Lucrarea practic 11.

Sngele. Efectuarea frotiului sangvin. Recunoaterea elementelor figurate sangvine.

Formula leucocitar.
Coloraii:
May Grnwald - Giemsa

SNGELE
Definiie: Este o varietate de esut conjunctiv fluid, format din plasm i elemente
figurate: eritrocite (hematii, globule roii), leucocite (globule albe) i trombocite
(plachetele sanguine). Se studiaz pe frotiuri colorate cu diferite metode, cea mai
utilizat fiind coloraia May-Grnwald Giemsa (MGG).
Tehnica executrii frotiului
Principiu : o pictur de snge capilar se
ntinde n strat subire pe o lam, aa nct
elementele figurate s nu fie suprapuse.
Etalarea frotiului se face cu o lam lefuit, cu
colul rupt, pstrnd un unghi de nclinaie de
45 grade.
Imediat dup ntindere, frotiul se usuc prin
agitare cu scopul primei fixri i apoi se
coloreaz.

Timpii tehnicii de colorare MGG:

1. Se prepar soluia de lucru Giemsa prin
diluarea a 3 picturi de colorant cu 2
cm de ap distilat.
2. Fixarea: se acoper frotiul cu 20-25 de
picturi de soluie May- Gruenwald, se
las 2 - 3 minute, timp n care are loc
fixarea chimic.
3. Colorarea se face n 2 timpi:
peste soluia M-G se adaug 20-25 de
picturi de ap tamponat, obinnd
colorantul n stare nativ, care se las
s acioneze 2 minute.
Amestecul colorant se ndeprteaz
fr a spla lama, dup care aceasta se
acoper cu soluia Giemsa diluat care
se las s acioneze 25-30 minute.
4. Frotiul se spal cu un jet puternic de ap
de robinet, se usuc i se examineaz la
microscop, cu obiectiv imersie.

Rezultate:
Frotiul corect colorat trebuie s aib culoarea rozviolet sau rou-violet.
Nucleii apar colorai n violet de intensiti
variabile, n funcie de raportul ntre
eucromatin/ heterocromatin.
Nucleolii sunt colorai n albastru deschis.
Citoplasma :
o acidofil se evideniaz n roz, rou sau
crmiziu, prin colorare cu eozin;
o bazofil apare n nuane de albastru, , prin
colorare cu albastru de metilen;
Granulaiile:
o neutrofile sunt colorate n violet, cu eozinatul
de albastru de metilen (colorant neutru);
o acidofile (eozinofile) apar n rou crmiziu;
o bazofile sunt colorate n albastru, sau n
violet (metacromatic) cu albastru de metilen;
o azurofile, se coloreaz n violet purpuriu cu
azur II, din compozitia colorantului Giemsa.

Criteriile de recunoatere ale elementelor figurate prezente pe frotiu:

ERITROCITELE (hematiile)
Form: disc biconcav, (rotund pe frotiu);
Diametru mediu de 7m, fiind considerate
etalon pentru estimarea dimensiunii
celorlalte elemente figurate;
Sunt anucleate;
Citoplasma lor este omogen i se
coloreaz n rou-crmiziu (cu eozin),
datorit coninutului n hemoglobin;
Prezint o zon central, palid colorat
care ocup 1/3 din diametru.
Numr: 4,5-5 milioane/mmla brbai
4-4,5 milioane/mmla femei

RETICULOCITELE
Sunt hematii tinere, prezente n
circulaie n proporie de 0,5-1,5%.
Prezint n citoplasm: ribozomi,
resturi de ARN, care se evideniaz cu
albastru-briliant cresyl, sub forma unei
reele de filamente i granule, colorate
n albastru.

LEUCOCITELE (globulele albe)

Se recunosc uor dup morfologia nucleului
i dup dimensiuni, diametru 10-21m,
adic de 2 -3 ori mai mari dect hematiile,
Conin n citoplasm dou tipuri de
granulaii: specifice i nespecifice.
Clasificarea leucocitelor se face dup prezena
granulaiilor specifice, n:
Granulocite: neutrofile, bazofile, eozinofile
Agranulocite: monocite i limfocite
Numr: 4000-8000 /mm

Legend: 1.granulocit neutrofil,

2. granulocit acidofil, 3. granulocit
bazofil, 4. limfocit mic, 5, 6. monocite

GRANULOCITUL NEUTROFIL
Form sferic, (rotund pe frotiu),
Mrime: de 2 ori ct o hematie,
Nucleu segmentat format din 3-5 lobi
unii ntre ei prin filamente de cromatin,
Citoplasm abundent, acidofil, care
conine 2 tipuri de granulaii:
o neutrofile-specifice: violete, mici,
pulverulente, numeroase,
o azurofile-nespecifice,
reduse
numeric.

1-3% din granulocitele neutrofile pot prezenta

nuclei nesegmentai: n form de potcoav
(metamielocite) sau majuscul I, S, Z
(stabkernige) i reprezint forme imature.

GRANULOCITUL ACIDOFIL sau

EOZINOFILUL
Form sferic, (rotund pe frotiu),
Mrime: de 2 ori ct o hematie,
Nucleu format din 2 lobi unii ntre ei,
Citoplasm: acidofil, care conine granulaii
specifice: acidofile, (eozinofile), mari, rotunde,
egale ca form, mrime i distribuie n
citoplasm.

GRANULOCITUL BAZOFIL
Form sferic, (rotund pe frotiu),
Mrime: de 2 ori ct o hematie,
Nucleu indentat, nesegmentat,
Citoplasm: acidofil care conine numeroase
granulaii specifice, bazofile: orto i
metacromatice, inegale ca form, mrime i
rspndire, care acoper nucleul i-l fac greu
de examinat.

LIMFOCITUL MIC
Form sferic, (rotund pe frotiu),
Mrime: ct o hematie, avnd un diametru 68,
Nucleu: mare, sferic, heterocromatic,
Citoplasm: bazofil, redus cantitativ, sub
forma unui lizereu fin, perinuclear.
Prin activare, se transform n limfocit
mijlociu sau mare.

MONOCITUL
Form sferic, ovalar sau neregulat,
Mrime: este cel mai mare dintre leucocite (1521m), fiind de aproximativ de 3 ori mai mare
dect o hematie,
Nucleul: excentric, are forme diferite
(reniform, oval, trapezoid), iar cromatina este
dispus n lamele sau blocuri mari,
Citoplasma bazofil este abundent, de culoare
albastr-cenuie i conine poate conine
granulaii azurofile (lizozomi).

FORMULA LEUCOCITAR
Reprezint raportarea procentual a leucocitelor,
obinut dup numrarea pe frotiu a cel puin 300 de
leucocite consecutive;
Valori normale:
TROMBOCITELE
fragmente
Granulocite
neutrofile segmentate
Sunt
citoplasmatice;
Granulocite
neutrofile cu
nesegmentate
Au form
de disc lenticular,
o Granulocite
eozinofile
o zon periferic
omogen, palid
Granulocite
bazofile
colorat, numit hialomer, care conine
Limfocite
microtubuli i microfilamente,
o zon central, ntunecat, numit
o Monocite
granulomer, format din: lizozomi,
peroxizomi, granule alfa, corpi deni i
mitocondrii;
Nu au nucleu
Numr: 150.000-300.000 /mm

55-65%
1-3%
2-4%
0-1%
25-35%
5-8%

TROMBOCITELE
Sunt fragmente citoplasmatice;
Au form de disc lenticular, cu
o o zon periferic omogen, palid
colorat, numit hialomer, care conine
microtubuli i microfilamente,
o o zon central, ntunecat, numit
granulomer, format din: lizozomi,
peroxizomi, granule alfa, corpi deni i
mitocondrii;
Nu au nucleu
Numr: 150.000-300.000 /mm