Sunteți pe pagina 1din 27

MICROORGANISMELE

SANITARO-INDICANTE.
ANALIZA SANITAROBACTERIOLOGICA A APEI SI
AERULUI

Microbiologia sanitar este


tiinta care se ocup cu
studiul florei microbiene a
mediului ambiant (inclusiv a
celei patogene) i a
proceselor cauzate de
activitatea lor vital, care in
mod direct sau indirect pot
influena sntatea omului.

Sarcinile microbiologiei sanitare:


Elaborarea, perfecionarea i evaluarea metodelor
microbiologice de examinare a obiectelor mediului ambiant
(ap, aer, sol, produse alimentare, obiecte de uz habitual,
etc)
Studiul i evaluarea influenei omului i animalelor asupra
obiectelor mediului
Elaborarea actelor normative - standardelor de stat (STAS),
a recomandrilor i indicaiilor metodice cu privire la
recoltarea probelor, condiiile de pstrare i expediere a
materialului de examinat, precum i metodica analizei de
laborator
Elaborarea recomandrilor i msurilor orientate spre
asanarea obiectelor mediului i controlul asupra realizrii
lor
Studiul legitilor relaiilor omului cu mediul ambiant i
elaborarea recomandrilor orientate spre protecia
sntii.

Microorganismele sanitaro-indicante
Inofensivitatea microbiologic a obiectelor
mediului ambiant nu se apreciaz direct,
prin depistarea microflorei patogene (ea nu
este permanent, este sensibil la
actiunea multor factori, cantitatea ei este
comparativ mic), ci indirect, prin
determinarea gradului de contaminare cu
reprezentani ai microflorei normale, care
se elimina n mediu cu excretele omului i
animalelor (ex.: m/f intestinal concluzie
despre poluare fecala cu posibil prezen
a microbilor patogeni).

Izolarea reprezentanilor microflorei


normale servete drept indice a strii
sanitare a obiectului, ceea ce permite
aprecierea pericolului potenial al
acestor obiecte pentru sntatea
populaiei. Aceste mi/o au fost
numite microorganisme sanitaroindicante (MSI).

Cerinele fa de MSI:
S fie prezente permanent n excretele omului i
animalelor i s fie eliminate n mediul extern n
cantiti mari
S nu existe alt rezervor natural dect organismul
omului i animalelor
S supravieuiasca pe obiectele mediului o
perioad mai ndelungat dect flora patogen
Lipsa multiplicrii sau multiplicare redus n mediu
S fie mai rezistente la aciunea factorilor mediului
S nu sufere modificri, astfel ca s fie identificate
fr dificultate
S poat fi depistate prin metode simple i
accesibile

Actualmente din categoria MSN,n


funcie de obiectul examinat, fac parte
E.coli, bacterii din grupul coli
(coliforme), enterococi, stafilococi,
Pseudomonas, Bacillus cereus, etc.
Aprecierea strii sanitare a obiectelor
mediului se efectueaza de asemenea
prin determinarea numarului total de
germeni/microorganisme
(NTG/NTM) la o unitate de volum sau
suprafa.

Analiza sanitaro-bacteriologic se efectueaza n


conformitate cu diferite acte normative:
Standarde de Stat (STAS), indicaii i recomandri
metodice, care sunt obligatorii pentru toate
laboratoarele. Aceste acte reglementeaz:
Metodele de recoltare a probelor
Cantitatea de produs recoltat
Condiiile de expediere n laborator
Metodele de examinare
Criteriile de apreciere a rezultatelor
Probele sunt nsotite de o fi n care se indic:
denumirea probei, locul i data recoltrii,
cantitatea, scopul analizei, instituia care va
efectua analiza, numele persoanei care a recoltat
proba.

EXAMENUL SANITARO-BACTERIOLOGIC AL APEI

Microflora apelor depinde de originea lor: ape


superficiale (ruri, lacuri, iazuri, rezervoare,
etc), ape subterane (izvoare, fntani, etc),
ape atmosferice (zpad, ploi), apa de mare.
Din punct de vedere al utilizarii distingem:
apa potabil i menajer din sistemul
centralizat i necentralizat de aprovizionare
apa bazinelor de not
gheaa medicinal i menajer
ape reziduale

Analiza sanitaro-bacteriologic a
apei se efectueaz cu scopul
unui control curent al calitii
apei potabile furnizat de
instalaii centrale sau din surse
locale la toate etapele
aprovizionrii (captare, instalaii
de epurare, reea de distribuie,
robinete).

Examenul sanitaro-bacteriologic al apei se


efectueaz pentru:
Selectarea surselor de alimentare central cu
ap potabil i menajer
Controlul periodic al eficienei dezinfeciei apei
potabile furnizat de instalaii centrale
Determinarea calitii apei utilizate din surse
locale (fntni, izvoare, arteziene)
Controlul strii sanitaro-epidemiologice a
apelor bazinelor deschise (lacuri, iazuri, fluvii)
Controlul eficienei dezinfeciei apei din
bazinele de not
Controlul eficienei epurrii apelor reziduale
Examinarea erupiilor hidrice de boli infecioase

Realizarea acestor obiective este


reglementat i monitorizat de
urmtoarele acte normative:
STAS 2761-84 Sursele de alimentare
central cu ap potabil i menajer;
STAS 2874-82 Apa potabil. Cerinele
igienice i controlul calitii
STAS 18963-73 Apa potabil. Metodele
analizei sanitaro-bacteriologice
Indicaii metodice 2285-81 Cu privire
la analiza sanitaro-microbiologic a
bazinelor deschise

Aprecierea corespunderii probelor de ap


examinate cerinelor standardelor de stat
se efectueaz dup o serie de indicatori
microbiologici:
Numrul total de germeni /
microorganisme (NTG / NTM)
Titrul coli (coli-titrul)
Indicele coli (coli-indicele)
Determinarea bacteriilor din grupul coli
(coliforme), a bacteriilor coli-fecale,
enterococilor, stafilococilor
Prezena mi/o patogene (se determin la
indicaii epidemiologice).

Recoltarea, pstrarea i transportarea


probelor de ap
Probele de ap se recolteaz n flacoane sterile cu
dop.
Apa de robinet se recolteaz n volum de 500 ml.
n prealabil orificiul robinetului se flambeaz cu un
tampon de vat mbibat cu alcool, apoi se
deschide complet i se las s curg apa timp de
10 min. Se deschide flaconul, se fixeaz sub jetul
de ap i se umple pn la aproximativ 1 cm sub
dop. Flaconul se astup cu dopul, peste care se
pune un capac de hrtie. n fia de nsoire se
indic locul recoltrii, data (ora, ziua, luna, anul),
scopul analizei i numele persoanei care a
prelevat proba

Din izvoare, fntni, arteziene proba de


ap se recolteaz direct din curentul de
ap sau de la adncimea de 10-15 cm.
Din bazinele deschise se recolteaz o
serie de probe la diferite distane de la
mal, diferite adncimi.
Transportarea apei se efectueaz n
frigidere portative la temperatura de 12 grade C. Analiza probelor trebuie
efectuat n cel mult 2 ore de la
prelevare (sau 6 ore cu pstrarea probei
n frigider).

Determinarea NTG
NTG reprezint numrul de mi/o care se
conin ntr-un ml de ap (germenii mezofili
anaerobi facultativi saprofii care populeaz
rezervorul de ap i sunt capabili s formeze pe
medii de cultur colonii vizibile cu ochiul liber
sau cu lupa).
Pentru determinarea NTG cte 1 ml de ap se
introduce cu pipeta n 2 cutii Petri sterile, n care
se toarn cte 5-7 ml de geloz topit i rcit
la 45 C. Coninutul cutiilor se repartizeaz
uniform, iar dup solidificarea gelozei cutiile se
introduc n termostat la 37 C pentru 24 ore.
Lectura i aprecierea: se numr toate coloniile
crescute att la suprafaa mediului, ct i n
profunzimea gelozei i se calculeaz media
aritmetic.

Determinarea bacteriilor din grupul coli


(bacteriilor coliforme)
Acest grup include reprezentani ai familiei
Enterobacteriaceae din genurile
Escherichia, Klebsiella, Citrobacter,
Enterobacter, etc.
Reprezint bastonae G-, asporogene, care
fermenteaz glucoza i lactoza pn la acid i
gaz (la 37 C timp de 24 ore). Aceste mi/o
ptrund n mediul ambiant, inclusiv n ap, cu
masele fecale ale omului i animalelor, de
aceea depistarea lor indic o poluare fecal a
mediului i pericolul unor infecii intestinale.
Determinarea bacteriilor coliforme se
realizeaz prin 2 metode:
Metoda membranelor filtrante
Metoda titrrii (fermentrii)

Metoda membranelor filtrante


Se bazeaz pe capacitatea membranelor
filtrante de a reine bacteriile din apa de
examinat cu izolarea lor pe medii de cultur i
identificarea lor.
Se utilizeaz membrane filtrante din
nitroceluloz nr 2 i 3. Ele se fierb n prealabil
timp de 10 min n ap distilat. Filtrarea se
efectueaz n filtrul Seitz cu utilizarea a 2-3
membrane. Apa din apeduct se filtreaz n
volum de 333 ml, iar din fntni, izvoare
100 ml. Membranele se scot cu pensa steril
i se aplic pe mediul Endo cu suprafaa pe
care se afl bacteriile n sus. Cutiile se
ncubeaz la 37 C timp de 24 ore.

Bacteriile din grupul coli vor forma colonii


tipice roii cu luciu metallic. Pentru
confirmare se pregtesc frotiuri, colorate Gram
i se monteaz testul oxidazei (Gram-,
oxidaza-)
Aceast metod permite determinarea
indicelui coli cantitatea de bacterii din
grupul coli care se conine n 1 l de ap. Pentru
determinarea indicelui coli numrul de colonii
tipice se nmulete cu 1000 i se mparte la
volumul de ap filtrat (ex.: 6x1000:333 =18).
Titrul coli reprezint volumul minim de ap n
care se conine o singur bacterie coliform.

Metoda titrrii
Prin aceast metod are loc iniial
mbogirea coliformilor m medii cu glucoz,
izolarea lor pe mediul Endo i identificarea
culturilor pure izolate. Apa potabil se
nsmneaz n volum de 333 ml: 3 volume
cte 100 ml, 3 cte 10 ml i 3 cte 1 ml.
Se incubeaz la 37 C timp de 24 ore. Din
tuburile cu cretere (turbiditate, acid i gaz)
se repic pe cutii cu mediul Endo. La etapa
urmtoare creterea coloniilor lactoza+,
constituite din bastonae G-, oxidaza-,
permite formularea unui rspuns pozitiv.
Pentru determinarea coli-indicelui i colititrului se consult tabele speciale.

Din grupul coliformilor se difereniaz


coliformii fecali (bacterii coli-fecale),
capabili s fermenteze lactoza cu
producere de acid i gaz la
temperatura de 44,5 C n 24 ore.
Prezena lor indic o poluare fecal
recent.

Aprecierea calitii apei conform


indicilor bacteriologici
n conformitate cu cerinele STAS, apa de
robinet trebuie s conin nu mai mult de
100 microorganisme la 1ml (NTG), coliindicele nu mai mare de 3 i coli-titrul mai
mare de 333 ml.
Apa bazinelor de not trebuie s corespund
cerinelor pentru apa de robinet.
Pentru apa din fntni i izvoare este
stabilit coli-indicele pn la 10 i coli-titrul
nu mai mic de 100 ml.
Sursele de ap nu trebuie s conin flor
patogen.

ANALIZA SANITARO-BACTERIOLOGIC A
AERULUI
Aerul este un mediu n care mi/o nu se multiplic. El
se impurific cu mi/o din sol i din excretele omului
i animalelor.
Analiza sanitaro-bacteriologic a aerului urmrete
scopul de a da o apreciere igienic i
epidemiologic a mediului aerian i de a elabora
msuri orientate spre profilaxia infeciilor aerogene.
O deosebit atenie se acord studierii microflorei
aerului din instituiile pentru copii i medicale.
Aprecierea strii sanitare a aerului din ncperile
nchise se efectueaz dup cantitatea
microorganismelor sanitaro-indicante (stafilococi,
alfa- i beta-streptococi), precum i numrul total
de microorganisme (NTM, NTG) la 1 m3 de aer.
n clinici chirurgicale, materniti i n alte instituii
medicale se determin i flora potenial patogen,
care poate cauza infecii nozocomiale.

Recoltarea probelor
Probele de aer pentru investigaie din
ncperi nchise se recolteaz din 5
puncte (n coluri i n centru), la o
distan de 0,5 m de la perei i la o
nlime de 1,6-1,8 m (n ncperi de
locuit) sau la nivelul patului (n
saloane de spital).
Recoltarea se efectueaz prin metoda
de sedimentare sau de aspiraie.

Metoda de sedimentare simpl,


accesibil, dar mai puin exact. Cutii
deschise cu medii de cultur se instaleaz pe
suprafee orizontale n punctele de recoltare.
Bacteriile din aer se vor sedimenta pe
suprafaa mediului.
Metoda de aspiraie este mai avantajoas.
n acest caz are loc sedimentarea forat a
mi/o din aer pe suprafaa mediului de cultur
sau n lichidul de captare. Pentru aceasta n
practica bacteriologic se utilizeaz aparatul
Krotov, captatorul Recimenski .a. Probele de
aer se recolteaz cu o vitez de 20-25 l/min.
Pentru determinarea indicatorilor
microbiologici se recolteaz pn la 250 l de
aer.

Numrul total de microorganisme


(NTM)
NTM se determin la 1m 3 de aer. Cu
ajutorul aparatului Krotov se aspir 2
probe de aer a cte 100 l pe 2 cutii
Petri cu geloz. Se incubeaz la 37C
24 ore. Se numr coloniile crescute i
se calculeaz media aritmetic. Pentru
determinarea NTM se efectueaz
recalcularea la 1 m3 de aer.

Determinarea stafilococilor i streptococcilor


n acest scop se folosesc probe de aer n volum
de 200-250 l cu utilizarea mediilor elective
corespunztoare. Se numr coloniile crescute,
care ulterior vor fi identificate. Tulpinile de
S.aureus vor fi supuse fagotipizrii (pentru
depistarea sursei infeciei i cilor de
transmitere).
Determinarea microorganismelor patogene
(C.diphtheriae, M. tuberculosis, salmonele).
Astfel de investigaii se efectueaz la indicaii
epidemiologice. Se examineaz probe de aer n
volum de 1000 l