1. Mn Peroxidasa.

Rojo Fenol

Buffer Succinato:
Solucin A: 0,2 M cido Succininco
(23,6g/L)
Solucin B: 0,2 M Hidrxido de Sodio
(18,3 ml)
pH4,5: 25 ml Solucin A + 18,3 ml
de Solucin B diluido en un total de
100ml

Sustrato: 100 ml buffer

Succinato pH: 4,5, SO4Mn4H2O 22
mg y Rojo fenol 10 mg
Adicionar 2,5 ml sustrato/ tubo +
muestra (50-100 l sn)
Calentar de 5-10 min en bao
Mara a 30C

Adicionar 20 microlitros, peroxide

de hidrogeno al 30 %
Incubar a 3C por 5 min

Adicionar 40 l NaOH 5 N.
Purpura y centrifugar

Leer absorbancia a 610 nm,

usar como blanco el reactivo
solo

DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES

0.5 mM ABTS (2,2

azinobis
(3etilbenztiazoline-6sulfonato) en 0.1 M

METODO DNS
Se hace una alcuota 1:50,
tomando 4.9ml de H2O y 0.1ml de
muestra de cultivo agotado,
Mezclar
Tomar 0,5 ml de stock y
adicionarle 0,5 ml de reactivo DNS
en un tubo de ensayo
Agitar; calentamiento al bao
Mara en agua a ebullicin x 5 min

El reactivo DNS est compuesto

por:

Acido 3,5 dinitrosalicilico

Tartrato de Na-K

Hidrxido de Sodio
El NaOH se disuelve en agua
destilada
aadiendo
con
agitacin el tartrato; se aade
agua
hasta
un
volumen
especfico y posteriormente se

Enfriamiento en agua fra x 2 min

Adicionar 5 ml de agua destilada,

agitar
Dejar 15 min en reposo a T
ambiente.
Leer absorbancia a 490nm, con un
blanco sustituyendo los azucares
por agua destilada.

2. LACASA CON ABTS COMO SUSTRATO

Buffer Acetato de Na:
Solucin A: 0,2 M cido actico
(11.55ml/L)
Solucin B: 0,2 M Acetato de Sodio
(16 g de C2H2O2 Na o 27.2 g de C2H2
Na.3H2O/L
pH3.6: 43.6 ml Solucin A + 3.7 ml

27.43 mg ABTS / 100 ml buffer

Ac-Na pH: 3.6

0.5 mM ABTS (2,2

azinobis
(3etilbenztiazoline-6sulfonato) en 0.1 M

Adicionar 2.5 ml/ tubo

Calentar de 5-10 min en bao

Mara a 30C

Adicionar enzima 5-10

Incubar por minutos hasta virar

a verdoso

Leer absorbancia a 420nm, usar

como blanco el reactivo solo