Sunteți pe pagina 1din 6

Tema 5: Examenul bacteriologic

1) 1.1.Creterea i multimplicarea bacteriilor.1.2.Dinamica


multiplicrii bacteriilor n cultura continu i
discontinu.Importana practic.
1.1.*Creterea mrirea coordonat a masei i volumului
structurilor bacteriene ca rezultat al proceselor de sintez.
* Multiplicarea creterea numrului de celule pe o unitate de
suprafa sau de volum.
- Diviziune binar
- nmugurire (levuri, ciuperci levuriforme)
- Autoreproducere (virusuri)
- Spori (micete)
- Fragmentare (actinomicete)
1.2. Creterea bacteriilor n laborator cultivare.
Se cultiv bacteriile pentru izolarea lor din medii naturale
(prelevate patologice, alimente, ap, etc).
Izolarea bacteriilor se realizeaz pentru:
1. Identificarea mi/o (scop de diagnostic)
2. Testarea sensibilitii lor fa de antibiotice
3. Obinerea unor produi de biosintez (antibiotice, AA),
bioconversie (hormoni steroizi), fermentare (alcooli, acizi organici,
etc), producerea vaccinurilor, probioticelor... Pentru cretere
bacteriile au nevoie de
nutrieni i condiii fizico-chimice adecvate.
Condiiile (principiile) de cultivare
- Surs nutritiv adecvat
- Surs de energie
- Ap
- Temperatura potrivit
- pH adecvat
- Concentraie optim a oxigenului i a CO2
- Presiune osmotic adecvat
* Temperatura de cretere
Exist temperaturi minime, maxime i optime de dezvoltare a
bacteriilor. n raport cu temperatura optim deosebim:
1. Bacterii psichrofile t optim 10-20 C.
Cresc i la 0 C.
2. Bacterii mezofile optimum 30-37 C
(limite 15-45 C)

3. Bacterii termofile optimum 50-60 C


(pn la 95 C)
4. Bacterii hipertermofile (cresc la 70110 C)
* pH
1. Bacterii neutrofile (majoritatea, inclusiv cele
patogene) pH 6-7,5
2. Bacterii acidofile pH 2-6 (Lactobacillus)
3. Bacterii alcalofile pH >8 (Pseudomonas,
Vibrio)
* Presiunea osmotic
1. Bacterii halotolerante (osmotolerante) cresc
n concentraii reduse de NaCl (mediu
izotonic cu mediul intern al gazdei) mi/o
patogene
2. Bacterii halofile prefer concentraii mari de
NaCl (1-30%) stafilococi, vibrioni (Vibrio
parahaemolyticus)
*Oxigenul
1. Bacterii strict aerobe
2. Bacterii microaerofile
3. Bacterii strict anaerobe
4. Bacterii anaerobe aerotolerante
5. Bacterii facultativ anaerobe
2) 2.1.Clasificarea microorganismelor dup sursele de
energie i carbon.2.2.Noiune de microorganism saprofite
i parasite.
2.1 I. Bacterii fotoautotrofe (energie solar, CO2)
II. Bacterii fotoheterotrofe (en. sol., subst.org)
III. Bacterii chemoautotrofe
IV. Bacterii chemoheterotrofe -folosesc energia degajat din
reaciile chimice de oxido-reducere. Ele necesit un substrat
donor de hidrogen (e- i H+) i un substrat acceptor de hidrogen.
n transfer particip
transportori intermediari de electroni (lanul respirator, NAD,
NADH, FAD, etc.)
- Bacteriile chemolitotrofe donorul de H este o
substan anorganic
- Bacteriile chemoorganotrofe donorul de H este o
substan organic (glucoza, lipide...)
2.2.

- Bacteriile care utilizeaz materia organic moart sunt saprofite


(reciclarea materiei organice).
- Bacteriile parazite (obligate, facultative) triesc pe contul
organismelor vii, aducndu-le prejudicii.
3) Bioenergetica.Respiraia microbilor.Mecanismul oxidrii
biologice. Depozitarea i utilizarea energiei.
Mecanismele de obinere a energiei la chemoorganotrofe n
funcie de acceptorul final de H :
* Respiraie aerob. Acceptorul final este oxigenul gazos. Implic
lanul respirator de transport al electronilor asociat MCP. Produs
final H2O sau H2O2 .
* Respiraie anaerob. Acceptori finali compui anorganici
(nitrat, sulfatS).
Transportul de electroni prin lanul respirator.
* Fermentaie. Substratul organic este metabolizat fr
intervenia unui agent oxidant extern. Const n procese de oxred care realizeaz numai o oxidare parial a substratului,
donorul i acceptorul de H+ fiind substane organice. Astfel se
ajunge de la un substrat mai redus la o molecul mai oxidat .
(ex.: fermentare lactic, fermentare alcoolic, acid mixt,
acetoinic, etc).
Fermentaia se poate desfura n prezena O2, dar fr
intervenia acestuia.
O parte din energia eliberat se pierde sub form de cldur sau
poate fi utilizat direct sub form de energie electro-chimic
(fpm) la nivelul MCP (ex.: rotaia flagelilor, transport
transmembranar) sau stocat n compui
chimici macroergici bogai n energie: ATP(sintetizat prin
fosforilare oxidativ sau fosforilare la substrat), fosfoenol-piruvat,
acetilfosfat i acetil-CoA.
n procesele de respiraie se elimin mai mult energie dect din
fermentaie. n procese de fermentare se formeaz
deeuri rejetate de ctre celul.
4) Noiuni de specie, cultur pur i mixt, tulpin i clon.
*Specie- populaie de microoragnisme cu trasturi i nsuiri
commune.

* Cultur pur populaia de microorganisme format din bacterii


de aceeai specie (indispensabil identificrii).
* Cultur mixt populaia de microorganism compus din
bacterii de specii diferite.
* Tulpin populaie microbian constituit din descendenii unei
singure izolri n cultur pur, care va fi studiat ulterior.
* Clon populaie care rezult din multiplicarea unei singure
celule.
5) Examenul bacteriologic.
Examenul bacteriologic const n inocularea (nsmnarea)
prelevatelor pe medii de cultur pentru izolarea culturilor pure de
bacterii (tulpinilor) care vor fi ulterior identificate, testate la
sensibilitate vis-a-vis de antibiotice, eventual conservate.
Examenul bacteriologic const din cteva etape succesive, de la
prelevarea (recoltarea) probelor biologice pn la remiterea
rezultatelor.
6)Etapele de cultivare,izolare, indicare i identificare a
microorganismelor aerobe i anaerobe.
LA AEROBE
-Prelevatul este supus examenului macroscopic
- Dup necessitate , probele sunt supuse pregtirii pentru
investigaie
-Examinarea microscopic
I etap -IZOLAREA CULTURILOR PURE
Scopul: de a obine o cultur pur dintr-un melanj de cellule
bacteriene sau dintr-un produs pathologic.
Tehnici utilizate:
1. Prin epuizarea inoculului pe suprafaa gelozei din cutia Petri
(nsmnare n striuri paralele, nsmnare n cadrane, etalarea
consecutivpe trei cutii).

2. Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n geloz topit i


rcit la 50 C (10-1, 10-2,...), apoi turnate n cutii Petri sau
eprubete.Incubare n termostat la 37 C, 18-24 h (n funcie de
TG).
II etap ACUMULAREA CULTURII PURE
- Examinarea macroscopic a coloniilor crescute (form, culoare,
dimensiuni, etc)
- Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte,
confirmarea puritii culturii
- Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n pant (nclinat)
pentru acumularea culturii pure
- Termostat, 37 C, 18-24 ore
III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE
- Verificarea puritii culturii (frotiu Gram)
- Identificarea culturii pure const n evidenierea unor
caractere specifice ale acestei culturi pentru a o include ntr-o
familie, gen, specie, variant
Se studiaz caracterele:
- Morfologice
- Tinctoriale
- De cultur
- Biochimice
- Antigenice (seroidentificarea)
- De patogenitate
- Sensibilitatea la bacteriofagi (fago-identificarea)
- Sensibilitatea la antibiotic.
LA ANAEROBE
Condiia principal cultivare n absena oxigenului
1. Utilizarea mediilor anaerobe (Kitt-Tarrozzi regenerat - 100 C,
20 min, rcit, acoperit cu vazelin; nsmnarea n geloz n
coloan)
2. Crearea condiiilor de anaerobioz
- Metoda fizic utilizarea anaerostatului
- Metoda chimic n exicator se ntroduc substane ce fixeaz
oxigenul (pirogalol+baz); utilizarea gas-pachetelor
- Metoda biologic Fortner cultivarea concomitent a aerobilor i
anaerobilor.

Recoltarea cu precauie, evitnd contactul cu aerul (n seringi,


utiliznd medii speciale)
I etap MBOGIREA ANAEROBILOR
- nsmnarea prelevatului n 2 eprubete cu mediul Kitt-Tarrozzi
regenerat
- nclzirea unui tub la 80 C, 20 min distrugerea florei
nesporogene
- Incubarea la 37 C, 24-48 h (va avea loc nmulirea anaerobilor)
II etap - IZOLAREA CULTURII PUREDE ANAEROBI
- Studierea caracterelor de cultur tulburarea mediului,
descompunerea bucilor de ficat, etc
- Izolarea culturii pure de anaerobi prin metoda Zeissler
(nsmnarea a 0,1 ml din mediul K-T pe 3 cutii cu geloz-snge
glucozat consecutiv). Incubarea n anaerostat/exicator/gas-pack,
24-48 h
- Metoda Weinberg diluii succesive ale culturii n geloz
glucozat lichefiat i aspirarea n tuburi lungi i nguste, nchise
ermetic. Incubarea n termostat, 24 h
III etap - ACUMULAREA CULTURII PURE
- Studierea macroscopic a coloniilor
- Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte
- Repicarea n mediul K-T regenerat pentru acumularea culturii
pure
- Incubarea n termostat, 24 h
7) Particularitile de izolare a bacteriilor n cultur pur
din prelevate
- A bacteriilor sporulate: nclzirea prealabil a prelevatului 80 C
20 min
- A bacteriilor acido-rezistente: tratarea prealabil cu acid a
prelevatului i neutralizarea ulterioar cu o baz
- A mi/o patogene din prelevate plurimicrobiene: mbogirea
prealabil a florei patogene utiliznd medii de mbogire
- A bacteriilor cu virulen nalt i pretenioase la cultivare:
inocularea la animalele de laborator sensibile