Sunteți pe pagina 1din 9

Determinarea concentratiei

unei solutii prin metoda


spectrofotometrica

I.

Scopul lucrrii

Scopul lucrrii este acela de a determina concentraia unei soluii prin msurarea
absorbanei cu ajutorul unui spectrofotometru n domeniul vizibil, prin intermediul a
dou activiti practice distincte, i anume aflarea lungimii de und la care are loc
maximul absorbiei luminii pentru o substan, prin trasarea spectrului de absorbie,
i aflarea concentraiei unei soluii a respectivei substane, folosind absorbia luminii
prin soluie, la lungimea de und optim.

II.

Teoria lucrrii

Noiuni generale de spectroscopie


Interaciunea radiaiei electromagnetice - definit prin aciunea de propagare a undelor
electromagnetice sub form de unde transversale - cu materia poate fi emisie, atunci
cnd un material emite energie electromagnetic, sau absorbie, atunci cnd energia
electromagnetic este absorbit de un material. Ambele fenomene implic o modificare
a nivelurilor energetice ale particulelor ce compun materialul - atomi i molecule; o
particul primete energie atunci cnd absoarbe radiaie i pierde din propria energie
atunci cnd emite radiaie.
Studiul acestor interacii poart numele de spectroscopie. Prin urmare, spectroscopia
este o denumire generic dat clasei de procedee i tehnici experimentale prin care se
urmrete i se cuantific efectul absorbiei sau emisiei de energie de ctre o prob
supus analizei chimice calitative i/sau cantitative. Cnd se vizeaz procesul de
msurare a interaciei, termenul folosit este cel de spectrometrie; spectrofotometria este
o ramur a spectroscopiei moleculare ce se ocup cu analiza calitativ i cantitativ a
spectrelor de absorbie n domeniul UV-VIS a substanelor organice sau anorganice n
stare lichid.

Spectrometria molecular
Energia unei molecule este dat de cel puin trei tipuri de contribuii: o contribuie
datorat energiei electronilor, o contribuie datorat vibraiei legturilor dintre atomi i
o contribuie asigurat de rotaia unor grupuri de atomi n funcie de alte grupuri de
atomi din interiorul moleculei. Diferena energetic dintre nivelurile electronice este
cea mai mare, urmat de diferena dintre nivelurile vibraionale i n final de diferena

energetic dintre nivelurile rotaionale. Avnd n vedere numrul foarte mare de


niveluri de cele trei tipuri dintr-o molecul, n general spectrele moleculare sunt
spectre continue (spectre de benzi).

Spectro(foto)metria molecular de absorbie n ultraviolet i vizibil (UV-VIS)

Spectrul vizibil de ctre oameni este restrns, descris tipic ntre 400 i 700 nm.
Energiile radiaiilor din domeniul vizibil i ultraviolet apropiat (200 - 400 nm)
corespund n general diferenelor dintre nivelurile energetice ale moleculelor.
Lungimile de und la care fiecare material poate absorbi lumina reprezint o
proprietate dat de diferena dintre nivelurile energetice din moleculele sale. n general
toate substanele absorb n domeniul ultraviolet, cu energie mai mare dect n cel
vizibil; pentru ca o molecul s absoarb n vizibil aceast diferen trebuie s fie mai
redus.
Legturile chimice i gruprile de atomi care provoac absorbia luminii n domeniul
ultraviolet i vizibil se numesc cromofore. De obicei gruprile cromofore conin
electroni cu o mobilitate ridicat, electroni care intr n conjugare cu electronii din
molecula de baz. Atunci cnd molecula absoarbe lumin cu lungimea de und n
vizibil i transmite sau reflect alt lungime de und, molecula se coloreaz.Cu ct
lungimea de und este mai mic, frecvena crete, la fel i energia radiaiei. Radiaia din
domeniul vizibil care acioneaz asupra cromoforului este absorbit de acesta i
determin un salt energetic a electronului dintr-un orbital cu energie joas pe un
orbital electronic cu energie nalt. Absorbia de ctre un material a unei culori va
cauza apariia acestuia (pentru ochiul uman) n culoarea situat diametrical opus pe
cercul culorilor complementare n spectrul vizibil, culoarea complementar.

Spectrele de absorbie molecular sunt diferite de la un tip de molecul la altul.


Spectrometria de absorbie molecular poate fi aplicat pentru substane n stare
solid, lichid sau gazoas, dar este folosit n mod uzual pentru analiza lichidelor, n
general soluii ale substanei de interes. Forma spectrului de absorbie pentru o
substan chimic poate fi diferit ntre substan n forma pur i o soluie a aceleiai
substane sau de la o soluie la alta, dac solvenii sunt diferii. Lund n considerare
faptul c informaiile asupra structurii unei molecule oferite de aceast tehnic sunt
limitate, spectrometria UV-VIS este folosit n general pentru aplicaii cantitative a
determinarea unei concentraii necunoscute a unei substane de identitate cunoscut
dintr-o prob.
Spectrul de absorbie, numit i spectru de emisie, al unei substane aflate ntr-o soluie
depinde i de concentraia acestuia; cu ct substana este mai diluat, cu att spectrul
este mai aplatizat, ceea ce nseamn c diferenele ntre maxime i minime sunt mai
mici.
n domeniul medical, spectrometria UV-VIS este folosit pentru analiza fluidelor
biologice; acestea fiind foarte complexe, este necesar cuplarea cu o tehnic prin care
se separ n primul rnd componentele probei. Interacia materiei cu radiaia
electromagnetic este folosit att ca metod de diagnostic, ct i ca metod de
tratament, cu aplicaii n scintigrafie, radiografie, tomografie computerizat cu raze X,
rezonan electronic de spin, spectroscopie prin rezonan magnetic in vivo,
imagistic prin tomografie de rezonan magnetic nuclear i multe altele.
Metoda spectrofotometric se bazeaz, prin urmare, pe analiza unui fascicul de lumin
care trece printr-o soluie. Cu ct sunt mai multe particule prezente n soluie, cu att
lumina va fi din ce n ce mai atenuat - intensitatea ei scade.
Se constat c intensitatea luminii emergente depinde i de ali parametri n afar de
concentraie, fenomen descris complet de legea Beer - Lambert

I = I0 10-Cl
unde I0 = intensitatea luminii incidente pe prob, I = intensitatea luminii transmise
(emergente din prob), = coeficientul de extincie, care depinde de natura chimic a

substanei si de lungimea de und a luminii incidente, C = concentraia substanei


absorbante, l = lungimea drumului optic (grosimea probei).
Sursa de lumin monocromatic genereaz un fascicul incident de intensitate I0, care
strbate soluia unei substane de concentraie C. Drumul strbtut prin soluie are
lungimea l, iar n urma parcurgerii soluiei, intensitatea fasciculului este atenuat
pn la intensitatea I.
Se pot defini additional dou mrimi care caracterizeaz procesul de absorbie,
transmitana (T) i absorbana (A). Transmitana reprezint fracia din lumina incident
care poate prsi proba, mai exact este transmis; dac se logaritmeaz inversul
transmitanei rezult o mrime denumit absorban, numit n trecut i extincie.

T = I/I0 = 10-Cl
A = lg 1/T = lg I0/I = C l
Ambele mrimi sunt adimensionale, astfel putem determina concentraia unei
substane msurnd absorbana. Pentru ca precizia msurtorii s fie ct mai
apropiat de realitate, absorbana trebuie msurat la lungimea de und (max)
corespunztoare maximului de absorbie a substanei.
Stabilirea maximului de absorbie se realizeaz analiznd spectrul de absorbie
A = f(), iar max este lungimea de und la care valoarea absorbanei este maxim. n
momentul n care se tie lungimea de und la care substana prezint maximul de
absorbie se poate trasa graficul variaiei absorbanei A n funcie de concentraia C,
A = f(C) cu valorile absorbanei msurate la max corespunztoare maximului de
absorbie. Astfel se poate determina C pentru orice alt soluie de concentraie
necunoscut.
Graficul trebuie s fie o dreapt care n mod ideal trece prin origine. Odat trasat
graficul, se poate determina concentraia necunoscut prin msurarea absorbanei
soluiei la aceeasi si interpolare pe grafic.
III.

Descrierea aparatului

Materiale necesare
-

spectrofotometru digital sau analogic

eprubete sau cuve de spectrofotometru

soluia de concentraie necunoscut X, a crei concentraie dorim s o

determinm
-

soluii de referin ale aceleiai substane, cu concentraii cunoscute

solventul pur al soluiei

Componentele unui spectrofotometru monofascicul


cel mai simplu principiu constructiv
-

surs de radiaii care trebuie s emit toate lungimile de und din domeniul

investigat
-

monocromator, dispozitiv ce selecteaz din ceea ce emite sursa o singur

lungime de und (poate fi din punct de vedere constructiv cu prism, cu reea de


difracie sau cu filtre optice)
-

solventul (blanc), folosete la etalonarea de T = 100% i T = 0%

proba, pentru care msurm absorbana (sau transmitana)

detectorul, care transform lumina emergent n current electric (fotocelul,

fotomultiplicator sau fotodiod)


-

amplificator
nregistrator, microampermetru gradat liniar n % pentru transmisie i

logaritmic pentru extincie sau afiaj digital

IV.

Modul de lucru

Intrucat nu exista constructiv posibilitatea de a masura direct intensitatea luminii


incidente I0 la iesirea din sursa si pentru a elimina efectul absorbtiei date de solventul
probei, masurarea I0 se face introducand in compartimentul probei o solutie blanc,
care contine toate componentele probei in afara de substanta de determinat. Ajustarea
spectrofotometrului pentru blanc trebuie facuta de fiecare data la schimbarea lungimii
de unda. Pentru aplicatii in care este necesara inregistrarea rapida, in cateva minute,
a unui spectru sunt folosite aparate cu un principiu constructiv modificat, numit
dublu fascicul, cu doua compartimente pentru solutii, unul pentru proba si unul
pentru blanc. Aparatul masoara cvasisimultan I0 (intensitatea luminii transmise de
blanc) si I (intensitatea luminii transmise de proba) fara a fi necesara schimbarea
manuala intre cele doua solutii, iar inregistrarea spectrului este controlata automat.
Aparatele monofascicul sunt folosite tipic pentru aplicatii de rutina la care se masoara
absorbanta la o singura lungime de unda, spre exemplu cand spectrul substantei este
deja cunoscut, si sunt de asemenea mai mici si mai compacte decat cele dublu
fascicul.
Pentru substanta de cercetat, trebuie sa aflam lungimea de unda max la care are loc
maximul absorbtiei. Pentru aceasta consultam o baza de date de spectre sau trasam
un spectru al substantei, care sa investigheze lungimile de unda din domeniul vizibil.
Odata aflata max, putem determina concentratia oricarei solutii a acestei substante,
daca avem la dispozitie cateva solutii standardizate, de concentratii cunoscute, ale
acelei substante, masurand absorbtia la max in solutiile standardizate si in solutia de
concentratie necunoscuta.
Determinarea maximului de absorbtie prin trasarea unui spectru
Pentru solutia de investigat dorim sa trasam spectrul de absorbtie, care necesita
masurarea absorbtiei prin solutie a luminii la mai multe lungimi de unda.
Spectrofotometrul analogic
1. Prin manevrarea butonului 2 se alege lungimea de unda, 400 nm pentru
inceput
2. In cuva aparatului se introduce blancul eprubeta cu solventul
3. Se pozitioneaza comutatorul 1 pe pozitia 0 (se inchide fluxul luminos prin
proba)
4. Din butonul 3 se regleaza acul aparatului de masura pentru a indica
transmisia T=0%
5. Se pozitioneaza comutatorul 1 pe pozitia I (se deschide fluxul luminos)
6. Din butonul 4 se regleaza acul aparatului de masura la indicatia T=100%

7. Se introduce eprubeta cu solutia de cercetat si se citeste extinctia E


(absorbanta) pe scala de sus a aparatului de masura, scala logaritmica de la
dreapta la stanga; se noteaza valoarea in tabelul cu rezultatele
8. Se repeta operatiile 2-7 pentru celelalte lungimi de unda
Observatie: pasii 2-6 trebuie repetati la fiecare schimbare a lungimii de unda;
activitatea aceasta, denumita setare de blanc, este necesara pentru a compensa
faptul ca si solventul si peretii eprubetei au o absorbanta a lor.
Spectrofotometrul digital
1. Se porneste aparatul din butonul de pornire si se asteapta circa 5 minute, cu
2.
3.
4.
5.

capacul aparatului inchis, pentru ca aparatul sa-si faca autoverificarea


Din butonul 3 se alege modul absorbanta, afisat pe ecran
Din butoanele 1 si 2 se alege lungimea de unda; se porneste de la 400 nm
Se introduce blancul si se inchide capacul
Se apasa butonul 2; aparatul va regla automat absorbanta la 0 pentru solutia

de blanc introdusa
6. Se introduce cuva cu solutia de cercetat, se inchide capacul si se citeste
valoarea absorbantei pe ecranul inregistratorului (I) sau se tipareste prin
apasarea butonului 4; se noteaza valoarea in tabelul de rezultate
7. Se repeta punctele 3-6 pentru celelalte lungimi de unda
Observatie 1: pasul 5 setarea de blanc este necesar pentru a compensa faptul ca
si solventul si peretii cuvetei au o absorbanta a lor. Acest pas trebuie reluat la fiecare
schimbare de lungime de unda.
Observatie 2: aparatul nu se stinge pana la terminarea lucrarii practice (lampa are un
numar limitat de aprinderi/stingeri)
! Sunset Yellow este un compus sintetic folosit drept colorant alimentar, notat E110 pe
etichetele produselor alimentare. Numarul mare de legaturi duble conjugate face ca
acest colorant sa absoarba in domeniul vizibil, mai exact in domeniul bleu-violet.
Culoarea perceputa de ochiul uman va fi, prin urmare, galben-oranj, complementar
culorii absorbite.

Bibliografie
Lucrari practice de Biofizica si Fizica Medicala, EDITURA UNIVERSITARA CAROL
DAVILA, 2013
www.biblioteca.regielive.ro, referat Spectrofotometrie
Curs Elemente de fotobiologie
www.creeaza.com
http://www.chm.davidson.edu
www.descopera.ro

S-ar putea să vă placă și