Referat

Biotehnologia de obinere a xanthanului

CUPRINS
Capitolul I
Memoriu descriptiv i justificativ...................................................................3
Capitolul II
Istoric.............................................................................................................4
Capitolul III
Microorganisme productoare de xanthan....................................................5
Capitolul IV
Mecanismul de biosintez a xanthanului.......................................................6
Capitolul V
Biotehnologia de obinere a gumei xanthan ..................................................7
Capitolul VI
Utilizarea xanthanului .................................................................................14
Bibliografie....................................................................................................15

1.Memoriu descriptiv i justificativ

Prin tema prezentat n acest referat mi-am propus s tratez biotehnologia
de obinere a gumei xanthan i s detaliez procesele ce intervin.
Astfel am evideniat microorganismele productoare de xanthan, am
prezentat mecanismul de biosintez i aspectele biotehnologiei de obinere a
acestui heteropololiglucid microbian. Deasemenea n lucrare am prezentat i
schia de principiu a instalaiei de obinere a xanthanului prin fermentare n
cultur discontinu i schema de recuperarea Xanthanului din mediul de
fermentare cu ajutorul izopropanolului.

Capitolul I
Istoric

Xanthanul a fost descoperit in 1940 de ctre Allene Rosalind Jeans i

echipa sa de cercetare de la Departamentul de Agricultur a Statelor Unite, care
l-au izolat din vegetalele infectate cu Xanthomonas campestris. El a fost primul
poliglucid microbian obinut la nivel industrial.
Guma Xanthan este un heteropoliglucid anionic ,extracelular,
ramificat, constituit dintr-o unitate pentaglucidic care se repet i care formeaz
coloana vertebral a glucanului, constituit din dou reziduri de -D glucozil,
dou reziduuri de D-manoz i un rest de acid D-glucuronic(figura 1).
Din punct de vedere chimic Xanthanul con ine, n principal , Dglucoz (40%), D-manoz(22%), acid D-glucuronic(22%), acid piruvic (4%),
grupri acetil(2%). Compoziia chimic a gumei xanthan difer n funcie de
tulpina Xanthomonas utilizat n procesul de biosintez, de copmozi ia mediului
de cultur (sursa de carbon folosit, prezena i nivelul fosforului din mediu), de
parametrii de fermentare i de timpul de cultivare.

Figura 1.Stuctura xanthanului.

Capitolul II

Microorganismele productoare de xanthan

Exist n natur peste 100 de specii de bacterii,aparinnd genului
Xanthomonas, dintre care se remarc tulpinile Xanthomonas campestris,
X.phaseoli, X.carotae i X.malvacearum, ca buni productori de poliglucid
extracelular.
Bacteriile din acest gen se prezint sub form de bastonae drepte, scurte,
predominant singure. Sunt bacterii G(), aerobe cu metabolism strict respirator,
folosind oxigenul ca acceptor terminal de electroni, sunt mobile, mobilitatea
fiind asigurata de un singur cil polar. Nu denitrific sau nu determina reducerea
azotatului. Aceste bacterii se dezvolt pe lactat de Ca, dar nu i pe glutamin,
asparagina nefiind folosit ca surs de carbon. Necesit factori de crestere cum
sunt metionina, acidul glutamic, acidul nicotinic sau derivai ai acestora.
Bacteriile din acest gen hidrolizeaz proteinele, iar unele tulpini celuloza i
pectina. Temperatura optim de dezvoltare este cuprins ntre 25-30 . Nu se
dezvolt la temperaturi peste 40 . n general sunt bacterii patogene pentru
plante, excepie fcnd Xanthomonas maltophila care este un patogen pentru
om.
Xanthomonas campestris, principala bacterie responsbil pentru
biosinteza xanthanului, este un microorganism care se gase te n natur,ea fiind,
pentru prima dat izolat de pe varz, la care cauzez putrezirea neagr.
Xanthomonas campestris se dezvolt la temperaturi cuprinse ntre 35-39 i
tolereaz niveluri de 2-5% NaCl.

Capitolul III
Mecanismul de biosintez a xanthanului
Biosinteza heteropoliglucidului microbian,de tipul xanthanului, este un
proces complex care implic participarea unui sistem multienzimatic, fiecare
enzim avnd un grad mare de specificitate.
Cile de metabolizare a glucozei la Xanthomonas campestris sunt
asemntoare cu acele ntlnite la Pseudomonas aeruginosa care implic dou
stadii.
Primul stadiu n biosinteza acestui polizaharid microbian const n
intoducerea substratului , respectiv a glucozei, n interiorul celulei, care se poate
produce prin transport activ, translocare de grup sau prin difuzie facilitat. La
Xanthomonas campestris exist dou sisteme discrete pentru introducerea
glucozei, unul periplasmatic i oxidativ, care necesit activitatea glucozodehidrogenazeii al doilea sistem intracelular i fosforilativ, pe calea enzimei
hexokinaza,enzim prezent la X. Campestris, care utilizeaz adenozin 55
-trifosfatul (ATP-ul)
Stadiul al doilea de biosintez a poliglucidului microbian implic
transferarea substratului fosforilat diferitelor glucide ale unor nucleotide, n
general nucleotide monoglucidice, necesare pentru asamblarea unitilor care se
repet n molecula unui poliglucid.

Capitolul IV
Biotehnologia de obinere a gumei xanthan

Principalele operaii implicate n producerea gumei xanthan snt:

pregtirea microorganismului i a inoculului;
pregtirea mediilor de cultur i sterilizarea acestuia;
fermentarea propriu-zis;
separarea i purificarea xanthanului.
4.1 Obinerea inoculului

Xanthomonas campestris este un microorganism cu caracteristici

instabile, mutaiile spontane care pot s apar conduc la schimbarea informaiei
genetice, depozitat n celul. Schimarile ce pot aprea afecteaz mecanismele
de reglare i nivelurile enzimatice, implicate n unele procese celulare, inclusiv
n biosinteza poliglucidului, cu degenerarea tulpinilor cu randament ridicat n
biopolimer la tulpini productoare, mai puin eficiente.
Pentru producia industrial de xanthan se utilizeaz un mutant de
Xanthomonas campestris,meninut n stare liofilizat ntr-un mediu nutritiv.
Prepararea inoculului implic :
transferarea culturii bacteriene i dezvoltarea pe mediu de agar nclinat;
transferri n serie i dezvoltarea bacteriei pe mediu de cultur lichid
(temperatura de dezvoltare 28 ,pH=7,0, durata incubrii 24 h)
asociate cu efectuarea testelor de identificare i controlul stabilitii
genetice a tulpinilor respective.
n ultimul timp, se utilizeaz coninutul n acid piruvic, ca indice de baz
n aprecierea calitii i cantitii de biopolimer produs de o tulpin.
Nivelurile de inocul pentru stadiile intermediare i de regim sunt de
5- 15% i respectiv de 5%. Prin controlul nivelurilor de Fe, Mn i Zn din cultura
de inocul se poate reduce volumul de inocul la numai 0,01-0,5 % din volumul
total al mediului de cultur.

4.2 Pregtirea mediului de cultur

La nivel industrial, guma xanthan se obine prin cultivarea lui
Xanthomonas campestris pe medii de cultur cu urmtoarea compoziie:
Componentul chimic
Cantitatea,g%
Cantitatea, g%
Varianta
I
II
D-glucoz
2,0-3,0
3,50
Extratul solubil de la 0,4
distilare
K2HPO4
0,5
0,5
MgSo4* 4 H2O
0,01
0,01
Extract de porumb sau 0,8
extract de drojdie
Ap pn la
1000 cm3
1000 cm3
Mediu de cultur steril se obine prin folosirea componentelor sterilizate
separat. Aceast procedur simplificat determin o mai bun flexibilitate, prin
utilizarea proceselor moderne monitorizate i a echipamentelor de control. n
cazul produciei de gum xanthan , sterilizarea continu nu ofer un avantaj mai
mare fa de sterilizarea discontinu, datorit volumelor relativ mici de mediu
de cultur, care trebuie sterilizate.

4.3 Fermentarea propriu-zis

Cultura submers n sistem discontinuu
n prezent, producia industrial a gumei xanthan se realizeaz n
fermentatoare cu capacitatea de 50-200 m3, n sistem discontinuu, cu agitare i
aerare.
Producia de xanthan este afectat de diferii parametri de fermenta ie,
pH-ul mediului fiind unul dintre aceti parametri, care are influen direct
asupra produciei de biopolimer. Fermentaia se realizeaz la un pH cuprins ntre
6,0-7,5, valoarea optim fiind 7,0. Fr control pH-ul nregistrez o descre tere
n timpul fermentrii, datorit formrii acizilor organici i funciilor acide,
coninute de xanthan. Dac pH-ul decrete sub 5,0, formarea xanthanului scade
drastic, de aceea este necesar controlul pH-ului prin utilizarea unui sistem
tampon sau prin adugare de baze n timpul desf urrii procesului de
fermentare.

Temperatura de fermentare este alt parametru critic, producia optim de

xanthan realizndu-se la temperatura de 28 ,iar temperatura de dezvoltare a
bacteriei Xanthomonas campestris se situeaz n limitele 20-30 . Creterea
temperaturii determin creterea vscozitii xanthanului produs.
Producia polimerilor microbieni, cum este i cazul xanthanului, este
realizat ntodeauna n condiii aerobe, oxigenul dizolvat constituind un alt
parametru deosebit de important, de aceea se impune controlul permanent al
aerrii i agitrii mediului de fermentare, procedeul adecvat const n aerarea
forat cu aer steril. Biosinteza polimerului determin cre terea vscozit ii
mediului care creaz probleme, legate de limitarea oxigenului care va afecta
cantitatea i calitatea produsului ,din acest motiv se recomand ca aerarea s
creasc odat cu mrirea vscozitii mediului.
O vitez de aerare cuprins ntre 0,75 i 1,5 vol.aer/l/minut determin
formarea unui poliglucid cu coninut maxim de piruvat.Agitarea asigur
dispersarea aerului n toate direciile mediului i creterea vitezei de transport a
nutrienilor prin membran celular, mbuntind viteza de dezvoltare a
microorganismului.
La temperatura de 28 aproximativ 50 % din D-glucoza din mediul de
cultur este convertit n gum xanthan n 72-96 ore.
Cultura continu
La fermentarea continu, adugarea mediului proaspt la cultura de
X.campestris se realizeaz continuu i concomitent cu recoltarea xanthanului
biosintetizat. Procesul de fermentare este controlat prin limitarea unui nutrient,
n timp ce ali nutrieni sunt prezeni n exces.
Producia de xanthan n cultur continu este condiionat de viteza de
diluie. Prin creterea vitezei de diluie de la 0,15 h -1 la 0,196 h-1, viteza de
producere a polimerului scade de la 0,84 g h-1 la 0,64 g h-1 . Xanthanul
sintetizat la viteze de diluie mai sczute au un index de consisten mai mare i
un index de plasticitate mai mic.
Randamentul de conversie al D-glucozei n xanthan variaz n limitele
81-89% din randamentul teoretic. Compoziia chimic a xanthanului ,obinut,
difer n funcie de tulpina de Xanthomonas utilizat i de nutrientul limitativ.
n cultura continu de X.campestris prin limitarea unor nutrieni se obin
randamente diferite de polimer (xanthan), aceasta avnd i compoziie chimic
mult diferit. Astfel, prin limitarea sursei de carbon scade drastic viteza de
cretere a microorganismului i producia de polimer. Prin limitarea azotului
crete randamentul de xanthan (7,0 g l-1) i gradul de acetilare(6,6%). n cazul
limitrii sulfului, magneziului i potasiului se obin randamente mai mari n
polimer, dect atunci cnd este limitat sursa de carbon(6,4; 5,7;5,3 fa de 2,7 g
9

l-1). Polimerul sintetizat n condiiile limitrii sulfului nu conine acetat, dar

are un grad mare de piruvare (8,5%) fa de cel produs cu limitarea magneziului.
Prin limitarea fosforului se influeneaz negativ gradul de piruvare, polimerul
fiind eliberat de grupri acetil.
ntr-o cultur continu, n condiii controlate i cu limitarea azotului,
concentraia celulelor microbiene rmne constant n intervalul de temperatur
20-37,5 , dar cea mai bun conversie a glucozei la xantan i vscozitate
maxim se realizeaz la 30

4.4 Recuperarea Xanthanului din mediul de fermentare

Lichidul de fermentare final conine pe lng xanthan celule de
X.Campestris , material insolubil, substrat glucidic neconsumat i diferite sruri
minerale. Pentru a corespunde reglementrilor de toxicitate, xanthanul trebuie
s fie liber de celule de X.campestris, de produse de fermentare sau constitueni
ai mediului, ca i de reactivii folosii n procesul de recuperare, mai ales atunci
cnd produsul se utilizeaz n scop alimentar.
Pentru recuperarea biopolimerului din lichidul de fermentare la nivel
industrial se folosesc diferite tehnici care realizeaz:
dezactivarea i ndeprtarea celulelor de Xanthomonas campestris;
precipitarea polimerului, prin trecerea xanthanului ntr-o form insolubil;
deshidratarea, uscarea i mcinarea biopolimerului obinut pn la
granulaia dorit.
Metode de prerecuperare
Primul stadiu n procesul de separare a xanthanului este pasteurizarea
lichidului de fermentaie la temperatura de 98,9 , timp de 3 minute, n
vederea distrugerii integrale a celulelor bacteriene de Xanthomonas
campestris,dar
i
pentru
activarea
unor
enzime
nedorite
(celulaze,pctinaze).Procedeul respectiv prezint dezavantajul c la acest nivel
de temperatur crete substanial vscozitatea soluiei de xanthan.
Pentru ndeprtarea celulelor bacteriene din mediul de cultur fermentat
se poate utiliza, n afar de filtrare, centrifugarea convenional sau tehnica de
floculare. Alt tehnic de prerecuperare presupune adsorbia particulelor din
lichidul de fermentaie pe particule de clei, urmat de coagulare sau filtrare.
Pentru a reduce costul biopolimerilor purificai i pentru simplificarea
operaiilor de separare i purificare se folosesc tehnici enzimatice, care
utilizeaz pentru degradarea celulelor de X.campestris proteaze acide, neutre sau
alcaline, provenite de la Bacillus subtilis, Aspergillus niger, Pellicularia
filamentosa.
10

O alternativ pentru clarificarea lichidului de fermentaie const n

realizarea unei fermentaii secundare n condiii acide cu fungul Trichoderma
Viridae, care este capabil s consume celulele de X.campestris. Celulele de
Trichoderma Viridae, fiind mai mari, se ndeprteaz mai uor prin filtrare.

Procedee de precipitare
Dup tratamentul de prerecuperare , xanthanul poate fi precipitat din
lichidul de fermentare clarificat, prin diverse procedee, n funcie de scopul
urmrit:
Obinerea gumei Xanthan intr-o form solid, stabil
microbiologic, uor de manipulat, transportat, depozitat, redizolvat
i diluat la concentraia impus de unele aplicaii;
Purificarea biopolimerului pentru a reduce nivelul solidului
nepolimer i pentru a mbunti performanele sale funcionale,
culoarea,mirosul i alte caliti ale gumei xanthan;
Modificarea proprietilor chimice ale biopolimerului pentru
aplicaii speciale.
Cel mai frecvent utilizat procedeu industrial const n adugarea unui
solvent organic miscibil n ap,cum ar fi un alcool inferior (etanol, metanol,
izopropanol),n concentraie suficient pentru a realiza precipitarea total a
xanthanului din soluie.Izopropanolul este considerat solventul cel mai potrivit
n acest caz .Volumul de alcool izopropilic necesar pentru precipitarea gumei
xanthan este dependent de concentraia unor sruri din mediu i independent de
concentraia biopolimerului.

11

Figura

Procesarea post precipitare

Centrifugarea sau presarea.Dup precipitare xanthanul umed conine
mari cantiti de lichid care pot fi ndeprtate prin centrifugare sau presare.
Uscarea final a precipitatului de biopolimer se poate realiza n usctoare
cu funcionare continu sau discontinu,sub vid, cu circulaia for at a aerului
sau n atmosfer de gaz inert,dac polimerul conine izopropanol,n usctoare
rotative, n usctoare prin pulverizare.
Respectarea condiiilor de uscare este esenial pentru evitarea degradrii
chimice a xanthanului i modificrii excesive a culorii.Uscarea se face pn la
un coninut final de umiditate de 100%
Mcinarea xanthanului uscat se face n scopul reducerii dimensiunilor
particulelor pn la mrimea necesar tipului de gum xanthan,care uneori este
singura diferen ntre diferitele produsele comercializate.
n figura 3 este prezentat schia de principiu a instala iei de ob inere a
xanthanului prin fermentare n cultur discontinu.

12

Figura 3

Compoziia chimic a xanthanului difer n funcie de tulpina de

Xanthomonas utilizat ,chiar n condiiile cultivrii pe medii de cultur cu
aceeai compoziie i respectrii parametrilor de fermentare (tabelul 2).

13

Tabelul 2.Compoziia chimic a xanthanului produs de diferite tuplini de Xanthomonas

Capitolul V
14

Utilizrile xanthanului
Proprietile unice ale xanthanului permit utilizarea acestuia cu precdere
n industria alimentar ,textil, cosmetic, famaceutic i n industria petrolier.
n industria alimentar a primit apobare de utilizare din anul 1969,fiind
folosit ca agent de ngroare, suspendare, emulsionare, stabilizare i pentru
controlul vscozitii diferitelor medii. Aceste utilizri au la baz urmtoarele
proprieti ale gumei xanthan:
Solubilitatea rapid a xanthanului, att n apa rece ct i n ap cald;
Formarea unor soluii vscoase chiar i la concentraii mici de gum
xanhan;
Soluiile de xanthan sunt pseudoplastice, cu proprieti de curgere.
n repaus vscozitatea soluiilor de xanthan este relativ mare. Prin
creterea vitezei de amestecare, vscozitatea scade ca o consecin a unei
alinieri progresive a moleculelor rigide odat cu creterea vitezei de
agitare. Pseudoplasticitatea soluiilor favorizeaz operaiile de pompare i
de umplere a dispersiilor pe baz de xanthan, care au proprieti bune de
curgere;
Stabilitatea relativ bun a vscozitii soluiilor de xanthan la temperaturi
ridicate, permite utilizarea xanthanului la obinerea sosurilor ,care i
pstrez vscozitatea n domenii largi de temperatur i pH, precum i n
prezena srurilor. Se folosete la fabricarea conservelor, dressing-urilor,
produselor instant, produselor alimentare congelate, buturilor cu arom
de fructe, crora le confer onctuozitate i fluiditate.
Manifest efect sinergic fa de guma guar, determinnd cre terea
vscozitii soluiilor la care particip cele dou gume, avnd astfel
aplicaii la pregtirea furajelor n cutii pentru animale de cas
n SUA, guma xanthan este folosit la obinerea pinii lipsite de gluten ,
pentru persoanele care sufer de boala celiac.
Studiile efectuate cu xanthan au scos n eviden faptul c acesta este
hidrolizat n tractusul gastrointestinal, n proporie de circa 15%, fiind
absorbit i metabolizat pn la CO2, fr acumularea gumei xanthan n
esuturi. Xanthanul neabsorbit este eliminat prin fecale.

15

Bibliografie:
1.Ionescu A., Zara M., Guru G.,Resmeri D., Biotehnologia
aditivilor alimentari,Editura Academica,Galai 2002
2.surse din internet:
www.wikipedia.com
http://www.answers.com/topic/xanthan-gum
http://memoonyourhealth.com/2009/05/17/memo-on-yourxanthan-gum-is-it-safe-to-eat/

16