UNIVERSITATEA POLITEHNICA BUCURETI

FACULTATEA DE CHIMIE APLICATA I TIINA MATERIALELOR

MASTER: EXPERTIZAREA PRODUSELOR CHIMICE, ALIMETARE I A MATERIALELOR

Autentificarea nivel calitativ al ceaiul verde (Camellia sinensis (L.))

n funcie de continutul de catechine principale i cafein

Prof. Dr. Ing. Ana Maria Joceanu

Masteranda: Docan Georgiana

Bucureti
2015

1. Introducere
Ceaiul verde ( Camellia sinensis ( L. ) ) este una dintre cele mai populare buturi din
ntreaga lume, care este de mare interes datorita proprietatilor sale benefice medicinale.
Exist tot mai multe dovezi c substanele specifice gsite n frunzele de ceai pot mbunt i
starea general de sntate . Cercetari recente sugereaza ca unii compusi , inclusiv cofeina si
catechine gsite n frunzele de ceai poate juca un rol important pentru a preveni bolile
cardiovasculare, gastrit cronic i unele forme de cancer . Cei mai importanti constitueni
chimici care influeneaz gustul i aroma de infuzii de ceai sunt polifenoli, flavonoli ,
cafeina , zaharuri, aminoacizi i compui volatili de arom din frunze de ceai verde. S-a
demonstrat c exist o relaie ntre nivelul de calitate a ceaiul verde i coninutul su de
catechine principale .
Conceptul de indice catechine ( CI ) a fost oferit pentru a estima calitatea ceaiului
verde . Aceti compui sunt principalii responsabili pentru gustul caracteristic astringent i
amar de brews ceai . n afar de aceste catechine , cafeina este un alt factor important n
determinarea nivelului de calitate de ceai verde . Este recunoscut ca un factor important al
calitii , datorit efectului su stimulativ. n contrast cu catechine din frunze de ceai verde ,
cofeina poate spori aroma de ceai perceptibil. Un numr mare de nutraceutice sunt derivate
din ceaiul din plante. n prezent, ceaiul verde ( Camellia sinensis ) este cultivat n special n
China i India ( Graham , 1992). Exist diferite tipuri de ceai , pot fi clasificate n trei mari
categorii n funcie de procesul de fabricaie ca nefermentate, fermentate i semi- fermentate (
Prayong , Weerapreeyakul, si Sripanidkulchai, 2007). Prima categorie include ceai alb i
verde , n timp ce a doua categorie este reprezentat de ceai negru si ceai pu-erh ( Bansal et al
, 2013 ).

Fig. 1. Structurile chimice ale catechine i cafein.

Clasificarea calitii ceaiului poate fi realizata n funcie de mai multe instrumente

analitice . Cu toate acestea , clasificarea soiurilor de ceai n funcie de compozi ia chimic a
oferit rezultate excelente . Componentele volatile, aminoacizii liberi i un coninut de metal,
au fost folosite ca parametri chimici pentru a diferenia soiuri de ceai. Pn acum ,
compoziiile chimice din frunze de ceai verde nu au fost utilizate pentru identificarea
nivelului de calitate a ceaiului .
n aceast lucrare , cinci catechine principale ( EGCG , EGC , ECG , CE i C) i
cafein din frunze de ceai verde au fost msurate simultan prin HPLC . Rezultatele au fost
folosite pentru a identifica nivelul calitati ceaiului verde .

2. Pregtirea probelor i preprocesare

Patru categorii de ceai verde au fost investigate n aceast lucrare , acestea au fost
achiziionate de la supermarketul local n Zhenjiang City din China . Toate probele de ceai
erau deja depozitate n recipiente nchise ermetic timp de patru luni . Lund in considerare
eterogenitatea probelor de ceai , s-a acordat atenie mare n etapa de e antionare . Probele au
fost mrunite nainte de analiz.
Dup cum tim, gradul calitai ceaiului este determinat de degusttori de ceai
acreditati n calitate totala inclusiv, aroma i aspectul ceaiului . n general , atribuile interne
(inclusiv gustul i aroma ) de ceai verde sunt adesea importante ca referine n determinarea
gradului sau. Atributele interne ale ceaiului verde sunt adesea legate cu multe componente,
cum ar fi alcaloid i catechine , care sunt legate de zonea geografa i climatic.
n experiment , 1,500 0,001 g de pulberi de ceai au fost ponderate cu exactitate ca
prob i fiecare grad de grup avea 15 probe , astfel , n toate 60 de probe pentru 4 grupuri de
grade. nainte analizei prin HPLC, o parte din prob de preprocesare a fost analizata : fiecare
prob ( 1,500 0,001 g de pulberi de ceai ) este extrasa de dou ori cu 80 ml de 70 % solu ie
apoas care conine metanol fiecare timp de 30 minute, la o temperatur de 80 C . Dup
rcire , extractele sunt centrifugate la 3500 rpm timp de 10 minute . Fazele lichide din ambele
extracte sunt colectate ntr- un vas de 250 ml i se aduse la volum cu 70 % solutie apoas care
contine metanol . Dupa care ceaiul este filtrat printr-un filtru cu membran de 0,45 pm ,
diluat de 5 ori cu ap distilata i analizat imediat cu HPLC.

2.1. Condiii de cromatografiere

Pentru a determina coninutul de catechine i cafein , metoda RP-HPLC a fost
aplicata n seria Shimadzu LC - 20A ( Shimadzu Co. , Kyoto , Japonia ) . Coloana utilizat a
fost o coloan Shim - Pack ODS - VP - Rx C18 cu 4,6 mm x 250 mm (id x lungime ) i 5 pm
dimensiunea particulei nominal . Debitul a fost stabilit la 1,0 ml / min i volumul injectat
este de 10 pl . Temperatura coloanei a fost meninut la 35 0,5 C utiliznd un cuptor

coloan. Catechinii separri sunt verificate deSPD - 20A UV - detector , care a fost stabilit la
278 nm . Separrile HPLC ale catechine i cafein sunt prezentate n Fig . 2 .

Fig. 2 .Separare HPLC de catechine i cafein : ( a) cromatogram de catechine i cafein

ca standarde calibrari ; ( b ) cromatograma probei de ceai .

2.2. Standarde i calibrare

Curbele standard pentru toate standardele au fost reprezentate grafic prin injectarea a
6 tipuri de amestecuri standard i au fost obinut suprafa cu peak-uri (vrfuri). Un grafic
standard a fost obinut prin trasarea concentratiei fa de suprafa. Toate peak-urile
(vrfurile) au fost reprezentate grafic i integrate cu ajutorul software-ului . Suprafaa i
timpul de obtinere a peack-urilor analizei au fost comparate cu cele ale standardelor
respective .

3 Rezultate i interpretri
n aceast lucrare , 60 de probe de ceai au fost ncercate , i fiecare grad are 15 probe .
ase compui din coninutul de probe de la fiecare grad au fost msurate simultan prin HPLC
aa cum se arat n Tabelul 2. Acestea au fost folosite pentru a identifica nivelul de calitate al
ceaiului verde i ase descriptori chimici.
Tabel1. Coninut (% w / w, baz uscat) de catechine i cafein n probe de ceai verde.
Grade
Grade 1

S.N.

Parametri

15

Gam

EGC

CAF

EC

EGCG

ECG

2.8134.794

0.981-1.400

2.5013.653

0.7201.338

5.86710.62

1.3374.060

Medie
S.D.

3.359
0.461

1.144
0.129

3.178
0.375

0.979
0.147

9.303
1.328

3.468
0.755

Grade 2

15

Gam
Medie
S.D.

2.5434.067
3.261
0.398

0.6581.198
0.916
0.164

2.1993.473
2.892
0.388

0.7571.398
0.977
0.165

5.9629.747
8.448
0.944

1.9323.974
3.332
0.512

Grade 3

15

Gam
Medie
S.D.

2.9693.692
3.423
0.201

0.7901.210
1.004
0.117

2.4203.414
2.894
0.301

0.7331.026
0.947
0.078

7.790-10.414
9.365
0.808

1.6883.771
2.569
0.850

Grade 4

15

Gam
Medie

3.6694.530
4.037
0.292

0.7261.106
0.853
0.126

2.1662.841
2.514
0.193

0.7201.610
0.897
0.211

8.2429.153
8.619
0.260

1.0222.022
1.639
0.245

S.D.

Cromatografia lichid de nalt performan (HPLC) a identificata la nivel de calitate

al ceaiului verde, prin msurarea de catechine i cafein coninuta. Patru categorii de ceaiuri
verzi de ardere au fost ncercate n aceast lucrare. Cinci catechine principale ((-) - galat
epigallocatechin (EGCG), (-) - epigallocatechin (EGC), (-) - galat de epicatechina (ECG), (-)
- epicatechin (CE), i (+) - catechine (C )) i con inutul de cafein au fost msurate simultan
prin HPLC.

3.1. SVC model i de identificare rezultatele

Ca o nou recunoatere a modelului/tiparului vectorului suport chimice/ca o noua
forma chimica de recunoastere , clasificarea vectorului suport ( VPC) a fost aplicat pentru a
dezvolta modelul de identificare. Unii parametri , inclusiv parametrul de regularizare ( R ) i
parametrul kernel ( K) au fost optimizai prin cross- validare . Modelul optim SVC a fost
realizat cu R = 20 i K = 2. Ratele de identificare au fost de 95% n setul de inceput i de 90
% n setul de predicie . Algoritm SVC arat performanele sale excelente n rezultatele de
identificare . Rezultatele generale arat c este posibil s se identifice nivelul de calitate a
ceaiului verde , n conformitate cu msurarea de catechine principale i coninutul de cafein
prin HPLC i SVC recunoasterea formelor.
Tabel 2 Matrice confuya
predicie .

pentru rezultatele de recunoatere din setul de pregatire i

Subset

Grade

Nr. prob

Rezultate obinute

Evaluarea
inregistrari
totate

Grad 1

Grad 2

Grad 3

Grad 4

Set de formare

Grad 1
Grad 2
Grad 3
Grad 4

10
10
10
10

10
0
0
0

0
9
1
0

0
1
9
0

0
0
0
10

95%

Set de predicie

Grad 1

90%

Grad 2
Grad 3
Grad 4

5
5
5

0
0
0

1
4
0

1
4
0

0
0
5

3.2 . Discutarea rezultatelor de identificare

Investigat din tabelul 2 , clasificarea eronat apare adesea ntre grupe de gradul 2 i
grup de gradul 3, datorit calitii lor apropiate. Ceaiul din frunze proaspete sunt adesea
culese la sfritul lunii martie i nceputul lunii aprilie - iulie n fiecare an . Ceaiul verde
prelucrat cu frunze proaspete este cunoscut ca fiind de calitate nalt iar calitatea scade cu
trecerea timpului . Dupa cum stim, ceaiul din aceeai categorie s-ar putea s mprt unele
calitai senzoriale similare, dar totui exist diferene subtile n compui chimici , cum ar fi
catechine i cafein . Frunzele de ceai culese devreme au cteva efecte asupra catechinei i
cafeinei din coninut .Perioada cand au fost culese frunzele de la proba cu gradul 2 este
apropiata de proba cu gradul 3 , astfel , catechine acestora i coninutul de cafein sunt foarte
similare . Acesta ar putea explica clasificarea gresit care apare adesea ntre grupul de gradul
2 i grupul de gradul 3.

4. Concluzii
Metoda HPLC a fost folosit pentru a msura simultan cinci principale catechine i
cafein din ceaiul verde . Coninutul lor a fost folosit ca descriptori chimici pentru a identifica
nivelul calitatati ceaiului verde . SVC ca un instrument de recunoatere a tiparului a fost
aplicat pentru a dezvolta modelul de identificare. Rezultatele totale demonstreaz c HPLC
cuplat cu SVC de recunoastere a formelor poate fi folosit pentru a indica nivelul calitai
ceaiului. Spre deosebire de abordrile BP -Ann i LDA , algoritmul SVC arat performanele
sale excelente n identificarea rezultatelelor . Se poate concluziona c analiza HPLC cu SVC
de recunoastere a formelor are un mare potenial pentru identificarea caliti si a altor
produselor agricole .

5. Concluzii proprii
Acest studiu stabilete un bun exemplu in evaluarea calitaii i ajuta la autentificarea
produselor prin combinarea metodelor HPLC i SVC pentu rezultate bune . Cromatografia
de nalt Performan (HPLC) este o metod uzual utilizat pentru separarea unor
antioxidani de cafeina i catechinele. Analiza HPLC s-a realizat cu ajutorul unui sistem
Shimadzu LC-20A. Pentru a determina calitatea ceaiului verde a fost folosita metoda HPLC
pentru determinarea componentilor catechine (GC, C, EC, EGC, EGCG, ECG, GCG, GC) si
cafein din extracte de ceai verde. Calitatea ceaiului este influentata atat de originea
geografica, cat i de perioada in care sunt culese frunzele , daca frunzele de ceai culese sunt
proaspete ceaiul are un nivel mai ridicat de cafeina dar si de catechine, dar in timp isi pierd
din proprietati si atunci ceaiul ii pierde din calitate.