Sunteți pe pagina 1din 25

FAMILIA POXVIRIDAE.

DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL
VARIOLEI

CARACTERE GENERALE
ALE FAMILIEI POXVIRIDAE
Virusuri ADN genomice mari, de
structur complex, rezisteni n
mediul extern, se multiplic n
citoplasma celulei-gazd. Sunt
capabile s infecteze omul, animale
domestice i slbatice (subfamilia
Chordopoxvirinae) i diferite insecte
(subfamilia Entomopoxvirinae)

Clasificarea subfamiliei
Chordopoxvirinae
Genul Orthopoxvirus (gazde naturale
omul, animalele)
Genul Parapoxvirus (om, animale)
Genul Avipoxvirus (psri)
Genul Capripoxvirus (caprine, bovine)
Genul Leporipoxvirus (roztoare)
Genul Suipoxvirus (suine)
Genul Molluscipoxvirus (om, cimpanzeu)
Genul Yatapoxvirus (om, maimue)

Caractere morfologice
Dimensiuni 250-400 nm
Virion n form de caramida sau spunier
Genomul ADN dublucatenar, liniar,
comportnd apr. 200 gene. Genele eseniale
n replicare sunt situate n centrul
genomului, iar cele neeseniale la
extremiti (codific proteine similare
citokinelor (virokine), sau receptori pentru
chemokine, interferon, interleukine i
factori de cretere (viroceptori). Proba bil
sunt de origine celular, capturate n cursul
co-evoluiei cu celulele-gazd.

Nucleocapsida biconcav, nconjurat


de o membran intern i un strat
palisadic (structur numit core ,
miez). NC este flancat de 2 corpi
laterali, funcia lor nu este cunoscut .
Membrana extern, lipoproteic, pe
care sunt plasate nite structuri
tubulare.
Din componena virionului fac parte
cel puin 10 enzime cu rol n sintez i
replicarea ADN.

Structura antigenic a
poxvirusurilor
Este foarte complex. n cadrul
aceluiai gen exist inrudiri genetice
i antigenice, ceea ce permite
vaccinarea contra unei maladii cu un
virus asemntor antigenic, dar cu
virulena atenuat (ex. Virusul
variolei/Virusul vaccinal). ntre genuri
de asemenea exist reacii
ncruciate.

Genul Orthopoxvirus
Specii:
Virusul variolei (om)
Virusul vaccinal (om, bovine)
Cowpoxvirus (roztoare, pisici,
bovine, om)
Monkeypoxvirus (roztoare,
veverie, maimue, om)
Camelpoxvirus (cmile, dromadari)

VIRUSUL VARIOLEI
Cultivare
1. MCA a embrionului de gin de 12 zile.
Virusul variolei induce formarea unor
vezicule (pox) mici, albicioase, opace,
bombate. Virusul vaccinal formeaz
vezicule mari, albe, opace. Monkeypox
determina leziuni hemoragice. Formarea
veziculelor este limitat de temperatura
de cultivare: 40,5 C (virusul vaccin al),
38,5 (virusul variolei). Celulele infectate
conin incluzii intra-citoplasmatice
(corpii Guarnieri)

2. Animale de laborator. Virusul vaccinal,


inoculat prin scarificare pe corneea
iepurelui (testul Paul), provoac o
keratit purulent n cteva zile. Virusul
variolei se poate reproduce pe unele
maimue.
3. Culturi celulare. Pot fi cultivate pe
culturi primare de rinichi uman sau de
maimu, fibroblaste embrionare de pui,
linii celulare HeLa, KB, Vero, etc. ECP se
manifest prin focare de necroz, care
apar mai tardiv pentru virusul variolei (56 zile) i n 3 zile pentru virusul vaccin al.


1.
2.
3.

4.
5.
6.
7.
8.

9.

10.

Ciclul replicativ
Adsorbia virionului la celulele permisive (ataarea are
loc prin multipli receptori)
Penetrarea prin fuziunea membranei externe cu MCP,
cu eliberarea miezului n citoplasm
n interiorul miezului are lor transcrierea ARNm
precoce, traduse ntr-o varietate mare de proteine
nestructurale.
Decapsidarea
Replicarea ADN cu formarea moleculelor intermediare
Genele intermediare sunt transcrise n ARNm tardive,
traduse n factori de transcriere tardivi
Transcrierea genelor tardive si sinteza proteinelor
structurale
Asamblarea cu formarea structurilor intermediare, cu
transformarea lor n virioni imaturi, care se vor
maturiza ulterior
Virionii maturi sunt nvelii cu membrana extern la
traversarea membranelor modificate ale ap. Golgi , apoi
transportate la periferia celulei
Eliberarea virionilor prin fuziunea lor cu MCP

Patogeneza variolei
Ultimul caz de variol n 1977 n Somali
n 1980 OMS a proclamat oficial eradicarea
mondial a maladiei
Pericol exist!!!
Conservarea i utilizarea experimental a
virusului variolic n laboratoare (SUA, Rusia)
Populaia nu este vaccinat
Circulaia virusului variolei maimuelor (n
Africa Central i de Vest), care se poate
transmite la om, precum i cazuri sporadice
de variol bovin n Marea Britanie i Rusia

Sursa de infecie omul bolnav (pe toat


perioada eruptiv)
Transmiterea aerogen, prin contact
direct
Virusul inhalat, depus pe mucoasa TRS,
este replicat in tesutul limfatic regional si
genereaza viremie primara cu invazia
sistemului fagocitic mononuclear. Dupa
replicarea ulterioara genereaza o viremie
secundara cu localizarea virusului in
epiderma, unde determina eruptia
caracteristica.

Perioada de incubaie 1-16 zile (12 zile


n mediu)
Semne clinice debut brutal, cu febr
nalt, stare de ru, cefalee i lombalgie.
ntre ziua a 2 i a 4 a pare un exantem care
evolueaz n 7-10 zile: maculele iniiale se
transform n papule, apoi n vezicule i
pustule. Ele se transform n cruste care
cad n 2-3 sptmni, lsnde cicatrice.
Toate elementele eruptive evolueaz
concomitent (difereniere de varicel).
Iniial leziunile apar pe fa, pe palme i
plante, apoi se rspndesc centrifug.

Varietati epidemiologice de variol:


Variola major foarte grav, letalitate
20-60% (edem pulmonar acut)
Variola minor letalitate pn la 1 %
Forme clinice grave variola
fulminant i hemoragic
Complicaii: - suprainfecie bacterian,
afectarea corneei, urmat de cecitate
Imunitatea antivariolica mediata
celular. Ac nu au rol protector

Virusul vaccinal
Este un virus de laborator, derivat din
virusul Cowpox bovin. Provoac la om o
infecie artificial, care protejeaz contra
variolei (principiul de vaccinare propus
de Edward Jenner, 1798)
Primovaccinarea prin scarificare
cutanat, multipunctur sau inoculare
sub presiune. Local apare elementul
eruptiv, care evolueaz pn la crust n
21 zile cu formarea unei cicatrice
Revaccinarea la subieci deja
vaccinai se observ o evoluie abortiv
sau cu formarea veziculelor.

Complicaiile vaccinarii:

Encefalit postvaccinal (1-6


decesuri la 1mln vaccinai),
Infecie generalizat letal la
imunodeprimai,
Eczema vaccinatum prin
autoinoculare sau heteroinoculare
(gur, vulv, regiunea anal,
conjunctiv, etc)

Diagnosticul de laborator al variolei


Prelevate: lichidul din erupii, raclat
vezicular, cruste, sediment urinar, saliv,
lacrimi. Atenie la respectarea regulilor de
autoprotecie ambalaj dublu, eticheta re
corecta.
Diagnostic microscopic (ME)
Detectarea Ag (RIF, RIHA, ELISA)
Diagnostic virusologic (izolarea i
identificarea)
Detectarea ADN viral (PCR n timp real)
Serodiagnostic (RN, RIFI, RIHA, RIHAds,
ELISA, RIHA) interes redus

Tratamentul variolei
Metisazon (Marboran) nu mai este
fabricat
Compui de Pb
Nucleozide carboxilice (inhibitori ai
metiltransferazei virale)
Cidofovir (Vistid) inhib in vitro
multiplicarea virusului variolei. Potenial
nefrotoxic, cere pregtire extempore.
Ribavirin (Virazol). Activ in vitro i
experimental pe oarece.

Profilaxia variolei
- Depistarea rapid i izolarea
bolnavilor
- Instaurarea strii de carantin
- Revaccinarea n focare
Vaccinul jenerian (15,4 mln doze n
SUA) nu mai este utilizabil
Vaccin viu produs pe culturi de celule
n SUA este utilizabil din 2004.

Poxvirusuri vectori de gene strine


Graie dimensiunilor mari ale ADN i
capacitii de incorporare a genelor strine
poxvirusurile constituie material pentru a
construi vectori ce exprim proteine de
interes medical, n special vaccinuri (proteine
virale virusul gripal A, HIV, etc).
Strategia:
- Primovaccinarea cu ADN purificat
- Revaccinare cu poxvirus recombinant,
exprimnd aceleai antigene ca i ADN
Efectul protector este determinat de imunitatea
celular