Sunteți pe pagina 1din 18

Frotiul de sange periferic

Dr. Ariela OLTEANU


SCJU Sibiu

Frotiul de sange periferic


reprezinta modalitatea de studiere a morfologiei

elementelor sanguine si a parazitilor sanguini;


orienteaza asupra cantitatii de hemoglobina si a numarului
de leucocite, trombocite din sange;
face parte integranta din investigarea incipienta, obligatorie

a oricarui bolnav pentru ca furnizeaza informatii importante


asupra tuturor celulelor sangvine.;

poate sa indice fie direct diagnosticul, fie sa sugereze

investigatii suplimentare;

Frotiul de sange periferic


Proba biologica primara:sangele venos recoltat pe EDTA

sau sange capilar recoltat prin punctie capilara din pulpa


degetului la adult sau calcai la sugar;
Se executa un frotiuri pe lame de sticla speciale;
Frotiul bine executat trebuie sa indeplineasca urmatoarele
conditii:
a. sa fie mai ingust decat lama (doua margini);
b. sa nu acopere toata lama, sa aiba margini drepte si
franjuri la extremitatea terminala;
c. sa aiba o grosime potrivita;
d. celulele sa fie distribuite uniform, intr-un singur
strat celular, sa nu fie deformate sau distruse.

Frotiul de sange periferic


Semnele unui frotiu impropriu :

eritrocitele suprapuse sau deformate,


leucocitele distruse,
zone rotunde necolorate sau eritrocitele cu contur dublu
(indicand ca lama este nedegresata),
zone intinse cu eritrocitele mari prea etalate, poligonale sau
sferoidale, cu pierderea palorii centrale etc.;
Daca frotiul nu este satisfacator, pentru a evita obtinerea de

informatii eronate se recomanda examinarea unui alt frotiu


sau efectuarea unui nou preparat

Frotiul de sange periferic


Erori la efectuarea formulei leucocitare:

1. eroare mecanica, data de modul de efectuare al frotiului


si, mai ales, de distributia neomogena a diferitelor tipuri de
leucocite pe suprafata frotiului;
2. eroare de interpretare, care depinde de calitatea
examinatorului;
3. eroare de esantionaj (poate fi atenuata prin cresterea
numarului de celule inregistrate). Cu cat este mai mare numarul
de celule inregistrat, cu atat limitele de siguranta sunt mai
apropiate de valoarea reala; rezultate satisfacatoare se obtin
numai cand formula leucocitara se bazeaza pe numaratori facute
pe cel putin 200 de celule, examinand in zig-zag marginile si
centrul frotiului.

Frotiul de sange periferic


Materiale si echipamente
Manusi de protectie
consumabile
pentru executant;
Cronometru;
Sursa lumina;
Lame de sticla degresate;
Lama slefuita mai ingusta;
Doua baghete de sticla si
o tavita de colorat;
Microscop optic cu
obiectiv uscat si imersie;
Pipeta automata 0,5-10
microL cu varfuri
corespunzatoare;
Pipeta automata 200-1000
microL cu varfuri
corespunzatoare;

Reactivi,
kit de coloraie rapid May-Grnwald
Giemsa;
alcool metilic;
apa distilata neutral;
ulei de cedru;
alcool sanitar.

Frotiul de sange periferic


Solutia May-Grunwald:

eozinat de albastru de metilen


1g
glicerina neutra puritate absoluta (p.a) 50ml
alcool metilic p.a
100ml
Solutia Giemsa:
eozinat de azur de metilen
3g
azur de metilen
0.8g
glicerina neutra p.a
250ml
alcool metilic
200ml
Apa distilata neutra pH 7-7,2 ( 500ml AD + cateva picaturi
dintr-o solutie slaba alcalina de Na2 CO3 1% sau tampon
fosfat pH 6,8

Frotiul de sange periferic


Tehnica executarii frotiului :
se aplica o picatura de sange cu lama (pentru sange

capilar)/pipeta automata (pentru sange venos din tub vidat)


pe o lama (curata si degresata)
se intinde rapid cat mai subtire si uniform, cu ajutorul
lamei slefuite, careia, tinand-o usor inclinata sub un unghi
de aproximativ 45 grade - i se imprima o usoara miscare de
translatie in lungimea lamei
se va usca apoi foarte repede, prin agitare in aer; acest timp
reprezinta o prima fixare
recomandabil sa se recolteze doua frotiuri; unul se pastreaza
ca rezerva. Se scrie numarul CA al bolnavului cu creionul
special/ se lipeste eticheta cu CA si se pune la colorat.

Frotiul de sange periferic


Coloratia May Grnwald-Giemsa:
se aseaza lama pe doua baghete deasupra unei tavite si se acopera cu

alcool metilic pentru fixare, 3-5 minute.


se scurge alcoolul metilic.
se acopera apoi lama cu solutia de colorat May Grnwald timp de 2
minute;
se adaug peste lamele acoperite cu soluia de colorat May Grnwald ap
de robinet i se mai las la colorat 2 minute;
se nltur colorantul de pe lam i se acoper lama cu soluie de
colorant Giemsa (diluata 1/10 : o parte solutie nediluata livrata de
producator se amesteca cu 9 parti apa distilata) si se lasa 20 minute la
colorat.
se scurge solutia Giemsa
se spala cu apa distilata sub jet slab pana se inlatura tot colorantul.
se sterge cu grija dosul lamei pentru ca frotiul sa ramana clar
se lasa sa se usuce in stativ.

Frotiul de sange periferic


Coloratia May Grnwald-Giemsa rapida:
se fixeaza frotiurile in reactivul 1 al kitului de coloratie

rapid, 10 secunde (fixator);


se trec frotiurile fara splare in reactivul 2, timp de10
secunde (eozina);
se trec frotiurile fara splare in reactivul 3 al kitului de
coloratie 10 secunde (methylen blue);
se spala frotiurile cu apa de robinet;
se terge dosul lamei;
se lasa sa se usuce lamele in stativ.

Frotiul de sange periferic


Tehnica executarii formulei leucocitare:
cu obiectivul cu imersie, pentru o corecta identificare

morfologica, se parcurge frotiul deplasand preparatul intr-un


singur sens si in zig-zag, pentru a se surprinde atat elementele
marginale cat si cele din mijlocul lamei (limfocitele au tendinta
de a se grupa spre centru, polimorfonucleatele si monocitele se
disperseaza spre margine si in franjuri)
pe masura ce se intalnesc leucocitele, ele se noteaza pe categorii
in grupe de cate 5 elemente
se examineaza in total cel putin 100 de elemente si se stabileste
procentul fiecarui tip de leucocit.

Frotiul de sange periferic


Examinarea cu obiectiv cu imersie:
Eritrocitele. Limita dintre 1/3 medie si 1/3 terminala a frotiului

reprezinta zona optima, cu grosimea corespunzatoare pentru


studiul eritrocitelor la care se urmareste:
marimea: anizocitoza, normocitoza,macrocitoza, microcitoza;
forma: poichilocitoza, sferocitoza, ovalocitoza, drepanocitoza,
eritrocite fragmentate sau schizocite, eritrocite in picatura;
culoarea: normocromie, hipocromie, eritrocite in semn de tras la
tinta, policromatofilie;
incluzii eritrocitare: punctatii bazofile, inele Cabot, corpi Jolly,
eritrocite parazitate, eritroblasti;
dispozitia: in rulouri, aglutinate.

Frotiul de sange periferic


Leucocitele. Distributia leucocitelor pe frotiurile
efectuate pe lama nu este uniforma: celulele mari
(monocitele si polinuclearele) au tendinta sa se
concentreze pe marginile frotiului si in franjuri.
In studiul leucocitelor se urmareste:
formula leucocitara (numaratoarea diferentiata);
anomalii morfologice:
de talie: gigantocite, granulocite poliploide;
nucleare: hipersegmentare, anomalie Pelger- Huet, nuclei

picnotici;
citoplasmatice: hipo sau agranularitate a neutrofilelor,
granulatii toxice, prezenta de vacuole, de granulatii gigante
etc.

Frotiul de sange periferic


Trombocitele.
evaluarea numerica. Evaluarea semicantitativa se face cel
mai bine pe frotiuri de sange fara anticoagulant, unde
numarul si mai ales marimea grupelor de trombocite
estimate pe marginile frotiului si in franjuri poate sa indice
numarul lor. Gasirea pe margini si in franjuri a unor grupe
de 15- 30 trombocite indica un numar normal; prezenta de
trombocite rare, izolate sau grupe mici de 2-8 trombocite
denota trombocitopenie, in timp ce existenta unor grupe
mari de peste 80-100 trombocite indica un numar crescut.
anomalii morfologice: anizocitoza trombocitara, modificari
ale glomerulului, vacuolizari etc.
aglutinabilitatea.

Frotiul de sange periferic


Componente celulare

Culoare

Nucleu

purpuriu

Corpi Jolly

purpuriu

Corpi Auer

purpuriu

Citoplasma limfocitelor

albastru

Citoplasma monocitelor

albastru-gri

Citoplasma bogata in ARN

albastru inchis

Granulatii specifice neutrofile

purpuriu deschis spre roz

Granulatii specifice eozinofile

portocaliu

Granulatii specifice bazofile

purpuriu inchis

Granulatiile limfocitelor

purpuriu deschis

Granulomerul trombocitelor

Roz-lila

eritrocite

caramiziu

Frotiul de sange periferic


Valori normale ale formulei leucocitare la diferite
varste
NOUNASCUT

SUGAR

Numar
leucocit
e
Nesegm
entate
neutrof
le
Segmen
tate
neutrof
le
Eozinof
le

NL

1500030000

900013000

5-10%

1-5%

400010000
5%

400010000
1-4%

30-70%

2-5%

7%

4%

1-4%

Bazofle

0-1%

1%

1%

0-1%

Limfocit
e

20-40%

Monocit
e

50-70%
6-8%

30-60%

ADULT

2-8%

30-25%

COPIL (6
ANI)

60-70%

30-60%

25-35%

4-8%

4-8%

Modificari sugestive pentru diagnostic


hipocromie + microcitoza = anemie feripriva
hipocromie + normo(macro)citoza = anemie sideroblastica
hipocromie + macrocitoza + policromatofilie = HPN
hipocromie + punctatii bazofile = anemie saturnina
hipocromie + punctatii bazofile + poikilocitoza (picatura, schizocite) = talasemie
hipocromie + eritrocite in rulouri = anemie cronica simpla
sferocite + policromatofilie = sferocitoza ereditara
sferocite + policromatofilie + aglutinare + deviere la stanga = AHAI (criza de hemoliza)
schizocite + policromatofilie + trombocite rare, izolate = anemie microangiopatica, CID
schizocite + policromatofilie + trombocite izolate +/- neutropenie = LED
eritrocite in picatura + bazofilie + granulocite imature + eritroblasti + trombocite anormale = MMM
rulouri + tablou leucoeritroblastic +/- plasmocite atipice = mielom multiplu
eritroblasti binucleati = anemie diseritropoietica
macromegalocitoza + neutrofile hipersegmentate = anemie megaloblastica
neutrofile cu nucleu pelgeroid si hipo- sau agranulare = mielodisplazie
leucocitoza + bazofilie + deviere la stanga a FL = LMC
leucocitoza + limfocitoza = LLC
celule hairy

+ monocitopenie +/ - neutropenie = HCL

celule blastice + bazofilie + deviere la stanga a FL = LMC in puseu blastic


celule blastice + hiatus leucemic = leucemie acuta