Sunteți pe pagina 1din 47

BIOCHIMIE I GENETIC

DINAMICA UNOR INDICI AI METABOLISMULUI GLICOPROTEIC N


OSTEOPOROZA PRIMAR I SECUNDAR I SUB INFLUENA UNOR
BIOREMEDII DE ORIGINE ALGAL
V. Gudumac, Veronica Sardari, Inna ve
Laboratorul Biochimie USMF Nicolae Testemianu
Summary
The dynamic of glycoprotein metabolism indices in primary and secondary
osteoporosis and under the influence of bioremedies of algal origin
The changes of the content of hexoses and N-acetylneuraminic acid were studied in
primary and secondary experimental osteporosis and under the influence of biological
preparations of algal origin. The concentration of hexoses decreased at 3 months in primary and
secondary osteoporosis. In 1,5, 3 and 6 months after osteoporosis induction the experimental
studies revealed osteoregenerative action of the preparations manifested by the increase of
hexoses content.
Rezumat
S-a studiat modificrile coninutului de hexoze sumare i acid N-acetilneuraminic n
osteoporoza experimental primar i secundar n dinamic la 1,5, 3 i 6 luni i sub influena
biopreparatelor de origine algal. Coninutul de hexoze sumare s-a redus veridic n perioada de 3
luni n osteoporoza primar i cea secundar. n urma investigaiilor efectuate s-a depistat efectul
osteoregenerativ al preparatelor cercetate, ceea ce se manifest prin creterea coninutului de
hexoze sumare.
Afeciunile sistemului osos i, n special, osteoporoza (OP) se impun n atenia
specialitilor ca o problem de o mare actualitate, cauzat de: incidena nalt a acestei patologii;
evoluia grav i complicaiile ei la persoanele de vrst medie i la cele de vrst naintat; i
prin imperfeciunea mijloacelor terapeutice, oferite de medicina modern. n legtur cu aceasta
elaborarea noilor programe de terapeutic, optimizare a modificrilor metabolice caracteristice
acestei patologii prezint un mare interes 1, 2, 3, 8.
n prezent este cunoscut efectul unor biopreparate de origine algal (BP) cu diferite efecte
terapeutice 5, 6.
Cercetrile de ultim or atest rolul important al componentelor glucidice din proteinele
noncolagenice n dezvoltarea i organizarea esuturilor mineralizate, precum i n apariia
diverselor patologii. Proteinele noncolagenice ale matricei reprezint 5% din masa acesteia. Ele
sunt reprezentate de osteocalcin, osteonectin, proteoglicani, sialoproteine, lipo- i
fosfoproteine. n prezent ele se studiaz intens, considerndu-se cei mai fideli markeri ai
metabolismului osos 9.
Metodele contemporane permit dozarea glucidelor legate cu proteine n esutul osos, fapt
ce ofer noi posibiliti n studierea patogeniei i evoluiei OP 10.
n literatura de specialitate n-am ntlnit referine privitor la modificrile metabolismului
glicoproteinelor n OP experimental primar i secundar i sub influena biopreparatelor de
origine algal. Reieind din acestea, am considerat oportun a studia coninutul de hexoze sumare,
acid N-acetilneuraminic (NANA) n esutul osos n evoluia OP experimentale primare i
secundare n dinamic la 1,5, 3 i la 6 luni i la utilizarea biopreparatelor de origine algal cu un
coninut divers de Zn legat organic.

146

Materialul i metodele de investigaie


Experimentele au fost efectuate pe 78 de obolani, femele i masculi maturi, cu masa de
160-250 g.
Osteoporoza primar a fost reprodus la animalele de laborator obolanii albi, femele,
fr pedigriu, prin ovariectomie metod clasic i acceptat de muli cercettori [4].
Osteoporoza secundar a fost provocat la obolanii masculi, prin injectri subcutanate
bisptmnale de prednisolon, n doz de 10 mg/kilocorp [7].
Animalele au fost divizate n 10 loturi (cte 7-8 n fiecare).
Animalele din lotul 1 (lotul-martor pentru OP primar) au fost fals operate, adic supuse
aceleiai intervenii chirurgicale, dar fr nlturarea ovarelor.
Lotul 2 (lotul-martor pentru OP secundar) a fost constituit din 7 animale intacte, crora li s-a
introdus subcutanat, bisptmnal soluie fiziologic (8,5 g/l NaCl) 1,0 ml/kilocorp.
Lotul 3 a inclus animalele crora li s-a modelat OP primar prin ovariectomie.
Lotul 4 OP secundar reprodus prin injectarea prednisolonului, 10 mg/kilocorp dizolvat n
soluie fiziologic.
Loturile 5 i 6 au inclus animalele cu OP primar i, respectiv, secundar, crora li s-a
administrat biopreparatul ce coninea 10 g/ml de zinc (OP+ BP-Zn1).
Loturile 7 i 8 au inclus animalele cu OP primar i secundar + biopreparatul ce coninea 5
g/ml de zinc (OP + BP-Zn2).
Loturile 9 i 10 au reprezentat animalele cu aceleai forme de OP + biopreparatul de origine
algal cu un coninut redus de Zn 0,2 g/ml (OP+BP-R).
Prelevarea materialului de cercetare (osul femural) a fost efectuat n dinamic pe
parcursul a 1,5, 3 i 6 luni de la debutul experimentului, animalele fiind sacrificate prin
decapitare sub narcoz uoar cu eter.
Osul femural a fost extras, eliberat de esuturile adiacente i a fost nlturat mduva
osoas prin splri repetate cu soluie fiziologic. Ulterior, a fost congelat n azot lichid i supus
triturrii, n piuli de porelan cu pislog i cntrit pe balana de torsiune. n calitate de mediu
de dispersare a fost utilizat soluia de zaharoz 0,25M (pH 7,4), ce coninea 0,001M EDTA,
astfel ca diluia final a omogenatului s constituie 1:10. Pentru distrugerea complet a
membranelor celulare, omogenatul a fost prelucrat cu triton X-100, cu o concentraie final de
0,1%, i supus ciclurilor repetate de ngheare-dezgheare.
Dozarea hexozelor sumare i acidului N-acetilneuraminic s-a operat conform procedeului
descris de . ., 1978 [10].
Rezultatele obinute i analiza lor
Din datele statistice expuse n tabelul 1 relevm, c dup 1,5 luni de la momentul
ovariectomiei coninutul de hexoze sumare n grupul de animale cu OP primar scade cu 13%,
fa de animalele din lotul-martor. La animalele cu OP secundar, n aceast perioad a
procesului patologic, modificrile coninutului de hexoze sumare au fost neconcludente, acestea
meninndu-se n limitele valorilor atestate la animalele intacte. n grupurile de animale cu OP
primar, supuse tratamentului cu biopreparatele BP-Zn1, BP-Zn2 i BP-R, coninutul de hexoze
sumare tinde spre o restabilire, revenind practic la nivelul nregistrat la animalele intacte. La
animalele cu OP secundar, n circumstane de utilizare a bioremediilor testate modificrile
coninutului de hexoze au fost neconcludente, acestea meninndu-se n limitele valorilor atestate
la animalele intacte.
Dinamica ulterioar a parametrului indic c n perioada de 3 luni de la iniierea
procesului patologic la animalele cu OP primar i secundar se nregistreaz o reducere
marcant, autentic statistic, cu 23% (p<0,01) i respectiv cu 31% (p<0,001) a coninutului de
hexoze sumare. La animalele cu OP primar, n condiii de administrare a bioremediului BP-Zn1
se nregistreaz o cretere a nivelului de hexoze sumare pn la valorile identificate n lotulmartor. Medicaia cu bioremediile BP-Zn2 i BP-R s-a dovedit a fi mai puin eficient, deoarece
nivelul nregistrat de hexoze sumare continu s persiste la valori joase, similare celor apreciate
n grupul de animale cu OP primar, constituind 78% (p<0,05) i respectiv, 72% (p<0,01). Astfel,
147

datele obinute releveaz modificri mai reduse n structura glicoproteinelor, n esutul osos, la
animalele cu OP primar supuse medicaiei cu biopreparatul BP-Zn1, datorit proprietii
acestuia de a restabili coninutul de hexoze sumare.
Tabelul 1
Dinamica coninutului de hexoze sumare n esutul osos, la animalele cu osteoporoz
primar i secundar i sub influena biopreparatelor de origine algal (mM/g esut uscat)
Grupurile
de studiu
Martor
OP
OP +
BP-Zn1
OP +
BP-Zn2
OP +
BP-R

Termenele de cercetare i formele de osteoporoz


1,5 luni
3 luni
6 luni
Primar
Secundar
Primar
Secundar
Primar
Secundar
5,500,40
4,640,60
5,540,38
5,210,32
5,520,39
6,030,72
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
4,810,11
4,910,34
4,280,16** 3,590,13***
3,910,13**
5,720,32
(87%)
(106%)
(77%)
(69%)
(71%)
(95%)
5,090,30
4,620,30
4,970,19
3,910,15**
4,880,10
5,500,27
(93%)
(99%)
(90%)
(75%)
(88%)
(91%)
4,980,19
4,390,20
4,340,17*
3,760,12***
4,580,12*
4,860,77
(91%)
(95%)
(78%)
(72%)
(83%)
(81%)
5,300,56
4,600,09
4,010,14** 3,710,07***
4,470,15*
6,890,24
(96%)
(99%)
(72%)
(71%)
(81%)
(114%)

NOT: * - diferen statistic semnificativ cu lotul-martor, p<0,05;


** - p<0,01;
*** - p<0,001.
De menionat faptul c, n aceast perioad de cercetare tratamentul s-a dovedit a fi mai
puin eficient n OP secundar, deoarece n acest caz nivelul de hexoze continu s rmn la
valori reduse, similare celor nregistrate n OP secundar.
La finele perioadei de investigaie (6 luni), n OP primar se deceleaz o reducere
autentic a nivelului de hexoze sumare, cu 29% (p<0,01). n acelai timp, la animalele cu OP
secundar, coninutul de hexoze se menine practic n limitele valorilor normale. Sub influena
bioremediilor testate se deceleaz o tendin de restabilire a nivelului de hexoze sumare n toate
grupurile experimentale cu OP primar, cu excepia bioremediilor BP-Zn2 i BP-R, cnd nivelul
lor rmne inferior cu 17% (p<0,05) i, respectiv, cu 19% (p<0,05) fa de valorile martorului.
Totodat s-a constatat eficacitatea mai nalt a biopreparatului BP-Zn1 care sporete coninutul
de hexoze sumare cu 25% (p<0,001) fa de animalele cu OP. n acelai timp, n OP secundar,
n aceast perioad de investigaie administrarea bioremediilor menionate practic nu
condiioneaz modificri veridice ale coninutului de hexoze fa de nivelul iniial (Tab. 1).
Generaliznd cele expuse, conchidem c reducerea coninutului de hexoze sumare la
animalele cu OP atest modificri n structura glicoproteinelor, care au loc n esutul osos,
schimbrile fiind mai exprimate n perioada de 3 i 6 luni n OP primar i 3 luni de la iniierea
procesului patologic n OP secundar.
Astfel, creterea de coninut al substanelor cercetate, cu statut de componente ale
glicoproteinelor, indic aciunea stimulatoare osteoregeneratoare a BP studiate, datorit
proprietilor lor de a estompa diminuarea coninutului de hexoze sumare la animalele cu OP
primar i secundar n dinamica procesului patologic.
Rezultatele obinute privind dinamica acidului N-acetilneuraminic (NANA) n esutul
osos n OP primar i secundar i sub influena tratamentului cu biopreparate de origine algal,
sunt expuse n tabelul 2.
Din datele expuse n tabelul 2, cantitatea de NANA n esutul osos practic nu se modific
dup 1,5 luni din momentul inducerii OP primare i secundare, precum i la medicaia cu
bioremediile investigate.

148

Tabelul 2
Dinamica coninutului de acid N-acetilneuraminic n esutul osos la animalele cu
osteoporoz primar i secundar i sub influena biopreparatelor de origine algal
(mM/g.esut uscat)
Grupurile
de studiu
Martor
OP
OP +
BP-Zn1
OP +
BP-Zn2
OP +
BP-R

Termenele de cercetare i formele de osteoporoz


1,5 luni
3 luni
6 luni
Primar
Secundar
Primar
Secundar
Primar
Secundar
1,670,10
1,540,15
1,630,11
1,560,19
1,650,11
1,860,09
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
1,840,13
1,620,04
1,720,03
1,430,07
2,020,05**
1,840,08
(110%)
(105%)
(106%)
(92%)
(122%)
(99%)
1,770,06
1,700,07
1,820,05
1,680,07
1,990,03*
1,560,09*
(106%)
(110%)
(112%)
(108%)
(121%)
(84%)
1,770,05
1,570,07
1,670,06
1,440,05
2,00,06*
1,490,09*
(106%)
(102%)
(102%)
(92%)
(121%)
(80%)
1,540,05
1,520,06
1,760,09
1,350,09
2,030,05*
1,720,19
(92%)
(99%)
(108%)
(87%)
(123%)
(92%)

NOT: * - diferen statistic semnificativ cu lotul-martor, p<0,05;


** - p<0,01.
Evoluia ulterioar a dinamicii parametrului indicat mai sus arat c, n perioada de 3
luni, n grupul de animale cu OP primar i cea secundar coninutul de NANA se menine
practic n limitele valorilor animalelor intacte. n grupurile de animale cu OP primar i
secundar, sub aciunea biopreparatelor testate, coninutul de NANA se menine practic n
limitele valorilor atestate la animalele intacte, exceptnd doar BP-R care, n OP secundar,
manifest o tendin de diminuare discret cu 13% n raport cu parametrii de referin.
De remarcat faptul c, spre finele perioadei de investigaie (6 luni), n OP primar se
deceleaz o cretere sugestiv a nivelului NANA, cu 22% (p<0,01). Totodat, la animalele cu OP
secundar n aceast perioad a procesului patologic coninutul de NANA practic a rmas
staionar n raport cu valorile iniiale. n OP primar, sub influena biopreparatelor BP-Zn1, BPZn2 i BP-R se deceleaz o cretere sugestiv a nivelului NANA n toate grupurile experimentale
cu 21% - 23% (p<0,05). Totodat, la animalele cu OP secundar, n perioada de 6 luni de
desfurare a procesului patologic, sub influena bioremediilor BP-Zn1 i BP-Zn2, se constat o
diminuare veridic a coninutului de substan cercetat cu 16% (p<0,05) i, respectiv, cu 20%
(p<0,05), iar la administrarea bioremediului BP-R coninutul de NANA practic nu se modific n
raport cu valorile iniiale.
Rezumnd cele expuse, putem constata c cantitatea de NANA se modific puin n
esutul osos n OP primar i OP secundar i sub influena tratamentului cu biopreparatele
investigate n primele 3 luni de la debutul procesului patologic, cu o cretere sugestiv n OP
primar, n toate loturile experimentale, i fr modificri semnificative n OP secundar, la 6
luni de la iniierea procesului patologic.
Concluzii
1. n esutul osos, n osteoporoza primar i n cea secundar, se produc modificri ale
coninutului de glucide combinate cu proteinele necolagenice, caracterizate prin reducerea
nivelului de hexoze sumare, schimbrile fiind mai pronunate n perioada de 3 luni, n OP
primar i n OP secundar, iar cantitatea de acid N- acetilneuraminic se modific
nesemnificativ n ambele forme de OP, n primele 3 luni de la debutul maladiei, cu o cretere
sugestiv n OP primar i fr modificri semnificative n OP secundar la 6 luni de la
iniierea procesului patologic.
2. Biopreparatele de origine algal, cu un coninut sporit de Zn organic, manifest proprieti
osteoregeneratoare datorit proprietilor de a restabili coninutul de hexoze sumare n esutul
149

osos, prioritar fiind biopreparatul BP-Zn1. Cercetrile efectuate confirm perspectiva


utilizrii remediilor studiate n calitate de mijloace eficiente de corecie a dereglrilor
metabolice provocate de osteoporoz.
Bibliografie
1. COMPSTON, JE. Treatments for Osteoporosis Looking beyond the HORIZON. N. Engl. J.
Med., 2007, vol. 356, p. 1878-1880;
2. JACKSON, RD., LACROIX, AZ., GASS, M. et al. Calcium plus Vitamin D supplementation
and the risk of fractures. N. Engl. J. Med., 2006, vol. 354, p. 669-683;
3. NIJS, RNJ., JACOBS, JWG., LEMS, WF. et al. Alendronate or Alfacalcidol in GlucocorticoidInduced Osteoporosis. N. Engl. J. Med., 2006, vol. 355, p. 675-684;
4. OMI, N., EZAWA, I. The effect of ovariectomy on bone metabolism in rats. Bone, 1995, vol. 17,
no. 4, p. 163-168;
5. RUDIC, V., GUDUMAC, V., POPOVICI, M. Ficobiotehnologie - realizri noi n biomedicin.
Chiinu: Cuant, 1995, 195p.;
6. RUDIC, V. BioR Studii biomedicale i clinice. Chisinu, 2007, 376p;
7. TKOCZ-KWIATKOWSKA, J., KACZMARCZYK-SEDLAK, I., FOLWARCZNA, J.
Effects of pamidronate on the development of changes in bone mechanical
properties and bone structure caused by the administration of prednisolone
in rats. Pol. J. Pharmacol., 1998, vol. 50, p. 253258;
8. UEBELHART, B., RIZZOLY, R. Osteoporosis treatment. Rev. Med. Suisse, 2007, vol. 94, no. 3,
p. 150-153;
9. YOUNG, MF. Bone matrix proteins: more than markers. Calcif. Tissue Int., 2003, vol. 72, p. 2-4;
10. , ., , . M
. , 1978, 5, . 290-293;

DINAMICA CONINUTULUI DE ARN N OSTEOPOROZA PRIMAR I


SECUNDAR I SUB INFLUENA UNOR BIOREMEDII DE ORIGINE ALGAL
Veronica Sardari
Laboratorul Biochimie al USMF Nicolae Testemianu
Summary
The dynamic of the content of ARN in primary and secondary osteoporosis
and under the influence of bioremedies of algal origin
The changes of the content of ARN were studied in primary and secondary experimental
osteporosis and under the influence of biological preparations of algal origin. The concentration
of ARN decreased in all periods of the experimental osteoporosis. In 1,5, 3 and 6 months after
osteoporosis induction the experimental studies revealed osteoregenerative action of the
preparations manifested by the increase of ARN content, the best effect had the biological
preparation BP-Zn1.
Rezumat
S-a studiat modificrile coninutului de ARN n osteoporoza experimental primar i
secundar n dinamic la 1,5, 3 i 6 luni i sub influena biopreparatelor de origine algal.
Coninutul de ARN s-a redus veridic n toate perioadele ale osteoporozei experimentale. n urma
investigaiilor efectuate s-a depistat efectul osteoregenerativ al preparatelor cercetate, ceea ce se
manifest prin creterea coninutului de ARN, prioritar fiind biopreparatul BP-Zn1.
Una dintre problemele actuale ale medicinii contemporane este, fr ndoial, osteoporoza
care n ultimele decenii, a focalizat eforturile specialitilor din centrele de cercetare, fapt dictat
de: morbiditatea n ascensiune, evoluia sever i complicaiile ei, imperfeciunea mijloacelor
terapeutice, oferite de medicina modern [1, 2, 9].
150

Aplicarea tehnicilor de ultim or n domeniul dat a avut i are un rol incontestabil n


perfecionarea asistenei medicale. Cercetrile din ultimii ani, realizate de o serie de autori,
orientate spre studiul etiologiei, al patobiochimiei OP, au evideniat rolul diferitelor modificri n
sistemul homeostaziei esutului osos i n evoluia bolii; s-au elaborat noi clasificri, programe
diagnostice i teste n determinarea evoluiei i a prognosticului bolii, au fost propuse noi
programe de tratament [3, 5, 7, 10].
Calusul osos, ca i alte tipuri de esut conjunctiv proliferativ, este destul de bogat n acizi
nucleici. Nivelul acidului dezoxiribonucleic (ADN) este ndeosebi nalt n sectoarele fibroase ale
calusului, unde se desfoar multiplicarea intens a celulelor. Coninutul acidului ribonucleic
(ARN) este mai nalt n sectoarele cartilaginoase i osteoide ale calusului, unde se desfoar
biosinteza intens a colagenului i a altor componente ale matricei osoase. Nivelul elevat de
ARN n celulele osoase este un indice al activitii lor biosintetice i reflect activitatea
permanent osteoblastic, ndreptat spre meninerea echilibrului metabolic al matricei osoase
extracelulare. Coninutul de ADN este mai redus dect concentraia ARN. Intensificarea
proceselor biosintetice n esutul osos este legat de creterea sintezei ARN 11.
n literatura de specialitate nu sunt prezente referine care ar releva influena
biopreparatelor de origine algal asupra metabolismului acizilor nucleici n dinamica OP
experimentale primare i secundare. Avnd drept reper aceast stare de lucruri, am considerat
oportun a studia coninutul de acid ribonucleic n esutul osos n evoluia OP experimentale
primare i secundare, n dinamic, la 1,5, 3 i la 6 luni precum i la administrarea biopreparatelor
de origine algal cu un coninut divers de Zn organic.
Materialul i metodele de investigaie
Experimentele au fost efectuate pe 78 de obolani, femele i masculi maturi, cu masa de
160-250 g.
Osteoporoza primar a fost reprodus la animalele de laborator obolanii albi, femele,
fr pedigriu, prin ovariectomie metod clasic i acceptat de muli cercettori [Omi N. et al.,
1995].
Osteoporoza secundar a fost provocat la obolanii masculi, prin injectri subcutanate
bisptmnale de prednisolon, n doz de 10 mg/kilocorp [Tkocz-Kwiatkowska J. et al.,
1998].
Animalele au fost divizate n 10 loturi (cte 7-8 n fiecare).
Animalele din lotul 1 (lotul-martor pentru OP primar) au fost fals operate, adic supuse
aceleiai intervenii chirurgicale, dar fr nlturarea ovarelor.
Lotul 2 (lotul-martor pentru OP secundar) a fost constituit din 7 animale intacte, crora li s-a
introdus subcutanat, bisptmnal soluie fiziologic (8,5 g/l NaCl) 1,0 ml/kilocorp.
Lotul 3 a inclus animalele crora li s-a modelat OP primar prin ovariectomie.
Lotul 4 OP secundar reprodus prin injectarea prednisolonului, 10 mg/kilocorp dizolvat n
soluie fiziologic.
Loturile 5 i 6 au inclus animalele cu OP primar i, respectiv, secundar, crora li s-a
administrat biopreparatul ce coninea 10 g/ml de zinc (OP+ BP-Zn1).
Loturile 7 i 8 au inclus animalele cu OP primar i secundar + biopreparatul ce coninea 5
g/ml de zinc (OP + BP-Zn2).
Loturile 9 i 10 au reprezentat animalele cu aceleai forme de OP + biopreparatul de origine
algal cu un coninut redus de Zn 0,2 g/ml (OP+BP-R).
Prelevarea materialului de cercetare (osul femural) a fost efectuat n dinamic pe
parcursul a 1,5, 3 i 6 luni de la debutul experimentului, animalele fiind sacrificate prin
decapitare sub narcoz uoar cu eter.
Osul femural a fost extras, eliberat de esuturile adiacente i a fost nlturat mduva
osoas prin splri repetate cu soluie fiziologic. Ulterior, a fost congelat n azot lichid i supus
triturrii, n piuli de porelan cu pislog i cntrit pe balana de torsiune. n calitate de mediu
de dispersare a fost utilizat soluia de zaharoz 0,25M (pH 7,4), ce coninea 0,001M EDTA,
astfel ca diluia final a omogenatului s constituie 1:10. Pentru distrugerea complet a
151

membranelor celulare, omogenatul a fost prelucrat cu triton X-100, cu o concentraie final de


0,1%, i supus ciclurilor repetate de ngheare-dezgheare.
Acidul ribonucleic s-a dozat conform procedeului descris de . ., 1963 [8].
Rezultatele obinute i analiza lor
Rezultatele obinute, privind evoluia coninutului de ARN n esutul osos n condiiile
OP primare, secundare i sub influena biopreparatelor de origine algal sunt expuse n tabelul 1.
Studiul efectuat la 1,5 luni din momentul iniierii procesului patologic atest o diminuare
autentic, cu 25% (p<0,05), a coninutului de ARN n osul femural, la animalele cu OP primar
i cu 26%, la animalele cu OP secundar versus valorile din lotul-martor. La animalele cu OP
primar, n acest termen de cercetare, medicaia cu biopreparatele BP-Zn1 i BP-Zn2 se soldeaz
cu reduceri mai puin pronunate ale concentraiei de ARN (86% (p>0,1)) i, respectiv, 83%
(p>0,1) vis-a-vis de valorile atestate n lotul martor. Administrarea remediului BP-R, n acest caz,
s-a dovedit mai puin eficient, deoarece valorile de ARN practic nu se deosebeau de nivelul
celor nregistrate n grupul de animale cu OP primar. Totodat, la animalele cu OP secundar
sub aciunea tratamentului cu biopreparatele sus-numite, cantitatea de ARN se menine sczut,
la nivelul instalat de OP, i constituie 67-79%.
Tabelul 1
Dinamica coninutului de ARN, n esutul osos, la animalele cu osteoporoz primar i
secundar i sub influena biopreparatelor de origine algal (g/kg.)
Grupur
i-le de
studiu
Martor
OP
OP +
BP-Zn1
OP +
BP-Zn2
OP +
BP-R

Termenele de cercetare i formele de osteoporoz


1,5 luni
3 luni
6 luni
Primar
Secundar
Primar
Secundar
Primar
Secundar
0,6800,06
(100%)
0,5110,03*
(75%)
0,5870,05
(86%)
0,5660,05
(83%)
0,4810,03*
(71%)

0,5350,08
(100%)
0,3960,03
(74%)
0,4200,02
(79%)
0,3940,03
(74%)
0,3580,03
(67%)

0,6750,07
(100%)
0,4440,06*
(66%)
0,5810,05
(86%)
0,5140,03
(76%)
0,4300,07*
(64%)

0,6170,08
(100%)
0,5430,18
(88%)
0,6340,10
(103%)
0,6890,15
(112%)
0,6000,17
(97%)

0,6730,07
(100%)
0,4650,01*
(69%)
0,5960,03
(89%)
0,5620,03
(84%)
0,5460,03
(81%)

0,6080,05
(100%)
0,5430,02
(89%)
0,8700,05**
(143%)
0,6840,08
(113%)
0,6410,05
(105%)

NOT: * - diferen statistic semnificativ cu lotul-martor, p<0,05;


** - p<0,01.
Ulterior, n perioada de 3 luni de desfurare a procesului patologic se constat o reducere
pronunat, statistic veridic a concentraiei ARN n OP primar, cu 34% (p<0,05), i manifest o
tendin de descretere, cu 12%, n OP secundar n raport cu parametrii de referin.
n condiii de administrare a BP-R la animalele cu OP primar, cantitatea de ARN, n linii
generale, s-a meninut constant, n raport cu valorile nregistrate n lotul cu OP i a constituit
64% (p<0,05), pe cnd bioremediile BP- Zn1 i BP-Zn2 majoreaz coninutul de ARN cu 31%
i, respectiv, cu 16%, fa de valorile nregistrate la animalele cu OP. n acelai timp, la animalele
cu OP secundar biopreparatele BP-Zn1 i BP-R sporesc discret coninutul cu 17% i cu 11%,
respectiv, fa de lotul de animale cu OP, i restabilesc cantitatea de ARN pn la valorile atestate
la animalele intacte. Cel mai evident efect de majorare a fost instituit de bioremediul BP-Zn2,
care induce cu 27% (p>0,1) cantitatea de ARN, versus animalele cu OP secundar.
Spre finele perioadei de investigaie (6 luni), modificrile coninutului de ARN n OP
primar i n OP secundar sunt similare celor nregistrate la etapa precedent, constituind 69%
(p<0,05), pentru OP primar, i 89%, pentru OP secundar, din nivelul relevat la obolanii
sntoi. Astfel, datele experimentale obinute indic cu certitudine reducerea intensitii
152

proceselor biosintetice n esutul osos, n OP primar i tendina de diminuare a acestora n OP


secundar, legat de scderea sintezei ARN.
Sub influena biopreparatelor BP-Zn1 i BP-Zn2, la animalele cu OP primar semnalm o
cretere statistic autentic a coninutului de ARN cu 28% (p<0,01) i, respectiv, cu 21%
(p<0,01), n raport cu animalele cu OP. Biopreparatul BP-R, de asemenea, contribuie la creterea
concentraiei de ARN cu 17% (p<0,05), fa de animalele supuse ovariectomiei.
La animalele cu OP secundar, n aceast perioad de investigaie, administrarea BP-Zn1
conduce la o cretere important a nivelului de ARN, acesta fiind net superior, cu 43% (p<0,01),
fa de cel nregistrat n lotul-martor i cu 60% (p<0,001) fa de valorile atestate n lotul cu OP.
Asistm deci la un proces de intensificare a sintezei de ARN incitat de biopreparatul BP-Zn1. La
utilizarea BP-Zn2 i a BP-R, coninutul de ARN crete cu 26% i cu 18%, fa de lotul cu OP;
ultimul preparat practic contribuind la normalizarea valorilor indicelui menionat.
Concluzii
3.
Coninutul de ARN scade n OP primar i n OP secundar, la toate etapele evoluiei
procesului patologic, fapt care denot reducerea n intensitatea proceselor biosintetice n
esutul osos.
4.
Biopreparatele de origine algal, cu un coninut sporit de Zn organic, manifest proprieti
osteoregeneratoare pronunate prin faptul c majoreaz eficient coninutul de ARN,
prioritar fiind biopreparatul BP-Zn1. Cercetrile efectuate confirm perspectiva utilizrii
remediilor studiate n calitate de mijloace eficiente de corecie n dereglrile metabolice
provocate de osteoporoz.
Bibliografie
1. MARANGELLA, M., DI STEFANO, M., CASALIS, S. et al. Effects of potassium citrate
supplementation on bone metabolism. Calcif. Tissue Int., 2004, vol. 74, no. 4, p. 330-335;
2. MC CLUNG, MR., LEWIECKI, EM., COHEN SB. et al. Denosumab in postmenopausal women
with low bone mineral density. N. Engl. J. Med., 2006, vol. 354, p. 821-831;
3. NIJS, RNJ., JACOBS, JWG., LEMS, WF. et al. Alendronate or Alfacalcidol in GlucocorticoidInduced Osteoporosis. N. Engl. J. Med., 2006, vol. 355, p. 675-684;
4. OMI, N., EZAWA, I. The effect of ovariectomy on bone metabolism in rats. Bone, 1995, vol. 17, no. 4,
p. 163-168;
5. ROUX, C., GARNERO, P., THOMAS, T. et al. Recommendations for monitoring antiresorptive
therapies in postmenopausal osteoporosis. Joint. Bone Spine, 2005, vol. 72, no. 1, p. 26-31;
6. TKOCZ-KWIATKOWSKA, J., KACZMARCZYK-SEDLAK, I., FOLWARCZNA, J. Effects of
pamidronate on the development of changes in bone mechanical properties
and bone structure caused by the administration of prednisolone in rats. Pol. J.
Pharmacol., 1998, vol. 50, p. 253258;
7. UEBELHART, B., RIZZOLY, R. Osteoporosis treatment. Rev. Med. Suisse, 2007, vol. 94, no. 3, p.
150-153;
8. , . . , 1963, . 31-32;
9. ZHANG, G., QIN, L., SHI, Y. Epimedium-derived phytoestrogen flavonoids exert beneficial effect on
preventing bone loss in late postmenopausal women: a 24-month randomized, double- blind and
placebo-controlled trial. J. Bone Miner. Res., 2007, vol. 22, no. 7, p. 1072-1079;
10. ZHENG, YY., YANG, J., CHEN, DH., SUN, L. Effects of the extracts of Cajanus cajan L. on cell
functions in human osteoblast-like TE85 cells and the derivation of osteoclast-like cells. Yao Xue
Xue Bao, 2007, vol. 42, no. 4, p. 386-391;
11. , ., , . . .:
, 1977, 272 c.;

153

REMANIEREA COMPOZIEI MINERALE


A ESUTULUI OSOS CU COMPUI COORDINATIVI AI CUPRULUI I
BIOPREPARATE DE ORIGINE ALGAL N OSTEOPATIA EXPERIMENTAL
Olga Tagadiuc
Laborator Biochimie USMF N.Testemianu
Abstract
Modification of the bone mineral composition by coordinative
copper compounds and BioR in experimental osteopathy
The aim of the study was to investigate coordinative copper compounds and BioR influence
on mineral composition of the bone in adult rats in experimental osteopathy induced by long
term CCl4 administration (8 weeks). Long term CCl4 administration statistically significantly
decreased magnesium and potassium and increased sodium contents in the bone of female rats.
Only phosphates were statistically significantly changed (increased) in male rats after CCl4
administration. Calcium content is not changed by any of the tested drugs and there are only a
few, not very significant variations of the phosphate content. Coordinative copper compounds
CMT-28, CMT-67, their combinations with BioR and BioR alone in low doses (1 mg/kg)
exhibited negative effect on magnesium, chloride, potassium and sodium contents in bone in
toxic osteopathy induced by CCl4. High doses of BioR (2 mg/kg) have beneficial effect on
magnesium and potassium levels and less negative effect on chloride and sodium contents.
Rezumat
Scopul studiului a fost de a cerceta influena compuilor coordinativi ai cuprului i a BioR
asupra compoziei minerale a esutului osos la obolanii aduli n osteopatia experimental
indus prin administrarea de durat a CCl 4 (8 sptmni). S-a stabilit c la administrarea de
durat a CCl4 scade semnificativ cantitatea magneziului i potasiului i crete cantitatea sodilui n
esutul osos la femele. La masculi administrarea CCl4 induce doar creterea semnificativ a
cantitii fosfailor n esutul osos. Cantitatea calciului nu este modificat de administrarea
preparatelor testate, iar a fosfailor manifest un numr limitat de schimbri de amploare mic.
Compuii coordinativi ai cuprului CMT-28, CMT-67, mbinrile lor cu BioR i BioR n doze
mici (1 mg/kg) exercit o aciune negativ asupra canitii magneziului, clorului, poatasiului i
sodiului n esutul osos pe fundal de osteopatie toxic indus de CCl4. Dozele mari de BioR (2
mg/kg) posed aciune pozitiv asupra cantitii magneziului i potasiului i aciune negativ mai
puin exprimat asupra cantitii de clor i sodiu.
Actualitatea temei
Cercetarea intens a esutului osos normal i n diverse patologii, ce a caracterizat ultimele
decenii, s-a orientat n mai multe direcii, printre cele mai importante fiind compoziia i
metabolismul normal al esutului osos [3, 8], mecanismele patogenice ale dezvoltrii afeciunilor
osteoarticulare [2, 4, 6, 9], metodele de diagnostic al maladiilor scheletului [10], strategiile
profilactice i terapeutice ale bolilor cu atingere osoas [1, 5, 7].
n prezent pentru profilaxia i tratamentul afeciunilor esutului osos, n special a
osteoporozei, sunt utilizate preparate cu dou direcii de aciune:
1. preparate care inhib resorbia esutului osos medicamente pentru terapia hormonal de
substituie; miacalcic; bisfosfonai; preparate ale calciului i vitaminei D; steroizi anabolici
(Deca-Durabolin);
2. preparate care majoreaz masa osoas derivaii fluorului; livial; PGE2; hormonul de
cretere; oseina; remedii experimentale (antagonitii integrinelor).
Totui, pn n prezent nu exist un medicament antiosteoporotic ce ar ntruni toate
cerinele naintate ctre aceste medicamente s stimuleze creterea densitii minerale osoase
(DMO) la femei i brbai independent de vrst, s nu afecteze structura normal a oaselor, s
micoreze riscul i incidena fracturilor de fragilitate, s nu provoace reacii adverse grave i s
fie bine suportat de pacieni, s se poat asocia cu alte medicamente, s fie ntr-o form practic

154

de administrare i economic eficace. Cele menionate anterior fundamenteaz necesitatea


continurii cercetrii efectelor osteotrope a diferitor medicamente i remedii.
Scopul studiului a fost de a cerceta influena compuilor coordinativi ai cuprului CMT-28
i CMT-67 i a biopreparatului de origine algal BioR asupra compoziiei minerale a esutului
osos n osteopatia toxic, indus prin administrarea tetraclorurii de carbon (CCl4).
Material i metode
Experienele au fost efectuate pe 80 obolani albi, aduli, fr pedigriu, cu masa corpului
de 160-180 g. Au fost cercetate urmtoarele grupuri experimentale.
I
lot animale intacte (8 femele i 8 masculi);
II lot animale, crora li s-a administrat 0,1 ml soluie CCl4 50% la 100 g mas
corporal, bisptmnal, timp de 8 sptmni (8 femele i 8 masculi);
III lot animale, crora li s-a administrat CMT-28 1 mg la 1 kg mas corporal timp de 10
zile, dup 8 sptmni de administrare a 0,1 ml soluie CCl 4 50% la 100 g mas
corporal (8 femele);
IV lot animale, crora li s-a administrat CMT-67 1 mg la 1 kg mas corporal timp de 10
zile, dup 8 sptmni de administrare a 0,1 ml soluie CCl 4 50% la 100 g mas
corporal (8 femele);
V lot animale, crora li s-a administrat CMT-28 1 mg la 1 kg mas corporal n
mbinare cu BioR 1 mg la 1 kg mas corporal timp de 10 zile, dup 8 sptmni
de administrare a 0,1 ml soluie CCl4 50% la 100 g mas corporal (8 masculi);
VI lot animale, crora li s-a administrat CMT-67 1 mg la 1 kg mas corporal n
mbinare cu BioR 1 mg la 1 kg mas corporal timp de 10 zile, dup 8 sptmni
de administrare a 0,1 ml soluie CCl4 50% la 100 g mas corporal (8 masculi);
VII lot animale, crora li s-a administrat BioR 1 mg la 1 kg mas corporal timp de 10
zile, dup 8 sptmni de administrare a 0,1 ml soluie CCl 4 50% la 100 g mas
corporal (8 masculi);
VIII lot animale, crora li s-a administrat BioR 2 mg la 1 kg mas corporal timp de 10
zile, dup 8 sptmni de administrare a 0,1 ml soluie CCl 4 50% la 100 g mas
corporal (8 masculi).
Compuii coordinativi ai cuprului CMT-28 i CMT-67 au fost oferii de prof.univ.,
d.h.ch. Aurelian Gulea (Catedra Chimie anorganic, USM), iar BioR de academicianul A a R.
Moldova, prof. univ., d.h.b., Valeriu Rudic (Institutul de Microbiologie al A a R. Moldova).
La 24 ore dup ultima injectare animalele au fost sacrificate sub narcoz uoar cu eter
sulfuric. Oasele femurale au fost extrase, eliberate de esuturile adiacente i nlturat mduva
osoas prin splri repetate cu soluie glaciar 0,9% de NaCl. n continuare oasele femurale au
fost ngheate n azot lichid i supuse triturrii pn la starea de pulbere. Pulberea (20 mg) a fost
hidrolizat n HClO4 i n hidrolizatul rezultat s-a determinat cu ajutorul seturilor standarde
cantitatea substanelor minerale:
1. calciului (Calcium Arsenazo, EliTECH),
2. fosfailor (EliTECH),
3. magneziului (Magnesium Calmagite, EliTECH),
4. clorului (Chloride, EliTECH),
5. potasiului (Potassium Fluid monoreagent, Centronic GmbH)
6. sodiului (Sodium, Centronic GmbH).
Cantitatea compuilor exprimat n mM a fost referit la g pulbere os.
Rezultatele obinute au fost evaluate statistic conform criteriului t-Student i coeficientului
de corelaie r, cu ajutorul programului STATISTICA 6,0 (StatSoft Inc, 2001).
Rezultate i discuii
Administrarea de durat a CCl4 (8 sptmni) determin mai multe schimbri ale cantitii
substanelor minerale n esutul osos la femele. Pot fi menionate scderea semnificativ a
cantitilor magneziului (cu 21%, p < 0,01) i potasiului (cu 23%, p < 0,001) i creterea
important a sodiului (cu 62%, p < 0,05) peste valorile de referin. De asemenea, se
155

nregistreaz o tendin de cretere a clorului (109% fa de martor). La masculi semnificativ


statistic este doar creterea cantitii fosfailor cu 11% (p < 0,05).
Utilizarea valorilor medii, independente de sexul animalelor, determin eliminarea
diferenelor statistic veridice dintre valorile depistate la animalele intacte i cele crora li s-a
administrat CCl4. Astfel, este evident necesitatea de a lua n consideraie sexul la evaluarea
rezultatelor dozrii elementelor minerale n estului osos normal i n diverse stri patologice.
Tabelul 1. Coninutul substanelor minerale n esutul osos al obolanilor aduli
sntoi i dup administrarea CCl4 (mM la 1g pulbere os).

Martor

Lotul

Calciul

Fosfaii

Magneziul

Clorul

Potasiul

Sodiul

5,7730,17

3,3890,07

0,7480,05

2,0960,06

0,0730,001

1,980,38

5,770,17

2,9810,1*

0,6390,03

2,6260,12*

0,0680,002*

3,7880,12

media

5,771

3,185

0,694

2,361

0,071

2,884

CCl4

5,8030,17

3,2530,1

0,5880,02

101%

96%

6,1110,15

media

##

##

3,1970,42#

2,2830,14

0,0560,003

79%

109%

77%

162%

3,3170,09#

0,6840,04

2,6410,12

0,0690,002

3,0640,42

106%

111%

107%

100,6%

102%

81%

5,957

3,285

0,636

2,462

0,063

3,13

Legend: a) veridicitatea statistic a diferenelor cantitii elementelor minerale la animalele


intacte de diferite sexe conform criteriului t-Student: * p < 0,05;
b) veridicitatea statistic a diferenelor cantitii elementelor minerale la animalele
intacte i dup administrarea CCl4 confrom criteriului: t-Student # p<0,05; ##
p<0,001.
Administrarea CMT-28, CMT-67, BioR n diferite doze i a combinaiilor lor nu modific
statistic semnificativ cantitatea calciului n esutul osos al animalelor experimentale, coninutul
lui variind ntre 97% i 103% fa de martor. Cantitatea fosfailor este diminuat la femele de
CMT-28, CMT-67 i CMT-28BioR cu 11% (p < 0,01), 24% (p < 0,01) i 9% (p < 0,01),
respectiv. Administrarea BioR n diferite doze i CMT-67BioR nu modific coninutul fosfailor
n esutul osos al masculilor (tab. 2).
Tabelul 2. Coninutul calciului i fosfailor n esutul osos al obolanilor aduli sntoi,
dup administrarea CCl4 i preparatelor testate (mM la 1g pulbere os).
Lotul
Martor
CCl4
CMT-28
CMT-67
CMT-28BioR
CMT-67BioR
BioR 1 mg/kg
BioR 2 mg/kg

Calciul
5,7730,17
5,770,17
5,8030,17
6,1110,15
5,5960,17
5,9430,14
5,9490,1
5,9560,16
5,7760,11
5,7840,13

101%
106%
97%
103%
103,1%
103,2%
100,1%
100,2%

Fosfaii
3,3890,07
2,9810,1*
3,2530,1
3,3170,09#
3,0290,09##
3,0660,05##
2,590,16##
2,7990,17
2,9960,08
3,0940,13

96%
111%
89%
91%
76%
94%
101%
104%

Legend: a) veridicitatea statistic a diferenelor cantitii elementelor minerale la animalele


intacte de diferite sexe conform criteriului t-Student: * p < 0,05;
b) veridicitatea statistic a diferenelor cantitii elementelor minerale la animalele
intacte i dup administrarea CCl4 i a preparatelor testate confrom criteriului: tStudent # p<0,05; ## p<0,01.

156

Astfel, cantitatea calciului elementul principal al cristalelor de apatit a esuturilor


mineralizate (Ca10[PO4]6OH2), denot o anume rezisten la aciunea noxei (CCl 4) i a
preparatelor testate. Fosfatul se prezint ca un element mai labil, n special, n esutul osos al
femelelor.
Compusul coordinativ al cuprului CMT-28 induce diminuarea magneziului, clorului,
potasiului i sodiului n esutul osos al obolanilor. Statistic veridic se micoreaz cantitile
magneziului cu 31% (p < 0,05), clorului cu 15% (p < 0,001) i potasiului cu 27% (p < 0,001)
la administrarea CMT-28. mbinarea lui cu BioR (1 mg/kg) aprofundeaz aceast diminuare,
aducnd coninutul magneziului la 51% (p < 0,05), a clorului la 57% (p < 0,001) i a
potasiului la 53% (p < 0,001) din valorile de referin. Cantitatea sodiului, la fel, manifest o
scadere la administrarea CMT-28 i CMT-28BioR, dar modificrile nu sunt statistic veridice
(tab. 3).
CMT-67 i CMT-67BioR exercit aciune similar asupra cantitii elementelor
minerale studiate, dar numrul schimbrilor statistic veridice este semnificativ mai mic.
Astfel, la administrarea CMT-67 scade veridic cantitatea clorului cu 55% (p < 0,001) i a
potasiului cu 33% (p < 0,001). mbinarea CMT-67BioR micoreaz nivelul clorului cu 73%
(p < 0,001) i a potasiului cu 46% (p < 0,001). n acelai timp, CMT-67 mrete cantitatea de
sodiu cu 73% (p < 0,05). Diminuarea cantitii de magneziu sub influena CMT-67 i a
magneziului i sodiului la administrarea CMT-67BioR nu este concludent.
Tabelul 3. Cantitatea de magneziu, clor, potasiu i sodiu n esutul osos al obolanilor
aduli sntoi, dup administrarea CCl4 i preparatelor testate (mM la 1g pulbere os).
Lotul
Martor

CCl4

CMT-28

CMT-67

CMT-28
BioR
CMT-67
BioR

BioR 1 mg/kg

BioR 2 mg/kg

Magneziul
0,7480,05
0,6390,03
0,5880,02##
79%
0,6840,04
107%
0,5150,05#
69%
0,6850,03
92%
0,3840,04#
51%
0,510,04
80%
0,5690,04
89%
0,7220,02
113%

Clorul
2,0960,06
2,6260,12*
2,2830,14
109%
2,6410,12
101%
1,7790,02###
85%
0,9320,11###
45%
1,1830,12###
57%
0,6950,03###
27%
1,1460,12###
44%
1,9070,17#
73%

Potasiul
0,0730,001
0,0680,002*
0,0560,003##
77%
0,0690,002
102%
0,0530,02###
73%
0,0560,002###
77%
0,0390,005###
53%
0,0370,004###
54%
0,04990,002###
73%
0,1030,05#
152%

Sodiul
1,980,38
3,7880,12
3,1970,42#
162%
3,0640,42
81%
1,3960,36
71%
3,4220,19#
173%
1,1920,38
60%
3,1250,71
83%
1,4920,12###
39%
1,6450,52##
43%

Legend: a) veridicitatea statistic a diferenelor cantitii elementelor minerale la animalele


intacte de diferite sexe conform criteriului t-Student: * p < 0,05;
b) veridicitatea statistic a diferenelor cantitii elementelor minerale la animalele
intacte i dup administrarea CCl4 i a preparatelor testate confrom criteriului: tStudent # p<0,05; ## p<0,01; ### p < 0,001.
BioR n doz de 1 mg la kg mas corporal, administrat obolanilor cu osteopatie toxic,
induce diminuarea statistic veridic a cantitii clorului cu 56% (p < 0,001), potasiului cu 23%
(p < 0,001) i sodiului cu 61% (p < 0,001), pe cnd cantitatea magneziului manifest doar o
tendin neconcludent de diminuare. Dublarea dozei, la fel, diminueaz cantitatea clorului i a
potasiului, dar modificrile sunt mai puin pronunate cantitatea clorului scade cu 27%
(p < 0,05) iar a sodiului cu 57% (p < 0,01) fa de valorile martor. Cantitatea potasiului crete
157

semnificativ peste valorile de referin, atingnd 152% (p < 0,05) din martor. Coninutul
magneziul, ca i n cazul precedent, doar manifest o tendin de cretere.
Astfel, modificrile cantitii magneziului, clorului, potasiului i sodiului n esutul osos al
obolanilor induse de aministrarea preparatelor testate sunt neunivoce. Compuii coordinativi ai
cuprului CMT-28 i CMT-67 exercit o aciune negativ asupra componenei minerale a esutului
osos pe fundal de osteopatie toxic indus de CCl 4. mbinarea acestor compui cu BioR
aprofundeaz modificrile nefavorabile, ce se manifest prin diminuarea cantitii magneziului,
clorului, potasiului i sodiului, microelemente implicate n reglarea proceselor de remodelare
osoas. Administrarea solitar a BioR, n special, n doz de 2 mg/kg mas corporal, are
influen benefic asupra cantitii magneziului i potasiului, iar aciunea negativ asupra
cantitii de clor i sodiu este mai puin exprimat, dect n cazul dozelor mici (1 mg/kg).
Concluzii
1. Osteopatia toxic indus de CCl4 se caracterizeaz prin scderea semnificativ a cantitii
magneziului i potasiului la femele i creterea cantitii sodilui la femele i a fosfailor la
masculi n esutul osos.
2. Cantitatea calciului nu este modificat de administrarea CCl 4 sau a preparatelor testate, iar a
fosfailor manifest un numr limitat de schimbri de amploare mic.
3. Compuii coordinativi ai cuprului CMT-28, CMT-67 i mbinrile lor cu BioR exercit o
aciune negativ asupra canitii magneziului, clorului, poatasiului i sodiului n esutul osos
pe fundal de osteopatie toxic indus de CCl4.
4. BioR n doze mici (1 mg/kg) manifest influen negativ asupra cantitii magneziului,
clorului, poatasiului i sodiului n esutul osos pe fundal de osteopatie toxic indus de CCl4.
5. Dozele mari de BioR (2 mg/kg) posed aciune pozitiv asupra cantitii magneziului i
potasiului i aciune negativ mai puin exprimat asupra cantitii de clor i sodiu n esutul
osos pe fundal de osteopatie toxic indus de CCl4.
Bibliografie
1. Coleman RE. Risks and benefits of bisphosphonates. Br J Cancer. 2008 Jun 3;98(11):173640. Epub 2008 May 27
2. Dai Y, Shen L.Relationships between serum osteoprotegerin, matrix metalloproteinase-2
levels and bone metabolism in postmenopausal women. Chin Med J (Engl). 2007 Nov
20;120(22):2017-21.
3. Davies J.H., Evans B.A.G., Gregory J.W. Bone mass acquisition in healthy children. Arch.
Dis. Child. 2005, nr. 90, pp. 373378;
4. Gertner J.M. Normal and Abnormal Skeletal Growth. In Dynamics of Bone and Cartilage
Metabolism, ed. Seibel M.J., Robins S.P., Bilezikian J.P. Academic Press, San Diego, USA,
1999;
5. Majima T, Komatsu Y, Shimatsu A, Satoh N, Fukao A, Ninomiya K, Matsumura T, Nakao K.
Efficacy of combined treatment with raloxifene and alfacalcidol on bone density and
biochemical markers of bone turnover in postmenopausal osteoporosis. Endocr J. 2008
Mar;55(1):127-34. Epub 2008 Jan 24.
6. Ozgocmen S, Kaya H, Fadillioglu E, Aydogan R, Yilmaz Z. Role of antioxidant
systems, lipid peroxidation, and nitric oxide in postmenopausal osteoporosis. Mol Cell
Biochem. 2007;295(1-2):45-52.
7. Prinsloo PJ, Hosking DJ. Alendronate sodium in the management of osteoporosis.Ther Clin
Risk Manag. 2006 Sep;2(3):235-49.
8. Salari P, Rezaie A, Larijani B, Abdollahi M.A systematic review of the impact of n-3 fatty
acids in bone health and osteoporosis.Med Sci Monit. 2008 Mar;14(3):RA37-44.
9. Sambrook P., Jones G. Corticosteroid osteoporosis. Br J Rheumatol, 1995, v.34, nr.1, p.8-12;
10. .. ..
. , 1997; 6: 48.

158

INFLUENA TETRACLORURII DE CARBON


ASUPRA COMPOZIEI MINERALE A ESUTULUI OSOS
Olga Tagadiuc, Inna ve, Lilia Andronache, V. Gudumac
Laborator Biochimie USMF N.Testemianu
Abstract
Carbon tetrachloride influence on the bone mineral composition
Carbon tetrachloride (CCl4) is a toxic compound widely distributed in the environment.
The aim of the study was to investigate CCl4 influence on mineral composition of the bone in
adult rats. Long term CCl4 administration (8 weeks) statistically significantly decreased
magnesium (21%, p < 0,01) and potassium (23%, p < 0,001) and increased sodium (62%, p <
0,05) contents in the bone of female rats. Only phosphates were statistically significantly
changed (increased by 11%, p < 0,05) in male rats after prolonged CCl4 administration.
Rezumat
Tetraclorura de carbon (CCl4) este o nox larg rspndit n mediul ambiant, care afecteaz
grav diverse organe i esuturi. Scopul studiului a fost de a cerceta influena CCl 4 asupra
compoziei minerale a esutului osos la obolanii aduli. S-a stabilit c la administrarea de durat
a CCl4 (8 sptmni) scade semnificativ cantitatea magneziului (cu 21%, p < 0,01) i potasiului
(cu 23%, p < 0,001) i crete cantitatea sodilui (cu 62%, p < 0,05) n esutul osos la femele. La
masculi administrarea CCl4 induce doar creterea semnificativ a cantitii fosfailor (cu 11%, p
< 0,05) n esutul osos.
Actualitatea temei
Tetraclorura de carbon (CCl4) este o substan semnificativ de toxic i destul de larg
rspndit n mediul ambiant. Populaia n majoritatea cazurilor este expus aciunii CCl 4 din
atmosfer i mai puin celei prezente n ap i alimente. Lundu-se n consideraie toate sursele
de expunere, n organismul omului ptrund zilnic cca 0,10,27 g CCl4/kg mas corporal 5.
Toxicitatea CCl4 este dictat de formarea produilor intermediari metabolic extrem de
agresivi, ca radicalii triclorometil i triclorometilperoxil, fosgen, cloroform, diclorocarben etc.
Radicalii menionai interacioneaz cu lipidele declannd oxidarea peroxidic a lipidelor, ce la
rndul ei este un generator important de compui nocivi - aceton, propanal, butanal, dialdehida
malonic etc. 2, 3. Metaboliii intermdiari a CCl4 posed capacitatea de a interaciona i a se
lega covalent la substanele macromoleculare proteine i enzime, acizi nucleici, fosfogliceride,
digliceride 4.
CCl4 se distribuie n ntreg organismul, fiind depistat n concentraii mari n snge, esutul
adipos, mduva osoas, creier, medul i nervi, ficat, rinichi, mucoasa intestinului, glandele
salivare, etc. Compusul tinde s se acumuleze n grsimi, concentraia sa n lipide fiind de cca 60
ori mai mare dect n snge 1, 8, 10. CCl4 afecteaz ficatul, rinichii, tractul gastrointestinal,
sistmeul nervos, fiind asociat cu apariia hepatoamelor, carcinoamelor hepatocelulare, cirozei,
comei hepatice, a limfomului non-Hodgkin, insuficienei renale etc. 6, 11.
n acelai timp nu exist studii referitor la aciunea CCl4 asupra esutului osos, n general, i
a fazei minerale a esutului n particular. Deasemenea, literatura de specialitate nu ofer date
despre diferenele de pendente de sex a rspunsului esutului osos la aciunea toxic a CCl4.
Scopul lucrrii a fost de a studia modificrile compoziiei minerale a esutului osos al
obolanilor de laborator femele i masculi, la administrarea de durat a CCl4.
Materiale i metode
Experienele au fost efectuate pe 32 obolani albi fr pedigriu, aduli, cu masa corpului de
160-180 g. Au fost cercetate urmtoarele grupuri experimentale.
I
grup 8 femele intacte;
II
grup 8 masculi intaci;
III grup 8 femele, crora li s-a administrat 0,1 ml soluie CCl 4 50% la 100 g mas
corporal, bisptmnal, timp de 8 sptmni;
159

IV

grup 8 masculi, crora li s-a administrat 0,1 ml soluie CCl 4 50% la 100 g mas
corporal. bisptmnal, timp de 8 sptmni.
La 24 ore dup ultima administrare animalele au fost sacrificate sub narcoz uoar cu eter
sulfuric. Oasele femurale au fost extrase, eliberate de esuturile adiacente i nlturat mduva
osoas prin splri repetate cu soluie glaciar 0,9% de NaCl. n continuare oasele femurale au
fost ngheate n azot lichid i supuse triturrii pn la starea de pulbere. Pulberea (20 mg) a fost
hidrolizat n HClO4 i n hidrolizatul rezultat s-a determinat cu ajutorul seturilor standarde
cantitatea substanelor minerale:
7. calciului (Calcium Arsenazo, EliTECH),
8. fosfailor (EliTECH),
9. magneziului (Magnesium Calmagite, EliTECH),
10. clorului (Chloride, EliTECH),
11. potasiului (Potassium Fluid monoreagent, Centronic GmbH)
12. sodiului (Sodium, Centronic GmbH).
Cantitatea compuilor exprimat n mM a fost referit la g pulbere os.
Rezultatele obinute au fost evaluate statistic conform criteriului t-Student i coeficientului
de corelaie r, cu ajutorul programului STATISTICA 6,0 (StatSoft Inc, 2001).
Rezultate i discuii
Coninutul substanelor minerale cercetate n esutul osos al obolanilor de laborator la
animalele de diferite sexe se caracterizeaz prin diferene statistic veridice. Astfel, clorul i
sodiul sunt n concentraie mai mare la masculi dect la femele cu 25% (p < 0,005) i 91% (p <
0,001), respectiv, iar fosfaii prevaleaz la femele cu 14% (p < 0,01) (tab. 1). La femele se atest
corelaii pozitive puternice ntre cantitile calciului i a fosfailor (r = 0,86, p < 0,05), calciului i
a clorului (r = 0,96, p < 0,05), fosfailor i a clorului (r = 0,77, p < 0,05). La masculi s-a
nregistrat doar o corelaie puternic pozitiv ntre cantitile calciului i clorului n esutul osos
(r = 0,96, p < 0,05).
Diferenele constate posibil sunt determinate de deosebirile reglrii hormonale a
metabolismului esutului osos la animalele de diferite sexe. La femele prevaleaz estrogenii, ce
conserveaz masa osoas, prin meninerea echilibrului optim ntre resorbia i formarea osoas i
intervenia n formarea, proliferarea i reglarea activitii att a osteoblastelor, ct i a
osteoclastelor. La masculi androgenii preponderent reduc resorbia osoas, efectul fiind indirect,
prin aromatizarea testosteronului la estrogeni [9].
Tabelul 1. Coninutul substanelor minerale n esutul osos al obolanilor aduli sntoi
(mM la 1g pulbere os).
Calciul
Femele

Fosfaii

Magneziul

5,7730,17 3,3890,07 0,7480,05

Clorul

Potasiul

Sodiul

2,0960,06

0,0730,001

1,980,38

Masculi 5,770,17 2,9810,1* 0,6390,03 2,6260,12* 0,0680,002* 3,7880,12


Not: * p < 0,01 conform criteriului t-Student.
Administrarea CCl4 nu modific coninutul de calciu n esutul osos al obolanilor aduli
att la femele (100,5%), ct i la masculi (106%). Cantitatea sumar de fosfai nu se modific n
esutul osos al femelelor (96%) i crete la masculi cu 11% (p < 0,05) dup administrarea noxei,
pe cnd cea c clorului vice versa, nu este afectat la masculi (100,6%) i denot o tendin de
cretere nesemnificativ la femele (109%). Cantitatea
magneziului i potasiului este
semnificativ diminuat n esutul osos al femelelor dup administrarea de durat a tetraclorurii de
carbon 79% (p < 0,01) i 77% (p < 0,001), respectiv, pe cnd la masculi ea nu sufer schimbri
importante (107% i 102%). Modificrile cantitii sodiului sunt diametral opuse la obolanii de
sex diferit. Se nregistreaz o cretere semnificativ pn la 162% (p < 0,05) la femele i o
scdere statistic neconcludent pn la 81% la masculi.
160

Calciul

Fosfaii

Femele

5,8030,17

3,2530,1

100,5%

96%

Masculi

Tabelul 2. Coninutul substanelor minerale n esutul osos al obolanilor aduli dup


administrarea CCl4 (mM la 1g pulbere os).

6,1110,15 3,3170,09*
106%

111%

Magneziul

Clorul

Potasiul

Sodiul

0,5880,02** 2,2830,14 0,0560,003** 3,1970,42*


79%

109%

77%

162%

0,6840,04

2,6410,12

0,0690,002

3,0640,42

107%

100,6%

102%

81%

Not: * p < 0,05, ** - p < 0,01 conform criteriului t-Student.


Schimbrile cantitii substanelor minerale n esutul osos nregistrate la femele dup
administrarea ndelungat a CCl4 sunt mai multe i mai profunde. La ele se refer:
scderea semnificativ a cantitilor magneziului i potasiului, cu 21% (p < 0,01) i
cu 23% (p < 0,001) fa de valorile normale, respectiv;
creterea important a sodiului cu 62% (p < 0,05) peste valorile de referin;
tendina de cretere a clorului (109% fa de martor).
La masculi se nregistreaz un numr considerabil mai mic de modificri, semnificativ
statistic fiind doar creterea cantitii fosfailor cu 11% (p < 0,05).
Administrarea tetraclorurii de carbon afecteaz legturile de corelaie dintre cantitile
substanelor minerale la femele, care dispar, pe cnd la masculi se menine corelaia calciu-clor,
dar ea este mai slab (r = 0,86, p < 0,05).
Fenomenele stabilite sunt n concordan cu datele literaturii, ce relev deosebiri
dependente de sex ale compoziiei i metabolismului esutului osos n diverse afeciuni, n
special n osteoporoz [7, 9]. Rezultatele noastre completeaz informaia referitor la compoziia
fazei minerale a esutului osos n osteopatia toxic i permit de a diversifica abordrile
diagnostice i stabili strategii terapeutice n dependen de sex n asemenea stri patologice.
Concluzii
1. Sa atest deosebiri statistic veridice ale cantitilor fosfailor, clorului i sodiului n esutul
osos ntre femele i masculi la animalele intacte
2. La animalele de laborator intacte nu sunt deosebiri statistic veridice ntre cantitatea calciului,
magneziului i potasiului n esutul osos la femele i masculi.
3. Administrarea CCl4 induce scderea semnificativ a cantitii magneziului i potasiului i
creterea cantitii sodilui la femele n esutul osos.
4. La masculi administrarea CCl4 induce doar creterea semnificativ a cantitii fosfailor n
esutul osos.
Bibliografie
1. Bergman K. Application and results of whole-body radiography in distribution studies of
organic solvents. Crit Rev Toxicol, 1984; 12: 59-119;
2. De Zwart L.L., Venhorst J., Groot M., Commandeur J.N., Hermanns R.C., Meerman J.H.,
Fan Baar B.L., Vermeulen N.P. Simultaneous determination of eight lipid peroxidation
degradation products in urine of rats treated with carbon tetrachloride using gas
chromatography with electron-capture detection. J Chromatogr Biomed Appl, 1997; B694:
277-287;
3. Dianzani M.U. Lipid peroxidation and haloalkylation: two distinct mechanisms for carbon
tetrachloride-induced liver damage. Int Congr Ser Exerpta Med, 1984; 632: 39-50;
4. Daz Gmez M.I., Castro J.A. Covalent binding of carbon tetrachloride metabolites to liver
nuclear DNA, protein and lipids. Toxicol Appl Pharmacol, 1980; 56: 199-206;
5. International Programme on Chemical Safety, Environmental Health Criteria 208 - Carbon
tetrachoride. http://www.inchem.org/documents/ech/ech/ech208.htm;
161

6. Kluwe W.M. Renal function tests as indicators of kidney injury in subacute toxicity studies.
Toxicol Appl Pharmacol, 1981; 57: 414-424.
7. Manolagas S.C., Kousteni S., Jilka R.L. Sex steroids and bone. Recent Progress in Hormone
Research, 2002; 57:358-409.
8. Marchand C., McLean S., Plaa G.L. The effect of SKF 525A on the distribution of carbon
tetrachloride in rats. J Pharmacol Exp Ther, 1970; 174: 232-238;
9. Riggs B.L., Kholsa S., Melton L.J. 3rd. Sex steroids and the construction and conservation of
the adult skeleton. Endocrine Reviews, 2002; 23(3):279-302.
10. Watanabe A., Shiota T., Takei N., Fujiwara M., Nagashima H. Blood to brain transfer of
carbon tetrachloride and lipoperoxidation in rat brain. Res Commun Chem Pathol Pharmacol,
1986; 51: 137-140;
11. Zimmerman H.J. Syndromes of environmental hepatotoxicity. In: Zimmerman HJ ed.
Hepatotoxicity -- the adverse effect of drugs and other chemicals on the liver. New York,
Appleton-Century-Crofts, 1978, pp. 297-302.

IODTIRONIN SELENODEIODINAZELE I HOMEOSTAZIA AXULUI


HIPOTALAMO-HIPOFIZARO-TIROIDIAN
Leonid Lsi, Svetlana Protopop, Svetlana Bobcova, Silvia Stratulat,
Ala Ambros, Larisa Zota
Catedra Biochimie i Biochimie clinic USMF Nicolae Testemianu
Summmary
The iodothyronine selenodeiodinases and set-point
of the hypothalamic-pituitary-thyroid axis
The goal of this review is to place the existing knowledge regarding the types 1, 2, and 3
(D1, D2, and D3, respectively) iodothyronine deiodinases into a biochemical context. This article
reviews new data regarding the mechanism of selenoprotein synthesis, the molecular and cellular
biological properties of the individual deiodinases, including tissue distribution, subcellular
localization, enzymatic properties, and regulation of synthesis, inactivation, and degradation.
Also the molecular mechanisms are elucidated through which the deiodinases regulate the
thyrotropin secretion, the homeostasis of circulating and intracellular triiodthyronine.
Rezumat
Lucrarea reprezint o sintez a literaturii i are ca scop plasarea cunotinelor existente cu
privire la iodtironindeiodinazele de tipul 1, 2 i 3 (D1, D2 i D3, respectiv) ntr-un context
biochimic. n articol sunt expuse date recente referitor la sinteza selenoproteinelor, proprietile
moleculare i celulare ale deiodinazelor individuale, inclusiv distribuirea tisular, localizarea
subcelular, proprietile enzimatice, reglarea biosintezei, inactivrii i degradrii lor. De
asemenea, sunt elucidate mecanismele moleculare prin intermediul crora deiodinazele regleaz
secreia tirotropinei, homeostazia triiodtironinei circulante i intracelulare.
Actualitatea
Valorile serice ale TSH-lui (thyroid stimulating hormone) i ale hormonilor tiroidieni (HT)
acceptate ca norme de referin sunt destul de extinse. Deosebirile interindividuale ale funciei
tiroidiene la subiecii sntoi sunt cauzate de o combinaie de factori genetici i ambiani [9].
Astfel de variaii sunt probabil determinate n cea mai mare msur de un ir de factori ai
mediului, printre care nivelul captrii iodului pare s fie de o importan major [11,14]. La
momentul actual nu sunt stabilite concentraiile optimale ale TSH-lui i ale HT, necesare pentru
meninerea unei stri fizice i psihice normale, dar n ultimii ani se observ tendina de a ngusta
valorile de referin ale TSH-lui.

162

Se consider c fiecare persoan posed un nivel constant al TSH-lui i al HT, numit setpoint al axului hipotalamo-hipofizaro-tiroidian (HHT) cu fluctuaii minore comparativ cu
variaiile nregistrate la diferii indivizi. Andersen S. i coautorii [3] au determinat concentraia
TSH-lui la 16 brbai sntoi la intervale de timp de o lun pe parcursul unui an i au constatat
c limitele de variaie individual a tirotropinei sunt de dou ori mai nguste comparativ cu
fluctuaiile nregistrate n lotul total. Prin urmare, teoretic este posibil ca rezultatele unei testri a
strii funcionale a glandei tiroide la o persoan dat s fie anormale, cu toate c se gsesc n
limitele valorilor de referin.
Lund n consideraie cele menionate, este important de a nelege mecanismele
biochimice subtile ce stau la baza homeostaziei axului HHT. Un rol deosebit n reglarea
concentraiei plasmatice i tisulare a hormonilor tiroidieni l ndeplinesc iodtironindeiodinazele.
Scopul lucrrii este de a integra cunotinele referitoare la structura, localizarea,
proprietile deiodinazelor i aportul lor n homeostazia axului hipotalamo-hipofizaro-tiroidian.
Structura i funciile iodtironindeiodinazelor
Actualmente sunt cunoscute 3 deiodinaze (D1, D2, D3) cu structur, localizare i funcii
distincte (tabelul 1).
Tabelul 1
IODTIRONIN SELENODEIODINAZELE UMANE
Parametrul
Activitate enzimatic

Localizare subcelular

Membran plasmatic

Masa molecular, Da
Substratul preferenial
(poziie)
Centrul activ
Pretranslaional

29 000
rT3 (5'), T3(5)

D2
Inelul extern,
poziia 5'
Asigurare tisular cu
T3 pentru organe
specifice; surs de T3
plasmatic (50%)
SNC, hipofiz, esut
adipos brun, tiroid
placentar, muchi
scheletici, inim
Reticul
endoplasmatic
30 500
T4, rT3 (5')

Selenocistein

Selenocistein

Selenocistein

Mecanismul
Posttranslaional

Transcripional
(lent)

Transcripional
(rapid)

Transcripional
?

Mecanismul

Oxidarea centrului
activ

Accelerarea
conjugrii cu
ubicuitina

Rol fiziologic

Rspunsul la majorarea T4

Localizare tisular

D1
Inelul extern i intern,
poziiile 5' i 5
Surs de T3 plasmatic,
n special la persoanele
hipertiroide; degradarea
rT3 i T3
Ficat, rinichi, gland
tiroid, hipofiz(?),
(nu-i prezent n SNC)

D3
Inelul intern,
poziia 5
Inactivarea T3 i
T4
Placent, SNC,
ficat fetal,
hemangioame
?
31 500
T3, T4 (5)

Comun pentru toate este prezena selenocisteinei (Sec) n centrele active, ceea ce dovedete
rolul esenial al acestui aminoacid n reaciile de deiodinare a iodtironinelor [5]. Este surprinztor
faptul c ncorporarea Sec n structura tuturor selenoproteinelor, inclusiv i a deiodinazelor, este
determinat de prezena codonului UGA n mRNA. Recunoaterea acestui codon ca semnal de
ncorporare a selenociesteinei i nu ca codon de terminare a biosintezei proteinei este asigurat

163

de prezena la captul 3' al mRNA codificator al multor selenoenzime a unui element reglator
netranslabil - SECIS (selenocysteine insertion sequence) [6].
Selenodeiodinaza tipul 1
D1 catalizeaz reacia de deiodinare a tiroxinei (T4) cu formarea triiodtironinei (T3) i ntr-o
msur mai mic a revers-triiodtironinei (rT 3). Este unica enzim ce poate cataliza reacia de
deiodinare att a inelului extern (5'), ct i a celui intern (5) al iodtironinelor [8]. Este
responsabil de suplinirea unei cantiti apreciabile de T3 plasmatic la subiecii cu funcie
tiroidian normal, iar la cei cu hipertiroidie pentru majoritatea cantitii de T 3 plasmatic. La
om, D1 este abundent exprimat n ficat, rinichi, gland tiroid. Este notabil faptul c aceast
enzim este absent n SNC. D1 este localizat n membrana plasmatic a celulei, graie acestui
fapt triodtironina obinut sub aciunea enzimei uor difundeaz n snge [19]. Din aceste
considerente, n esuturile cu expresie nalt a D1 concentraia T 3 se afl n stare de echilibru cu
cea plasmatic [5].
Activitatea acestei enzime este reglat la nivel transcripional i posttranslaional. Studii
efectuate pe oareci, obolani i oameni au constatat c HT mresc cantitatea de D1 mRNA i
activitatea D1. S-a dovedit c promotorul genei Dio1 posed dou TRE (thyroid hormone
response element), iar TR este receptorul responsabil pentru activarea T3-indus a Dio1 [2]. La
pacienii cu hipertiroidie anume expresia nalt a acestei gene T3-dependente este cauza activitii
nalte a D1 i, implicit, a nivelului nalt de T 3 plasmatic [5]. Timpul de njumtire pentru D1
este de 12 ore. Inactivarea i degradarea ulterioar a enzimei este activat de rT 3 i acidul
iopanoic [5].
Figura 1. STRUCTURA I CONVERSIA IODTIRONINELOR SUB ACTIUNEA
IODTIRONINDEIODINAZELOR

164

Selenodeiodinaza tipul 2
D2 reprezint o selenodeiodinaz cu specificitate absolut fa de inelul extern (5') al
iodtironinelor. Ea catalizeaz reaciile de conversie T4 T3 i rT3 3,3'-T2. Spre deosebire de
D1, aceast enzim este responsabil de producerea tisular de T 3. n esuturile cu o expresie
nalt a D2, concentraia tisular de T3 este mai puin dependent de cea plasmatic. Este
prezent n SNC, hipofiz, esut adipos brun, muchi scheletici i este localizat n reticulul
endoplasmatic n apropierea nucleului. n aa mod, triiodtironina obinut din tiroxin prin
aciunea D2, practic nu difundeaz n snge, dar uor traverseaz nucleolema [5].
Hormonii tiroidieni micoreaz activitatea D2 la nivel pre- i posttranslaional. Studii pe
obolani au indicat c T3 scade nivelul mRNA codificator de D2, iar T4 micoreaz
preponderent activitatea acestei enzime. Cu toate c se poate de presupus existena TRE negative
n promotorul genei Dio2, prezena lor la momentul actual nu este confirmat. De asemenea, s-a
constatat c i rT3 reduce activitatea D2 dar nu afecteaz nivelul mRNA codificator de D2,
indicnd c acioneaz la nivel posttranslaional [7].
Activitatea unor ci metabolice reglatoare poate fi modificat prin proteoliza selectiv a
enzimelor-cheie. Acest proces este frecvent mediat de sistemul proteozomic, n care anumite
semnale metabolice stimuleaz conjugarea enzimelor-int cu ubicuitina (Ub) urmat de captare
selectiv i proteoliz n proteozomi. D2 reprezint enzima-cheie a homeostaziei concentraiei T 3
intracelular. D2 are un timp de njumtire foarte scurt (<1 or), accelerat de prezena
substraturilor enzimei T4, rT3 i chiar de concentraii nalte ale T3. Studii efectuate pe animale
au demonstrat c pentru D2 este caracteristic calea de degradare proteozomic i c conjugarea
cu ubicuitina este stimulat de interaciunea enzimei cu substratul ei [18].
Selenodeiodinaza tipul 3
D3 este cea de-a treia enzim implicat n deiodinarea reductiv a iodtironinelor. Ea
reprezint principala enzim cu rol de inactivare a HT, aa cum D1 posed capacitate redus de
nlturare a iodului din inelul intern al iodtironinelor. Catalizeaz reaciile de conversie T4rT3 i
T33,3'-T2, ambele produse ale reaciei reprezentnd forme biologic inactive ale iodtironinelor.
Aceast enzim protejeaz esuturile de efectele nocive determinate de acumularea excesiv a
hormonilor tiroidieni [10].
Activitatea enzimei este crucial pentru homeostazia HT pe parcursul embriogenezei,
deoarece expunerea prematur a embrionului la aciunea hormonilor tiroidieni ai mamei poate fi
detrimental i poate conduce la malformaii, retard mental i fizic i chiar deces. Expresia D3
este reglat ntr-o manier esut-specific, ceea ce posibil este esenial pentru reglarea coordonat
de ctre HT a dezvoltrii i diferenierii tisulare [4].
Cu toate c mecanismele moleculare de reglare a activitii D3 nu sunt complet studiate, sa constatat c enzima este activat de hormonii tiroidieni. Studii pe obolani au relatat c n SNC
activitatea D3 este crescut n hipertiroidie i micorat n hipotiroidie. n strile de tranziie de
la eutiroidie la hipertiroidie n toate regiunile creierului cu expresie nalt a D3, coninutul D3
mRNA se majora de 4 50 ori, n timp ce la modelarea hipotiroidiei severe mRNA practic nu se
depista. Aceste constatri pledeaz n favoarea mecanismului transcripional de reglare a
activitii D3 [20].
Rolul selenodeiodinazelor n reglarea secreiei TSH-lui
Studii efectuate pe obolani cu hipotiroidie au relatat c injectarea intravenoas de T 4
marcat cu iod radioactiv (125I-T4) reduce rapid secreia hipofizar de TSH i doar la 15 minute de
la injectarea 125I-T4, n hipofiz se depisteaz 125I-T3, cu toate c n prealabil s-a efectuat
inhibarea D1. Aceste studii au presupus prezena unei activiti 5'-deiodinazice n hipofiz. Mai
trziu, a fost demonstrat c aceeai activitate deiodinazic este caracteristic pentru SNC i
esutul adipos brun i este responsabil pentru aproximativ 50% de T 3 produs n aceste esuturi
[13]. n plus, aceast activitate 5-'deiodinazic are proprieti cinetice, specificitate de substrat i
reglare distincte de cele ale D1, chiar dac ultima ar fi prezent n hipofiz i cortexul cerebral.
Ulterior a fost stabilit c producerea hipofizar de T3 este efectuat de D2, care asigur valori
adecvate de T3 i T4 necesare pentru meninerea normal a TSH-lui circulant. n strile
165

ioddeficitare, cnd este micorat doar nivelul T4, activarea acestei enzime conduce la o producere
sporit de T3 i, implicit, la activarea secreiei TSH-lui.
Homeostazia triiodtironinei circulante
Glanda tiroid secret T4 i T3 ntr-o proporie determinat de raportul T4/T3 n
tireoglobulin (15/1 la om) i modificat de conversia minimal a T4 la T3 n glanda tiroid. In
aa mod, la persoanele cu aport suficient de iod, prohormonul tiroxina reprezint iodtironina
major secretat de glanda tiroid, raportul T4/T3 este aproximativ 11/1 [12]. Majoritatea T3 se
produce n esuturile extratiroidiene via deiodinarea tiroxinei n poziia 5' de ctre deiodinazele 1
i 2. Concentraia plasmatic a fraciilor libere ale T3 i T4 este constant, astfel toate esuturile
sunt expuse la aceleai cantitate de T3. Cu toate acestea, concentraia T3 libere n diferite esuturi
variaz n funcie de transportul transmembranar al hormonului i de activitatea deiodinazelor
tisulare. Aceste enzime mresc (D2) sau micoreaz (D3) nivelul tisular de T3 i, corespunztor,
influeneaz numrul de complexe receptor tiroidian(RT)-T3 independent de valorile plasmatice
ale HT. Ca urmare, impactul HT asupra esuturilor-int difer de la un esut la altul. Ca exemplu,
n ficat i n rinichi, n condiii obinuite, saturarea RT cu T 3 este aproximativ de 50%, pe cnd n
SNC este de aproape 95%. n plus, n esutul adipos brun, activitatea deiodinazei 2 i saturarea
RT cu hormon sunt dinamice i sunt modificate n funcie de necesitile metabolice ale esutului.
La temperatur obinuit a corpului saturarea receptorilor tiroidieni este de aproximativ 70%, iar
la temperatura de 4C crete pn la 100%. [12]. Se poate de presupus c modificrile
concentraiei tisulare de T3 sunt dictate de o program coordonat ce ajustaz activitatea D2 i
D3 necesitilor metabolice ale esuturilor corespunztoare.
De asemenea, deiodinazele moduleaz statusul tiroidian al esuturilor individuale ca
rspuns la deficiena de iod, hipotiroidie sau hipertiroidie. Celulele ce au pierdut capacitatea de a
ajusta rata de activare i inactivare a T4 i T3 sunt cele mai afectate, iar statusul lor tiroidian va fi
determinat de concentraia plasmatic a T3. Pe de alt parte, esuturile n care are loc expresia D2
i/sau D3, prin modificarea activitii acestor enzime, vor tempera fluctuaiile plasmatice ale HT,
constituind un potent mecanism al homeostaziei tiroidiene.
Homeostazia intracelular a triiodtironinei
n stare de echilibru, se poate estima concentraia T3 nuclear cunoscnd-o pe cea plasmatic
i raportul T3 nuclear/ T3 plasmatic. Determinarea capacitii maximale de legare a HT de ctre
TR permite calcularea saturrii lor, care n norm este de 40-50% pentru majoritatea esuturilor
[15]. n aa mod, modificrile concentraiei plasmatice ale T3 n strile de hiper- i hipotiroidie
sunt reflectate de modificri ale fixrii HT la TR n acele esuturi, ceea ce determin intensitatea
efectelor biologice ale HT. Oricum, n anumite esuturi, mai ales n hipofiz, creier i esut
adipos brun, exist o surs suplimentar de T3, determinat de conversia tisular a T4 la T3 [17].
Aceste esuturi conin D2 i triiodtironina generat prin reacia de deiodinare catalizat de D2
completeaz T3 primit din plasm. Ca urmare, saturarea TR cu hormon este mult mai nalt (7090%), iar 50-80% revine T3 provenit din T4. Unele esuturi (ca exemplu, ficatul i rinichii) n care
unica surs de T3 este cea plasmatic exprim doar D1. Dup cum a fost menionat anterior, D2
este localizat n reticulul endoplasmatic perinuclear, compartiment celular cu un acces
preferenial pentru nucleu. D1 este localizat n membrana plasmatic. Secreia rapid de T 3 din
esuturile ce conin D1 i reinerea T3 n esuturile ce conin D2 explic raportul T 3 nuclear/T3
plasmatic de 3-4 ori mai nalt caracteristic creierului comparativ cu ficatul, rinichii sau inima
[16]. Consecinele prezenei D2 n esuturi sunt c impactul secreiei T 4 asupra coninutului
tisular de T3 poate fi diminuat la nivel prereceptor de modificri compensatorii ale activitii
enzimei.
Rolul D2 pentru homeostazia T3 intracelular este stabilit pentru hipofiz, creier i esutul
adipos brun. Oricum, doar un numr restrns de efecte biologice ale conversiei T4 n T3 sunt
caracterizate complet (ca exemplu, reglarea secreiei TSH-lui, a genelor implicate n
termogeneza adaptiv n esutul adipos brun). In aceste cazuri, efectele biologice specifice
coreleaz mult mai strns cu nivelul plasmatic al T4 sau cu rata de conversie a T4 la T3,
comparativ cu nivelul plasmatic al T3. Oricum, distribuia larg a D2 n esuturile umane
166

sugereaz c ar exista i alte efecte biologice T 3-dependente mediate de T3 obinut n esuturi prin
aciunea D2. Ca exemplu, al-Adsani H. i coautorii [1] au studiat efectul terapiei cu levotiroxin
la un lot de pacieni cu hipotiroidie i au constatat modificri ale valorilor plasmatice ale TSH-lui
i ale tiroxinei, n timp ce nivelul plasmatic al triiodtironinei nu s-a schimbat. Este remarcabil
faptul c consumul energetic bazal a corelat pozitiv cu T4 i negativ cu TSH, dar n-a fost asociat
cu T3. innd seama de faptul c aproximativ 45% din consumul energetic bazal revine
muchiului scheletic care exprim D2, se poate de constatat c anume T3 provenit din T4 prin
aciunea deiodinazei 2 i nu T3 plasmatic este responsabil de cheltuielile energetice [1].
Concluzii
Selenodeiodinazele ndeplinesc roluri eseniale n reglarea secreiei tirotropinei i n
meninerea constant a concentraiei plasmatice i tisulare a hormonilor tiroidieni n condiii
normale i n disfunciile tiroidiene.
Bibliografie selectiv
1. al-Adsani H, Hoffer LJ, Silva JE 1997 Resting energy expenditure is sensitive to small
dose changes in patients on chronic thyroid hormone replacement. J Clin Endocrinol Metab
82:11181125
2. Amma LL, Campos-Barros A, Wang Z, Vennstrom B, Forrest D 2001 Distinct tissuespecific roles for thyroid hormone receptors and 1 in regulation of type 1 deiodinase
expression. Mol Endocrinol 15:467475
3. Andersen S, Pedersen KM, Bruun NH, Laurberg P 2002 Narrow individual variations
in serum T(4) and T(3) in normal subjects: a clue to the understanding of subclinical thyroid
disease. J Clin Endocrinol Metab 87:10681072
4. Berry DL, Rose CS, Remo BF, Brown DD 1998 The expression pattern of thyroid
hormone response genes in remodeling tadpole tissues defines distinct growth and resorption
gene expression programs. Dev Biol 203:2435
5. Bianco AC, Salvatore D, Gereben B, Berry MJ, Larsen PR. Biochemistry, cellular and
molecular biology, and physiological roles of the iodothyronine selenodeiodinases. Endocr Rev
2002;23:3889
6. Buettner C, Harney JW, Larsen PR 1998 The 3'-untranslated region of human type 2
iodothyronine deiodinase mRNA contains a functional selenocysteine insertion sequence
element. J Biol Chem 273:3337433378
7. Burmeister LA, Pachucki J, St. Germain DL 1997 Thyroid hormones inhibit type 2
iodothyronine deiodinase in the rat cerebral cortex by both pre- and posttranslational
mechanisms. Endocrinology 138:52315237
8. Fekkes D, Hennemann G, Visser TJ 1982 Evidence for a single enzyme in rat liver
catalyzing the deiodination of the tyrosyl and the phenolic ring of iodothyronines. Biochem J
201:673676
9. Hansen PS, Brix TH, Sorensen TI, Kyvik KO, Hegedus L 2004 Major genetic
influence on the regulation of the pituitary-thyroid axis: a study of healthy Danish twins. J Clin
Endocrinol Metab 89:11811187
10. Huang SA, Tu HM, Harney JW, Venihaki M, Butte AJ, Kozakewich HP, Fishman
SJ, Larsen PR 2000 Severe hypothyroidism caused by type 3 iodothyronine deiodinase in
infantile hemangiomas. N Engl J Med 343:185189
11. Knudsen N, Bulow I, Jrgensen T, Laurberg P, Ovesen L, Perrild H, Rasmussen L
2005 Small differences in thyroid function may be important for body mass indecs and
occurrence of obesity in the population J Clin Endocrinol Metab vol.90,No.7:4019-4024
12. Larsen PR 1981 Regulation of thyrotropin secretion by 3,5,3'- triiodothyronine and
thyroxine. Prog Clin Biol Res 74:8193
13. Larsen PR, Dick TE, Markovitz BP, Kaplan MM, Gard TG 1979 Inhibition of
intrapituitary thyroxine to 3.5.3'-triiodothyronine conversion prevents the acute suppression of
thyrotropin release by thyroxine in hypothyroid rats. J Clin Invest 64:117128

167

14. Laurberg P, Bulow Pederson I, Knudsen N, Ovesen L, Andersen S 2001


Environmental iodine intake affects the type of nonmalignant thyroid disease. Thyroid 11:457
469
15. Oppenheimer JH 1979 Thyroid hormone action at the cellular level. Science 203:971
979
16. Oppenheimer JH, Schwartz HL 1985 Stereospecific transport to triiodothyronine from
plasma to cytosol and from cytosol to nucleus in rat liver, kidney, brain and heart. J Clin Invest
75:147154
17. Silva JE, Leonard JL, Crantz FR, Larsen PR 1982 Evidence for two tissue specific
pathways for in vivo thyroxine 5'deiodination in the rat. J Clin Invest 69:11761184
18. Steinsapir J, Bianco AC, Buettner C, Harney J, Larsen PR 2000 Substrate-induced
down-regulation of human type 2 deiodinase (hD2) is mediated through proteasomal degradation
and requires interaction with the enzymes active center. Endocrinology 141:11271135
19. Toyoda N, Berry MJ, Harney JW, Larsen PR 1995 Topological analysis of the integral
membrane protein, type 1 iodothyronine deiodinase (D1). J Biol Chem 270:1231012318
20. Tu HM, Legradi G, Bartha T, Salvatore D, Lechan RM, Larsen PR 1999 Regional
expression of the type 3 iodothyronine deiodinase messenger ribonucleic acid in the rat central
nervous system and its regulation by thyroid hormone. Endocrinology 140:784790

STATUTUL TIROIDIAN I ACTIVITATEA CARDIAC


(ASPECTE BIOCHIMICE)
Mihai Tanic, Leonid Lsi, Svetlana Protopop
Catedra Biochimie i Biochimie clinic USMF Nicolae Testemianu
Summmary
Thyroid status and cardiac activity (biochemical aspects)
Thyroid hormones have relevant effects on the cardiovascular system. Thyroid hormoneinduced changes in cardiac function in patients with hypo- and hyperthyroidism can result from
direct or indirect effects. Direct effects result from triiodothyronine (T3) action in the heart itself
and are mediated by nuclear or extranuclear mechanisms. Nuclear T3 effects are mediated by the
binding of T3 to specific nuclear receptor proteins, which results in increased transcription of T3responsive cardiac genes that encode both structural and functional proteins. Extranuclear effects
influence primarily the transport of calcium, amino acids and sugars across the cell membranes.
Also T3 influences the sensitivity of the sympathetic system and induces hemodynamic
alterations in the periphery that results in increased cardiac filling and modification of cardiac
contraction.
Rezumat
Hormonii tiroidieni posed efecte relevante asupra sistemului cardiovascular. Modificrile
funcionale ale miocardului prezente la pacienii cu hipo- i hipertiroidie apar graie efectelor
directe sau indirecte ale hormonilor tiroidieni. Efectele directe sunt consecina aciunii
nemijlocite a triiodtironinei (T3) asupra cordului i sunt mediate de mecanisme nucleare i
extranucleare. Efectele nucleare sunt realizate prin fixarea T3 la receptori nucleari specifici ce
conduce la sporirea transcrierii genelor cardiace T3-dependente codificatoare de proteine
structurale i funcionale. Efectele extranucleare influeneaz prioritar transportul calciului,
aminoacizilor i al glucozei prin membranele celulare. De asemenea, T3 influeneaz
sensibilitatea sistemului nervos simpatic i induce alterri n hemodinamica periferic, urmate de
creterea sensibilitii cardiace i modificarea contractilitii miocardului.

168

Introducere
Hormonii tiroidieni (HT) joac un rol deosebit n diferenierea, creterea, metabolismul i
fiziologia tuturor esuturilor. Interconexiunea tirocardiac a fost presupus cu aproximativ 200 de
ani n urm de ctre fiziologul britanic C. Parry. Savantul a relatat 8 cazuri n care pacientele cu
hipertiroidie prezentau tahicardie, iar patru din ele aveau hipertrofia cardiac. Autorul descrie un
caz de fibrilare atrial la pacientul cu hipertiroidie. R. Graves (1835) a prezentat 4 cazuri de
tirotoxicoz la femei, asociat cu palpitaii cardiace violente i prelungite. De asemenea, i
renumitul savant C.A. Basedow (1840) n lucrrile sale sugera legtura dintre cord i statutul
tiroidian.
Dei efectul fiziologic s-a stabilit relativ demult, biochimia modificrilor cardiace n cadrul
disfunciilor tiroidiene a nceput s fie studiat mai detaliat doar n ultimele dou decenii. Danzi
S. i coautorii [7] menioneaz c HT sunt reglatori importani ai funciilor inimii i ai
hemodinamicii. Sabatino L. [30] susine c cordul reprezint un organ int pentru HT suferind
schimbri eseniale la nivel anatomic, fiziologic i biochimic n cazul hipo- sau hipertiroidiei.
Mecanismul de aciune
Forma biologic activ a HT este triiodtironina (T3). Conversia tetraiodtironinei (T4) n T3 se
realizeaz la nivelul membranei celulare a cardiomiocitelor, reacia fiind mediat de
iodtironindeiodinaza de tipul 2 [30]. Studiile au demonstrat c la roztoare, spre deosebire de
om, nu are loc expresia tipului 2 al iodtironindeiodinazei n miocard i conversia T4 n T3 [31].
Ipotezele privind mecanismul de trecere a hormonilor tiroidieni prin membrana celular
sunt multiple i neclarificate definitiv pn-n prezent. Forma bioactiv a HT intr n citozol
datorit unor proteine specifice de transport, localizate n membrana celular [11]. Ritchie J.W. i
coautorii [29] menioneaz c n celulele mamiferelor transportul HT i al aminoacizilor prin
membrana citoplasmatic se realizeaz prin intermediul Sistemului L de transfer. n experimente
realizate pe Xenopus oocytes cu supraexpresia Sistemului L s-a atestat o ptrundere masiv a HT
din mediul extracelular n citozolul i nucleul cardiomiocitelor. Autorii menioneaz c
capacitatea receptorilor hormonilor tiroidieni (TR) de a activa transcripia cretea spre deosebire
de cercetrile n care se bloca expresia sistemului menionat anterior. Rezultatele experimentului
indic c Sistemul L joac un rol extrem de important n reglarea expresiei genelor T3-specifice.
Din citozol molecula de hormon poate fi transportat la membrana nuclear, pe care o trece
i interacioneaz cu receptorii nucleari T3-specifici (mecanism nuclear) sau poate interaciona
cu receptorii extranucleari (mecanism citozolic).
Receptorii nucleari, genele T3-specifice, mecanismul nuclear de aciune. inta
principal pentru T3 n manifestarea mecanismului su nuclear de aciune i influien asupra
activitii cordului sunt genele tiroid-specifice.
S-a demonstrat c omologul celular al protooncogenei c-erb A, leag T3 cu o afinitate foarte
mare, ceea ce a dus la ipoteza c TR nucleari aparin familiei c-erb A [38].
Dou gene separate, TR i TR, localizate respectiv pe cromozomii 17 i 3 [17] servesc
drept matri n sinteza moleculelor de mRNA, care dup splicing i translare dau natere
izoformelor receptorilor T3 - specifici [39].
Din mRNA transcris de pe gena TR provin izoreceptorii TR1 i TR2 [39], ultimul nu
posed situs de legare pentru T3 i reprezint un antagonist al hormonului [28], iar dup alte
surse bibliografice [18,40] e capabil s interacioneze cu T3, ns complexul HR disociaz.
Izoreceptorii transcrii de pe gena TR sunt TR1 i TR2 [39]. Localizarea i funciile
TR2 au declanat o serie de preri n rndurile savanilor care studiaz problema respectiv.
Astfel, Polikar R. [28] menioneaz c izoreceptorul este prezent doar n glanda pituitar i
hipotalamus, iar Williams G.R. [39] n lucrarea sa afirm c la obolani TR2, de rnd cu
organele menionate, a fost depistat i n cord. Autorul susine c receptorul e capabil s lege T 3,
dei Zhang J. [42] n lucrarea sa infirm acest lucru. Polikar R. [28] susine ideea c deocamdat
receptorul TR2 nu a fost depistat la om. Cercetrile recente n domeniu au demonstrat existena
i a altor izoforme ale receptorilor pentru T3 - 1 i 2 - pentru gena TR i TR3 (transcris

169

din regiunea promotorului) pentru TR [39], structura i funcia crora deocamdat nu au fost
clarificate.
Ponderea receptorilor difer de la autor la autor relevndu-se tendina de specificitate de
specie i esut. Astfel la obolani receptorii sunt rspndii n toate esuturile, 1 creier, ficat,
rinichi i cord [28]. La om tabloul localizrii TR este similar cu excepiile menionate anterior
referitor la TR2. Izoforma predominant ntr-un organ sau altul, determin particularitile
metabolice specifice ale lui, interacionnd cu corepresori sau coactivatori ai transcrierii i
manifestnd o aciune esut-specific [10].
Cercetrile ntreprinse de Williams G.R.[39] pe obolani au demonstrat c n 40% fixarea
T3 (n inim) revine pe contul isoformei TR1, aceeai pondere revine i pentru TR1, restul
20% sunt legai de TR2. Gloss B. [14] relateaz c n cordul oarecilor, 70% din cantitatea
total de hormon este legat de TR1, iar restul de TR1. Autorul menioneaz c au fost
identificate cantiti nesemnificative de TR2 n inima oarecelor i deci aciunea TR1 este
predominat.
Mecanismul nuclear de aciune a HT presupune formarea complexului hormon receptor
(HR). Odat intrat n nucleu, T3 se leag de receptorii si adiionnd i cofactorii specifici ai
transcripiei: activatori (receptorul 1) sau supresori (2). Formarea complexului HRC (hormonreceptor-cofactor) creeaz toate condiiile necesare legrii compusului de elementul de rspuns
la hormonul tiroidian (TRE), secven de 20-30 de nucleotide din molecula de DNA, iar n cazul
legrii hormonului la TR2 interaciunea cu TRE nu are loc [4]. Legarea HR de TRE se
realizeaz sub form de monomeri, homodimeri sau heterodimeri (compui formai din HR i un
receptor din familia hormonilor steroizi) [4,17].
Fixarea HRC la TRE n prezena coactivatorilor necesari, iniiaz transcrierea genelor
cardiace T3-specifice. n opinia lui Kahaly G.J. [18] odat cu formarea HRC-TRE, complexul
proteic corepresor, care la acel moment se afl fixat n regiunea TRE, disociaz. Astfel se
formeaz un complex transcripional activ ce favorizeaz sinteza mRNA, datorit mririi ratei de
acetilare a histonelor i despiralizrii cromatinei. [4,18,22]. Autorii menioneaz c n cazul cnd
formarea complexului HRC nu are loc, receptorul neactivat se leag la TRE din molecula de
DNA (de asemenea, sub forma homo-, heterodimerilor) i inhib transcripia.
Iniial se considera c HT mediaz efectul lor asupra transcrierii sub forma homodimerilor,
similar receptorilor pentru hormonii steroizi, ns o grup de savani a observat c TR se
heterodimerizeaz cu proteinele specifice [2]. Aceste proteine au fost denumite TR proteine
auxiliare (TRAP), ele faciliteaz legarea TR la TRE. Datorit depistrii acestor proteine n
extractele nucleare ale diferitor celule i esuturi, la diverse specii reiese concluzia c
heterodimerii TR/TRAP pot fi formai n toate celulele ce conin TR. Legarea mai activ a
acestui complex la TRE dect sub forma TR homodimerilor a favorizat presupunerea c acetea
influeneaz procesul de transcriere a genelor T3-specifice.
Unul dintre partenerii posibili, prefereniali ai heterodimerizrii pentru RT este receptorul
X-retinoic (RXR) membru al receptorilor nucleari din superfamilia cu omologie nalt cu
RAR (retinoic acid receptor) [4,18,22]. Studiile au demonstrat c RXR joac un rol important n
transcripia mediat de T3, favoriznd fixarea TR la TRE.
Formarea heterodimerilor TR/RXR mrete numrul posibil al genelor ce ar fi supuse
reglrii T3-specifice. Se cunosc 3 membri ai subfamiliei RXR ceea ce face posibil presupunerea
c diverse izoforme RXR pot forma diveri heterodimeri TR/RXR, cu specificitate diferit
pentru TRE i/sau abilitate distinct de a transactiva genele int. S-a presupus posibilitatea
ligandului acid 9-cis-retinoic de a adiiona i de a activa partenerii heterodimeri ai complexului
TR. Cooney A.J. [6] i Bogazzi F. [3] au menionat c TR se pot heterodimeriza cu ali
membri ai familiei de receptori RAR: PPAR (peroxisome proliferator activated receptor), VDR
(vitamin D receptor), dar importana funcional a acestor heterodimeri nc nu a fost clarificat.
S-a presupus posibilitatea implicrii lor n reglarea T 3-specific la nivelul unor gene sau esuturi
particulare, [22,33] mrind n acelai moment diversitatea complexelor TR i potenialul
receptorilor de a se fixa la diferite gene int.
170

Recent s-a observat c creterea ratei de fosforilare n celule mrete activarea genelor int
mediat de T3 [24]. Mecanismul nu este cunoscut, dar poate implica fosforilarea TR i RXR sau
a coactivatorilor TR. Studiile au artat c TR-1 posed dou situsuri serinice de fosforilare n
domeniul aminoterminal A/B [15]. Aceste situsuri nu sunt similare i prezente la toate speciile.
TR -1 la om poate fi fosforilat in vivo i in vitro [24], dei situsul de fosforilare nu a fost
descoperit. Sugawara A. [34] a examinat legarea TR-1 fosforilat de TRE i a depistat c
fosforilarea selectiv mrete legarea de TRE ca homodimeri dar nu ca TR/RXR heterodimeri.
Fosforilarea de ctre preteinkinaza A poate micora legarea v-erbA i a TR-1 monomer la TRE
[37] ceea ce demonstreaz c fosforilarea poate fi un alt mecanism, distinct de fixarea T3 la
receptor, ce moduleaz legarea complexelor TR la TRE. n plus, T3 poate singur s moduleze rata
de fosforilare a receptorilor tiroidieni. Davis P.J. [8] a artat c TR-1 se asociaz cu
proteinkinaza MAP (mitogen-activated protein), ultima stimulnd fosforilarea TR. Amplificarea
cilor n care e prezent proteinkinaza A de asemenea poteniaz transcripia mediat de T3,
sugestionnd c multiple proteinkinaze pot modula activitatea transcripional a TR.
Gotnar A. i coautorii [13] menioneaz c T3 regleaz expresia genelor responsabile de
sinteza att a proteinelor structurale ct i a celor reglatoare. Inhibiia sau stimularea transcripiei
acestora este un mecanism eficient (dei periculos n patologie) de inducere a modificrilor n
anatomia, fiziologia i biochimia cordului. n majoritatea sa proteinele structurale T 3-specifice
din cord sunt att cele ce alctuiesc canalele ionice (ex. Ca 2+-ATP-aza i cofactorul sau inhibitor
fosfolambanul) [10] ct i elementele din aparatul contractil al cordului: miozina (catena grea),
troponina I, iar cele reglatoare mediaz activitatea pompelor ionice [27]. Proteinele sintetizate au
menirea de a regla functionarea canalelor ionice, deci i activitatea cordului.
Efectul principal al HT n reglarea funciilor cardiace se manifest prin intermediul genelor
ce codific izoformele catenelor grele ale moleculei de miozin (MHC) [9]. Predominarea uneia
sau altei izoforme de miozin n structura muchiului cardiac este crucial determinnd
proprietile fiziologice ale cordului n dependen de statutul tiroidian. Izoforma V1 a miozinei
(predominant n cordul normal), const din dou catene grele MHC, V 3 din dou catene
MHC, iar V2 este un heterodimer compus dintr-o catena MHC i una MHC de miozin.
Activitatea ATP-azic a miozinei V1 este mult mai mare dect cea a miozinei V3.
Administrarea T3 favorizeaz expresia genei MHC i inhib transcripia pentru izoforma [26],
iar hipoconcentraia hormonului creeaz condiii optime pentru predominarea izoformei MHC
(cu activitate ATP-azic sczut).
Studiile au demonstrat c n cordul hipotiroid predomin MHC [26]. n asemenea
disfuncii tiroidiene scade velocitatea contraciilor muchilor papilari, comparativ cu cordul
hipertiroid, la care este prezent n exclusivitate miozina V1, care datorit activitii ATP-azice
crescute, determin accelerarea contraciilor cardiace.
La oameni forma MHC alctuiete mai mult de 95% din miozina cordului i nu sufer
schimbri eseniale n dependen de statutul tiroidian, dei s-au descris cazuri n care pacienii,
dup o terapie de 9 luni cu hormoni tiroidieni prezentau dereglri n activitatea miocardului
ventriculului stng, care se manifestau prin creterea volumului sistolic cardiac cu 14 44%, iar
biopsiile realizate pre- i postratament hormonal au demonstrat c dup administrarea
ndelungat a HT cantitatea de MHC se reduce, dei nesemnificativ [2].
Pe lng genele pentru MHC, T3 influieneaz expresia genelor ce codific alt component
important al complexului contractil muscular troponina I [10]. Autorii menioneaz c la
obolani hipertiroizi crete expresia genelor pentru troponina I.
Studiile au artat c durata sistolei i a diastolei cardiace se deregleaz n diverse patologii
ale glandei tiroide. La persoanele cu hipertiroidie durata diastolic se micoreaz, iar la cele cu
hipotiroidie crete. Asemenea manifestri se datoresc vitezei de evacuare a ionilor de calciu din
citozol, care este determinativ pentru relaxarea diastolic [19]. Un aport semnificativ n
exportul citozolic al ionilor respectivi l joac pompele de calciu din membrana reticulului
sarcoplasmatic, n afar de acesta un rol secundar n evacuarea lor l au i pompele de calciu din
membrana citoplasmatic.
171

Gena care codific formarea pompelor de calciu din reticulul sarcoplasmatic este tiroidspecific, situsul de legare al HRC n aceste gene a fost depistat n sectoarele lor reglatoare.
Astfel, T3 crete expresia genei pentru Ca2+- ATPaza sarcoplasmatic (SERCa2+). Calsechestrina
acioneaz n concordan cu fosfolambanul i fosforilarea lui. Fofolambanul inhib activitatea
pompelor de calciu, iar concentraia lui e determinat de starea tiroidei, deci genele pentru
fosfolamban sunt de asemenea T3-specifice [5,19]. Cercetrile ulterioare au artat c T3
supreseaz expresia genelor pentru fosfolamban [7] dnd posibilitatea expresiei calsechestrinei.
HT mai influieneaz i transcrierea genelor ce codific pompele de rianodin, care
particip la exportul ionilor de calciu din reticulul sarcoplasmatic n citozol n timpul sistolei,
cauza prelungirei fazei sistolice n cordul hipertiroid.
De asemenea, sunt influienate de hormonii tiroidieni i pompele citolemice Na +/K+ATP-aza, Na+/Ca2+, pompele de K+-voltaj dependente (Kv 1.5, Kv 4.2, Kv 4.3), implicate n
coordonarea rspunsului electrochimic i mecanic al miocardului [5,27]. n majoritatea sa efectul
T3 asupra canalelor citolemice este rezultatul aciunii extranucleare a hormonului [8].
S-a constatat c HT mresc cu aproximativ 30% rata de sintez a mRNA, i deci sinteza
proteinelor n cardiomiocite. Ca urmare, n caz de hipertiroidie dimensiunile celulare cresc,
determinnd apariia unei hipertrofii cardiace moderate. n cordurile hipertiroide efectul direct al
T3 se manifest prin sinteza masiv de SERCa2+ i MHC n miocite [40].
De asemenea, s-a demonstrat c T3 majoreaz rata de transcripie a genelor ce codific
factorul natriuretic atrial [21,23].
Efectul extranulear al T3. Lund n consideraie capacitatea cordului de a rspunde, de
rnd cu alte esuturi (adipos brun, galand pituitar), foarte rapid i prin multiple reacii
metabolice la aciunea hormonilor tiroidieni, ct i lipsa supresiei totale la inhibiia transcripiei
i a translaiei, se poate afirma, cu certitudine, c hormonii tiroidieni pot media activitatea
cardiac i prin mecanism nongenomic [1,8].
Efectul extranuclear deruleaz rapid, independent de starea receptorilor nucleari i viteza
sintezei proteice. Mecanismul se bazeaz pe fixarea T3 cu receptorii citoplasmatici i/sau
citolemici. Davis P.J. [8] i Fazio S. [12] menioneaz c n cazul mecanismului nuclear de
aciune a hormonului efectul devine vizibil doar dup 0,5 - 2 ore de la administrarea acestuia, iar
pentru cel extranuclear, spre exemplu inducerea schimbrilor n transportul ionic, e suficient doar
de cteva minute (4 minute) pentru a inactiva pompele de sodiu.
Prin mecanismul extranuclear HT moduleaz activitatea canalelor ionice, fosforilarea
oxidativ, transcrierea genelor mitocondriale, generarea mesagerilor secunzi intracelulari
AMPc [1]. Toate cele menionate sunt rezultatul interaciunii HT cu receptorii extranucleari care
se localizeaz n citoplasm (izoformele p28 i p46) i organitele intracelulare (mitocondriali
mtRXR, mtPPAR), iar iniierea cascadei de proteinkinaze confirm prezena izoreceptorilor
pentru T3 n membrana celular.
Dei activitatea canalelor ionice n cardiomiocit este reglat prin intermediul mecanismului
nuclear de aciune a HT, funcionarea acestora e reglat i extranuclear. Astfel triiodtironina
controleaz activitatea canalelor ionice Na+-Ca2+, tipului L i T al canalelor de Ca2+ prin
fosforilarea fosfolambanului (ceea ce atenuiaz efectul inhibitor al lui asupra Ca2+-ATP-azei)
[27], canalului pentru rianodin, influiennd asupra transportului de Ca 2+ prin membrana
citoplasmatic i n reticulul sarcoplasmatic. n susinerea ideii vine i Davis P.J. [8], care
menioneaz c T3 acioneaz stimulant asupra contractilitii cardiomiocitelor izolate, prin
mecanisme nongenomice de transport al calciului i prin procese independente de AMPc, GMPc
i NO.
Activitatea canalelor menionate determin excitabilitatea celulei i durata potenialului de
aciune [35]. innd cont de constanta concentraiei HT n snge se concluzioneaz despre
reglarea continu a activitii cardiomiocitelor.
Segal J. [32] menioneaz posibilitatea implicarii T3 n transportul glucidelor i a
aminoacizilor prin membrana cardiomiocitelor.

172

Reglarea T3-specific a activitii cordului se realizeaz prin aceeai cascad de


protinkinaze, care se activeaz i n cazul reglrii adrenergice [20]. Se cunoate c la pacienii cu
hiper- i hipotiroidie manifestrile statutului tiroidian simuleaz dereglrile n reglarea
adrenergic a activitii cordului, dei investigaiile n domeniul sensibilitii inimii fa de acest
tip de reglaj arat c aceasta nu sufer schimbri substaniale n disfuncia tiroidian.
Analogii HT. Prezena multiplelor izoforme ale receptorilor tiroidieni i afinitatea lor
organospecific, induce ideea prezenei analogilor HT cu aciune general sau local. Aceti
analogi pot stimula sau inhiba activitatea cardiac. Concomitent, cu efectele sale
cardiomodulatoare, analogii manifest efecte extracardiace, spre exemplu regleaz
colesterolemia.
Young W.F. i coautorii [41] au depistat substane care prezentau efect cardiostimulant i
colesterolodiminuant (autorii nu prezint denumirea analogului). Alt analog este acidul
triiodotiroacetic, acesta are aciune mai pronunat n muchii scheletici i ficat dect n cord.
Unul dintre primii analogi ai HT descrii este acidul 3,5-diiodtiropropionic [25], acest
compus mbuntete funciile cardiace n cazul cardiomiopatiilor fr a mri frecvena
contraciilor cardiace.
Un analog bine studiat astzi este GC-1, n care grupele metil substituie atomii de iod ai
inelului intern, iar grupele izopropil substituie atomul de iod din inelul extern. Afinitatea
analogului dat pentru -izoreceptori este de 10 ori mai mic dect pentru 1-receptori. Aciunea
lui hepatic i cardiac este comparabil cu cea a T3 n cazul hipertiroidiei i al
hipercolesterolemiei dietice [36]. La oareci hipertiroizi administrarea T3 timp de 3 sptmni a
demonstrat c creterea numrului contraciilor cardiace i volumului sistolic a fost mai evident
dect la administrarea GC-1 (n aceleai concentraii). De asemenea, T3 avea un efect mai
pronunat asupra sintezei mRNA pentru MHC, MHC i SERCa 2+ n cardiomiocite. n
experienele expuse efectul T3 a fost de 9 ori mai pronunat comparativ cu cel al GC-1.
Dei aciunea GC-1 asupra activitii cardiace era mai slab, analogul micora
colesterolemia de 10 ori mai efecient ca T3. Autorii au demonstrat c pentru a mri frecvena
contraciilor cardiace cu 15% a fost necesar folosirea GC-1 n concentraii de 120 de ori mai
mari comparativ cu cele ale T3. Deci, capacitatea GC-1 de a activa receptorii pentru T 3 n
cardiomiocite este mult mai redus comparativ cu hormonii tiroidieni.
Recent, s-a depistat alt analog pentru T3 KB-141, acesta se leag cu o afinitate de 14 ori
mai mare cu TR dect cu TR [16].
Concluzii
Modificarea nivelului plasmatic al hormonilor tiroidieni influeneaz substanial activitatea
contractil i electric a cordului. Efectele majore ale HT asupra cordului se realizeaz prin
reglarea expresiei sau modularea activitii principalelor proteine responsabile de homeostazia
calciului. Prezena multiplelor izoforme ale receptorilor tiroidieni i afinitatea lor
organospecific, sugereaz posibilitatea utilizrii analogilor HT cu aciune general sau local.
Aceti analogi pot stimula sau inhiba activitatea cardiac.
Bibliografie
1. Basset J.H., Harvey C.B., Williams G.R. Mechanisms of thyroid hormone
receptor specific nuclear and extranuclear actions. Mol Cell Edocrinol,
213 (1), 2003, p. 1-11.
2. Baumann C.T., Muruvada P., Hager G.L.et al. Nuclear-cytoplasmic shuttling
by thyroid hormone receptors: multiple protein interactions are required
for nuclear retention. J Biol Chem, 276, 2001, p.1123711245.
3. Bogazzi F., Hudson L.D., Nicodem V.M. A novel heterodimerization partner
for thyroid hormone receptor. Peroxisome proliferator-activated receptor. J
Biol Chem, 269, 1994, p. 1168311686.
4. Brent G.A. The molecular basis of thyroid hormone action. N. Engl. J. Med., 331, 1994, p.
847-853.

173

5. Carr A.N., Kranias E.G. Thyroid hormone regulation of calcium cycling proteins. Thyroid,
12, 2002, p. 453-458.
6. Cooney A.J., Tsai S.Y., OMalley B.W. et al. Chicken ovalbumin upstream
promoter transcription factor (COUP-TF) dimers bind to different GGTCA
response elements, allowing COUP-TF to repress hormonal induction of
the vitamin D3, thyroid hormone, and retinoic acid receptors. Mol Cell
Biol, 12, 1992, p. 41534163.
7. Danzi S., Klein I. Thyroid hormone-regulated cardiac gene expression and cardiovascular
disease. Thyroid, 12, 2002, p. 467472.
8. Davis P.J., Davis F.B. Nongenomic actions of thyroid hormone on the heart. Thyroid, 12,
2002, p. 459-466.
9. Dieckman L.J., Solaro R.J. Effect of thyroid status on thin-filament Ca++ regulation and
expression of troponin I in perinatal and adult rat hearts. Circ. Res. 67, 1990, p. 344-351.
10. Dillmann W.H. Biochemical basis of thyroid hormone action in the heart. Am J Med, 88 (6),
1990, p. 626-630.
11. Everts M.E., Verhoeven F.A., Bezstarosti K. et al. Uptake of thyroid hormones in neonatal
rat cardiac myocytes. Endocrinology, 137, 1996, p. 42354242
12. Fazio S., Palmieri E., Lombardi G.et al. Effects of Thyroid Hormone on the Caddiovascular
System. Recent Progress in Hormone Research, 59, 2004, p.31-50.
13. Gotnar A., Marek B., Pakula D. Thyroidhormones and the cardiomyocytes. Endocrynol Pol,
57 (2), 2006, p. 144-148.
14. Gloss B., Trost S., Bluhm W. et al. Cardiac ion channel expression and contractile function
in mice with deletion of thyroid hormone receptor alpha or beta. Endocrinology, 142 (2),
2001, 544-550.
15. Goldberg Y., Glineur C., Resquiere C., Ricouart A. et al. Activation of
protein kinase C or cAMP-dependent protein kinase increases
phosphorylation of the c-erbA-encoded thyroid hormone receptor and of
the v-erbA-encoded protein. EMBO J, 7,1988, p. 24252433.
16. Grover G.J., Mellstrm, Ye. Liu., Malm J. et al. Selective thyroid hormone receptor-
activation: a strategy for reduction of weight, cholesterol, and lipoprotein (a) with reduced
cardiovascular liability. PNAS, 100 (17), 2003, p. 10067-10072.
17. Harvey C.B., Williams G.R. Mechanism of thyroid hormone action. Thyroid. 12, 2002, p.
441-446.
18. Kahaly G.J., Dillmann W.H. Thyroid hormone action in the heart. Endocrine
Reviews, 26(5), 2005, p. 704-728.
19. Kiss E., Jakab G., Kranias E.G. et al., Thyroid hormone-induced alterations in
phospholamban protein expression: regulatory effects on sarcoplasmic reticulum Ca
transport and myocardial relaxation. Circ. Res. 75, 1994, p. 245-251.
20. Klein I, Ojamaa K., Thyroid hormone and the cardiovascular system. N Engl J Med 344,
2001, p.501 509.
21. Ladenson P.W., Block K.D., Seidman J.G. Modulation of atrial natriuretic factor by thyroid
hormone: messenger ribonucleic acid and peptide levels in hypothyroid, euthyroid, and
hyperthyroid rat atria and ventricles. Endocrinology, 123, 1988 , p. 652-659.
22. Lazar M.A., Berrodin T.J. Thyroid hormone receptors form distinct nuclear
protein-dependent and independent complexes with a thyroid hormone
response element. Mol Endocrinol., 4, 1990, p. 16271635.
23. Liang F., Webb P., Marimuthu A. et al. Triiodothyronine increases brain natriuretic peptide
(BNP) gene transcription and amplifies endothelin-dependent BNP gene transcription and
hypertrophy in neonatal rat ventricular myocytes. J Biol chem., 278, 2003, p. 15073-15083.
24. Lin K.H., Ashizawa K., Cheng S.Y. Phosphorylation stimulates the
transcriptional activity of the human beta 1 thyroid hormone receptor.
Proc Natl Acad Sci USA, 89, 1992, p. 77377741.
174

25. Morkin E., Pennock G.D., Spooner P.H. Clinical and experimental studies on the use of 3,5diiodothyropropionic acid, a thyroid hormone analogue, in heart failure. Thyroid, 12(6),
2002, p. 527-33.
26. Morkin E. Regulation of myosin heavy chain genes in the heart. Circulation, 87, 1993, p.
1451-1460.
27. Ojamaa K., Sabet A., Kenessy A. et al. Regulation of rat cardiac Kv1.5 gene expression by
thyroid hormone is rapid and chamber specific. Endocrinology, 140, 1999, p. 3170-3176.
28. Polikar R., Burger A.G., Scherreo H. et al.,The thyroid and the heart.
Circulation, 87, 1993, p. 1435-1441.
29. Ritchie J.W., Shie Y.B., Hayoshi Y. et al. A role of the thyroid hormone transporters in the
transcriptional regulation by thyroid hormone receptors. Mol Endocrinol, 17 (4), 2003, p.
653-661.
30. Sabatino L., Colantuoni A., Iervasi G. Is the vascular system a main target of thyroid
hormones? From molecular and biochemical findings to clinical perspectives. Curr Vasc
Pharmacol, 3 (2), 2005, p. 133-145.
31. Salvatore D., Bartha T., Harney J.W. et al. Molecular biological and biochemical
characterization of the human type 2 seienodeiodinase. Endocrinology, 137, 1996, p. 33083315.
32. Segal J. Acute effects of thyroid hormone on the heart: an extranuclear increase in sugar
uptake. J. Mol. Cell. Cardiol., 21, 1989, p. 323-334.
33. Sugawara A., Yen P.M., Darling D.S. Characterization and tissue expression
of multiple triiodothyronine (T3) receptorauxiliary proteins (TRAPs) and
their relationship to the retinoid X receptors (RXRs). Endocrinology, 133,
1993, p. 965971.
34. Sugawara A., Yen P.M., Apriletti J.W. et al. Phosphorylation selectively
increases triiodothyronine (T3)-receptor homodimer binding to DNA. J Biol
Chem, 269, 1994, p. 433437.
35. Sun Z.Q., Ojamaa K., Coetzee W.A., Artman M., Klein I. Effects of thyroid hormone on
action potential and repolarizing currents in rat ventricular myocytes. Am. J. Physiol.
Endocrinol. Metab. 278, 2000, p. 302-307.
36. Trost S.U., Swanson E.A., Gloss B. et al., The thyroid hormone receptor--selective agonist
GC-1 differentially affects plasma lipids and cardiac activity. Endocrinology, 141, 2000, p.
3057-3064.
37. Tzagarakis-Foster C., Privalsky M.L. Phosphorylation of thyroid hormone
receptors by protein kinase A regulates DNA recognition by specific
inhibition of receptor monomer binding. J Biol Chem, 273, 1998, p.10926
10932.
38. Weinberger C., Thompson C.C., Ong E.S. et al. The c-erb-A gene encodes a thyroid hormone
receptor. Nature, 324, 1986, p. 641-646.
39. Williams G.R. Cloning and characterization of two novel thyroid hormone receptor beta
isoforms. Mol. Cell. Biol., 20, 2000, p. 8329-8342.
40. Yen P.M. Physiological and molecular basis of thyroid hormone action. Physiol Rev, 81 (3),
2001, p. 1097.
41. Young W.F. Jr., Gorman C.A., Jiang N.S. et al. L-thyroxine contamination of pharmaceutical
D-thyroxine: probable cause of therapeutic effect. Clin Pharmacol Ther, 36 (6), 1984, p. 781787.
42. Zhang X, Jeyakumar M, and Bagchi MK. Ligand-dependent cross-talk between steroid and
thyroid hormone receptors. Evidence for common transcriptional coactivator(s). J Biol
Chem 271: 14825-14833, 1996.

175

INTOXICAIA CU UNELE PESTICIDE INDUCE ELIBERAREA CITOCROMULUI C


I FRAGMENTAREA ADN N CULTURI DE CELULE UMANE HUH 7
Eugeniu Simionic*, C. Munteanu**, R. Huculeci**, A. Dinischiotu**
*USMF N. Testemianu Catedra Biochimie i Biochimie Clinic; **Universitatea din
Bucureti, Facultatea de Biologie, Catedra Biochimie
Summary
Intoxication with some pesticides induce release of cytochrome C
and DNA fragmentation in human cell line Huh 7
Lindane and deltametrine are insecticides with very large utilization in agriculture and
public health wich are dangerous contaminants for human organism. We studied the capacity of
lindane and deltametrin to induce release of cytochrome C and DNA fragmentation in human
cell line Huh 7, as a posibele mecanism of toxiticity. Our results sugest that intoxication with
lindane and deltametrin induce biochemical modifications related to apoptosis.
Rezumat
Lindanul i deltametrinul sunt insecticide pe larg utilizate n agricultur i sntate public,
periculoase ca contaminani pentru organismul uman. Noi am studiat capacitatea acestor
insecticide de a provoca eliberarea citocromului c i fragmentatrea ADN n culturi de hepatocite
umane transformate Huh7, ca un posibil mecanism al toxicitii lor urmat de declansarea
prcesului apoptotic. Rezultatele obinute, sugereaz c intoxicaia cu aceste pesticide induce
modificrile biochimice caracteristice apoptozei.
ntroducere
Apoptoza i stresul oxidativ sunt asociate cu expunerea la pesticide i alte substane toxice.
Multe cercetri indic c expunerea la pesticide poate determina creterea nivelului radicalilor
liberi care pot induce apoptoza [1,2]. Radicalii liberi influeneaz expresia genelor, regleaz
rspunsul celular la aciunea citokinelor, precum i evenimentele legate de proliferarea celulelor.
Toate aceste evenimente sunt inte ale apoptozei [3,5,7].
O posibil legtur ntre speciile ROS i apoptoz poate lua natere n timpul unor
intoxicaii grave cu pesticide. n aceste cazuri n celule sunt activate ciclurile redox n care are
loc degradarea pesticidelor i generarea speciilor ROS, ca anionul superoxid, peroxidul de
hidrogen, radicalul hidroxil [5, 14]. Aceste specii reactive pot interaciona cu proteinele i
lipidele membranei mitocondriale perturbnd prmeabilitatea i provocnd deschiderea canalelor
membranare cunoscute sub numele de pori de permeabilitate tranzitorie PTP (permeability
transition pore). Deschiderea neselectiv a acestor canale, ca urmare a unui stimul citotoxic,
poate provoca ptrunderea necontrolat a apei i ionilor n mitocondrie determinnd o
expansiune a volumului matriceal i ruperea membranei mitocondriale externe ce permite ieirea
citocromului C (cyt C) n citosol. Odat eliberat n citoplasm, cyt C se va asocia cu proteina
Apaf-1 i apoi cu procaspaza 9 formnd apoptozomul [8,10]. Caspaza 9 activeaz alte caspaze
ceea ce conduce la o activitate proteolitic intens ce implic digestia proteinelor structurale n
citoplasm, inactivarea proteinelor care apar organismul de apoptoz (ICAD, Bcl-2), activarea
endonucleazelor (CAD) care provoac fragmentarea ADN i n final apoptoza.
Experimente efectuate pe culturi de celule, indic capacitatea multor pesticide de a induce
apoptoza. In lucrarea de fa sa studiat capacitatea inducerii apoptozei de intoxicaia cu
insecticidele deltametrin i lindan n culturi de hepatocite umane transformate Huh 7 (human
hepatocarcinome).
Deltametrinul reprezint un insecticid piretroid ( Fig. 1, A) sintetizat n 1974 i este utilizat
in agricultur pentru tratarea culturilor de bumbac (45% din consumul total), de cafea, porumb i
alte cereale, fructe, legume, precum i a produselor depozitate. De asemenea este utilizat in
zootehnie, medicina veterinar i sanatate public. Intoxicaia cu deltametrin la oameni a
generat: ataxie, convulsii ce au dus la paralizii musculare, dermatite, edeme, diaree, dispnee,
dureri de cap, iritabilitate, tremor, vom i chiar moarte datorit stoprii respiraiei [13].
176

H3C
Br

Br

CN
CH3 O

Cl
O

Cl

Cl

H
H

H
H

Cl
H

Cl
Cl
A.
B.
Fig.1 Formulele de structur ale deltametrinului (A.) i lindanului (B.)

Lindanul este un insecticid si fumigant care din punct de vedere chimic, reprezint un
compus organic clorurat cu denumirea sistemic de 1,2,3,4,5,6-hexaclorociclohexan sau hexaclorociclohexan (Fig.1, B). Din 1949, lindanul este folosit pe scar larg mpotriva
diferitelor insecte duntoare n agricultur, industrie alimentar, sntate public si mpreun cu
fungicidele ca agent de tratare a seminelor. Este component al loiunilor, cremelor i
sampoanelor pentru controlul pduchilor i scabiei la om. La om simptomele intoxicarii sunt
legate de expunerea ambiental cronic i sunt caracterizate prin pierderea echilibrului, carierea
dinilor i hiper-iritabilitate. Loiunile ce conin 10% lindan, aplicate pentru prevenirea scabiei la
copii pot avea consecine severe. Biochimic lindanul este implicat n dereglrile homeostaziei
ionilor de Ca2+ datorit analogiei structurale cu inozitolul, poate induce peroxidarea lipidelor
membranare i modificarea activitii enzimelor antioxidative urmat de declanarea perocesului
apoptotic [13,14].
Scopul acestei lucrri a fost stabilirea capacitii insecticidelor deltametrin i lindan de a
iniia eliberarea cyt C i fragmentaterea ADN n culturi de hepatocite umane transformate Huh 7
evenimente moleculare importante n aprecierea leziunilor provocate de intoxicaii capabile de
a induce moartea celular prin apoptoz.
Materiale i metode
Model de studiu in vitro. Studiul a fost realizat pe culturi de hepatocite umane
transformate, Huh7, intoxicate cu 70 M lindan i 50 M deltametrin, n prezena de 10% ser
fetal bovin n mediul de cultur DMEM (Dullbecos Modified Eagles Medium).
Test de citotoxicitate. Concentraia optim de lindan i deltametrin utilizat pentru
tratamentul culturii de hepatocite a fost stabilit n urma realizrii unui test de citotoxicitate
folosind MTT
[bromur de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoliu], care permite
evaluarea metabolismului oxidativ, pe baza transformarii MTT-ului intr-un formazan sub
aciunea enzimelor NAD(P)H-dependente. Culoarea (galben pn la albastru) este proporional
cu numarul celulelor active metabolic.
Evidenierea citocromului C. Pentru evidenierea cyt C celulele tratate cu pesticid au fost
tripsinizate i ulterior resuspendate n 2 ml tampon de extracie (210 mM manitol, 70 mM
sucroz, 20 mM HEPES-KOH, pH 7.4, KCl 50 mM, EGTA 50 mM, MgCl 2 2mM, dithiotreitol
1mM). Dup liz, celulele au fost centrifugate 5min/12000xg/4C, supernatantul obinut fiind
ultracentrifugat 30min/100.000xg(46.000rpm)/4C. Fracia citosolic obinut a fost concentrat,
probele fiind supuse unor centrifugari succesive folosind centricoane YM-10 (centrifugarea a
fost realizat cte 1 or/5000xg/4C). Determinarea concentraiei proteice a probelor s-a realizat
folosind metoda Lowry. Separarea proteinelor s-a efectuat prin migrarea probelor n condiii
denaturante n 15% gel de poliacrilamid. Probele supuse electroforezei au prezentat o
concentraie de 70 g/godeu.
Dup migrare, proteinele au fost transferate utiliznd metoda transferului umed Western
blot pe membrane PVDF n prezena tamponului de transfer (Tris 25 mM, glicin 192 mM,
metanol 20%). Membrana a fost spalat cu ap distilat i apoi blocat n 10 ml tampon de
blocare 30 min (tamponul de blocare, soluiile de diluie, anticorpii i solutia de spalare anticorpi
au fost utilizate din kitul Invitrogen Western Breeze, Chromogenic Immunodetection System).

177

Dup blocare membrana a fost spalat cu 20 ml ap i incubat n prezena anticorpului


primar anti-cyt C. Dup incubare n prezena anticorpului primar membrana a fost splat cu
soluie splare anticorpi i incubat 30 min n prezena anticorpului secundar (donkey anti sheep
conjugat cu peroxidaza). Revelarea a fost realizat n 10 ml DAB cromogen (NOVOCASTRA
Liquid DAB Substrate Kit for Peroxidase).
Evaluarea gradului de fragmentare a ADN. Pentru evaluarea gradului de fragmentare a
ADN au fost tripsinizate i omogenizate 2 x 10 6 celule Huh 7 n 200 l PBS. Omogenatul
celular se adaug etanol 70% i se incubeaz 48 ore/-20C. Dup o centrifugare 1500
rpm/10min/4C, se ndeprteaz etanolul i sedimentul celular se resuspend in 100 l tampon
de extractie (0.2 M Na2HPO4, 0.1 M ac. citric, pH 7.8) i se incubeaz timp de 30 de minute, la
37C. Omogenatul este centrifugat i din supernatant se transfer 80 l intr-un Eppendorf 1.5 ml
steril se adauga 5 l ARN-az i se incubeaz 30 min/37C. Apoi se adaug 10 l proteinaz K i
se incubeaza 30 min/37C. 20 l din amestec se incubeaza 30 min la temperatura camerei in
prezen de EDTA 125 mM, etanol 100%, se omogenizeaz amestecul, se centrifugeaz i se
nltur supernatantul. Peletul ADN este splat cu etanol 70% se usuc la pompa de vid 10 min i
apoi se face resuspendarea peletului n soluie de rehidratare ADN (Tris/HCl 10mM, pH 7.4,
EDTA 1mM, pH 8 ). Vizualizarea fragmentelor ADN s-a realizat prin migrarea electroforetic n
gel de agaroz (h.r.) 1.8% n prezena de bromur de etidiu.
Rezultate i discuii
Principalii markeri apoptotici urmarii pentru evidenierea efectului indus de tratamentul cu
pesticide la nivel hapatocitar au fost: eliberarea citocromului C mitocondrial n citoplasm i
procesul de fragmentare ADN, aparut in faza trzie a apoptozei.
Concentratia optim de pesticide utilizat pentru tratamentul hepatocitelor n vederea
inducerii apoptozei a fost stabilit n urma realizrii unui test de citotoxicitate folosind MTT,
care permite evaluarea metabolismului oxidativ. Rezultatele acestui test (Fig. 2 i 3) indic faptul
c tratamentul cu lindan (70 M) timp de 12 i 24 ore induce efecte toxice moderate la nivelul
celulelor Huh7.

Fig.2 Test de citotoxicitate la nivelul celulelor Huh7 tratate cu lindan 70 M

Fig.3 Test de citotoxicitate la nivelul celulelor Huh7 tratate cu deltametrin 25 i 50 M

178

Eliberarea citocromului C: Citocromul C a fost prima molecul mitocondrial implicat


n semnalizarea apoptotic. Studiile efectuate pe culturi de celule Huh 7 au artat ca atat
intoxicaia cu lindan 70 M ct i intoxicaia cu deltametrin 50 M provoac eliberarea cyt C
(Figurile 4 i 5).

Fig.4 Analiza Western blot a cyt C eliberat de la nivelul celulelor tratate


cu 70 M lindan timp de 4 si 6 ore

Fig.5 Analiza Western blot a cyt C eliberat de la nivelul celulelor tratate


cu 50 M deltametrin timp de 2 i 4 ore
Rezultatele obinute au pus n eviden eliberarea cyt C de la nivel mitocondrial din
celulele Huh 7 tratate timp de 6 ore cu 70 M lindan (Fig. 4). Din densitometrarea benzilor
obinute n urma revelrii specifice a membranei PVDF cu anticorpi anti-cyt C, se poate observa
o cretere a cantitii de cyt C din citoplasma celulelor tratate, comparativ cu celulele martor,
care este proporional cu intervalul de tratament.
Cantitatea de cyt C eliberat la nivel citoplasmatic n urma tratamentului hepatocitelor cu
lindan timp de 4 ore a fost cu 207 % mai mare comparativ cu martorul, n timp ce n urma
tratamentului timp de 6 ore, cantitatea de proteina eliberata este cu 1661% mai mare n
comparaie cu celulele netratate (Fig. 4). Comparativ cu celulele tratate cu lindan 70 M, in
celulele tratate cu 50 M deltametrin eliberarea cyt C de la nivel mitocondrial are loc dup un
interval de timp mai scurt (2 ore; Fig.5) dect cel n urma cruia se elibereaz cyt C din celulele
tratate cu lindan (6 ore; Fig.4). Acest lucru poate demonstra efectul mai toxic al tratamentului cu
deltametrin comparativ cu cel cu 70 M lindan.
Toate aceste rezultate sugereaz faptul c procesul apoptotic indus la nivelul celulelor Huh
7, att sub aciunea deltametrinului ct i a lindanului este dependent de mitocondrie i implic
eliberarea cyt C de la acest nivel.
Evaluarea gradului de fragmentare a ADN: Fragmentarea ADN reprezint faza
terminal a apoptozei, care are loc n cteva etape: formarea unor macrofragmente ADN de 300
mii perechi de baze (p.b.), generarea unor fragmente mai mici de 30-50 mii p.b. i scindarea
internucleozomal cu formarea fragmentelor de 180 p.b. sau multiplul lor. Aceste fragmente de
180 p.b., n timpul electroforezei ADN purificat din celulele apoptice, apar sub forma unei trene,
fapt pe larg utilizat n identificarea apoptozei celulare [11].

179

Fig. 6 Fragmentarea ADN indus n celule


Huh7 de tratamentul cu
50 M
deltametrin
1
- marker 100 bp
2 - celule control
3 - celule tratate 24 de ore
4 - celule tratate 48 de ore
5 - celule tratate 72 de ore
Datele experimentale obinute n studiile noastre, arat c atat in cazul tratamentului cu
deltametrin (50 M) ct i cu lindan (70 M) are loc inducerea fragmentrii ADN la nivel
celular. Apariia acestui proces se observ foarte clar la 72 ore de tratament cu 50 M deltametrin
i la 48 i respectiv 72 de ore n cazul tratamentului cu 70 M lindan.

Fig.7 Fragmentarea ADN indus n celule


Huh7 de tratamentul cu 70 M lindan
1 - marker 100 bp
2 - celule control Huh7
3 - celule tratate 24 de ore
4 - celule tratate 48 de ore
5 - celule tratate 72 de ore

n cazul tratamentului cu lindan 70 M, se observa c intensitatea fragmentrii ADN crete


proporional cu intervalul de expunere (Fig. 7). Studii recente efectuate pe alte tipuri de culturi
celulare au artat capacitatea acestora i a altor pesticide de a provoca fragmentarea ADN
[11,15].
Concluzii
Studiul efectului toxic al lindanului n concentraie de 70 M i a deltametrinului n
concentraie de 50 M in vitro (culturi de celule Huh 7), au subliniat capacitatea acestor pesticide
de a induce efecte caracteristice procesului apoptotic. Rezultatele obinute sugereaz faptul c
procesul apoptotic indus de aceste pesticide este dependent de mitocondrie i implic eliberarea
cyt C de la acest nivel. De asemeni mrirea duratei de intoxicaie pn la 72 ore induce i
fragmentarea ADN - semnal final n declanarea procesului apoptotic.
Bibliografie
1. Akhgari M., Abdollahi M., Kebryaeezadeh A., Hosseini R., Sabzevari O. - Hum. Exp.
Toxicology, 22(4):205-11, [2003]
2. Ananya R., Subeena S., Kumar D.A., Kumar D.T., Med. Sci. Monit., 11(9):325-329, [2005]
3. Atif F., Parvez S., Pandey S., Rehman H. - Archives of Environ. Contamination and
Toxicology, [2005].
4. Banerjee B.D., Seth V., Ahmed R.S. - Rev. Environ. Health., 16(1):1-40, [2001].
5. Banerjee B.D., Seth V., Bhattacharya A., Pasha S.T. Toxicol. Lett. 107(1-3):33-47, [1999].
6. Chandra J, Samali A, Orrenius S. - Free Radic. Biol. Med. 29:32333, [2000].
7. Cornejo P, Tapia G, Puntarulo S, Galleano M, - Toxicol Lett. 119(2):87-93, [2001].
180

8. Descampiaux B., Leroux J.M., Peucelle C., Erb F. - Cell Biol. Toxicol. 12(1):19-28, [1996].
9. Fabreguettes C. - Centre International de Toxicologie, Misery, Evreux, France, [1991].
10. Garcia-Fernandez A.J., Bayoumi A.E., Perez-Pertejo Y., Romero D., Ordonez C., Reguera
R.M., Balana-Fouce R., 11. Ordonez D. - Xenobiotica. Nov;32(11):1007-16, [2002].
12. Goldstein J.C., C Muoz-Pinedo, J-E Ricci, S R Adams, A Kelekar, Schuler, R Y Tsien and
D R Green - Cell Death and Differentiation, 12, 453462, [2005].
13. Sauviat M.P., Pages N. - J.Soc.Biol.;196(4):339-48. [2002].
14. Kroemer G. - Biochemical & Biophysical Res. Communic., Vol.304:433-435, [2003].

TERAPIA GENIC N PATOLOGIILE CORDULUI


Mihail Tanic
(Cond. t. dr., conf. universitar, I. Cemortan)
Catedra Biologie Molecular i Genetic Uman USMF Nicolae Testemianu
Summary
Gene therapy of heart diseases
Gene therapy offers large possibilities in heart diseases treatment: coronarian disease,
congestive heart insufficiency, cardiomiopathy, and airtimes. Expression of therapeutic genes in
target tissues assures angiogenesis, calcium intracellular homeostasis, apoptosis preventing and
heart contractility genes modulation. Implementation of the gene therapy needs to resolve the
following problems: selection of therapeutical genes, vectors and methods of their delivery.
Rezumat
Terapia genice ofer posibiliti vaste n tratamentul patologiilor cardiace cum ar fi boala
coronarian, insuficien cardiac congestiv, cardiomiopatii, disritmii etc. Expresia genelor
terapeutice n regiunile tisulare int asigur angiogeneza terapeutic, homeostazia intracelular a
ionilor de calciu, prentmpinarea apoptozei i modularea genelor ce controleaz ritmul celular.
Implementarea terapiei genice necesit soluionarea problemelor legate de alegerea genelor
terapeutice, vectorului, modului de introducere a vectorului n esutul int etc.
Actualitatea temei
Patologiile cardiovasculare dein locul nti n rndul bolilor cu cea mai mare rat de
morbiditate i mortalitate mondial. Progresul tehnico-tiinific n domeniul terapiei genice ofer
perspective largi n tratamentul, iar n unele cazuri i profilaxia multor patologii cardiace
precum: boala coronarian, insuficien cardiac congestiv, cardiomiopatii, distritmii etc.
Implementarea terapiei genice n tratamentul pacienilor cardiaci minimalizeaz interveniile
traumatice la nivelul cordului reducnd complicaiile postoperatorii i tratnd pacienii la nivel
molecular prin intermediul produilor elaborai de propriile celule, activate prin modularea
genic.
Obiectivele lucrrii
Scopul actualului studiu este analiza datelor bibliografice recente privind succesele n
domeniul tratamentului genic al afeciunilor cordului de divers genez.
Rezultate i discuii
Dup o perioad lung de studii experimentale preclinice, terapia genic permite modularea
genic la pacienii cu diverse patologii ischemice, nereceptive la metodele terapeutice
medicamentoase [6] i a celor la care angiogeneza fiziologic este compromis (vrsta naintat,
hipercolesterolemia, diabetul zaharat, disfuncii endoteliale) [3]. Terapia genic a miocardului
poate veni n ajutorul ameliorrii strii pacienilor cu boal coronarian, insuficien cardiac
congestiv sau disritmii greu tratabile. Un interes deosebit prezint profilaxia genic a
complicaiilor stentingului coronarian [7, 8].

181

Terapia genic presupune transferul genelor de interes prin intermediul unor vectori specifici
n regiunile tisulare cu expresie genic anormal. Odat ptruns n celula int, vectorul trece n
nucleu, asigurnd integrarea genelor terapeutice n genomul gazdei urmat de expresia
acestora.
Obiectivele terapiei genice sunt: substituirea unei gene defecte, introducerea n genom a unei
secvene nucleotidice absente, intensificarea producerii unei anumite proteine care ar avea efect
terapeutic etc. [1].
Terapia genic necesit soluionarea urmtoarelor probleme: alegerea genelor terapeutice,
alegerea vectorului potrivit, modul optim de introducere a vectorului n esutul int, cantitatea
necesar de vectori i gene, determinarea posibililor reacii adverse etc. [1].
Mecanismele tratamentului genic al afeciunilor miocardului
Alegerea tacticii terapiei genice n tratarea afeciunilor cordului depinde de etiologia acestora.
n cazul patologiilor ischemice a miocardului, sarcina de baz a tratamentului genic este
revascularizarea regiunilor ischemiate prin accelerarea neoformrii vaselor colaterale
(angiogeneza terapeutic).
Tratamentul genic al insuficienei cardiace congestive se axeaz pe trei direcii: modularea
homeostaziei intracelulare a calciului; modularea activitii receptorilor -adrenergici i sporirea
rezistenei cardiomiocitelor la apoptoz [1].
Disritmiile cardiace pot fi controlate transducnd genele care controleaz ritmul cordului n
regiunile afectate [8].
Patologiile ischemice ale cordului. Dei hipoxia cronic a miocardului, deschide vasele
colaterale nefuncionante anterior, acestea nu pot compensa n msur deplin segmentul
subepicardial stenozat de vas [2].
n condiiile hipoxiei acute angiogeneza d natere celulelor vasculare noi doar peste 24 de
ore, timp n care cardiomiocitele se necrotizeaz. Sarcina major a angiogenezei terapeutice este
accelerarea procesului de neoformare a vaselor colaterale. Aceasta ar restabili fluxul sangvin
coronarian spre regiunile ischemiate de miocard i ar permite ptrunderea prin intermediul
circulaiei sangvine restabilite a remediilor medicamentoase utilizate n tratamentul patologiilor
n cauz [4].
Angiogeneza terapeutic a miocardului presupune inserarea genelor ce codific factorii de
cretere a reelei vasculare (FGF, VEGF) n celulele regiunilor ischemiate [2]. Ptrunderea
genelor respective n celulele int permite expresia lor, care la rndul su se manifest prin
sinteza factorilor de cretere ceea ce stimuleaz neoformarea vaselor sangvine. Utilizarea
factorilor de cretere n calitate de remedii terapeutice necesit verificarea toxicitii acestora,
gradului de aciune sistemic, efectului tumorogen [2].
Ideea precum c factorii angiogenici de cretere pot stimula revascularizarea esutului
ischemiat, a fost pentru prima dat verificat la pacienii cu ischemia periferic. Transferul
genelor factorului endotelial de cretere (VEGF) a mbuntit starea pacienilor nlturnd
durerile de repaus i a vindecat ulcerele trofice. Pe angiografia realizat dup tratament s-a
depistat o reea de vase colaterale noi, ceea ce dovedete eficiena angiogenezei terapeutice.
Lund n consideraie rezultatele obinute s-a trecut la a doua etap de implementare a terapiei
genice n tratarea pacienilor cu patologii ischemice ale cordului [1].
Creterea colateralelor este o combinaie a schimbrilor endoteliale, proliferrii celulelor
musculare netede i remodelarea esutului conjunctiv, deci factorii de cretere trebuie s posede
capacitatea s influeneze direct sau indirect o varietate larg de celule int: endoteliale,
fibroblati i celule musculare netede etc. [4].
Angiogeneza ncepe cu desprinderea de la capilarele preexistente, proliferarea i migrarea
celulelor endoteliale, care are ca rezultat formarea unei reele vasculare noi. Vasele neoformate
se pot dezorganiza att timp ct nu sunt completate cu pericite. Procesul este reglat de
stimulatorii i inhibitorii angiogenezei [4].
Insuficiena cardiac congestiv. Meninerea homeostaziei intracelulare a ionilor de calciu.
Reducerea expresiei Ca2+-ATP-zei reticulului sarcoplasmatic (SERCa2+) perturbeaz
182

contractilitatea miocardului. Terapia genic a IC congestive presupune supraexpresia SERCa 2+,


care conform experienelor realizate pe animalele de laborator restabilete funcia sistolic i cea
diastolic a cordului, i diminueaz concentraia citosolic a ionilor de calciu. n rezultat se evit
activarea cascadei de reacii ce ar induce hipertrofia miocardului i/sau moartea celular.
Homeostazia calciului se poate menine i prin inhibarea expresiei fosfolambanului inhibitorul
pompei de calciu din reticulul sarcoplasmatic, n rezultat crete activitatea SERCa2+ [1].
Sporirea rezistenei cardiomiocitelor la apoptoz. Studiile efectuate au artat efectul
terapeutic benefic al transducerii genelor Bcl-2 i Akt n prolongarea rezistenei cardiomiocitelor
la hipoxie. Expresia acestora blocheaz apoptoza indus de p53 i hipoxie [1].
Modularea activitii receptorilor -adrenergici. Adenilatciclaza este una dintre enzimele
cheie n semnalizarea transmembranar. Studiile au artat c adenilatciclaza joac un rol
important n activitatea receptorilor -adrenergici. Ultimele date demonstreaz c n cazul
cardiomiopatiilor supraexpresia izoformei VI ai adenilatciclazei crete rspunsul miocardului la
stimularea -adrenoreceptorilor. Efectul respectiv se bazeaz pe creterea concentraiei
intracelulare a AMPc ceea ce s-a dovedit a fi suficient pentru a ameliora funcia cardiac i a
micora dimensiunile cordului. Avantajul creterii AMPc pe seama expresiei genelor transduse
este lipsa activrii proteinei G i lipsa influenei asupra numrului -adrenoreceptorilor [5].
Alegerea vectorului
Alegerea vectorului n terapia genic a miocardului este o problem de soluionarea creia
depinde eficiena tratamentului, modul i calea de administrare a genelor de interes, aciunea
sistemic sau local a produsului de expresie genic precum i posibilele reacii adverse [1].
Alegerea vectorului depinde i de nivelul de aciune a proteinelor codificate de genele
terapeutice. Astfel genele care codific proteinele a cror activitate se realizeaz exclusiv
intracelular trebuie transduse unui numr mare de celule int pentru a obine efectul dorit, iar
genele care codific proteinele cu aciune extracelular, pot fi transduse ntr-un numr redus de
celule, la nivel tisular produsul expresiei acestora va stimula n mas populaia celular ce
posed receptori specifici [1].
Tratamentul genic al miocardului este favorizat de particularitile histologice a esutului
muscular striat. S-a demonstrat c esutul muscular n special cel ischemiat este foarte receptiv la
ADN-ul plasmidic. Celula muscular striat este plurinucleat, deci vectorii au mai multe inte la
nivelul unei singure celule, transformarea genetic doar a unui nucleu va avea aciune
terapeutic.
n terapia genic a afeciunilor cardiace se folosesc vectori virali (adenovirui, retrovirui,
virui adenoasociai, lentivirui) i nonvirali (plasmide, liposomi, celule izolate transfectate) [1].
Vectorii virali. Adenoviruii posed un potenial pronunat de transducie pentru majoritatea
celulelor [5]. Obinerea adenoviruilor este relativ simpl, ns utilizarea lor n calitate de vectori
ar putea avea unele efecte secundare [1,5]. Printre particularitile care defavorizeaz
adenoviruii este efectul scurt al expresiei genice datorit distrugerii rapide a vectorilor de forele
imune ale organismului, este posibil apariia miocarditei [5].
O alternativ ar fi folosirea vectorilor non-adenovirali. Rezultate pozitive au fost obinute pe
animalele de laborator cu utilizarea n calitate de vectori a viruilor adenoasociai i a
lentiviruilor (derivai ai virusului HIV) [5]. Transferul genelor utiliznd aceti vectori a
accelerat revascularizarea miocardului compromis fr a provoca miocardita. Viruii
adenoasociai i lentiviruii, pot infecta att celulele proliferante ct i cele cu un potenial
proliferativ diminuat [5], se caracterizeaz printr-o imunogenitate sczut i posibilitate minim
de mutagenez la integrarea n genomul uman.
Dezavantajele viruilor adenoasociai i a lentiviruilor este lungimea limitat (pn la 4,7 kb)
a fragmentului nucleotidic pe care acetia l pot transporta; prezena genelor reziduale ai
virusului HIV n genomul vectorului [5].
Utilizarea vectorilor nonvirali. Datele recente arat c supraexpresia genic de scurt durat
este optim pentru terapia genic a miocardului, aceasta se obine prin folosirea n calitate de
vectori ai terapiei genice a plasmidelor i liposomilor [5]. Principalul avantaj n utilizarea
183

plasmidelor este costul mic de producere al acestora. Printre dezavantaje menionm gradul nalt
de imunogenitate precum i distrugerea rapid a plasmidelor n organism, ceea ce sporete doza
vectorilor utilizai n terapia genic.
O alt form de vectori folosii n terapia genic sunt liposomii. Liposomii reprezint sfere
lipidice cu coninut hidrofil n componena cruia se afl fragmentul polinucleotidic de interes.
Fuzionnd cu membrana citoplasmatic a celulei int, liposomii revars coninutul n
citoplasma celular cu integrarea ulterioar a acestuia n genomul celulei gazd [5].
Ultimele studii au artat posibilitatea transferului genic prin metoda indirect. Experienele pe
animale de laborator au permis transferul genic, n regiunile ischemiate ale miocardului, indirect,
prin intermediul celulelor transfectate ex vivo [1].
n prezent se studiaz nu doar vectorii ca entiti biologice, dar i factorii fizici exogeni, care
ar facilita transportul genelor terapeutice n celul din locul injectrii. Experienele au artat c
expresia genelor transduse poate crete de 20 de ori, dac imediat dup injectarea preparatului se
va aplica n regiunea respectiv o surs de ultrasunet (1 MHz), care permiabilizeaz membranele
celulare i mbuntete preluarea plasmidelor cu ADN-ul recombinat [1].
Modalitile de transfer a vectorilor recombinai
Rezultatele terapiei genice n mare msur depind de metoda de introducere a vectorilor cu
genele de interes n regiunile int. Anume de concentraia local, a vectorilor va depinde viteza
angiogenezei induse, timpul necesar restabilirii circulaiei n sectorul respectiv, cantitatea de
gene administrat pacientului, numrul de proceduri i durata tratamentului etc. [1].
Spre soluionarea problemei respective s-au propus mai multe metode sistemice i locale de
introducere a genelor de interes n organism.
Introducerea sistemic (intravenoas) a vectorilor pune problema gradului de distribuie ctre
regiunile ischemiate ale cordului i reinerea lor local [2]. Aceeai problem a aprut la
introducerea direct a factorilor de cretere n circuitul sangvin. n ultimul caz cantitatea
factorilor de cretere care vor ajunge la miocard a fost minim, deoarece n majoritatea sa ei se
cupleaz cu globulinele sngelui (spre exemplu FGF cu -2-macroglobulina) care se leag de
receptorii celulelor Kupffer determinnd acumularea factorilor de cretere n ficat [2].
Rezultate pozitive s-au obinut la introducerea local a genelor ce codific factorii de cretere
sau a factorilor propriu-zii. O serie de experiene au demonstrat capacitatea esutului muscular
striat, inclusiv cardiac de a prelua i a expresa ADN-ul injectat local [4].
Metodele de injectare local a vectorilor recombinai sunt (fig. 1) [1]:
a b

2
3
4

e
Fig. 1. Variantele de introducere intracardiac a vectorilor cu genele terapeutice. a
intramiocardial, prin cateter; b intracoronarian; c intravenos; d intrapericardial (1-

184

epicardul; 2 cavitatea pericardial; 3 foia parietal a pericardului; 4 foia fibroas a


pericardului); e intramiocardial, injectabil.

185

1. subepicardial. Dup injecia intraoperatorie a vectorilor, materialul transgenic se


distribuie n miocardului adiacent (gradientul de distribuie scade direct proporional cu
distana de la locul injectrii);
2. subendocardial. Dup injectarea intramiocardial prin intermediul cateterului, materialul
transgenic se distribuie similar celui descris anterior;
3. intracoronarian. Injectarea remediilor transgenice direct n lumenul arterelor coronare
permite distribuirea vectorilor ctre poriunea de miocard i interstiiu vascularizate de artera
respectiv. Neajunsul acestei metode este prezena obligatorie a arterelor permiabile sau a
bypassului funcional la pacienii cu ocluzie arterial;
4. retroperfuzia. Metoda se bazeaz pe canularizarea sinusului coronarian sau a venelor ce
se vars n acesta cu introducerea vectorilor recombinai, ceea ce permite distribuirea
retrograd a vectorilor cu genele de interes ctre cardiomiocite i interstiiu;
5. intrapericardial. Accesul transtoracic n cavitatea pericardial permite introducerea
intrapericardial a vectorilor respectivi. Acetia se vor distribui n regiunile miocardului
situate subepicardial.
n cazul disritmiilor cardiace tehnica de transfer a genelor ce controleaz ritmul cardiac poart
denumirea de gene painting - pictare genic. Denumirea procedurii n cauz provine din
modalitatea transducerii genelor n cordul afectat. Astfel, n timpul experienelor realizate asupra
animalelor de laborator suferinde de aritmii severe, pe suprafaa atriului drept se aplica ntr-un
strat uniform o substan gelatinoas, care coninea vectori cu genele HERG-G628S. Ptrunderea
vectorilor n regiunea nodului sinoatrial a ameliorat starea animalelor. n rezultat, dup 3
sptmni ritmul cardiac a revenit la normal [8].
Bibliografie
1. Jeffrey M.I. Myocardial gene therapy. Nature, 2002, 415, p. 234-239.
2. Laham R.J., Rezaee M. et al. Intracoronary and intravenous administration of basic
fibroblast growth factor: myocardial and tissue distribution. Drug Metabolism and
Disposition, 1999, 27 (7), p. 821-826.
3. Markkanen J.E., Rissanen T.T. et al. Growth factor-induced therapeutic angiogenesis and
arteriogenesis in the heart-gene therapy. Oxford Journals. Medicine. Rardiovascular
Research, 65 (3), p. 656-664.
4. Schwary E.R., Speakman T. et al. Evaluation of the effects of intramiocardial injection of
DNA expressing vascular endothelial growth factor (VEGF) in a myocardial infarction
model in the rat-angiogenesis and angioma formation. J. Am. Coll. Cardiol, 2000, 35, p.
1323-1330.
5. Sesti C., Kloner R. Gene therapy in congestive heart failure. Circulation, 2004, 110, p.
242-243.
6. Yl-Herttuala S., Martin J.F. Cardiovascular gene therapy. Lancet, 2000, 355 (9199), p.
213-222.
7. Yl-Herttuala S., Alitalo K. Gene transfer as a tool to induce therapeutic vascular
growth. Nature Medicine, 2003, 9, p. 694-701.
8. www.hopkinsmedicine.org/Press_releases/2004/11_07_04.html

186

OBEZITATEA I PRINCIPIILE ALIMENTAIEI CORECTE


Svetlana Verejan
(Conductor tiinific - Elena Rvneac, dr., conf. univ.)
Catedra Biochimie i Biochimie Clinic
Summary
Obesity and the principles of correct nutrition
Obesity is not just a cosmetic consideration; it is a serious health problem. It is prodused
by the combination of an excessive nutrient intake and a sedentary lifestyle. Some studies reveal
that excessive body predisposes to various diseases, particularly cardiovascular diseases,
diabetes mellitus type 2, cerebrovascular accidents, sleep apnea, high blood pressure
(hypertension), hypercholesterolemia and osteoarthritis. The main treatment for obesity is to
reduce body fat by eating fewer calories and exercising more.
Rezumat
Obezitatea este nu doar inestetic, ci i o problem serioas de sntate. Ea este produs
prin combinaia unei ingestii nutritive excesive i a unui stil de via sedentar. Unele studii arat
c greutatea corporal excesiv predispune spre variate boli, in special boli cardiovasculare,
diabet zaharat de tip 2, accidente cerebrovasculare, apnee, hipertensiune, hipercolesterolemie i
osteoartrita. Tratamentul principal n obezitate este reducerea masei corporale prin dieta
hipocaloric i activitate fizica sustinuta.
Obezitatea se definete printr-o stare patologic nutriional-metabolic, cu depuneri de
grsimi n esutul adipos, nsoite de creterea anormal a greutii corporale. Cauzele obezitii
pot fi multiple, cele mai eseniale fiind totui ingestia hipercaloric i hipodinamia.
Pentru prevenirea i combaterea ei sunt eseniale cunotine profunde n ceea ce privete
metabolismul elementului fundamental al esutului adipos - adipocitul, ct i despre alimentaia
adecvat.
esutul adipos este cel mai mare rezervor de energie al organismului, principalul rol al
acestuia fiind acela de a stoca triacilglicerolii n perioadele de exces alimentar i n acelai timp,
de a mobiliza aceste rezerve atunci cnd este necesar acest lucru.
La om dezvoltarea esutului adipos alb se produce n principal dupa natere. Celulele
adipoase au tendina de a se aglomera formnd lobuli sau paniculi adipoi separai ntre ei prin
septuri conjunctive de esut lax. n aceste septuri se gsesc vase de snge i terminaii nervoase
adrenergice i colinergice. Dei esutul adipos alb a fost considerat a fi un esut slab vascularizat,
fiecare adipocit se gseste n contact cu cel puin un capilar.
Actual s-a constatat c exist un determinism genetic al numrului de adipocite. Marea
majoritate a populaiei de adipocite se sintetizeaz la 2-3 ani, iar la pubertate aceste celule se
hipertrofiaz. Deacea se consider c exist dou tipuri de obezitate:
hiperplastic (creterea numarului de adipocite) - apare n primii 2-3 ani
hipertrofic (creterea volumului adipocitelor) - apare la pubertate sau mai trziu[1].
La om capacitatea preadipocitelor de a se diferenia pare mai mare pentru depozitele
abdomonale dect pentru cele femurale. Aceste rezultate sunt n acord cu importanta capacitate
de dezvoltare a masei adipoase n regiunea abdominal, excesul fiind corelat cu riscurile cardiovasculare asociate diabetului de tip 2, hipertensiunii i dislipidemiei.
Acumularea de esut adipos n organism pe parcursul vieii este determinat concomitent
de doi factori: adipogeneza i balana n care se afl reaciile de lipogenez i lipoliz.
Adipogeneza se definete ca procesul de difereniere a celulei grase adulte din
preadipocite. Se tie astzi c adipogeneza nu are loc exclusiv pe parcursul copilriei, aa cum se
credea iniial; de fapt, adipocite noi se pot diferenia din preadipocitele fibroblast-like pe
parcursul diferitor perioade ale vieii, dezvoltarea obezitaii la adult datorndu-se ntr-o buna
masur i apariiei de noi adipocite (unele studii estimeaz c dezvoltarea tesutului adipos la
indivizii supraalimentai se face i prin apariia de noi adipocite pe seama pericitelor). Factorii
187

care intervin n acest proces sunt reprezentai de EGF (epidemal Growth Factor), vitaminele D3,
A i substane de tipuri FGF (Fibrolast Growth Factors).
Lipogeneza definete reaciile de sintez a acizilor grai i, secundar, a trigliceridelor:
sediile acesteea sunt esutul adipos, dar i ficatul. Glicerolul se obine prin aport exogen sau prin
glicoliz, iar acizii grai pot fi sintetizai de novo sau provin din sursa endohepatic. Acizii
grai provenii exogen sunt absorbii fie direct n circulaia sangvin fie n circulaia limfatic
sub form de chilomicroni. Chilomicronii au diametrul de 3 mm, au un miez central format de
triglicerid i colesterol esterificat i o parte periferic format din colesterol liber, proteine i
fosfolipide. La nivelul capilarelor chilomicronii se scindeaza sub aciunea lipoproteinlipazei
secretat de celulele endoteliale. Acizii grai rezultai ramn legai de proteine i astfel vor
traversa lamina bazala a adipocitului alb i apoi membrana celular i ajung n citoplasm unde
formeaz din nou trigliceride. Depozitele adipoase sunt permanent rennoite. Cel mai lipogenetic
hormon este insulina care permeabilizeaz membrana adipocitului pentru glucoz.
Lipoliza, care este controlat de glucagon, definete dimpotriv hidroliza trigliceridelor:
cnd organismul are nevoie de energie, adipocitele stimulate de catecolamine, elimin n snge
glicerol i acizi grai neesterificai (enzima lipaza hormono-sensibil, denumire nvechit trigliceride lipaz), pornind de la hidroliza trigliceridelor de rezerv. Rezerva de acizi grai din
organism depinde, aadar, de echilibrul dintre lipoliza i lipogenez. Aceast reglare apare sub
controlul anumitor molecule, printre care AMPc (AMP cilclic), care joac un rol fundamental:
inhib sinteza lipoproteinei lipaze i se opune lipogenezei;
activeaz lipaza hormono-sensibil i favorizeaz n consecin lipoliza.[4]
Adipocitul reprezint o celul activ din punct de vedere metabolic, la nivelul ei
producndu-se att sinteza lipidelor din carbohidrani ct i acumularea grsimilor provenite din
alimentaie, toate acestea aflndu-se sub control hormonal i nervos. De asemenea, adipocitul
reprezint locul de secreie a unei varietai de molecule active metabolic cum ar fi: acizii grai
liberi, care scad rata de oxidare a glucozei la nivelul esuturilor periferice; adipsina- posibila
legatur ntre activarea pe cale alternativ a complementului i metabolismului esutului adipos,
i ali factori ai complementului implicai n aprarea organismului; factorul de necroza tumoral
alpha, care poate fi un determinant important al sensibilitaii la insulun; IL-6 (interleukina-6)
implicat n aprarea organismului i n metabolismele lipidic i glucidic; angiotensinogenul, care
pare a promova diferenierea terminal a preadipocitului la celula adipoas[3].
Masa esutului adipos este corelat direct cu secreia de leptin. Leptina, polipeptid cu 167
de aminoacizi, este sintetizat i secretat n esen de ctre esutul adipos i, n cantiti mult
mai mici, de catre muchiul scheletic, glandele fundice gastrice i placent.
Rolul principal al leptinei n reglara greutii corporale const n neuromodularea
mecanismelor de foame i saietate, semnalizarea structurilor nervoase superioare (hipotalamus)
despre dimensiunea rezervelor energetice ale organismului. De asemenea, are roluri importante
n metabolismul carbohidratilor, dezvoltarea sistemului osos i reproductiv, ea influeneaza
metabolismul energetic prin aciunea direct asupra unor esuturi periferice precum muchiul
scheletic, ficatul, pancreasul i nsui asupra esutul adipos, unde intervine n metabolismul
glucidic i lipidic. Persoanele obeze prezint de obicei rezisten la actiunea leptinei, avnd
niveluri circulante crescute. n puinele cazuri descoperite la oameni cu deficien a leptinei,
administrarea de leptin a determinat o reducere a aportului alimentar i scderea semnificativ
n greutate. S-au descoperit cteva cazuri cu deficit al receptorului leptinei, indivizii respectivi,
dei cu greutate normal la natere, manifestnd o cretere rapid n greutate n primele luni de
viat, insoit de hiperfagie, hipogonadism hipogonadotropic i afectarea secreiei tireotropinei.
Prezena citokinelor n esutul adipos, n special TNF-alfa i IL-6, orienteaz cercetrile actuale
ctre o posibil cauz inflamatorie a obezitaii, observndu-se o prevalen a infeciilor cu
adenovirusuri de 20-30% la pacienii obezi, fa de doar 5% la cei normoponderali.
Importana diferitor factori alimentari n geneza obezitii
Lipidele. Rolul lipidelor n geneza obezitii este fundamental. Ele sunt cele care
furnizeaz cele mai multe calorii pe gram (9 kcal). Ele trebuie s aduc 30-35% din necesarul
188

energetic zilnic. Alimentele lipidice au cea mai mare densitate energetic deci, pe cel mai mic
volum furnizeaz cea mai mare energie. Induc mai puin sietate dect glucidele. Majoritatea
alimentelor hiperlipidice necesit mai puin efort de masticaie dect alimentele glucidice bogate
n fibre. Iau locul glucidelor n alimentaie. Induc o mai mic termogenez postalimentar dect
glucidele. Aceste elemente induc cel mai mare consum global i o cretere de ansamblu a raiei
(hiperfagie) pentru a menine o greutate alimentar constant a raiei. n rile n care coninutul
de lipide al raiei este crescut, obezitatea este frecvent. Grasimile sunt mai greu reperate n
alimente dect glucidele i aprecierea lor cantitativ este mediocr. Dac pentru glucide exist un
prag de acceptabilitate maxim, nu exist nici o limita pentru creterea plcerii indus de grasimi.
Alimentele hiperlipidice (dar i glucidolipidice cum ar fi ingheata, ciocolata, patiseria) sunt
asociate cu o componenta afectiv important care le antreneaza valoarea hedonic.
Lipidele contin acizi grai saturai, mononesaturai i polinesaturai. Acizii grai sunt
incriminati n creterea colesterolemiei i a LDL colesterolului, de aceea aportul acestora este
recomandat s fie redus la mai putin de 10%. Ei se gsesc n carne gras, unt, brnzeturi, ou.
Acizii grai mononesaturai se gsesc n uleiul de masline i ei trbuie s asigure aprox. 10% din
aportul caloric. Ei au un efect hipolipemiant i indirect antiaterogen. Acizii polinesaturai sunt cei
cu efecte favorabile de scdere a trigliceridemiei i a agregabilitaii plachetare i ar determina
scderea riscului morii subite i al aritmiilor. Acest efect il au n special cei din clasa omega-3,
care se gsesc n untura de peste, nuci i uleiul de soia. Acidul alfa-linoleic scade riscul de infarct
miocardic i cardiomoipatie ischemic la femei. Raportul dintre acizii grai polinesaturai i
acizii grai saturai trebuie s fie >0,8. Sursele de lipide se mpart n surse vegetale i surse
animale, fiind recomandat ca 2/3 din lipide s fie de origine vegetal.
Proteinile pot proveni att din surse de origine animal, ct i din surse de origine vegetal.
Cele de origine animal trebuie s asigure 1/2 din totalul aportului proteic. Acestea au o valoare
biologic mai mare, datorit coninutului de aminoacizi eseniali (din ou fiind de referint). Alte
proteine cu valoare biologic mare sunt cele din carne, pete, lapte i derivate ale acestuia.
Cantitatea consumat trebuie s fie suficient pentru meninerea balanei de azot a organismului.
Proteinile sunt mai puin imlicate n geneza obezitaii, deoarece ele au o slab valoare energetic
(un gram de protein furnizeaz 4 kcal). Proteinele induc o sietate esential. Au o termogenez
important i sunt puin stocate. Dac sunt asociate cu lipide efectele lor se modific. Este
necesar ca ele s aduc 15% din aportul energetic zilnic, fiind necesare minim 0,8g/kgc/zi. Au
efect defavorabil ca o alimentaie hiperproteic n prima copilrie cnd sunt susceptibile de a
induce o multiplicare a numarului de adipocite[1].
Glucidele trebuie s fie n cea mai mare parte reprezentate de glucide complexe i doar n
mic masur de glucide simple, rapid absorbabile. Ele trebuie s furnizeze 50-60% din aportul
energetic zilnic.
Alimentele glucidice au un volum important i o slaba densitate energetic n valoare de 4
kcal pe gram. Au putere de sietate ridicat, dar mai mic dect cea a proteinilor, necesitnd un
efort de masticaie important. Ele antreneaz o termogenez postprandial mai ridicat dect
lipidele. Consumul lor induce o activitate a sistemului nervos simpatic. Induc propria lor oxidare
n funcie de aport, fiindc au o capacitate slab de stocare; n supraalimentaie glucoza este
oxidat cu prioritate. Energia este eliberata sub form de caldur. Creierul, eritrocitele i
medulara renal sunt consumatoare principale de glucoza. Toate obsevaiile epidemiologice arat
c n arile unde aportul de glucide este crescut obezitatea este rar. Indicele de mas corporal
(IMC) este mai scazut la vegetarieni dect la nonvegetarieni.
n citeva cazuri, glucidele pot favoriza cretere ponderal: cnd contribuie printr-un aport
care depaete cheltuielile i antrenaz stocajul de lipide; cnd sunt prezente n alimente care
conin i lipide i sunt consumate n exces; n cazul n care sunt absorbite ca buturi ndulcite la
distanta de masa (mai mult de o ora) cnd organismul nu le contabilizeaz ca raie energetic i
nu realizeaz adaptarea asupra prizelor alimentare care urmeaz; daca au un index glicemic
ridicat i putere insulinosecretorie important, n acest caz activitatea lipoproteinolipazii (LPL)
conduce la stocajul lipidic.
189

Fibrele alimentare se gsesc n special n fructe, legume i cereale integrale[5]. Ele nu pot
fi digerate de organismul omului, deoarece acesta nu secret enzime care s le digere. Ele mresc
greutatea i volumul bolului fecal (concomitent l nmoaie), diminund astfel riscul de
constipaie; induc o stare de sietate, scad pofta de mncare, nu produc acumularea grsimii n
corp sau creterea n greutate, avnd ca repercursiune scderea greutaii corporale. La acelai
volum, dietele bogate n fibre alimentare sunt mai srace caloric. Se recomand un aport zilnic
de 25-35 g, n dependen de virst i sexul subiectului.
Prezena fibrelor n raia alimentar reprezint un beneficiu important la nivelul tubului
digestiv. Aceste fibre, prin deplasarea lor prin tubul digestiv, actioneaz ca o matur, ndepartnd
resturile i toxinele care se acumuleaz n tractul digestiv. Daca acest efect de curare nu ar
exista, infecia din tubul digestiv nu ar fi de stpanit. Ele mai au i alte beneficii cum ar fi:
controlul glicemiei din sange, scderea colesterolului, reducerea absorbiei grsimilor. Dei nu
furnizeaz nutrienii n mod direct, sunt tipuri de fibre ce constituie hrana bacteriilor saprofite din
tractul intestinal, contribuind la accelerarea digestiei i impiedicnd microbii s provoace infecii.
Exist dou tipuri principale de fibre ce se deosebesc prin modul n care reacioneaz cu
apa: fibrele insolubile i fibrele solubile. Fibrele insolubile nu se dizolv n ap, ci se umfl n
intestin i acioneaz ca o matur, eliminnd substanele nedigerabile. Acestea sunt celuloza,
tariele de gru i, n general, fibrele care se afl n frunzele plantelor, cojile fructelor i
legumelor i cerealelor integrale. Nedizolvndu-se n ap, ele o absorb contribuind la marirea
volumui maselor fecale i prevenind apariia unor boli cum sunt cancerul de colon, sindromul de
colon iritabil i altele. Fibrele solubile sunt cele care se dizolva n apa, trec prin tractul digestiv,
leaga acizii biliari i colesterolul astfel ncat s nu fie absorbit din intestin. Aceste efecte benefice
sunt furnizate de trele de ovaz, orz, mazare, fasole uscat.
Indigenii africani consumau fibre n cantitate foarte mare i aveau o inciden foarte
scazut a cancerului de colon, diverticulozei, litiazei biliare, apendicitei, bolii hemoroidale i a
unor boli cardiovasculare.[7]
Alcoolul. n organism alcoolul este fie oxidat, fie eliminat i niciodat depozitat (precum
grasimile). Cu toate acestea consumat n cantiti moderate are efecte multiple care favorizeaz
dezvoltarea obezitii. Alcoolul determin diminuarea oxidrii lipidelor, ceea ce contribuie la
stocajul lor; induce o termogenez stabil i stimuleaz apetitul antrennd astfel un efect
hiperfagic. Consumul de alcool are o contribuie substanial n etiologia obezitii din cauza
aportului caloric crescut i anume de 7 kcal/g.
Alimentaia trebuie s aduc i necesarul zilnic de minerale, vitamine hidrosolubile i
liposolubile, indispensabile unui organism sntos. Aportul de lichide trebuie s fie de cel puin 2
litri pe zi, iar sarea s nu depaeasc 6 g/zi. Pentru a asigura aportul tuturor acestora este necesar
ca alimentaia s fie ct mai diversificat.
Cea mai important mas a zilei ar trebui s fie micul dejun, aceasta deoarece activitatea
zilei care tocmai ncepe necesit efort fizic care se realizeaz prin consum energetic. Organismul
uman se afl dupa un repaus alimentar de 10-12 ore, secreia gastric fiziologic se afl la nivelul
maxim ntre orele 7 - 9 ale dimineii, activitatea splinei i pancreasului este maxima ntre orele 911, iar activitatea cerebral este mai intens n prima parte a zilei. n concluzie, renunarea la
masa de dimineat predispune la oboseal matinal (prin deficit energetic)..
Neglijarea micului dejun, pe lang cele expuse, predispune la tulburari neuro-vegetative
i diabet zaharat. Am menionat c activitatea pancreasului este maxim ntre orele 9-11, ca
urmare secreia de insulin este maxim n acest interval, ceea ce determin oscilaii ale
glicemiei n sensul scderii acesteia. Prima suprare va aprea la nivelul celulei nervoase care
nu are rezerv de glucoz ca alte organe i care-i va striga nemulumirea prin determinarea
senzaiei de foame. Scderea concentraiei combustibilului reprezentat de glucoz se va
manifesta printr-o capacitate de concentrare sczuta, nervozitate, iritabilitate, tremor. Rezultatul
va fi foamea de la ora 10 sau 11 care n timp se poate complica cu tulburari ale secretiei de
insulin i scderea toleranei la glucoz ceea ce poate duce la ngraare i diabet.
Studiile de specialitate au artat c cei care iau micul dejun au rata metabolic de 3-4 ori
190

mai mare comparativ cu cei care renun la el (caloriile din alimentele consumate n cursul
dimineii sunt arse mai uor pe parcursul zilei, deci nu ne stric silueta, dimpotriva contribuie la
un control mai bun al greutii), factorul de coagulare al sangelui este mai mic, ceea ce se traduce
printr-o circulaie mai buna, nivelul colesterolului este mai mic[6].
Este important nu doar s ne asigurm necesarul caloric dintr-o propoie corespunzatoare a
principiilor alimentare, ci i s fragmentm aportul alimentar n mai multe mese, dupa principiul
"mannca puin i des". Sunt necesare trei mese principale i doua gustri, cu evitarea
consumului de alimente ntre acestea. E util stabilirea unui orar al meselor, care e bine sa fie
respectat, pe cit de posibil, zi de zi. Consumul de apa n timpul mincarii este nedorit, deoarece
acesta spala sucul gastric fiind n detrimentul unui mod de via sntos. Apa se bea nainte sau
dupa masa cu 15-1h (n dependent de tipul mncrii).
Mncarea n fug este interzis, deoarece impulsul de la crier ca organismul e saturat
ntirzie i deaceea subiectul dat tinde s consume mai mult dect este necesar. Seara
metabolismul este mai atenuat, de aceea consumul de alimente ingerate n acest timp predispune
spre obezitate.
S-a demonstrat c persoanele cu o alimentare hipocalorica sunt mai energici si au o durata
de viaa mai mare.
Complicaiile induse de obezitate. Obezitatea produce repercursiuni devastatoare.
Complicaiile ce intervin sunt numeroase i diverse:
diabet zaharat de tip II;
hipertensiune arterial;
insuficien cardiac (n apariia ei joaca rol travaliul crescut impus inimii de obezitate,
hipertensiunea arterial asociat, precum i infiltraia gras a muchiului cardiac);
ateroscleroza apare mai frecvent i mai devreme la bolnavul obez (cu cel putin 10 ani fata de
normoponderal). Dac se ine seama de frecvena, severitatea i mortalitatea crescut prin
complicaiile aterosclerozei (infarcte miocardice, accidente vasculare cerebrale), se inelege
gravitatea acestei complicaii la obezi;
varicele reprezint una dintre cel mai des ntalnite complicaii, localizate la nivelul
membrelor inferioare;
tulburari de static: cifoza dorsal, lordoz cervical, picior plat, spondiloze, artroza soldului,
poliartroze sau numai durerea articular semnalata la 70% dintre obezi;
dintre complicaiile pulmonare: bronita acut i cronic, emfizemul pulmonar, dispneea de
efort datorit scderii capacitaii vitale, uneori hipertensiunea pulmonara.
complicaiile digestive sunt: hipotonia biliar, litiaza biliar, constipatia cronic, hepatita
cronic prin steatoza hepatic (infiltraie gras a ficatului);
complicaiile cardiovasculare;
complicaii la nivelul sistemului nervos central: cefalee, astenie, vertije, uneori obsesii,
anxietate;
complicaii cutanate: intertrigo, piodermite, seboree;
complicatii ginecologice: amenoree, tulburri de ciclu ovarian;
A fi obez nseamna a avea o viaa adumbrit, deoarece consecinele ei reprezinta un veritabil
impediment pentru ncadrarea in limitele unei viei normale.
Optai pentru o alimentaie corect, pentru un regim dinamic si bucurai-v de viaa!
Bibliografie
1. A se vedea: Bray GA. Treatment for obesity: a nutrient balace/nutrient partition approach.Philadelphia, 1991, p.87-93.
2. A se vedea: Lacat D. Obzitatea. - Iai, 1978, 100-115.
3. A se vedea: Prentice A. Actiology of obesity: metabolic factors.- Philadelphia, 2000, p.61-69
4. http://beautycenter.ro/articol/557/celulita-prevenire-si-ingrijiri
5. http://dieta.romedic.ro/diete/Fibre_alimentare_0614/Ce_sunt_fibrele_alimentare?
_01998.html
191

6. http://www.diperia.ro/2008/04/01/importanta-micului-dejun/
7. http://www.diperia.ro/2008/04/01/fibrele-alimentare/

192