Universidad de Sonora

Divisin de ciencias biolgicas y de la

salud
Departamento de investigaciones
cientficas y tecnolgicas
Practica # 1: Conteo Celular en cmara
de Nuebauer
Biologa Celular
Martin Centeno Vejines

Hermosillo, Sonora, Mxico a 19 de junio de 2015

RESUMEN
Un hemocitmetro es un dispositivo utilizado para simplificar el recuento de clulas
cuando las clulas estn disueltas en grandes cantidades. A menudo se utiliza
para estimar la concentracin de clulas en la sangre y para contar un gran
nmero de colonias de microorganismos en fluidos, tales como levaduras y
bacterias. Un hemocitmetro es una pequea placa de vidrio con una depresin
poco profunda en la que se pipetea una muestra. La depresin se divide en una
rejilla de malla fina que consta de muchos pequeos cuadrados que miden
alrededor de 0,05 mm2. Estas divisiones nos permiten contar las clulas bajo un
microscopio y luego estimar la cantidad total en la muestra, contando clulas en
algunos cuadrados y haciendo uso de la estadstica. Finalmente por medio de la
observacin al microscopio del nmero total de clulas, se es capaces de
encontrar la concentracin de las clulas.
INTRODUCCIN
La cmara
de
Neubauer es un instrumento
utilizado
en medicina y biologa para
realizar
el
recuento
de clulas en un medio lquido,
que puede ser un cultivo
celular, sangre,
orina, lquido
cefalorraqudeo, lquido sinovial, etc.

Esta cmara de recuento est adaptada al microscopio de campo claro o al de

contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente
deprimidas en cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una
cuadrcula de dimensiones conocidas. Se cubre la cmara con un cubreobjetos
que se adhiere por simple tensin superficial (en especial una vez que se haya
aadido la muestra lquida).
Luego se introduce, por capilaridad entre la cmara y el cubre, el lquido con las
clulas a contar, generalmente tras una dilucin previa; puesto que la cmara tiene
dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultneamente. Se observa la
retcula al microscopio con el aumento adecuado y se cuentan las clulas.

A partir del nmero de clulas contadas, conociendo el volumen de lquido que

admite el campo de la retcula, se calcula la concentracin de clulas en la
muestra lquida aplicada.1
El clculo de la concentracin de clulas se puede expresar as:
Partculas / l = (partculas contadas) / [(superficie contada (mm) profundidad de
la cmara (mm)] dilucin

En la retcula central, la cmara de Neubauer tiene un cuadrado primario que

contiene nueve cuadrados secundarios, cada uno de ellos dividido a su vez en 16
cuadrados terciarios. El cuadrado secundario central contiene no 16, sino 25
cuadrados, cada uno de ellos dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En
los bordes de este cuadrado central se cuentan los hemates, utilizando slo los
cuadrados de los bordes del terciario central y uno de los centrales. En los
secundarios de los bordes superiores e inferiores de la cmara se hace el
recuento leucocitario.
OBJETIVO
Apreciar la organizacin estructural y morfologa de las celular vegetales y
animales a travs del uso del microscopio ptico
OBJETIVOS ESPECIFICOS
-Hacer preparaciones de clulas vivas en un portaobjetos
-Usar correctamente el microscopio ptico
-Determinar las caractersticas morfolgicas de las diferentes clulas
-Hacer conteos de las clulas a travs de un hematocitometro

MATERIALES Y METODOS
Se coloca en un portaobjeto una gota del cultivo, se cubre con un
cubreobjetos y se observa en el microscopio
Cuantificacin celular:
1. El cultivo se agita para que las clulas tengan una distribucin uniforme
2. Una muestra representativa del cultivo se colecta en un tubo de ensayo
o matraz. De este se toma un ml, que se pone en otro tubo de ensayo o
recipiente de volumen pequeo, y en casa de ser necesario, se fijan
agregndole la punta de una pipeta Pasteur inmersa en una solucin de
lugol o una gota de formol concentrado.
3. Si el cultivo est muy denso (mayor que 10^6 clulas/ml) se diluye el
contenido del tubo de ensayo que contiene 1 ml de muestra de agua
destilada o agua de mar libre de impurezas.
4. Se agita manualmente o mediante un agitador mecnico para la
distribucin sea uniforme.
5. Una vez diluida y uniformizada la muestra, se selecciona una
submuestra con una pipeta Pasteur.
6. El hematocitometro con su portaobjetos encima se llena con la micro
pipeta haciendo un ngulo de 45 con respecto al plano horizontal
7. Se coloca el hematocitometro en el microscopio y se observa y
cuantifica las clulas.
8. El registro se hace contando las clulas presentes en cada una de las
subdivisiones mayores de las cuadriculas.
9. Con un hematocitmetro de 0.1 mm de profundidad, la densidad de
micro algas se calculan de acuerdo a la siguiente relacin:
D = C. 10^6
Donde:
D = densidad del cultivo en celulas/ml2
C = numero promedio de las clulas en una cuadricula de 1 mm 3, de ser
necesario C se multiplica por el factor de dilucin
Manejo del microscopio:
1. En cuanto a la iluminacin:
a) Encender la fuente luminosa

b) Si el microscopio tiene espejo, coloque la lmpara cerca del microscopio

(20 o 25 cm de distancia) y con el espejo cncavo dirija la luz hacia el
condensador.
2. Colocacin de la preparacin
c) colocar el objetivo de 10x y bajar o subir la platina a trmino medio
d) tome su preparacin con la mano (dedo ndice y pulgar)
e) coloque la preparacin en la platina, asegurndose que la parte donde el
objeto a observar este en el orificio de la platina. Sujete con las pinzas.
3. Enfoque:
f) Mirando por el ocular proceda a subir lentamente la platina con el tornillo
micromtrico, hasta encontrar la imagen del objeto, con el tornillo micromtrico
precise el enfoque, de ser necesario gradu la luz para ms comodidad.
g) Para obtener mayor aumento, sin mover la platina, gire el revlver y
coloque en posicin el objetivo de 40x y rectificar con el tornillo micromtrico. El
mismo procedimiento en el objetivo de 100x, solo colocando una gota de aceite de
inmersin.
RESULTADOS
Cuadro #1 = 146
clulas

Cuadro #3 = 157

Cuadro #2 = 187
clulas

Cuadro #4 = 136

Muestra: Chaetoceros
Sumatoria = 576
Promedio = (144)
Estadstica = (144) (10000) (2)
Clulas totales por ml = 2, 880, 000 Chaetoceros

DISCUSIN
Dependiendo del tipo de muestra a medir, se ha de habr de preparar una muestra
con una concentracin apta para su recuento. Tpicamente, el rango de
concentraciones que permite contar el hematocitmetro est entre 250.000 clulas
y 2,5 millones de clulas por ml. Algo tpico es que la muestra tenga una
concentracin en torno a 10^6 (1 milln) aplicando las diluciones
correspondientes. Por debajo de 250.000 clulas / ml (2,5 * 10^5) la cantidad de
clulas contadas no es suficiente para poder dar una estimacin lo
suficientemente fiable de la concentracin celular
CONCLUSIN

De acuerdo a la literatura citada, el resultado obtenido el laboratorio es

incongruente, aparentemente, esto puede deberse a una mala agitacin del tubo
de donde se obtuvo la muestra, o un probable conteo errneo en la cmara de
nuebauer
CUESTIONARIO:
1. Describa las partes fundamentales de un microscopio
1 * Ocular: lente situado cerca del ojo del observador. Capta y ampla la
imagen formada en los objetivos.
2 * Objetivo: lente situado en el revlver. Ampla la imagen, es un elemento
vital que permite ver a travs de los oculares.
3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparacin.
4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.
5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
6 * Tubo: es la cmara oscura que porta el ocular y los objetivos. Puede
estar unida al brazo mediante una cremallera para permitir el enfoque.
7 * Revlver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes aumentos,
y que rota para poder utilizar uno u otro, alinendolos con el ocular.
8 * Tornillos macro y micromtrico: Son tornillos de enfoque, mueven la
platina o el tubo hacia arriba y hacia abajo. El macromtrico permite
desplazamientos amplios para un enfoque inicial y los micromtricos
desplazamientos muy cortos, para el enfoque ms preciso. Pueden llevar
incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el tubo a una
determinada altura.
9 *Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que
se coloca la preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de
la fuente de iluminacin situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener
el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera que permite
mover la preparacin. Puede estar fija o unida al brazo por una cremallera
para permitir el enfoque.

10 *Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de

enfoque asociados al tubo o a la platina. La unin con la base puede ser
articulada o fija.
11 * Base o pie: Es la parte inferior del microscopio que permite que ste
se mantenga de pie.
2. Realiza un esquema del tipo de clula observada

3. Diferencias estructurales de las clulas procariotas y eucariotas

4. Tipos de hematocitometro y su uso

Los hay de distintas reas en el cuadriculado de la cmara central y con
distintas profundidades. Dependiendo de tipo de clulas que se quieran utilizar
se usara el ms apto para cada trabajo

Literatura citada

Valzaby. (2013). History of the Hemacytometer. 2015, de

http://futurescienceleaders.org/
Sitio
web:
http://futurescienceleaders.org/researchers2012/2013/0
2/history-of-the-hemacytometer/

Anonimo.
(Desconocido).
Conteo
Celular
con
Hematocitmetro Uso Elemental del Hematocitmetro.
2015,
de
Celeromics
Sitio
web:
http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Co
nteo-Camara-Neubauer.pdf

Anonimo. (Desconocido). Partes de un microscopio .

2015,
de
areaciencias.com
Sitio
web:
http://www.areaciencias.com/partes-microscopio.htm