Transferul de zigoi la bovine

Apvloaei Sergiu
Grupa C

Ameliorarea produciei animale a beneficiat de progrese realizate n mai multe domenii:

selecia geneticii, controlul reproduciei, vaccinarea i echilibrul raiilor alimentare. Att pe plan
mondial, ct i n Romnia, pentru perfecionarea continu a procesului de reproducie se aplic cu
succes biotehnologia transferului de zigoi.
Transferul de zigoi este o metod modern de intensibizare a reproduciei ce const n
recoltarea, dup poliovulaie i fecundaie, a zigoilor din aparatul genital al femelei donatoare i
transferul acestora n aparatul genital al femelelor receptoare, unde urmeaz ca acesta s se
dezvolte.
Biotehnologia transferului de zigoi presupune cunoaterea proceselor fiziologice legate de
ovulaie, particulariti ale ciclului sexual al femelelor i evoluia zigotului n primele zile de la
fecundaie.
Din punct de vedere zooeconomic, transferul de zigoi ofer posibilitatea folosirii cu
eficient crescut a rezervelor de ovocite de la animalele cu o nalt valoare zootehnic
(donatoare), prin provocarea maturrii i eliberrii mai multor gamei femeli, cu obinerea unui
numr mai mare de produi de la aceeai femel. Tranferul de zigoi se practic i pentru scurtarea
intervalului dintre generaii. Prin instalarea gestaiei, femela intr n repaus productiv pe ntreaga
durat a gestaiei. Prin practicarea transferului de zigoi, produii de concepie sunt transferai n alte
organisme, lucru care ofer posibilitatea obinerii unor noi produi de la aceea i femel n intervalul
de timp n care, n mod normal, ar fi trebuit s fie gestant. Datorit scurtrii intervalului dintre
generaii, se accelereaz ameliorarea efectivelor de animale.
Din punct de vedere tiinific, transferul de zigoi reprezint o biotehnologie prin intermediul
creia se pot efectua studii tiinifice ale proceselor intime legate de fecundaie i de influien ele
matern i patern asupra produsului de concepie. Produii obinui astfel permit studierea
influienelor factorilor genetici i ai mediului extern asupra dezvoltrii zigoilor, ereditatea grupelor
sangvine, obinerea de animale mozaic de gene, a concentrrii mai multor caractere pe acelai
individ, a instituirii unei profilaxii i terapeutici genetice pentru unele boli de metabolism.

Etapele tranferului de zigoi la vac

1. Selecia i pregtirea vacilor donatoare
Criteriile seleciei donatoarelor sunt:
- performana reproductiv- stare ginecoligic perfect, intervalul dintre parturiie i primul estru s
fie mai mic de 60 de zile, intervalul parturiie-nsmnare mai mic de 80 de zile, indicele de
gestaie s fie mai mic de 1,5;
- superioritate genetic- ritm superior de cretere, nainte i dup nrcare, randament ridicat la
sacrificare, producia de lapte;
- valoarea produsului obinut prin transfer embrionar.
Vacile donatoare trebuie s fie sntoase, s suporte mai multe intervenii de poliovula ie i
recolare de zigoi. Alimentaia lor are un rol foarte important, acestea fiind grupate dup mrime i
necesiti nutriionale, pentru care sunt ntocmite raii ct mai complete care s asigure necesarul de
hran zilnic pentru fiecare grup.
Vacile donatoare, dup poliovulaie, vor fi nsmnate artificial cu material seminal provenit
de la cei mai valoroi tauri.
2. Selecia i pregtirea vacilor primitoare
Este important ca receptoarele s aib aparatul genital integru, de aceea se recomand
folosirea vielelor. Ele trebuie s fie sntoase, fr afec iuni ginecologice (s aib fi e ginecologice
n care vor fi menionate ciclurile sexuale, data i caracterul estrului, durata ciclului sexual), s aib
aceeai talie cu donatoarea (n momentul transferului s aib 80% din greutatea adultului), s fie
apte s nasc descendei cu aceeai greutate la natere ca donatoarele.
Un alt aspect important este ca alimentaia s fie echilibrat.
3. Sincronizarea estrului i ovulaiei la vacile donatoare i primitoare
Se face prin mijloace medicamentoase, urmrind succesiv dou-trei cicluri de clduri la
vacile donatoare, stabilindu-se durata cicluilui. Astfel se calculeaz data apariiei ciclului i, n
funcie de data previzibil, se acioneaz prin tratamente hormonale asupra unui grup de femele
primitoare, avnd ca scop inducerea cldurilor, sincronizate cu cldurile naturale ale donatoarei.
Aceast sincronizare medicamentoas cuprinde mai multe metode:
- metoda cu spirale;
- implantul subcutanat cu progeteron;
- metoda cu PGF2

- metoda cu progesteron i PGF2

4. Inducerea poliovulaiei i nsmnarea arficial a vacilor donatoare

Poliovulaia reprezint provocare eliberrii concomitente la aceeai perioad de clduri a
unui numr sporit de ovocite dect cel caracteristic speciei. n prezent sunt aplicate dou principale
metode clasice de tratament poliovulator:
- gonadotropina seric (PMSG) n doz de 2500-3000 U.I. intramuscular; la dou-trei zile de la
administrare se injecteaz intramuscular o doz de PGF 2, cldurile aprnd la 48-60h dup.
Dezavantajul acestei metode este producerea de chiti ovarieni.
- FSH n doze de 28-40 mg intramuscular sau subcutanat, fracionat diminea a i seara, timp de 4
zile.

Administrarea PGF2 n doz de 500-700 g se face la 72h de la nceperea tratamentului,

estru aprnd la 50-60h de la injectarea prostaglandinei.

Avantajul acestei metode este c nu

produce chiti ovarieni.

n ceea ce privete repetarea tratamentelor de poliovulaie la aceeai donatoare, s-a constatat
c tratamentele pot fi repetate pe intervalul a mai multor luni sau ani, fiind necesar un interval de
cel puin 60 de zile dup ftare n vederea nceperii unui nou tratament.
5. Fecundarea ovocitelor
Ovocitele sunt fecundate n urma nsmnrii artificiale, de regul efectundu-se dou
nsmnri artificiale la 12 i 24h de la nceputul cldurilor observate clinic sau sistematic, dup 56
i 72h de la administrarea PGF2.

6. Recoltarea zigoilor
Zigoii sunt recoltai din cornul uterin, dup ieirea din oviduct, recoltarea realizndu-se de
regul ntre zilele 6-8 dup fecundaie. Se foloseau dou metode de recoltare a zigo ilor, chirurgical
i nechirurgical, metoda chirurgical fiind abandonat n prezent.
Metoda nechirurgical presupune: contenia femelei, anestezia, vidarea rectului, toaleta
vulvei i a regiunii perivulvare, identificarea prezenei corpilor galbeni pe ovar, introducerea
lichidului de splare n lumenul cornelor uterine, splarea acestora, recuperarea lichidului mpreun
cu zigoii, identificarea i recuperarea zigoilor din lichidul recuperat i supus decantrii i
aprecierea morfologic a lor.
Prin examen transrectal apreciem rspunsul femelei la tratamentul poliovulator, palpndu-se
cu atenie ambele ovare i numrndu-se corpii galbeni. Se introduce cateterul de tip Folley prin

cervix pn n cornul uterin, la circa 5-8cm de la bifurcaia coarnelor uterine. Cu o sering se

introduce prin cateter aproximativ 8-15ml de aer cu scopul de a fixa cateterul i a mpiedica
refularea lichidului de splare. Irigarea coarnelor uterine se face continuu, calea de evacuare a
lichidului fiind conectat la vasul de colectare a mediului recuperat printr-un tub de plastic. n cazul
cateterului cu dou ci recuperarea lichidului de splare se face prin calea de admisie cruia i este
adaptat o pies n forma literei y. Evacuarea lichidului se face printr-un tub din plastic conectat la
un filtru de colectare cu orificii foarte mici care au rol de re inere a zigo ilor, lichidul traversnd
filtrul i fiind colectat ntr-un recipient. Acelai mediu de splare este folosit i la splarea celuilalt
corn uterin.
ntre momentul recuperrii zigoilor i cel al inovulrii lor n uterul receptoarelor, zigo ii
trebuie s fie meninui n via n condiii speciale i manipulai n cele mai bune condi ii tehnice i
igienice.
n ultimii ani s-a generalizat folosirea unei soluii tampon fosfat- PBS pentru splarea
coarnelor uterine i pentru pstrarea zigoilor recuperai. Acest lichid are un pH de 7,2 i con ine
multe sruri minerale, glucoz i protein.
Rezultatele recuperrii zigoilor depind n mare msur de abilitatea i antrenamentul
operatorului, mediile, soluiile, serurile, emzimele i substanele crioprotectoare care vin n contact
cu zigoii trebuind s fie sterile.
7. Cutarea i aprecierea calitii zigoilor
Dup prelevare zigoilor, vasul cu lichidul recoltat este lsat s se decanteze timp de 20-30
minute. Stratul superior se ndeprteaz, iar cel inferior n care se gsesc zigo ii se transfer ntr-o
plac Petri cu diametrul de 10cm.
Pentru identificarea zigoilor se examineaz cu mare atenie la stereolup fiecare ptrat de la
niveului plcii Petri. Zona pelucid garanteaz protecia zigotului, motiv pentru care ea trebuie s
fie perfect integr, fr fisuri i perfect sferic. Dup identificare, acetia sunt transfera i n plci
Petri mai mici cu lichid de conservare, cu ajutorul unei seringi de aspirare. Dup ultima baie, zigo ii
sunt condiionai pentru congelare n paiete, pe care se menioneaz identificarea donatoarei, rasa,
data colectrii, numrul de zigoi i centrul de producie.
8. Conservarea i deconservarea zigoilor
Congelarea rmne cea mai avantajoas metod de meninere pentru un interval de timp
practic nelimitat a viabilitii zigoilor. Zigoii sunt meninui n stare solid n azot lichid la o
temperatur de circa -196C.
n timpul congelrii intervin doi factori letali pentru zigoi: formarea gheii intracelulare i

concentraia salin ridicat. Pentru a prentimpina efectul negativ al acestor factori metoda de rcire
const n deschidratarea parial a celulelor i evitarea ocului produs de concentraii ridicate n
sruri prin ultilizarea unui crioprotector, n general glicerol, n mediul de congelare.
Protocolul de congelare a zigoilor bovini prevede:
alegerea zigoilor
timp de recoltare pn la nceperea congelrii 2-3h
introducerea lor n mediu de congelare la temeratura laboratorului
introducerea n paiete identificate
rcirea pn la -6C sau -7C cu o vitez de 4C/minut
inducerea cristalizrii
rcirea pn la -30C cu o vitez de 0,4C/minut
introducerea paietelor direct n azot lichid i stocarea lor la -196C.
La decongelare paietele se scot repede din containerul cu azot i se introduc direct ntr-o
baie de ap la 37C, unde se menin circa 30 de secunde.ndeprtarea crioprotectorului se face
progresiv astfel nct ieirea acestuia i ptrunderea apei n celul s fie compatibile cu
permeabilitatea membranei celulare.
Nivelul supravieuirii zigoilor dup congelare este condiionat de mai muli factori: stadiul
de dezvoltare, calitatea nainte de congelare, femela donatoare.
9. Transferul zigoilor
Pregtirea receptoarelor const ntr-o sincronizare ct mai perfect a cilului sexual cu cel al
femelei donatoare. O atenie special se va acorda depistrii ciclurilor (diminea a, prnz, seara),
apoi se determin momentul exact al nceputului estrului. Prin examen transrectal se identific
corpul galben de pe ovar, inovularea fcndu-se n vrful cornului uterin adiacent ovarului cu corp
galben. nainte i dup transfer se va evita orice stres: tratamente antiparazitare, vaccinri, lotizri,
recoltri de snge, schimbri de alimentaie, etc. Variaiile climatice determin creterea mortalit ii
zigoilor.
Pentru transfer se folosete un pistolet Cassou n care se introduce paieta cu zigotul
decongelat. Traversarea cervixului trebuie s se realizeze cu mare precauie pentru a nu leza
mucoasa cervical. Anestezia epidural cu 4-6ml procain 2% determin relaxarea cervixului i
evitarea contraciilor organelor genitale.