mg2+

HO

OH Glucozo-6-fosfat

OH

OH

OH

OH

HO

C
H2C

OH

izomeraza

OPO 3 H 2

Glucozo-6-fosfat

H2C

OPO 3 H 2

Fructozo-6-fosfat

 Metiltransferazele catalizeaz transferul

gruprilor cu un atom de carbon
coenzima care poart aceste grupri este
tetrahidrofolatul (FH4).

OH
N
5

N
H2 N

10
9
CH2 NH

COOH
CO

NH CH
CH2
CH2

N
acid p-aminobenzoic

pterina
acid pteroic

COOH
acid glutamic

 Transport grupri:

metil (-CH3)
hidroximetil (-CH2OH)
formil (-CHO)
formimino (-CH=NH)
metilen (-CH2-),

 transformarea serinei n glicin:

H2 C

OH

HC

NH2

COOH
Serin

H
N
5
N
H
FH4

CH2

9
10
CH2 NH
serin hidroximetil
transferaz

N
H2 C

CH2

NH2 +

COOH
Glicin

N
H

N5, N10-metilen FH4

 formarea gruprilor metil:

N5,N10-metilen-FH4 + (NADH + H+)

N5-metil-FH4 + NAD+

 metilarea homocisteinei la metionin

CH3
H2 C

SH

H2 C
HC

+
NH2

COOH
Homocistein

N
5

CH2 NH

N
H
5
N -metil FH4

homocisteinmetiltransferaza
metilcobalamina

H2 C

H2 C
HC

H
N

CH3
+

NH2

COOH
Metionin

N
H
FH4

CH2 NH

 transformarea deoxiuridilatului n
deoxitimidilat (folosit n sintez de ADN):
O

O
H3 C

NH
O
O P O H2C

O-

CH2

CH2

timidilat sintaza

+
N

OH H
dUMP

H
5

10

N , N -metilen FH4

NH

O P O H2 C
-

OH H
dTMP

O
+

FH4

Hidrolazele
A-B + H2O

A-H + B-OH

Subclase

Esterazele care pot fi:

carboxilesteraze (cu substrat R-COOR)
tiolesteraze (cu substrat R-CO -SR)
fosfomonoesteraze (substrat R-O-PO 3H2)
fosfodiesteraze sau fosfataze (substrat R-O-PO 2H-O-R1)

Glicozidaze
Peptidaze

NH 2
N
O
-

P
O

O
-

O
-

P
O

O H 2C

HR

NH 2

Adenilatciclaza

H 2C

O
HO

ATP

HO

P
O

OH

AMPc

N
N

NH 2
N
N
O

H 2C

Metilxantine
N

N
N

Fosfodiesteraza

P
O

P
OH

AMPc

O
-

NH 2

Insulin
Ca2+-Calmodulin

O H 2C
-

N
O

HO

HO

5`-AMP

Liazele
catalizeaz reacii de adiie reversibile,
la legturi multiple.
Anhidraza carbonic catalizeaz
hidratarea dioxidului de carbon:

CO2 + H2O

H2CO3

 Fumaraza catalizeaz hidratarea acidului

fumaric la acid malic:

COOH

H
C
C

H
HOOC
Acid fumaric

+ H2O

COOH
Fumaraza

HC

OH

CH2
COOH
Acid malic

Izomerazele
catalizeaz reacii de izomerizare:
Racemazele transform un enantiomer dextrogir
n enantiomerul levogir

(+)-Alanina

(-)-Alanina

 Epimerazele schimb configuraia unui singur

atom de carbon asimetric

D-Glucoz

D-Galactoz

HC

OH

HO

HO

HC

OH

HO

OH

H2C

OH

D-Galactoz

40

HC

HO

HO

OH

OH

OH

OH

H2C

OH

H2C

OH

D-Glucoz

20

D-Manoz

 Izomerazele cis-trans modific configuraia unei

duble legturi

Acid fumaric

Acid maleic

 Mutazele schimb poziia unei grupri n

molecul

COOH
HC
H2 C

OH
OPO3 H2

Acid 3-fosfogliceric

COOH
mutaz

HC
H2 C

OPO3 H2
OH

Acid 2-fosfogliceric

Ligazele
catalizeaz reacii de condensare cuplate cu scindare de
ATP
A-H + B-OH

A-B
ATP

ADP + Pi

Sinteza glutaminei catalizat de glutaminsintetaz:

Acid glutamic + NH3

Glutamin
ATP

ADP

COOH

CH2
NH3 +

Glutamin sintetaz

CH2
HC

NH2

COOH

Acid glutamic

NH 2

CH2
CH2

ATP

ADP+Pi

HC

NH2

COOH

Glutamin

 Sintazele catalizeaz legarea a dou molecule fr

implicarea ATP

aminolevulinat sintaza
glicogen sintaza
NOS - nitric oxid sintaza

 Vitaminele care pot fi transformate n coenzime pentru a

participa la reacii de oxido-reducere sunt:
A.Nicotinamida i riboflavina
B.Vitamina C i biotina
C.Biotina i nicotinamida
D.Tiamina i riboflavina
E.Tiamina i Biotina