CURS 2 / 3 octombrie 2011

Experimentele de identificare si descriere a materialului genetic la

Ek au demonstrat rolul genetic al ADN:

ADN este molecula ereditatii

Principiul transformarii genetice si
transferul experimental de
material genetic intre specii diferite
stau la baza unei BIOTEHNOLOGII
numita:

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT

CURS 2 - GENETICA MD

TEHNOLOGIA
ADN RECOMBINANT
(era ingineriei genetice)

CURS 2 GENETICA MD

ADN recombinant
(combinatii noi de ADN):
este realizat
in vitro;

1.
- este format din secvente ADN de la specii diferite;
diferite;

2.
- se utizeaza enzime de restrictie si ligaze
ligaze;;

CURS 2 GENETICA MD

ADN recombinant (rDNA):

este realizat
in vitro;

3.
- ADN
ADN--ul artificial creat este introdus in celule vii
in culturi celulare (E.coli, Drojdia de bere, celule
de mamifer), in zigoti, in celule stem embrionare
cu scopul de a transfera caractere noi,
peste barierele naturale, celulelor sau
organismelor.

CURS 2 - GENETICA MD

ADN recombinant:

este realizat
in vitro;

4.
Trebuie preluat de celula gazda intrintr-o forma in
care poate fi replicat si exprimat; din acest motiv,
este incorporat intrintr-un vector (molecula naturala
de ADN utilizata pentru transportul secventelor
ADN exogen intrintr-o celula gazda, capabila sa se
replice independent, formand clone moleculare).
moleculare).

CURS 2 - GENETICA MD

ADN uman donor

Fragmentare cu
enzime de restrictie

fragmente

Mixare
Unirea fragmentelor ADN cu vectorul folosind LIGAZE

Molecule de
ADN recombinant

ADN bacterian

Introducerea molec. ADN in celula bacteriana

Celula se divide si replica moleculele de ADN recombinant

TEHNOLOGIA
ADN RECOMBINANT
etape
CLONA

CURS 2 - GENETICA MD

TEHNOLOGIA

ADN RECOMBINANT

APLICATII PRACTICE
IN

MEDICINA

proteine terapeutice

vaccinuri

medicamente prin sinteza bacteriana

animale transgenice*

animale knock-out*
(pentru studiul bolilor ereditare umane)

CURS 2 - GENETICA
MD

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT

ANIMAL TRANSGENIC
organism transformat genetic prin introducerea in
momentul fertilizarii a unei noi informatii genetice
(gena);
- animalul transgenic exprima fenotipic noua informatie
genetica si o transmite descendentilor sai.

CURS 2 - GENETICA
MD

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT

ANIMAL
NIMAL KNOCKKNOCK-OUT
animal model de laborator, obtinut
prin introducerea in celulele stem
embrionare a unei informatii
genetice (gena) modificata (se
inactiveaza expresia acelei gene).

CURS 2 - GENETICA
MD

10

E.coli
cromozom
plasmid

Gena pt.rezistenta
la antibiotice

ADN uman

Unirea fragmentelor
ADN de la specii
diferite cu ligaze

ADN bacterian

Fragmentare cu
enzime de restrictie

Plasmide cu fragmente de
ADN uman
Celula bacteriana preia
plasmidul din mediul celular

E.coli fara plasmid

TEHNOLOGIA
ADN RECOMBINANT

Gena insulinei
CURS 2 - GENETICA
MD

Gena pt. sinteza

ARNr

11

Obtinerea animalelor transgenice

A
D
N

CURS 2 - GENETICA
MD

Oita Tracy animal transgenic

care produce alpha-antitripsina
umana

Beltsville pig animal transgenic

care produce hormonul de
12
crestere uman

CUM ESTE ORGANIZAT ADN

PENTRU A INDEPLINI
URMATOARELE FUNCTII?

1.Stocarea informatiei genetice

2.Exprimarea informatiei genetice
3.Transmiterea informatiei genetice
4.Variatia informatiei genetice

CURS 2 - GENETICA
MD

13

ADN

Transcriptie
Translatie

CURS 1 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ARNm
proteina

GENETICA MD

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 1

Evenimente care au precedat
descoperirea structurii ADN in 1953

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright

GENETICA - FIM

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 2

Evenimente care au precedat
descoperirea structurii ADN in 1953

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright

GENETICA - FIM

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 3

1952
E.CHARGAFF arata ca, indiferent de specie:
Totalul purinelor = totalul pirimidinelor
A+G=C+T
A/T=1 si G/C=1 principiul echivalentei

Raportul de asimetrie
A+T
ESTE DIFERIT DE 1 !
G+C
*este diferit de la o specie la alta, dar
caracteristic pentru fiecare specie.
La 2specia
CURS
- GENETICA umana este ~ 1,6.
MD

17

PRINCIPIUL ECHIVALENTEI regula lui CHARGAFF

Relative Proportions (%)

of Bases in DNA

Proportia relativa (%) a bazelor azotate

Organism

OM
Human

30.9

29.4

19.9

19.8

Chicken
Gaina

28.8

29.2

20.5

21.5

Grasshopper
Lacusta

29.3

29.3

20.5

20.7

Arici
de mare
Sea Urchin

32.8

32.1

17.7

17.3

27.3

27.1

22.7

22.8

Yeast de bere 31.3

Drojdia

32.9

18.7

17.1

23.6

26.0

25.7

Grau
Wheat

E.E.coli
coli
CURS 2 - GENETICA
MD

24.7

18

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 4

1952/1953
M.WILKINS si R.FRANKLIN bombardeaza molec.
de ADN cu raze X folosind tehnica difractiei cu
raze X.
Concluzia:
Molecula ADN are o structura regulata,
care se repeta, helicala.

CURS 2 - GENETICA
MD

19

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 5

1953
F.CRICK si J.WATSON
Propun un model al structurii fizice si
chimice molec. ADN (Double Helix)
1962 PREMIUL NOBEL in MEDICINA

CURS 2 - GENETICA MD

20

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 6

F.CRICK si J.WATSON

1953

Folosind datele existente despre structura moleculei

ADN, propun un model al structurii fizice si chimice a molec.
ADN publicat in lucrarea lor intitulata Double Helix (Dubla
spirala sau Elicea vietii).

CARACTERISTICILE MODELULUI:

molec.ADN este formata din 2 lanturi polinucleotidice
legate intre ele prin leg.de H care se formeaza la
nivelul bazelor azotate.

Imperecherile intre baze se fac pe baza de
complementaritate.

Diametrul helixului este de 2 nm.
CURS 2 - GENETICA MD

21

CARACTERISTICILE MODELULUI:

catenele se infasoara una in jurul
celeilalte printr-o rotatie spre dreapta
(spiralizare dextrogira); intre perechile de
baze succesive exista o distanta de 0,34
nm, iar un tur complet de spira (3600) are
3,4 nm (pasul spiralei), deci 10 b.a. /tur de
spira;

spatiul dintre coloana glucido-fosforica a

unei catene si a celeilalte catene nu este
uniform ocupat de b.a. atfel ca, prin
rasucirea catenelor apar depresiuni
(santuri) inegale ca marime; la nivelul
depresiunii mari se fixeaza factorii proteici
implicati in transcriptie iar in depresiunea
mica se fixeaza histonele.
CURS 2 - GENETICA MD

22

STRUCTURA
MOLECULEI ADN

CURS 2 GENETICA MD

23

DEZOXIRIBONUCLEOTID
Unitatea structurala a moleculei ADN
este dezoxiribonucleotidul,
format din trei elemente distincte:
1. Baza azotata
2. Pentoza
3. Grup fosfat
BAZA

CURS 2 GENETICA MD

24

STRUCTURA MOLECULEI ADN

BAZA

BAZA

CURS 2 - GENETICA
MD

Grupare
fosforica
dezoxiriboza

25

STRUCTURA MOLECULEI ADN

Punti de hidrogen

Capatul 5

Capatul 3
CURS 2 GENETICA MD

Capatul 3
3

Capatul 5
26

B-ADN
CURS 2 GENETICA MD

forma clasica descrisa de

Watson&Crick

27

MODELUL WATSON&CRICK

A fost acceptat unanim

CURS 2 GENETICA MD

28

ADN - GENE - CROMOZOMI

CROMOZOM
NUCLEU

CURS 2 GENETICA MD

GENE

29

Molecula ADN
este flexibila,
dinamica.

ALTERNATIVE STRUCTURALE ALE

MOLECULEI ADN:
(difera prin tipul de spiralizare spre dreapta sau stanga,
inclinarea bazelor fata de ax, modificarea pasului elicei si
numarul de baze / tura de elice).

1.B-ADN (conformatia biologica principala,

caracteristica celulelor vii)
2.A-ADN
3.Z-ADN ( ax glucido-fosforic in zig-zag)
CURS 2 - GENETICA MD

30

Sant
mare
Sant
mic

Sant
mare

Sant
mic

Sant

A-ADN
Z-ADN
FORME
DEXTROGIRE
CURS 2 - GENETICA
MD

B-ADN

FORMA
LEVOGIRA
31

Tranzitia conformationala a moleculei de ADN

A-ADN
CURS 2 - GENETICA
MD

B-ADN
32

FORME STRUCTURALE ALE

ADN
B-ADN

A-ADN

Z-ADN

CURS 2 - GENETICA
MD

Tatuaje biologice

34