Identificarea spirochetelor.

Diagnosticul de laborator al leptospirozei

Obiective:
1. Cunoasterea principalelor caractere utilizate pentru identificarea spirochetelor
2. Cunoasterea metodelor de diagnostic direct in leptospiroza
3. Cunoasterea metodelor de diagnostic serologic in leptospiroza
1. Identificarea spirochetelor
Treponema
Caractere
microscopice

Mobilitate

Caractere de
cultura

Borrelia

Leptospira

bacterii Gram-negative spiralate, mobile

subtiri,
capete efilate

groase

spire regulate

spire laxe si neregulate

- pot fi observate in
microscopie pe fond
intunecat si pe preparate
colorate prin impregnare
argentica
- nu pot fi observate pe
preparate colorate Gram sau
Giemsa

- pot fi observate pe
frotiu colorat Giemsa
sau Wright si in
microscopie pe fond
intunecat

- pot fi observate in
microscopie pe fond
intunecat
- nu pot fi observate pe
preparate colorate Gram
sau prin impregnare
argentica

fibre axiale periplasmice

inrulate in jurul
protoplastului

fibre axiale
periplasmice

strict anaerobe sau

microaerofile
- foarte pretentioase nutritiv
speciile patogene nu
cultiva pe medii acelulare

microaerofile

axistil format din 2

flageli periplasmici in
jurul carora se inruleaza
protoplastul
- strict aerobe

- pretentioase nutritiv
- cultiva lent

fine,
unul sau ambele capete
indoite in carlig
spire regulate, stranse,
putin adanci

- pretentioase nutritiv
- temperatura optima 2830C

2. Diagnosticul direct in leptospiroza:

-

Clasificarea leptospirelor:
tulpinile patogene sunt reunite n specia Leptospira interrogans (e.g. serovaruri Icterohaemorrhagiae,
Autumnalis, Canicola, Pomona)
tulpinile nepatogene au fost plasate n specia Leptospira biflexa (e.g. serovar Patoc )

Produse patologice:
- snge
- LCR
- urin
- postmortem: microfragmente de ficat, cortical renal, plmni, suprarenale.

Examen microscopic:
a. Microscopia pe fond ntunecat:
indicat pentru sedimentul urinar i LCR
n snge expansiunile fibrilare ale hematiilor pot fi confundate cu leptospirele
leptospirele = filamente regulat spiralate, luminiscente, foarte mobile, descriind micri de sfredel
metod lipsit de sensibilitate i nespecific
b. Imunofluorescena direct = metod specific

Cultivarea:
Izolare din snge sau LCR n primele 10 zile de boal;
Izolare din urin dup prima sptmn de boal, timp de 3 luni;
Sunt necesare mai multe probe deoarece concentraia leptospirelor poate fi sczut;
Cultiv optim la 28-30 C, n aerobioz, pe mediu de cultur lichid Korthof mbogit cu ser de iepure;
Culturile se urmresc pn la 30 de zile prin microscopie pe fond ntunecat la intervale de 5 zile.

Tehnici de biologie molecular

- PCR
- Metode de hibridizare direct
3. Diagnosticul serologic in leptospiroza
Reacia de aglutinare microscopic = metoda de referin
- msoar capacitatea serului pacientului de a aglutina leptospire vii;
- utilizeaz antigene specifice de tip preparate din tulpini patogene;
- practicat doar n laboratoarele de referin.
Aglutininele apar n a doua sptmn de boal.
Titrul la pacienii infectai este > 100
Teste alternative:
- hemaglutinarea indirect
- aglutinarea pe lam
- ELISA
mai puin sensibile sau specifice
folosesc antigene preparate din tulpini saprofite

n sal se gsesc:
microscop cu fond ntunecat, ulei de cedru;
suspensie de leptospire vii nepatogene;
pipet, vrfuri;
lame de microscop i lamele;
cristalizor cu soluie dezinfectant.