SPITALUL ORASENESC DR.

VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 1/22

CUPRINS:
1.Scop
2.Domeniu de aplicare
3.Documente de referinta
4.Definitii si abrevieri
5.Responsabilitati
6.Descrierea procedurii
7.Inregistrari si anexe
8.Istoricul editiilor/reviziilor
Lista difuzare-retragere

Nume :

Elaborat
Dr. deac Liliana

Verificat
Dr. Deac Liliana

Aprobat
Dr. oltean-Petri Ioan-

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

Functia :
Semnatura:
Data:

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 2/22

Responsabil analiza

Sef Laborator

Hadrian
Manager

23.09.2013

23.09.2013

23.09.2013

1. SCOP
Procedura are ca scop descrierea reactiilor de aglutinare a anticorpilor
antistreptolizinei O, a factorului reumatoid din ser, a proteinei C reactiva i a
responsabilitilor personalului care execut i verific aceast analize.
Procedura are ca scop descrierea metodei de determinarea calitativ a prezenei
anticorpilor nespecifici non-treponemici (reagine) n ser prin tehnica RPR-carbon.
Procedura are ca scop descrierea metodei de testare TPHA, precum si a
responsabilitatilor personalului care executa si verifica aceasta analiza.

2. DOMENIU DE APLICARE
Procedura se aplic la efectuarea tuturor reactiilor de aglutinare a anticorpilor
antistreptolizinei O, a factorului reumatoid din ser, a proteinei C reactiva,
determinarea calitativ a prezentei anticorpilor nespecifici non-treponemici (reagine) n
ser prin tehnica RPR-carbon si la testarea TPHA a serurilor n Laboratorul analize
medicale AL Spitalului Orasenesc dr. Valer Russu Ludus.

3. DOCUMENTE DE REFERINTA

3.1.
SR EN ISO 15189:2007 Laboratorare medicale. Cerinte particulare
pentru calitate si competenta.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 3/22

3.2. Brudac I. Cristea, A. Ghid de Laborator, Ed. Medical Universitar Iuliu

Haieganu, Cluj-Napoca, 2005.
3.3. Fischbach, F. A Manual of Laboratory & Diagnostic Tests- Fourth edition, J.B.
Lippincott Company, Philadelphia, New York, London, Hagerstown, 1992.
3.4. Kondi, V. Laboratorul clinic. Hematologie, Ed. Medical, Bucureti, 1981
3.5.

Prospectele kiturilor.

3.6.

Tratat de

4. DEFINITII SI ABREVIERI
4.1. DEFINITII
Consumabile - toate materialele folosite n cursul operrii care trebuie
schimbate sau rennoite n mod regulat (vacutainere pentru VSH), etc.
Control intern de calitate tehnici i activiti operaionale din cadrul unui
laborator care sunt folosite pentru a ndeplini cerinele calitii. Controlul intern
are att scopul de a monitoriza procesul de verificare a faptului c rezultatele
msurrii sunt suficient de sigure pentru a fi eliberate, ct i scopul de a
elimina cauzele performanelor nesatisfctoare.
Evaluarea extern a calitii determinarea performanei msurrilor
efectuate n laborator cu ajutorul comparrilor inter-laboratoare.
Prob unul sau mai multe eantioane luate dintr-un sistem i destinate
obinerii de informaii cu privire la acel sistem.
Prob de laborator prob primar sau sub-prob a acesteia preparat pentru
a fi trimis sau care a fost primit de laborator pentru a fi msurat.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 4/22

Repetare - comand de efectuare a aceleiai analize autorizat de utilizator din

diferite motive sau efectuat de aparat n mod automat prin creterea sau
scderea diluiei probei.
Test operaiune tehnic constnd n determinarea uneia sau mai multor
caracteristici ale unui produs, proces sau serviciu, n concordan cu o anumit
procedur.
Aglutinare adunare in grmezi
Antigen particul stin organismului (microbian, viral etc.) care odat
introdus n organism este capabil s induc formare de anticorpi.
Anticorp rspunsul organismului (n scop de aprare) la introducerea unui
stimul strin (antigen).
TPHA - este un test treponemic cu specificitate inalta, utilizat pentru
confirmarea serurile reactive la VDRL / RPR.
Reactivi (kit) - substane chimice (n form lichid) care folosesc la determinarea
unei anumite analize. Toi reactivii care folosesc pentru determinarea aceleiai
analize sunt grupai n aceeai trus (kit).
4.2. ABREVIERI
SL - ef de Laborator
RC Responsabilul Calitii
SMC - Sistemul de management al calitii
SIL Sistemul informatic al laboratorului (programul de laborator i reeaua de
calculatoare)

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 5/22

ASLO Anticorpi antistreptolizina O

FR Factor rheumatoid
PCR Proteina C- reactiva
RPR Rapid Plasma Reagin (test rapid pentru detecia reaginelor n ser sau
plasm)
VDRL Veneral Disease Research Laboratory (test rapid pentru detecia
reaginelor n ser sau plasm)
TPHA - Treponema Pallidum Haemaglutination;
BFP

- Biological Fals Positiv (Reactie biologica fals pozitiva);

T. pallidum Treponema pallidum;

5. RESPONSABILITATI

5.1. Sef Laborator

o verifica modul de executie a analizei prin consultarea tuturor inregistrarilor
emise sau efectuate in timpul si dupa executia analizelor medicale;
o in cazul unei executii necorepunzatoare a procedurii, va aplica procedura
de controlul analizelor neconforme.
5.2.

Responsabilul de Analiza

oexecuta analiza conform metodei descrise in prezenta procedura; respecta

intocmai si in toate aspectele sale metoda de lucru;

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 6/22

oefectueaza toate inregistrarile privitoare la executia analizelor medicale in timp

real;
oefectueaz i interpreteaz rezultatele controlului intern de calitate;
osemnaleza SL cazul de analiza neconforma.
5.3.

Executant

o analizeaz biletele de trimitere/ solicitrile de analize;

o recolteaz probele biologice conform manualului de recoltare si n concordant
cu cererea de analize;
o numeroteaz probele recoltate cu un numr unic de identificare;
o dup terminarea programului de recoltare distribuie probele biologice n
compartimentele corespunztoare;

6. DESCRIERE PROCEDURA
6.1.

Semnificatie clinica

Streptolizina este o hemolizina produsa de streptocoii de grup A. La pacientii

infectati, streptolizina O actioneaza ca un antigen fata de care organismul dezvolta un
raspuns umoral specific (antistreptolizina O = ASLO). Titrul ASLO incepe sa creasca la
1 saptamana dupa instalarea infectiei streptococice si atinge un maxim la 24
saptamani. In absenta complicatiilor sau a reinfectiei, titrul ASLO revine la normal
dupa 6-12 saptamani.
Titrul ASLO este crescut in 80 - 85 % din cazurile de infectie streptococica A.
Nivelul anticorpilor ASLO atinge valori foarte mari in reumatismul articular acut, de
aceea titrurile persistent scazute pledeaza impotriva acestei afectiuni.
FR factorii reumatoizi sunt imunoglobuline, in general de tip IgM, cu
specificitate inalta fata de imunoglobulina gama umana sau animala. La populatia
sanatoasa, FR se gaseste in 3-5 % din cazuri in titruri joase. In cazul bolnavilor de
artrita reumatoida, la 70 80 % este prezent in titru inalt, iar in osteoartrite si febra
reumatica numai in 2 3 % se intalneste acest titru inalt. Poate apare si in alte boli

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 7/22

tbc pulmonar, lupus eritomatos, hepatita, sifilis din care cauza pozitivitatea FR se
poate aprecia numai impreuna cu alte date diagnostice.
Prezenta FR in serul bolnavilor care prezinta semne clinice corespunzatoare
artritei reumatoide are valoare decisiva in precizarea diagnosticului. Determinarea
semicantitativa a FR face posibil ca medicul sa poata aprecia evolutia bolii.
In functie de prezenta sau absenta factorului reumatoid, poliartrita reumatoida
este clasificata in 2 categorii: seropozitiva sau seronegativa.
PCR (CRP) este o proteina neglicozilata cu structura pentamerica care
migreaza electroforetic in apropierea zonei gamma. Este un reactant de faza acuta care
creste rapid, dar nespecific, ca raspuns la leziuni tisulare si inflamatie, fiind un
indicator mai sensibil si mai prompt decat VSH.
Rolul fiziologic al PCR este complex:
o printr-un mecanism dependent de calciu se leaga de reziduurile de fosforil
colina ale multor fosfolipide si in special ale polizaharidului C pneumococic (de unde ii
provine si numele);
o se leaga de cromatina si histone, avand rol in clearance ul detritusurilor
celulare;
o este un factor major de opsonizare se leaga de fagocite si accelereaza
fagocitarea antigenelor si microorganismelor;
o se leaga de fractiunea C1q a complementului, determinand activarea
complementului pe calea clasica;
o se leaga de lipoproteinele LDL si detine probabil un rol in indepartarea acestora
de la nivelul placii aterosclerotice.
Desi principala sursa a PCR este ficatul, date recente indica faptul ca tesutul
arterial poate produce atat PCR cat si proteine apartinand sistemului complementului.
Nivelul PCR poate inregistra cresteri foarte mari (de 100 de ori sau chiar mai mult)
dupa traumatisme severe, infectii bacteriene, inflamatii, interventii chirurgicale sau
proliferari neoplazice.
PCR se poate pune in evidenta in infarctul miocardic acut si in numeroase boli
maligne, mai ales in faza de metastaza.

RPR Prezenta sau absenta reaginelor din proba analizata ajuta la

diagnosticarea sifilisului. Un rezultat pozitiv cu un test nontreponemic cum este RPR,

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 8/22

trebuie analizat si prin prisma unui test treponemic cum este TPHA, inainte de
confirmarea infectiei.
Rezultate fals pozitive au fost raportate in anumite situatii cum ar fi dependenta de
droguri, alte boli venerice, sarcina si postpartum, precum si boli autoimune.
Diagnosticul clinic nu ar trebui sa se bazeze pe rezultatul unui singur test ci ar trebui
sa integreze atat datele clinice, cat si pe cele furnizate de laborator.
TPHA este un test treponemic cu specificitate inalta, utilizat pentru confirmarea
serurile reactive la VDRL/RPR:
- identifica anticorpii treponemici IgG si IgM ;
- ca si pentru testele netreponemice, titrul variaza cu stadiul infectiei dar, dupa
o scadere spre stadiul tardiv, raman pozitive ani de zile (martor de infectie);
- seroconversia se produce extrem de rar (exceptie, TPHA la pacienti HIV pozitiv,
tratati);
- nu se utilizeaza in urmarirea evolutiei bolii si dupa tratament (exceptie sifilisul
congenital 18-24 luni).
Testul TPHA poate da reactii incrucisate cu alte forme de infectii treponemice si
de asemenea, s-au descris rezultate fals pozitive la unele cazuri de mononucleoza
infectioasa, lepra, tuberculoza, boli autoimune, la persoane aparent sanatoase dupa
viroze sau persoane care folosesc droguri.

6.2.

Principiul determinrii

Se foloseste metoda latex imunoturbidimetrica.

Particulele latex fac posibila observarea cu ochiul liber a reactiilor antigen
anticorp.
ASLO
Daca serul de cercetat contine anticorpi antistreptolizina O, in cantitate
suficienta, acestea formeaza punti intre particulele de latex sensibilizate cu
streptolizina O si suspensia isi pierde caracterul omogen, iar aglutinarea particulelor
devine evidenta.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 9/22

PCR
Daca in produsul examinat cantitatea de proteina C reactiva atinge nivelul
necesar, intre particulele sensibilizate de latex se formeaza punti de antigen anticorp,
suspensia isi pierde caracterul omogen si devine evidenta aglutinarea.
FR
In prezenta factorului reumatoid anticorpii antiimunoglobulinici produc punti
intre particulele de latex, suspensia isi pierde caracterul omogen, iar aglutinarea
devine evidenta.
RPR
Treponema pallidum determin apariia a 2 tipuri de anticorpi: anticorpii
diagnostici, reprezentai n principal de reagine, i anticorpii antitreponemici. Reaginele
sunt induse de fraciunea lipoproteic a Treponemei pallidum si sunt constituite din
punct de vedere biochimic n special din IgM si ocazional din IgG.
RPR este un test de floculare care foloseste ca antigen cardiolipina, care are o
structur chimic apropiat cu antigenii treponemici, cu adaus de colesterol si lecitin
pentru cresterea sensibilitatii si a specificitatii si tratate cu microparticule de carbon
pentru marirea diferentei vizuale ntre rezultatul pozitiv si negativ.
Astfel, dac o picatur de ser pozitiv si o pictur de reactiv sunt amestecate pe
suportul de test apar flocoane care sunt vizibile macroscopic, gratie particulelor de
carbon.
Dac reaginele nu sunt prezente n serul respectiv, flocularea nu se produce si
lichidul este colorat n gri clar.
In prezenta anticorpilor pacientului fata de antigenele proprii de suprafata sau fata
de antigene adsorbite pe membrana lor, hematiile aviare aglutineaza in retele
caracteristice formate din complexe imune.
Anticorpii anti Treponema pallidum prezenti in serul uman produc aglutinarea
eritrocitelor aviare sensibilizate cu un extract antigenic de Treponema pallidum. Ca
martor sunt folosite hematii nesensibilizate (fara antigene treponemice).

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 10/22

In cazul reactiilor specifice, anticorpii treponemici din serurile de testat determina

aglutinarea hematiilor aviare sensibilizate, intr-o retea caracteristica, iar hematiile
nesensibilizate, neaglutinate, sedimenteaza sub forma unui buton compact pe fundul
godeului de reactie.
6.3.

Probe biologice primare

Proba biologica primara este sangele integral recoltat de catre asistentul de

recoltare, in vacuete cu dop rosu (specific probelor pentru biochimie) de un volum in
concordanta cu numarul si tipul analizelor ce trebuie executate pentru pacientul
respectiv.
Prelucrarea probei primare se face in maximum 4 ore de la recoltare. Astfel
centrifugarea probei primare (sange total) se face in decurs de maximum 3 ore, dar nu
inainte de 30 de minute de la recoltare.
Serul se poate depozita:
pentru ASLO o saptamana la 20 80 C, iar congelat la - 200 C, o perioada
mai mare de timp; cu toate acestea se recomanda sa se efectueze determinarea pe
probe proaspete.
pentru PCR si FR 24 de ore la 20 80 C, iar congelat la - 200 C, o perioada
mai mare de timp; se recomanda sa se efectueze determinarea pe probe proaspete.

pentru RPR

pentru TPHA
6.4.
Factori care pot influenta rezultatele
Interferente: hemoglobina pana la 20 g/l, bilirubina pana la 10 mg/dl, factorul
reumatoid pana la 75 UI/ml si lipemia (trigliceride pana la 2500 mg/dl) nu interfera.
Pot apare reactii fals pozitive i n:
Mononucleoz;
Lepr;
Lupus eritematos;
Malarie;
Pneumonie viral.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 11/22

Tehnica TPHA poate ntlni, rar, reacii fals pozitive cu alte forme de infecie
treponemic sau mononucleoz infecioas, boli autoimune i dependen de droguri.
Nu se folosesc seruri lipemice, icterice, hemolizate.
6.5.

o
o
o

6.6.

Echipamente si resurse
ASLO/FR
suspensie de latex sensibilizat cu streptolizina O/IgG uman in tampon
glicina NaCl pH 8,6 concentrat;
ser fiziologic;
control pozitiv ;
control negativ ;
placi de unica folosinta / placa impartita in 6 campuri;
pipete serologice sau automate;
ceas de laborator, centrifuga.
PCR
o reactiv PCR latex;
o tampon glicina NaCl pH 8,6 concentrat;
o control ser pozitiv;
o control ser negativ;
o placa impartita in 6 campuri;
o pipete de unica folosinta.
pipeta automata de 20-200 l;
varfuri galbene pentru pipeta automata;
microplaci cu fundul in U.

Reactivi, calibratori si materiale de control

Trusa de RPR-carbon contine reactiv (suspensie stabilizat de lipide si carbon), control

pozitiv i negativ, carduri test, beioare pentru amestecare, flacon i ac de pipetare.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 12/22

Trusa se va depozita la 2-8C. Cardurile, betisoarele, flaconul si acul de pipetare

pot fi pastrate la temperatura camerei.
Reactivul si controalele sunt stabile pana la data marcata pe eticheta daca
recipientele sunt pastrate bine inchise si daca este prevenita contaminarea in timpul
utilizarii lor.
Indicii privind deteriorarea:
Reactiv: aglutinare vizibila in flacon.
Controale: prezenta de particule.
PREPARAREA REACTIVILOR:

reactivul: agitati flaconul pana ce se obtine o suspensie omogena; montati acul

pe flaconul de pipetare si aspirati cantitatea necesara de ractiv.
Controalele sunt gata de utilizare.

Controalele pozitiv (C+) si negativ (C-) trebuie testate impreuna cu probele

pacientilor, pentru a verifica performantele testului.
Controlul pozitiv (C+) trebuie sa produca o aglutinare clara si vizibila a particulelor
de carbon.
Controlul negativ (C-) nu trebuie sa produca aglutinarea particulelor de carbon.
TPHA
Reactivi si controalele sunt incluse in kit. Avem 2 nivele de control:
negativ si pozitiv.
Continutul Kitului de TPHA:
A.Celule sensibilizate. 2 x 7.5ml. Suspensie stabilizata de eritrocite aviare
sensibilizate cu antigen de T.Pallidum, azida de sodiu 0.95 g/l.
B.Celule de control. 2 x 7.5ml. Suspensie stabilizata de eritrocite aviare, azida de
sodiu 0.95 g/l.
C-. Control negativ. 1 ml ser, azida de sodiu 0.95 g/l.
C+.Control pozitiv. 1 ml ser animal imun, azida de sodiu 0.95 g/l.
D.Reactiv. 40 ml.Tampon salin fosfat, pH 7.2, extract de T.Pallidum (Reiter),
azida de sodiu 0.95 g/l.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 13/22

Kitul se depoziteaza la 2-8C. Flacoanele trebuie depozitate in pozitie verticala,

altfel exista posibilitatea formarii agragatelor celulare. Suspensiile de celulele si
controalele sunt stabile pana la data marcata pe eticheta daca recipientele sunt
pastrate bine inchise si daca este prevenita contaminarea in timpul utilizarii lor.
Indicii privind deteriorarea reactivilor :
celulele : aglutinare vizibila in flacon.
reactiv si controale : prezenta de particule.
Prepararea reactivilor :
Reactivii A si B : se agita flaconul pana se obtine o suspensie omogena.
Reactivul si controalele sunt gata de utilizare.
6.7.

Testare
ASLO
o se lasa reactivii sa ajunga la temperatura camerei;
o se omogenizeaza reactivul latex prin agitare usoara;
o in cercul trasat pe lama se pune o picatura (50 l) din serul de cercetat
nediluat;
o se pune o picatura de reactiv latex peste picatura de ser aflata pe placa;
o se amesteca cele doua picaturi cu capatul plat al pipetei astfel incat sa
acopere toata suprafata cercului;
o se roteste exact 2 minute;
o se urmareste aparitia sau absenta aglutinarii;
o citirea se efectueaza in doua minute dupa incetarea rotirii lamei.
PCR / FR
- se lasa reactivii sa ajunga la temperatura camerei;
- se omogenizeaza reactivul latex prin agitare usoara;
- reactivul din picurator se impinge inapoi de doua ori, apoi se umple din
nou picuratorul;
o se pune o picatura (50 l) din serul de cercetat nediluat;
o se pune o picatura de reactiv latex peste picatura de ser aflata pe placa;
o se amesteca cele doua picaturi cu capatul plat al pipetei astfel incat sa
acopere toata suprafata cercului;

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 14/22

o se roteste lama manual timp de 2 minute;

o se urmareste aparitia sau absenta aglutinarii;
o citirea se efectueaza in 3 minute dupa incetarea rotirii lamei.
Evaluarea de dupa uscarea picaturii da rezultate eronate, pentru toate
determinarile. La fiecare serie de determinari se vor lucra controalele (pozitiv si
negativ).
Pentru a lucra testul RPR-carbon se parcurg umtorii pai:
1. Aduceti reactivii si probele la temperatura camerei.
2. Plasati 50 l de proba si cate o picatura din fiecare control in cercuri separate pe
suprafata cardului de test.
3. Agitati usor flaconul de pipetare ce contine reactiv. Atasati acul de pipetare pe gura
flaconului. Inversati flaconul cu acul atasat si presati-l usor pentru a elimina bulele de
aer ramase in interiorul acului.
4. Plasati acul in pozitie verticala deasupra cardului de test si adaugati o picatura de
reactiv in fiecare cerc, langa picatura de proba ce urmeaza a fi testata.
5. Amestecati cele doua picaturi cu betisoarele de unica folosinta furnizate, distribuind
amestecul pe intreaga suprafata a cercului (nu depasiti marginea). Utilizati cate un
betisor pentru fiecare proba.
6. Rotiti cardurile timp de 8 minute.
7. Se citete rezultatul la terminarea celor 8 min.
TPHA Se folosete ser proaspt de pacient. Serul poate fi depozitat la 2-8C
timp de 5 zile. Pentru perioade mai lungi, eantioanele de ser trebuie ngheate la
20C.
Controlul calitii kitului:
nainte de a realiza un set de determinri se recomand testarea reactivilor cu
fiecare dintre controalele incluse n kit, urmrind paii menionai n seciunea

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 15/22

corespunztoare. Dac nu se obin rezultatele ateptate, nu se va introduce kitul in

lucru.
Utilizarea controalelor pozitiv si negativ:
Controalele pozitiv si negativ furnizate in kit, trebuie testate impreuna cu probele
pacientilor, pentru a verifica performantele testului, lund n considerare c acetia
sunt prediluai la 1:20. Se adaug 25 l din fiecare reactiv de control direct n
godeurile 3 i 4. Nu se adaug nici o soluie de diluare.
Controlul pozitiv trebuie s prezinte aglutinare clara si vizibila cu celulele
sensibilizate A dar nu si cu cele B n testul calitativ i o reacie pozitiv la titrul
menionat n prospect o diluare dublat n testul cantitativ.
Controlul negativ nu trebuie s prezinte aglutinare cu niciuna din tipurile de
celule.
Se pun separat controalele, in godeul 1si 2 contol negativ si in 3 si 4 control
pozitiv.
Se adauga apoi in godeurile 1 si 3 reactiv de control si in godeurile 2 si 4 reactiv
antigen.
Testul calitativ:
Se aduc reactivii la temperatura camerei, asigurndu-se c antigenul i reactivii
de control sunt complet resuspendai. Fiecare test necesit 4 godeuri, 2 din ele vor fi
folosite pentru a dilua proba.
- Se adaug 25 l de diluent n godeul 1; 100 l n godeul 2 i cte 25 l n
godeurile 3 i 4;
- Se adaug 25 l de prob (ser) n godeul 1. Se amestec coninutul godeului 1
i se transfer 25 l n godeul 2. Se amestec i se transfer 25 l din godeul 2 n
godeul 3, se amestec i se descarc 25 l din godeul 3;
- n continuare se transfer 25 l din godeul 2 n 4, se amestec i se descarc
25 l din godeul 4;
- Se adaug 75 l de reactiv control n godeul 3 i 75 l de reactiv antigenic n
godeul 4;
- Se amestec coninutul din godeuri prin rotire manual pe o suprafa plan
timp de 30 secunde;

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 16/22

- Se acoper placa i se incubeaz 45 minute la temperatura camerei, pe o masa

de lucru plana, ferita de vibratii;
- Dup expirarea timpului se citesc rezultatele.
Testul cantitativ:
Fiecare test necesit 8 godeuri. Se folosete ser uman diluat 1:10 preparat iniial
pentru testul calitativ (1 parte ser uman, 9 pri ser fiziologic 0,9%).
-Se adaug 25 l de diluent n godeurile1 si apoi 3-12
-In godeul 2 se pune 100l de diluent
-Se amesteca 25l de ser in primul godeu si se transfera in al doilea,apoi se
amesteca si 25l de amestec se trasnsfera in al treilea iar de aici se arunca 25l
amestec.
-Se preia 25l de amestec din godeul 2 si se tranfera in al 4 lea,si apoi se
continua dilutiile binare,in godeurile 5-12
-Se adaug 75 l de reactiv de control in godeul 3
-Se adauga 75 l reactiv antigen in godeurile 4-12
-Se amestec coninuturile din godeuri prin agitare uoar pe o suprafa plan
timp de 30 secunde;
-Se acopera placa i se incubeaz 60 min. la temperatura camerei; dupa
expirarea timpului se citesc rezultatele.
La fiecare serie de pacienti pentru testat, se efectueaza controlul negativ si
pozitiv.
Controlul pozitiv trebuie s prezinte aglutinare clara si vizibila cu celulele sensibilizate
A dar nu si cu cele B n testul calitativ i o reacie pozitiv la titrul menionat n
prospect o diluare dublat n testul cantitativ.
Controlul negativ nu trebuie s prezinte aglutinare cu niciuna din tipurile de celule.
Orice aglutinare observata cu celulele de control B reprezinta aglutinare nespecifica. O
proba de acest fel nu poate fi testata cu acest kit.
6.8. Evaluare externa a calitatii
Se face conform programului de comparri interlaboratoare al organizatorului de
schem stabilit anual.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 17/22

6.9. SPECIFICATII DE PERFORMANTA

TPHA Metoda are o sensibilitate analitica echivalenta cu aceea observata cand
se utilizeaza WHO Reference Serun for Diagnostic Test for Treponemal Infections.

6.10.

Rezultate

RPR
Rezultatele testului:
Aglutinare = reacie pozitiv;
Lipsa aglutinrii = recie negativ
Citirea se face imediat dup trecerea celor 8 min. de agitare, cu ochiul liber, de preferat
n lumin natural.
Rezultatul negativ apare ca un punct format din microparticule de carbon
concentrate n mijlocul cercului de testare, sau ca o suspensie omogen n tot cercul
de testare.
Rezultatul slab pozitiv este caracterizat de o concentrare de agregate fine nconjurat
de o zon difuz de agregate fine negre.
Rezultatul pozitiv este caracterizat de prezena agregatelor negre rspndite
generalizat pe toat suprafaa cercului de testare.
TPHA

Citirea rezultatelor:

Se examineaza prezenta si modul in care s-a produs aglutinarea celulelor. Se

compara modul de aglutinare observat in godeurile ce contin celule sensibilizate cu
modul de aglutinare observat in godeurile ce contin celule de control.

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 18/22

Controlul negativ nu trebuie s prezinte aglutinare cu niciuna din tipurile de

celule.
Controlul pozitiv trebuie s prezinte aglutinare clara si vizibila cu celulele
sensibilizate A dar nu si cu cele B n testul calitativ i o reacie pozitiv la titrul
menionat n prospect o diluare dublat n testul cantitativ.
Testul calitativ:
Un rezultat pozitiv indic prezena anticorpilor de Treponema pallidum dintr-o
infecie trecut sau prezent.
Un rezultat negativ indic absena anticorpilor de Treponema pallidum.
Un rezultat dubios (la limit) poate corespunde unui nivel sczut de anticorpi n
fazele timpurii de sifilis sau a unor anticorpi reziduali n sifilisul tratat. n acest caz, o
alt prob ar trebui testat pentru a demonstra o cretere a titrului de anticorpi.

6.11. Interval biologic de referinta

VDRL NEGATIV

Tabel pentru aprecierea rezultatelor TPHA calitativ.

Grad de aglutinare
Strat neted de celule ce
acopera complet fundul
godeului

Citire

Interpretare

4+

Pozitiv - prezenti anticorpi T.

Pallidum= infectie activa sau in
antecedente

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Strat neted de celule ce

acopera partial fundul
godeului
Reteaua de glutinare este
inconjurata de un inel de
hematii
Reteaua de glutinare de
diametru redus, inconjurata
de un inel gros de hematii
Buton de hematii cu o
deschidere in centru
Buton de hematii cu/fara o
foarte mica gaura in centru

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 19/22

Pozitiv
3+

2+

Pozitiv

Pozitiv
1+
+/-

La limita - nivel de anticorpi

scazut sau rezidual (se repeta)
Negativ - absenti anticorpi T.
pallidum

Testul cantitativ:
Titrul aproximativ este dat de cea mai mare diluie n godeul n care apare o
reacie pozitiv.

6.12. Raportarea rezultatelor

Rezultatele analizelor sunt introduse manual n SIL.
Dup introducerea n SIL, rezultatele sunt verificate de catre SL prin sondaj.
Rezultatele sunt raportate pe Buletine de analize medicale.
Acest buletin este autorizat a fi eliberat de ctre SL, care poate aduga i observaii
sau recomandri cu privire la aceste rezultate.
TPHA Rezultatele se inscriu pe Lista de lucru zilnica apoi se introduc manual, in
SIL, unde sunt validate de catre RA si listate.
Rezultat negativ pentru testarile calitative: negativ.
Rezultat pozitiv pentru testarile calitative: pozitiv (+/++/+++/++++).

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 20/22

Rezultat pozitiv pentru testari semicantitative: pozitiv la dilutia 1/80 sau

1/160,1/320,1/640,1/1280,1/2560,1/5120,1/10240,1/20480 (gradul dilutiei la care
inca este pozitiv).
6.13. Siguranta, precautii si consideratii privind mediul
Probele trebuie manipulate ca fiind potenial infecioase (nivel II de biosecuritate).
Personalul implicat n efectuarea analizelor trebuie s in seama de urmtoarele
aspecte referitoare la securitate i protecie:
o Se folosete echipament de protecie (mnui i halate) n timpul lucrului.
o Nu se mnnc, nu se bea i nu se fumeaz n camera de lucru.
o Se evit contactul sngelui cu pielea i cu mucoasele.

7.

INREGISTRARI SI ANEXE
7.1.

INREGISTRARI

7.1.1. Lista de lucru zilnica

7.1.2. Registru calibrari si control intern
7.1.3. Registru control extern

7.2.

ANEXE
N/A

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 21/22

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

8. ISTORICUL EDITIILOR/REVIZIILOR
Editia/
Revizia

Data editiei/
Reviziei

Descrierea
modificarii

1/0

23.09.2013

Prima aparitie

Nume si prenume
Elaborat
Dr. Deac
Liliana
RA

Verificat
Dr.
Deac
Liliana
SL

Aprobat
Dr. OlteanPetria IoanHadrian
MA

SPITALUL ORASENESC DR. VALER RUSSU LUDUS

LABORATOR ANALIZE MEDICALE
Cod: PS-xx
PROCEDURA
SPECIFICA

REACTII DE AGLUTINARE ASLO,

PCR,FACTOR REUMATOID, RPR, TPHA

Editia: 1/Revizia: 0
Data intrarii in
vigoare: 23.09.2013
Pagina: 22/22

LISTA DIFUZARE - RETRAGERE

Cod
document

Editia/
Revizia

Copia nr.

PS-xx
PS-xx

1/0
1/0

Difuzare
Nume
Prenume/
Functia
???

Semnatura/
Data

RENAR

N/A

Retragere
Nume
Prenume/
Functia

Semnatura/
Data