Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
chinezeti.
Prezint o colorabilitate inegal din cauza granulelor de polifosfati care apar evidente n special
prin coloratia metacromatic (corpusculii Babe-Ernst) sau dup decolorare prelungit n
coloratii Gram.
* Caractere de cultur
B. difteric este un germen aerob facultativ anaerob care se dezvolt la 37 0 C, la un pH de 7,4 7,6, crete bine pe mediul electiv Lffler (ser coagulat de bou, glucozat 1%).
Izolarea din produse patologice se face pe geloz snge i pe medii selective Tinsdale, GundelTietz (care contine:geloz-sange-cistein-telurit de K).
Pe mediul Tinsdale (care contine geloz-ser-cistin-telurit - thiosulfat),
C, diphtheriae produce dup 24-48 h de incubare la 37C, colonii mici negre cenuii inconjurate
de un halou brun (datorit H2S care rezulta din metabolism i reactioneaz cu srurile de telur).
B. pseudodifterici cresc sub forma de colonii negre, fr hafou brun,
C. ulcerans produce un halou foarte intens.
Pe mediul Gundel-Tietz n functie de aspectul coloniilor pot fi diferentiate trei tipuri biochimice
(biotipuri) de C. diphtheriae: gravis, mitis i intermedius , avnd proprietatea de a reduce teluritul
de potasiu n telur metalic, de culoare neagr.
Dup incubare 48 h la 37C i apoi 2-3 zile la temperatura laboratorului:
- tipul gravis produce colonii negre, mari, cu suprafata granulat cu aspect de margareta (margini
crenelate, centru ridicat i striuri radiale);
- tipul mitis produce colonii mai mici, negre, cu margini regulate:
- tipul intermedius colonii negre cu aspecte intermediare ntre primele dou: talie mai mare,
suprafat granular, centrul uor mamelonat, margini regulate, transparente.
Pe geloz-snge bacilii difterici produc colonii rotunde, friabile, cu suprafata uor granulara, de
culoare alb-gri perle.
Pe mediul Lffler bacilii difterici produc colonii albe, care seamn cu picturile de spermantet
(substant gras cu aspect de cear).
* Caractere biochimice i de metabolism
Pentru crestere, bacilul difteric are nevoie si de factori de crestere (vitamine, aminoacizi) care se
gsesc n serul si sngele introdus in aceste medii.
Tulpinile toxigene elaboreaz o exotoxin, specific, de natur proteic, responsabil de
simptomele de toxiinfectie difterica.
Bacilul difteric produce cistinaza care descompune cistina cu formare de hidrogen sulfurat, dar
nu hidrolizeaz ureea (ureazo-negativ).
Bacilul difteric, indiferent de biotip, fermenteaz constant glucoza, maltoza si levuloza si nu
fermenteaz zaharoza si manita.
Tipul gravis fermenteaz: dextrina, amidon, glicogenul.
Tipul mitis nu fermenteaz nici un polizaharid;
Tipul intermedius fermenteaz, uneori tardiv, numai dextrina.
* Rezistent la agenti fizici, chimici i biologici.
Bacilii difterici sunt rezistenti la uscciune, sensibil la antisepticele uzuale il distrug n cateva
minute.
Este sensibil la: eritromicin, penicilin, bacteriofagi specifici.
2
* Caractere antigenice
Au fost descrise antigene somatice (la nivelul peretelui bacterian), dar nu s-a realizat o schem
antigenic de identificare, exotoxina este puternic antigenic si este comun tuturor tulpinilor de
C. diphtheriae.
Filtratul de cultur reprezint toxina brut, coresupunde actiunii combinate a formolului si
cldurii se detoxific, transformndu-se n anatoxin, produs dotat cu calitti antigenice dar lipsit
de orice urma de toxicitate.
* Imunitatea
Este preponderent antitoxica, se obtine dupa trecerea prin boala sau dupa vaccinarea profilactic
cu antitoxina difterica.
* Diagnosticul de laborator este bacteriologic
Se recolteaza produse patologice atat de la bolnavi cat si de la purtatori si se face prin izolarea,
identificarea germenului precum si stabilirea caracterului toxigen al tulpinii.
Recoltarea se face din exudate cu tampoane sterile dimineata pe nemancate, nainte de a face
tratament cu antibiotic.
De la bolnavii sau suspectii de angina difterica se recolteaza trei tampoane din secretia
faringo-amigdaliana si un tampon nazal.
De la cazurile suspecte de difterie cu alte localizari se recolteaza un tampon din secretia
faringo-amigdaliana, un tampon din secretia nazala si un tampon din leziunea cutanata sau
mucoasa suspectata.
De la contactii din focare de difterie sau de la purtatori sanatosi se recolteaza un tampon
cu exudat nazal si un tampon cu secretie faringo-amigdaliana.
* Diagnosticul bacteriologic
La bolnavi:
- tamponul nr. l (din cele trei) va servi pentru efectuarea frotiurilor colorate: Gram, albastru de
metilen, Del Vecchio-pentru evidentierea granulatiilor metocromatice, n solutie apoasa de
albastru de metilen 10% se adauga 0,1% hidrat de K (KOH,);
- tamponul nr. 2 se va nsamanta pe mediile solide: Tinsdale, Gundel-Tietz, geloz-snge,
Lffler;
- tamponul nr. 3 este incubat 16-18 h la 370 C n mediul de mbogaire O.S.T. (ou-ser-telurit),
dup timpul de incubare se fac treceri pe mediile solide de mai sus.
Tampoanele din celelalte secretii (nazale, oculare, din plagi etc) se mbogtesc n mediul
O.S.T. i dupa incubare in conditiile descrise se vor trece pe mediile solide corespunztoare.
Dup incubarea pe medii solide, 24-48 h, se vor face repicri una sau dou colonii
reprezentative pe un tub cu mediu Lffler, sau n sectoare cu mediu geloz sange si frotiuri din
toate aceste medii si colorate Gram si Del Vecchio, pentru stabilirea caracterelor morfologice
microscopice.
Apoi se fac nsmntari din mediul Lffler pentru punerea n evident a caracterelor
biochimice (fermentarea zaharurilor n mediul Hiss cu indicator Andrade proba cistinazei H 2S,
proba ureazei in mediul cu uree, Blake-Cristensen).
Toxigeneza in vitro se face prin testul de precipitare in gel E.O.F. (Elek, Ouchterlony,
Frobisher), sau in vivo prin inoculare s.c. in cobai, a culturii , dup 24-48 h, cobaii mor cu
3
Pe mediile solide, care sunt mediile tip Lwenstein-Jensen (L-J), sau tip Ogawa, sunt medii
selective contin:
5
- sruri mirerale,
- asparagin sau acid glutamic,
- amidon,
- glbenus de ou,
- glicerina si verde malahit.
Amestecul final se repartizeaz n tuburi de 18/180 si se coaguleaza n pozitie inclinat la 90 C.
Temperatura optima de dezvoltare a bacilului tuberculos este de 37C timp de 30-60 zile, bacilul
este aerob, de aceea se nsmanteaz pe mediul solid nclinat, dar o cantitate de 10 % C02,
favorizeaza cresterea.
Coloniile micobacteriene apar tarziu, dup prima sptmn abia se vede o mic formatiune.
Numai dup 30-40 zile ajunge o colonie caracteristic de aspect verucos (conopidiform) de tip
R", aceasta este cretere eugonic a coloniilor rugoase.
Prezenta coloniilor mici de tip S" este o cretere disgonic i este caracteristic pentru
Mycobacterrum bovis.
* Caractere biochimice
Sunt germeni aerobi, au enzima catalaz, se dezvolta un pH usor acid, tipul hominis este singurul
care produce acid nicotinic.
* Caractere de patogenitate
Virulenta micobocteriilor este data de existenta unel substante cord-foctor, care rezista la
actiunea enzimelor lizozomale, care lipseste la micobacteriile avirulente.
De asemenea au capacitatea de a se multiplica intracelular (intramacrofogic).
Produc n organismul afectat si fenomene de intoxicatie, care este un factor agravant.
* Diagnosticul de laborator este un : diagnostic bacteriologic
Se bazeaz prin punerea n evident a bacilului Koch n produsele patologice, n acest scop se
folosesc 3 metode: -examenul direct,
-cultivarea i
-inocularea la cobai.
* Diagnostic bacteriologic
Recoltaren produselor patologice se face n recipiente sterile cu capac ce se pot nchide ermetic.
n tuberculoza pleuro-pulmonar se recolteaz: sput, aspirat bronic sau cavitar, lichid de
spalatura bronic, piese de exerez chirurgical, lichid de spltur gastric, fecale, piese
necroptice, lichid pleural.
n tuberculoza uro-genitala: urin, sange menstrual, biopsie de endometru, piese de exerez
chirurgical.
n tuberculoza ganglionar: material din biopsie sau punctie.
n tuberculoza ostio-articular: lichid articular, ,puroi din abcese reci, fragmente osoase.
In meningita tuberculoas:lichid cefalorahidian.
Cel mai folositor produs este sputa, pentru c tuberculoza pulmonar este forma cea mai
frecvent.
O escar n centrul unui halou inflamator persistent, observabil la 24-48 h reprezint o reactie
pozitiv.
Dup sacrificarea animalului, de regul dup 5-6 sptmni de la inoculare se constat: ancru
la locul de inoculare, hipertrofia (inclusiv cazeificarea ganglionilor limfatici, inghinali,
presacrati, mezenterici), leziuni tuberculoase caracteristice (tuberculi-zone cazeoase ntinse) n
splin, ficat, i plmni.
Se vor face frotiuri colorate adecvat i se vor face nsmntri pe mediul Lwenstein-Jensen.