COALA POSTLICEAL APRENDIS

DISCIPLINA: NURSING N HEMATOLOGIE

CURS 3.

GRUPELE SANGUINE; SISTEMUL AB0 I Rh

DETERMINAREA GRUPELOR SANGUINE I A Rh-ului

n prezent exist 29 de sisteme care definesc grupele sangvine, recunoscute de ISBT

(International Society of Blood Transfusion). Dintre aceste sisteme, cele mai cunoscute i cele
mai importante, n cazul transfuziilor sunt sistemle ABO si Rhesus (Rh). Toate grupele sangvine din
cadrul celor 29 de sisteme sunt determinate de combinatiile a 29 de antigene de pe suprafata
hematiilor si n total exista peste 400 de grupe sangvine.
n practica curent, termenul de ,,grup sanguinse refer doar la eritrocite, cu toate c exist i
grupe trombocitare (HPA) i grupe leucocitare (HLA).
Conceptul de ,,siguran transfuzional se bazeaz, n mare parte, pe nelegerea
principiilor de baz ale acestor sisteme de grup sanguin.
SISTEMUL AB0
Sistemul ABO a fost descoperit de Landsteiner n 1901 care a constatat c eritrocitele unei
persoane amestecate cu plasma unei alte persoane pot aglutina.
Hemaglutinarea reprezint adunarea eritrocitelor n grmezi vizibile cu ochiul liber pe lam,
prin formare de complexe Ag-Ac.
Hemoliza reprezint reactia de distrugere a eritrocitelor i se produce extravascular ca i
consecint a formrii complexelor antigen-anticorp, sau intravascular prin formarea complexelor
antigen-anticorp si activarea complementului.
Grupele sanguine ABO sunt definite de prezenta antigenelor (aglutinogenelor) pe suprafata
eritrocitelor i a anticorpilor (aglutininelor) n plasm (Fig.nr.1)
Antigenele sunt structuri tridimensionale care fac parte din membrana celular i au o
stuctur chimic precis. Genele care coordoneaz sinteza antigenelor de grup sanguin ABO se
gsesc pe cromozomul 9, iar cele pentru Rh sunt situate pe cromozomul 1.
Grupele se noteaz dup numele antigenului (aglutinogenului) deosebindu-se astfel: grupa: 0
(zero) A, B i AB. Un alt cercettor clasific grupele sanguine notndu-le cu cifre romane: I, II, III,
IV. Astzi, pentru a nltura posibilitatea unei interpretri greite a grupelor sanguine de baz, ambele
clasificri au fost unificate, sistemul sanguin OAB fiind reprezentat astfel:
sistemul ABO este un sistem format din dou antigene (aglutinogeni): A i B exprimate pe
eritrocite, dar i pe membranele endoteliale i epiteliale;
doi anticorpi (aglutinine): (alfa) i (beta), aflati n plasm;
n sistemul ABO exist 4 grupe sanguine principale: OI, A II, B III i AB IV. Se descriu mai
multe subgrupe A i B, fra semnificatie clinic

Fig. 1 Antigenii si aglutininele grupelor sanguine

Sistemul ABO este cel mai important sistem de grupe sanguine datorit prezentei anticorpilor
o

fixatori de complement la 37 C care pot cauza hemoliza intravascular a hematiilor transfuzate.

Aglutininele (anticorpii) corespunztoare aglutinogenilor A si B fac parte din clasa
imunoglobulinelor M (IgM), proteine cu mas molecular mare care nu pot traversa bariera
placentar.
Aglutinogenii si anticorpii (aglutininele) corespunzatori (de exemplu A si (alfa)) nu se
gsesc n sngele aceleiai persoane. Dac ar intra n contact anticorpii si antigenii corespunzatori,
ar avea loc o reacie antigen-anticorp (reacie foarte specific) si hematiile ar aglutina i n
final ar fi distruse.
n Romania distributia grupelor sangvine este urmtoarea: 34% grup O, 41% grup A, 19% grup
B si 6% grup AB.

Sistemul Rhesus (Rh)

Sistemul antigenic Rh a fost descoperit de Landsteiner si Wiener n membrana hematiilor de
la maimuta Macacus Rhesus. Sistemul se aseamn cu sistemul ABO si cu anticorpii de
histocompatibilitate HLA si este larg rspndit.
Exist trei perechi de antigene Rh: Cc, Dd si Ee. Dintre acestea, cel mai antigenic si cel mai
important este antigenul D, denumit si antigenul Rh.
Antigenul apare n sptamana a 6-a de viaa intrauterin i crete progresiv n membrana
eritroblastilor, pn la maturizare.
Anticorpii Rh fac parte din clasa imunoglobulinelor G (Ig G) care pot trece bariera
placentar. Spre deosebire de cazul antigenelor i anticorpilor din sistemul ABO, la persoanele cu
grup Rh negativ lipsesc att antigenele de pe suprafaa hematiilor ct si anticorpii din ser.
Aceste persoane pot sintetiza ns anticorpi anti-Rh n urma unor transfuzii gresite sau in
cazul n unei sarcini n care mama are Rh negativ iar copilul Rh pozitiv.
Aplicaia direct a determinrii factorului Rh este diagnosticul prenatal prin amniocenteza

pentru a depista incompatibilitatea feto-maternal. Aceasta incompatibilitate st la baza bolii

prenatale denumita eritroblastoza fetala sau boala hemolitica a nou nscutului.
Boala apare ca urmare a imunizrii mamei cu Rh negativ mpotriva antigenului D de pe
membrana eritrocitelor ftului cu Rh pozitiv, motenit de la tat.
Imunizarea mamei se produce n ultima parte a sarcinii si n special la natere cnd, are loc o
cretere a numrului de eritrocite ce trec n sngele mamei. La prima sarcin, titrul anticorpilor antiRh nu este att de mare ncat s apar probleme. Incepnd ns cu a doua sarcina, copii vor manifest
boala deoarece anticorpii din sngele mamei traverseaza bariera placentar, ajung n sngele ftului i
distrug hematiile acestuia.
Gravitatea bolii este direct proporional cu concentraia de anticorpi anti-Rh care crete odat
cu numrul de sarcini.
La primul contact al mamei cu antigenul Rh se activeaz un rspuns imun primar, lent prin
producere de limfocite B specifice fa de antigenul D. Dup ndeprtarea antigenului, limfocitele B
rmn circulante i active sub forma celulelor de memorie care pot supravietui un timp ndelungat si
sunt capabile s rspund rapid la o noua ntlnire cu antigenul.
La a doua sarcina cu ft Rh pozitiv, are loc un rspuns imun rapid, mediat de celulele de
memorie care ncep s produc Ig G anti-Rh. Ig G trec bariera placentara n sngele fatului, recunosc
hematiile acestuia i se declaneaz boala hemolitic.
Pentru declansarea bolii ntre mam i ft trebuie s existe compatibilitate n sistemul ABO.
Astfel dac mama are grup O i ftul are grup sangvin A sau B, aglutininele (anticorpii) sau din
sngele mamei impiedica trecerea eritrocitelor fetale cu antigen A sau B, blocnd astfel imunizarea
mamei fa de antigenul Rh (D) fetal.

Determinarea grupelor sanguine

Determinarea grupei sanguine ABO const n realizarea a dou probe obligatorii
(Beth-Vincent-Tzank i Simonin), care se completeaz reciproc, iar rezultatul trebuie s fie identic.
O grup este considerat valid dac d acelai rezultat la dou
d e t e r m i n r i d i f e r i t e , utiliznd doi reactivi diferii, din dou prelevri diferite.
Materiale necesare:
-materiale necesare pentru recoltarea sngelui prin punc ie
venoas(fr anticoagulant) sau punc ie capilar(punctia pulpei
degetului)
- centrifug de laborator
- plac cu godeuri/lame de sticl
- pipete Pasteur
- baghete de sticl cu vrf rotund
- seruri hemotest: anti AB, anti-B i anti-A (pentru metoda Beth-Vincent-Tzank)
- suspensie eritrocite de cercetat n SF sau ser propriu (10-20 %) (Metoda Beth-Vincent)
- hematii test O, A1, A2 i B (pentru metoda Simonin)
- ser sau plasm de cercetat (pentru metoda Simonin).

- mnui sterile i de protecie; container pentru colectarea deeurilor cu risc biologic

Pregtirea eantioanelor:
NU se lucreaz din probe neetichetate!!!
Sngele recoltat fr anticoagulant se centrifugheaz i se separ serul de cheag prin decantare
ntr-o eprubet inscripionat cu datele de identificare ale bolnavului. Se prepar suspensia eritocitar
n ser fiziologic sau n ser propriu, n proporie de 10-20 %.
1. PROBA BETH-VINCEN-TZANK (metoda direct)
Este metoda cea mai cunoscut pentru determinarea grupei sanguine ABO, care
identific antigenul de pe eritrocite; se mai numete prob globular sau eritrocitar.
Folosim seruri hemotest monoclonale i eritrocitele de cercetat (de la pacient).
Etape de lucru
- Pe o lam/plac cu godeuri, se depune, de la stnga la dreapta:
o pictur ser hemotest anti A+B (este incolor)
o pictur ser hemotest anti-B (este de culoare galben)
o pictur ser hemotest anti-A (este de culoare albastr)
- Alturi de fiecare pictur se depune o pictur de suspensie de eritrocite de cercetat de 10 ori
mai mic dect serul test;
- Se amestec fiecare pictur cu coltul lamei/bagheta de sticl
fcnd un rond de 2 cm diametru
- p e n t r u f i e c a r e d u e t d e p i c t u r i ( s e r + e r i t r o c i t e ) s e f o l o s e t e a l t c o l
al lamei/alt baghet (sau se terge bagheta foarte bine);
- Se agit lent lama/placa de opalin, cu micri circulare, observnd apariia aglutinrii.
= aglutinare

Interpretarea rezultatelor:
Prezena aglutinrii/hemolizei = reacie pozitiv
Absena aglutinrii/hemolizei = reacie negativ.
Dac aglutinarea nu se produce n nici una dintre picturi, nseamn c sngele cer cetat nu
are antigen (aglutinogenul): aparine grupei 0I.
Dac aglutinarea NU se produce n serul anti-B (a doua pictur), nseamn c sngele
cercetat are aglutinogen A. Sngele aparine grupei AII.
Dac aglutinarea NU se produce n serul anti-A, nseamn c sngele de cercetat are aglutinogen

B si sngele aparine grupei B III.

Dac aglutinarea se produce n toate cele trei seruri-test, nseamn c sngele conine att
aglutinogen A, ct i aglutinogen B ; Face parte, deci, din grupa AB IV.
2 . PROBA SIMONIN (metoda invers)
Se mai numete proba seric i identific anticorpii din ser sau plasm.
Folosim hematii test O, A1, A2, B i serul de cercetat (de la pacient).
Etape de lucru
- Pe o plac de opalin (lam de sticl) se depun 4 picturi din serul de cercetat i se amestec
succesiv, ntotdeauna n aceeai ordine:
o pictur ser de cercetat cu o pictur eritrocite test O;
o pictur ser de cercetat cu o pictur eritrocite test A1;
o pictur ser de cercetat cu o pictur eritrocite test A2;
o pictur ser de cercetat cu o pictur eritrocite test B
Se amestec serul cu eritrocitele test cu bagheta de sticl, tergnd bine ntre amestecuri. Se
ateapt cteva minute, micnd uor placa. Se observ prezena aglutinrii sau hemolizei.
Interpretarea rezultatelor
- Dac aglutinarea s-a produs n ultimile 3 picturi omogenizate, nseamn c n serul de cercetat se afl
ambele aglutinine ( i ) ; Serul de cercetat face, deci, parte din grupa 0I.
- Dac aglutinarea se produce numai n ultima pictura de ser n care am pus eritrocite - test BIII nseamn c aglutinogenul B s-a ntlnit cu aglutinina omoloag ; Deci serul aparine grupei AII.
- Dac aglutinarea se produce numai n picturile de ser din mijloc n care am pus eritrocite - test A1 si
A2 - nseamn c s-a ntlnit cu aglutinina alfa, care a aglutinat hematiile-test. Serul aparine grupei
B III.
- Dac aglutinarea nu s-a produs n nici una din picturile serului de cercetat nseamn c serul nu are
aglutinine, deci face parte din grupa ABIV.
Apariia aglutinrii la proba Beth-Vincent este mai rapid, anticorpii din serurile hemotest fiind
selecionai pentru aviditatea i titrul lor, n timp ce la proba Simonin, aglutinarea apare
dup cteva minute, fiind o reacie natural ntre un antigen i un anticorp n titru mai mic.
DETERMINAREA Rh-ULUI (FACTORUL D)
Se efectueaz odat cu grupa ABO, datorit imunogenicitii mari a antigenului D. Pentru
testare se folosete ca reactiv ser anti-D(anti-Rh monoclonal) i
s e u r m e a z c u s t r i c t e e i n s t r u c i u n i l e productorului de reactivi.
Reactivii anti-D pot fi de origine uman (policlonali IgG+IgM), sau produi in vitro,
monoclonali specifici (IgM). Testarea se face la temparatura camerei, nu necesit incubare.
Echipamente i materiale:
-centrifug de laborator
-plac de sticl cu godeuri/lame de sticl
-pipete Pasteur
-baghete de sticl

-reactivi anti-D
-suspensie eritrocite de cercetat n SF sau ser propriu (10-20 %)
Tehnic:
Pe o lam curat sau plac de opalin se pune o pictur de ser anti-D i
s e a m e s t e c c u ajutorul unei baghete de sticl cu eritrocitele de cercetat. Se ateapt 3-5 minute i
se citete reacia, urmrind apariia aglutinrii.
Este indicat ca n paralel s se lucreze cu o prob martor (+) i (-).
Interpretare:
Prezena aglutinrii = reacie pozitiv Rh(D)= POZITIV
Absena aglutinrii = reacie negativ Rh(D)= NEGATIV

Fig.2 Seruri test pentru metoda Beth Vincent

Aglutinare/neaglutinare