UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS-DEPARTAMENTO DE FARMACIA

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUMICA
PROFESORES: MARITZA ROJAS - JUAN CAMILO MARN

Jessica Lorena Izquierdo Merchn Cd. 124847

Grupo 14

INFORME No. 6
EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE FLAVONOIDES
OBJETIVOS
General
Comprobar la presencia de flavonoides a travs de pruebas cualitativas en una
muestra de flores de Sauco, y con base en los resultados obtenidos determinar si la
especie Drymis granadensis contiene dicho grupo de molculas.
Especficos
Conocer el fundamento terico y prctico de las diferentes pruebas
cualitativas para la identificacin de flavonoides.
Llevar a la prctica los conocimientos adquiridos tericamente sobre
cromatografa de capa delgada con el fin de identificar sustancias.
Conocer la razn por la cual el agua de repollo morado reacciona con H 2SO4, y
HCl dando cambios en la coloracin de la solucin.
MARCO TERICO
Los flavonoides son metabolitos secundarios que comprenden varias clases de
sustancias naturales, entre las cuales estn muchas de las que les confieren colores
amarillo, naranja, rojo, violeta y azul, a muchas flores, hojas y frutos, especialmente.
Presentan una estructura qumica muy definida, son molculas que tienen en su
estructura dos anillos bencnicos unidos mediante una
cadena de tres tomos de carbono, estructura denominada
C6C3C6.
Figura No. 1: Esqueleto Carbonado C6C3C6 de los
Flavonoides
Los flavonoides se clasifican en varias clases de acuerdo con las variantes
estructurales que presenta la cadena central C 3, algunos de los grupos son:
chalconas, flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas,
catequinas, epicatequinas, auronas, isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc.

Dentro de las plantas, estas sustancias se encuentran la mayora de las veces,

ligadas a molculas de carbohidratos; a este tipo de combinacin ncleo flavonoide
bsico con una o varias unidades de carbohidratos, se les denomina glicsidos, y
cuando no tienen ligadas molculas de carbohidratos se las denomina agliconas
flavonoides.
Las propiedades fsicas dependen de la clase de flavonoide considerado y su forma
(libre, glicsido sulfato); las flavonas, flavonoles y auronas, debido al sistema
conjugado son compuestos slidos con colores que comprenden desde el amarillo
muy tenue hasta el rojo; las antocianidinas son de colores rojo intenso, morado,
violeta y azul; las flavanonas y flavanonoles debido al carbono quiral C-2 presentan
el fenmeno de rotacin ptica; los glicsidos son en general slidos amorfos,
mientras que las agliconas y los altamente metoxilados son cristalinos.
La solubilidad de los flavonoides depende de la forma en que se encuentren y el
nmero y clase de sustituyentes presentes; los glicsidos, las antocianidinas y los
sulfatos son solubles en agua y alcohol; las agliconas flavonoides altamente
hidroxiladas son solubles en alcohol, mientras que las poco hidroxiladas lo son en
solventes como ter etlico, acetato de etilo y acetona; las agliconas flavonoides
altamente metoxiladas son solubles en solventes menos polares como el ter de
petrleo y el cloroformo; los flavonoides con hidroxilos fenlicos son solubles en
soluciones alcalinas, pero algunos altamente hidroxilados se descomponen por
accin de las bases fuertes, lo que permite reconocerlos y diferenciarlos de otros.
Los glicsidos flavonoides son slidos amorfos que se funden con descomposicin,
mientras que las correspondientes agliconas son slidos cristalinos.
Los flavonoides son metabolitos secundarios vegetales de origen biosinttico mixto:
el anillo A proviene de la ruta de la malonilcoenzima A y el anillo B y la cadena C3
provienen de la ruta del cido shikmico; un trictido se cicliza y se condensa con
una molcula de cido p-cumrico; la enolizacin del ciclo proveniente de la ruta de
la malonilCoA da origen al anillo aromtico A en las chalconas y flavanonas, que a
su vez son los precursores de las dems clases de flavonoides; este proceso de
biosntesis sustenta el hecho de que en la mayora de flavonoides el anillo A sea
meta-oxigenado, es decir como es caracterstico de los anillos aromticos originados
por la va de la malonilCoA; y por otro lado, el anillo B proveniente de la ruta del
cido shikmico, generalmente es orto-oxigenado.
METODOLOGA

RESULTADOS
HOJAS DE SAUCO
SOLVENTE

PRUEBA
Blanco

Cloruro Frrico

ACETATO DE
ETILO

Prueba positiva
para compuestos
fenlicos
Magnesio/cido
Clorhdrico

OBSERVACION
Coloracin
marrn
traslcida.

Se
observa
color marrn
oscuro

Se observa
rojiza.

solucin
verdoso

coloracin

Prueba positiva
para flavonoides
con nucleo benzopirona
Leucoantocianidin
as

Se observ coloracin
de la solucin amarilla y
en el fondo verdosa.

Prueba negativa

n-BUTANOL

Blanco

Coloracin amarillo-caf
traslcido.

Cloruro Frrico

Se
observa
solucin
color marrn oscuroverdoso.

Prueba positiva
para compuestos
fenlicos
Magnesio/cido
Clorhdrico
Prueba positiva
para flavonoides

Se observa
roja.

coloracin

RESULTADOS

con nucleo benzopirona

Leucoantocianidin
as
Prueba negativa

HOJAS DE DRIMYS GRANADENSIS

SOLVENTE
PRUEBA
Blanco

Cloruro Frrico
Prueba positiva
para compuestos
fenlicos
ACETATO DE
ETILO

Magnesio/cido
Clorhdrico

No
se
observ
coloracin de la solucin
naranja, rojo o violeta;
sino color marrn.

OBSERVACION
Coloracin
marrnamarillento.

Se
observa
solucin
color
marrn-verdoso
oscuro.

Se observa
vinotinto.

coloracin

Prueba positiva
para flavonoides
con nucleo benzopirona
Leucoantocianidin
as
Prueba negativa

Blanco

No
se
observ
coloracin de la solucin
naranja, rojo o violeta;
sino color marrn.

Coloracin rojo-naranja
translcido.

RESULTADOS

Cloruro Frrico
Prueba positiva
para compuestos
fenlicos
n-BUTANOL

Se
observa
solucin
color
marrn-verdoso
oscuro.

Magnesio/cido
Clorhdrico
Prueba positiva
para flavonoides
con nucleo benzopirona

Se observa coloracin
naranja-rojiza.

Leucoantocianidin
as

Se observ coloracin
de la solucin rojiza.

Prueba positiva

Cromatografa en Capa Delgada:

Sin UV
ANTES DE
REVELAR

DESPUS DE
REVELAR
CON NP-PEG

Rf Sen: 3,7/3,9= 0,95

Rf Drymis granadensis: 1,55/3,9= 0,39

180 nm

364 nm

REPOLLO

DISCUSIN
Los resultados nos permitieron deducir que las hojas de Sen contienen Glicosidos
Antracenicos, y las de Drimys no los contienen.

PRUEBAS QUMICAS

Es posible identificar distintos tipos de flavonoides mediante reacciones con

resultados de color y propiedades de solubilidad. Cuando no hay interferencia de
pigmentos no flavonoides, el material vegetal se puede ensayar directamente. Los
extractos acuosos de pigmentos tambin muestran variaciones en color cuando se
les adiciona un lcali: las flaconas, y los flavonoles se ponen amarillos, las flaconas e
isoflavononas viran a diversos tonos de rojo, las charconas a prpura rojizo, los
flavonoles a caf-anaranjado y las antocianinas a azul.
De las reacciones coloridas o pruebas qumicas realizadas durante la prctica solo
una tiene especificidad, las otras dos son inespecficas para flavonoides en general.
ENSAYO DE CLORURO FERRICO
Esta prueba no es especfica para flavonoides ya que la reaccin que ocurre es la
formacin de un complejo de cloruro frrico con un fenol, y como se sabe que los
flavonoides poseen grupos fenlicos que son los que en mayor parte le dan la
capacidad de antioxidante a estos compuestos, entonces esta molcula reaccionar
dando prueba positiva para fenoles.
Generalmente la presencia de de una
coloracin verde sugiere derivados del catecol y un color azul, derivados del
pirogalol.
La reaccin que se lleva a cabo es la siguiente:

Como se puede observar, la reaccin no requiere un medio especfico para ser

llevada a cabo, esta se realiza en solucin acuosa, previamente agregado etanol al
extracto. Al no ser esta una prueba especfica para flavonoides, se puede correr el
riesgo de obtener como resultado falsos positivos, es decir, que dentro del extracto
no hayan solo flavonoides, sino otros compuestos que presenten esta estructura
(Fenol), por tanto para asegurar la presencia de flavonoides no se conviene utilizar
este reactivo como identificacin especfica.
Para las seis fracciones a las cuales se les realiza esta prueba durante la prctica
(fase acuosa, fase orgnica de acetato de etilo y fase orgnica de n-butanol, en
extractos de Sauco), se observa un muy evidente resultado positivo, todas
adquieren una coloracin verde intensa, lo que indica una alta concentracin de
flavonoides presentes como fenoles en las fracciones.
ENSAYO DE SHINODA
Este ensayo consiste en agregar al flavonoide disuelto en etanol magnesio metlico
y lentamente unas gotas de acido clorhdrico. La formacin de una coloracin
naranja, rojiza o violeta evidencia la presencia de compuestos que tiene el ncleo de
la
- benzopirona como los flavonoles, flaconas, flavononoles, flavononas,
isoflavonas entre otros, por tanto esta prueba se considera especfica para
flavonoides aunque otros compuestos como las Xantonas que no tiene este ncleo
dan prueba positiva, pero en este caso la prueba se considera especfica.
Aunque el mecanismo de la reaccin no se conoce, se cree que se produce una
reduccin, ya que la presencia de acido clorhdrico ayuda a la produccin de H 2 in
situ que sirve de catalizador para producir la reduccin del respectivo flavonoide en
presencia de un metal como el magnesio. Aunque se han hecho experimentos que
demuestran que en presencia de otros metales se forma otra coloracin se cree que
es la misma reaccin.

+
O

Mg / HCl

MgCl 2

OH

Segn los resultados obtenidos para las distintas fracciones del extracto de sauco,
en todas ellas se encuentran presentes estos tipos de flavoniodes, pues para todas
se observan resultados positivos, siendo mayor la concentracin de flavonoides

antes de hacer las extracciones con n-butanol y acetato de etilo, pues la prueba
realizada al concentrado suspendido en ETOH:H 2O la coloracin es roja muy intensa,
mientras que en la prueba realizada a cada una de las otras fracciones se observa
una coloracin rosada de menor intensidad.
ENSAYO DE HCl
Esta prueba sirve de reconocimiento de uno de los derivados de los flavonoides, las
leucoantocianidinas, esta reaccin se basa en la transformacin de la
leucoantocianidinas en antocianidinas cuando esta es sometida a calentamiento en
presencia de un acido mineral, generalmente acido clorhdrico, con esta prueba se
espera obtener un color rojo intenso. 4 La reaccin que se lleva a cabo es la ilustrada
en el siguiente esquema:

Como se puede apreciar en la reaccin y el mecanismo, esta estructura es un

derivado de los flavonoides, y por lo tanto esta prueba se puede considerar
especfica para este tipo de compuestos, aunque no los reconozca en su forma
general, es decir no reconozca cualquier flavonoide. Para comprobar la presencia de
antocianidinas en los extractos se agrego etanol a estos y se procedi a agregar
acido clorhdrico y posteriormente se sometieron a calentamiento, esperando
observar como prueba positiva coloraciones naranjas, rojizas o violetas.
Para el extracto de sauco se observa respuesta negativa en las dos fracciones
orgnicas, tanto n-butanol como acetato de etilo, tras el calentamiento no se
observa ningn cambio en la coloracin de las muestras; para la muestra de la fase
acuosa el resultado es inconcluso, pues se observa claramente un cambio de
coloracin, la solucin toma una coloracin caf muy intensa, pero no es naranja,
rojiza o violeta, esto puede indicar que las condiciones no fueron las adecuadas y no

alcanzo a formarse en la totalidad el compuesto que produce esta coloracin , es

decir la velocidad de reaccin era muy lenta y no se observo rpidamente el color;
pero tambin se puede considerar que en esos extracto no haya leucoantocianidinas
y por tanto no se dio la reaccin y que el color obtenido es producto de reacciones
colaterales que se pudieron haber formado en estas condiciones con otros
compuestos, ya que la presencia de flavonoides en una planta no indica siempre la
presencia de todos sus derivados.
CONCLUSIONES
La planta drimys granadensis no contiene glicsidos antracnicos.
La planta de Sen dio pruebas positivas para glicsidos antracnicos.
La cromatografa en capa delgada nos permiti identificar compuestos
antracnicos, mediante sus caractersticas de polaridad.
Borntrager-Klaus permite determinar la presencia de compuestos
antraquinonicos mediante la formacin de un complejo coloreado rojo que se
forma en la fase alcalina como consecuencia de la hidrolisis de estos y
oxidacin de antronas hasta antraquinonas.
REFERENCIAS
1. Sharapin N. Fundamentos de Tecnologa de Productos Fitoteraputicos.
CYTED-Convenio Andrs Bello, Bogot, 2000. P 28-38.
2. Sanabria G.A, Anlisis fitoqumico preliminar, departamento de Farmacia,
Universidad Nacional, Bogot 1983.
3. Universidad de san Carlos de Guatemala facultad de ciencias qumicas y
farmacia escuela de qumica farmacutica departamento de farmacognosia y
fitoqumica curso de fitoqumica. Pag 1, 2.
4. Kurman Galagovsky Lydia .Qumica organica fundamentos teoricos- practicos
para el laboratorio ; Departamento de qumica orgnica , facultad de ciencias
exactas y naturales Universidad de Buenos Aires. Pag: 117,118,125,126,127.
5. J. Lemli, S. Toppet, J. Cuveele, G. Jansse. Naphthalene Glycosides in Cassia
senna and Cassia angustifolia: studies in the field of drugs containing
Anthracene derivates. Planta Med 1981; 43: 11-17.
6. Ivo MahellySantizoRodas .identificacin de familias de metabolitos,
secundarios en Myricacerifera; universidad de san Carlos de Guatemala
facultad de
ciencias qumicas y farmacia, febrero 2004. pag: 44,45.