Enzime

Dr. Lucia Dican

Definiie

Biocatalizatori proteici care mresc viteza reaciilor chimice,

dar numai pentru reaciile termodinamic posibile
Coordoneaz toate procesele metabolice
Catalizeaz un numr redus de reacii, foarte frecvent numai
una; se caracterizeaz printr-o nalt specificitate
Sunt implicate n majoritatea reaciilor biochimice din celule,
fiind importante n diagnostic i tratament

Regiunea din enzim unde se fixeaz moleculele substratului i se produc reaciile

chimice care transform aceste molecule se numete centru activ
Complexul enzim-substrat (ES) de la nivelul centrului activ este stabilizat prin atracii electrostatice, legturi
de hidrogen, interaciuni hidrofobe,

substrat

Complex de tranzitie E-S

Produs

NOMENCLATURA ENZIMELOR

n anul 1883 se propune o alt nomenclatur care const n

adugarea sufixului az la rdcina cuvntului care indic
substratul, enzimele fiind denumite ureaz, arginaz,
asparaginaz,etc.
Ulterior s-a fcut o completare la nomenclatura propus n
anul 1883, precizndu-se c n denumirea enzimelor se va
indica att substratul, ct i tipul de reacie la care acesta
particip: alcooldehidrogenaza (ADH), piruvatdehidrogenaza
(PDH), malatdehidrogenaza (MDH), etc.

NOMENCLATURA ENZIMELOR

Comisia pentru Enzimologie din cadrul Uniunii Internaionale

de Biochimie a propus n anul 1961 un sistem de
nomenclatur, clasificare i numerotare n care fiecare enzim
cunoscut este caracterizat printr-un cod de patru cifre
desprite prin puncte.
Oxidoreductaze
Transferaze
Hidrolaze
Liaze
Izomeraze
Ligaze

NOMENCLATURA ENZIMELOR
prima cifr indic clasa de enzime
A doua cifr indic subclasa, respectiv gruparea sau legtura chimic interesat n
reacie:
CH2OH,

C O,

C CH ,

CH2 NH2

A treia cifr reprezint subsubclasa, preciznd totodat natura acceptorului: NAD +,

FAD, etc.
A patra cifr arat poziia enzimei n subsubclas.
Exemplu: alcooldehidrogenaza, enzima care produce oxidarea etanolului va fi notat:
ADH: E.C.1.1.1.1, semnificnd urmtoarele:
oxidoreductaz
gruparea interesat n reacie CH 2OH
acceptorul NAD+
reprezint prima enzim n subsubclas.

NADH,H+

NAD+
CH3 CH2 OH

ADH

CH3 CHO

CLASELE DE ENZIME

Oxidoreductazele sunt enzime care catalizeaz reaciile de

oxido-reducere celular
Un exemplu tipic este reacia catalizat de
lactatdehidrogenaz (LDH): NAD+ NADH, H+
CH3 CH COOH
OH

LDH

CH3 C COOH
O

Oxidoreductazele cuprind 13 subclase n funcie de natura gruprii

oxidate; de asemenea, innd seama de natura acceptorului, respectiv
a donorului, aceste subclase sunt divizate n mai multe subsubclase .

CLASELE DE ENZIME

Tranferazele sunt enzime care catalizeaz transferul unei

grupri X (diferit de hidrogen) de pe un donator pe un
acceptor (diferit de ap);
n funcie de natura acestor grupri transferazele pot fi:
transaminaze, transacilaze, transmetilaze, etc.
Transaminazele sunt divizate n 8 subclase, aceasta innd seama de
tipul gruprii transferate, iar subclasele, la rndul lor, mprite n
mai multe subsubclase.
O categorie important de reacii aparinnd acestei clase sunt
reaciile de transaminare, cum este cea catalizat de GOT (GlutamicOxalilacetic-Transaminaz):
COOH
COOH
CH2
CH2
CH NH2
COOH
Glu

O C COOH
CH2 COOH
OAA

GOT

CH2
CH2
C O
COOH
-Kg

H2N CH COOH
+
CH2 COOH
Asp

CLASELE DE ENZIME

Hidrolazele sunt enzime care produc scindarea substratului cu fixarea

componentelor apei
Hidrolazele se mpart n 9 subclase principale, n funcie de tipul
legturii hidrolizate; desigur, fiecare subclas cuprinde mai multe
subsubclase

H3C

CO

+
CH2 CH2 N
Acetilcolina

CH3
CH3 + H2O
CH3

AcChE
H3C COOH + HO
Acid acetic

+
CH2 CH2 N
Colina

CH3
CH3
CH3

CLASELE DE ENZIME
Liazele sunt enzime care produc scindarea substratului prin alte
mecanisme dect cel al hidrolizei

Liazele cuprind 5 subclase

HOOC CH OH
HOOC CH2
Acid malic

Fumaraz

HOOC
C

C
H

COOH

Acid fumaric

H2O

CLASELE DE ENZIME

Izomerazele catalizeaz reaciile de interconversiune a izomerilor

optici, geometrici sau de poziie

Izomerazele sunt divizate n 5 subclase mari.

Enzima participant la reacie este triozizomeraza (TIM).
O
C

TIM

H
H C OH
CH2 O

CH2 OH
C O
CH2 O

Gliceroaldehidfosfat
Dihidroxiacetonfosfat
(G-A-P)

(DHAP)

CLASELE DE ENZIME

Ligazele catalizeaz formarea unei noi legturi CC, CO, CN, C

S, reaciile fiind cuplate cu scindarea ATP.
Ligazele sunt divizate n patru subclase, care la rndul lor cuprind
mai multe subsubclase
ATP
CH3 COOH + CoA SH
Acid acetic

Coenzima A

AMP + PPa

Acetil-CoAsintetaz

CH3 CO

SCoA

Acetil-CoA

STRUCTURA ENZIMELOR

Din punct de vedere structural enzimele se mpart n dou mari clase:

formate numai din aminoacizi, avnd prin urmare o natur exclusiv proteic; n aceast
categorie intr proteazele, lipazele, ribonucleaza, etc.
enzime care pe lng componenta proteic mai conin i o component neproteic numit i
cofactor; majoritatea enzimelor au aceast structur.
Componenta proteic a enzimelor este numit apoenzim, iar componenta neproteic
cofactor (cum s-a meionat) i poate fi grupare prostetic, coenzim sau ioni metalici.
Gruparea prostetic este componenta neproteic legat de apoenzim prin legturi
covalente ferme, stabile, neputndu-se desprinde de aceasta; funcioneaz ca grupri
prostetice FMN, FAD, etc.
Coenzima, de obicei derivat al unei vitamine este componenta neproteic legat de
apoenzim prin legturi labile; ea poate trece uor de la o apoenzim la alta. Au rol de
coenzime n diversele reacii NAD+, NADH,H+, NADP+, etc.
Ionii metalici sunt necesari pentru activitatea a numeroase enzime. Dup modul de
legare i rolul ionului metalic, enzimele sunt:
metaloenzime ce conin o cantitate bine definit de ion metalic funcional, fiind strns legat
de apoenzim

Se pune problema: cum poate fi sczut nivelul energiei de activare pentru a se mri viteza de reacie ?

EST

S
ES

EP
T = starea de tranzitie
n concluzie putem afirma c enzimele, ca de
altfel toi catalizatorii, favorizeaz
desfurarea unei reacii prin scderea
barierei cinetice, fr a modifica bariera
termodinamic. O reacie termodinamic

Directia reactiei

Energia descreste (reactia catalizata)

Energia (reactia necatalizata)

ST

Reduc energia de activare (Ea ) i consecutiv

mresc numrul ciocnirilor eficace dintre reactani
=> mresc viteza de reacie

Centrul Activ
Regiunea din enzim unde se fixeaz moleculele substratului
i se produc reaciile chimice care transform aceste
molecule se numete centru activ.

+
CoE (1)
(4)

(3)

(2)

(1)
(2)
(3)
(4)

Stabilizeaza tranzitia
Expulzeaza apa
Grupari reactive
Coenzima helps

centrul activ al unei

enzime

Centrul activ ocup o poriune relativ mic dintr-o enzim;

Centrul activ este o entitate tridimensional; aminoacizi aflai n locuri diferite ale
lanului polipeptidic ajung, datorit conformaiei spaiale, n apropiere constituind
centrul activ;
Natura legturilor dintre enzim i substrat depinde de aranjamentul atomilor din
centrul activ. Astfel, un substrat trebuie s aib o form potrivit pentru a ptrunde
n centrul activ al unei enzime. FISCHER propune modelul CHEIA N
BROASC, adic substratul trebuie s se potriveasc perfect la centrul activ
pentru a suferi procesul catalitic.
Alte cercetri experimentale susin ns c centrul activ al unei enzime nu este
rigid, c forma acestuia se modific n momentul legrii substratului. Acest
fenomen de recunoatere dinamic a substratului de ctre enzim a fost numit de
KOSHLAND POTRIVIRE INDUS.

Centrul activ al enzimelor

1890
Fisher propune
modelul broasccheie:
S trebuie s se
potriveasc perfect la
centrul activ pentru a
suferi procesul
catalitic

Fisher

Centrul activ al enzimelor

1958
Koshland susine
c centru activ al
enzimei nu este
rigid
Forma acestuia se
modific n
momentul legrii
S= recunoastere
dinamica a S de
catre E

centrul activ al unei

enzime

Substratul se leag de enzim prin fore relativ slabe; complexul enzimsubstrat care se formeaz poate trece n produii de reacie cu eliberarea
enzimei, sau poate reface substratul iniial:
Pentru majoritatea enzimelor centrul activ apare sub forma unei despicturi
n apoenzim; aceast falie este cptuit cu aminoacizi hidrofobi, apa fiind
n mare parte exclus. Totui centrul activ conine i unii aminoacizi cu
resturi polare, eseniali pentru procesul de cataliz.
Pe lng resturile catalitice aflate n centrul activ, care particip direct la
transformarea substratului, apoenzima mai conine aa-numitele resturi de
specificitate, unde sunt prezeni aminoacizi cu rol n recunoaterea
substratului

centrul activ al unei

enzime

Un exemplu l constituie ribonucleaza, enzim ce produce scindarea

ARN; centrul activ al acestei enzime este format de His 12 i His119, care
reprezint resturile catalitice. Pe lng aceti aminoacizi, ribonucleaza
mai conine n regiunea cuprins ntre aminoacizii 31-41 i 5 aminoacizi
bazici, cu rol important n recunoaterea moleculei de ARN care are
caracter acid i care reprezint resturile de specificitate.
Pentru un mare numr de enzime centrul activ conine Ser, Cys, His, Tyr,
Lys.
Spre deosebire de enzimele obinuite, ENZIMELE ALOSTERICE conin
pe lng centrul activ i o zon numit centru alosteric; aici se fixeaz
efectorii alosterici, care nu intervin direct n cataliz, dar pot influena
procesul catalitic prin modificarea conformaiei spaiale a enzimei.

S trebuie s aib o form potrivit pentru a ptrunde n

centrul activ al unei E

Centrul activ evita influenta moleculelor de apa

+
Atracii electrostatice

SPECIFICITATEA ENZIMELOR
SPECIFICITATEA DE SUBSTRAT
Cnd o enzim acioneaz asupra unui singur substrat vorbim
de specificitate absolut; amintim ureaza, arginaza, etc
O C

NH2 ureaz

NH2
Uree
HN C

CO2 + 2NH3

HOH

NH2

arginaz

NH

HOH

(CH2)3
H2N CH COOH
Arginin

O C

NH2
NH2

Uree

+ H2N CH COOH
(CH2)3
NH2
Ornitin

Dac o enzim acioneaz asupra unui grup de substrate cu structur asemntoare vorbim de
specificitate relativ; n aceast clas intr proteazele, lipazele, fosfomonoesterazele, etc.

SPECIFICITATEA ENZIMELOR
SPECIFICITATEA DE ACIUNE
Un substrat poate suferi aciunea mai multor enzime, care vor
produce reacii diferite, avnd ca rezultat produi de reacie
diferii.
aa-oxidaz
R
H2N CH COOH
Aminoacid

aa-decarboxilaz
transaminaz

R C COOH + NH3
O Cetoacid
R CH2 NH2 + CO2
Amine
R C COOH
O Cetoacid

SPECIFICITATEA ENZIMELOR

STEREOSPECIFICITATEA
dac unele substrate se gsesc n una din formele D(+), D(), L(+)
sau L(), enzima transform numai una din ele. Prin urmare enzima
deosebete att izomerii optici (+,) (dextrogir, levogir), ct i
formele spaiale (D,L).

CH3

NAD+

NADH, H+

HO C H
COOH

CH3
C O
COOH

Acid L(+)-lactic

Acid piruvic

LDH

STEREOSPECIFICITATEA

Enzimele deosebesc izomerii geometrici cis, trans

fumaraza acioneaz numai asupra acidului fumaric (izomerul trans)

i nu asupra acidului maleic (izomerul cis):
H

HOOC
C
C
H

fumaraz
+ HOH

CH2 COOH
HO CH COOH

COOH

Acid fumaric

Acid L-malic

STEREOSPECIFICITATEA

Asimetria biologic
n acest caz enzima este capabil s diferenieze grupri care din
punct de vedere chimic sunt identice. Explicaia acestui fapt const
n aceea c dei un substrat apare ca fiind simetric, interaciunea E-S
este asimetric. Stereospecificitatea interaciunilor E-S a fost prima
dat demonstrat i explicat n cazul aconitazei, enzim al crui
substrat este acidul citric.
Reiese c aconitaza atac ntotdeuna numai partea din structura
acidului citric care provine din OAA, dei cealalt parte, identic, are
anse egale de a participa la reacie

14

CH3 CO SCoA
Acetil-CoA
H2O
+
CO COOH
CH2 COOH
OAA

CoA-SH

14

CH2 COOH
aconitaz
HO C COOH
H2O
CH2 COOH
Acid citric

14

14

CH2 COOH
Acid cis-aconitic

CO COOH

CH2 COOH
C COOH

CH2 COOH
CH2
-Kg

Stereospecificitatea

A
sp3

Suprafata enzimatica
Explicaia const n aceea c interaciunea E cu
S simetric se face ntr-o manier ce-i confer
acestuia (S) asimetrie; aceasta este posibil
deoarece legarea E cu S se face prin cel puin
trei puncte, fiind diferit n funcie de modul de
abordare a substratului de ctre enzim.

EXEMPLE DE SPECIFICITATE ENZIMATIC

PROTEAZELE

Pepsina hidrolizeaz numai legturile peptidice la care particip L-aminoacizii,

hidroliza fiind favorizat dac R i R sunt resturi aromatice.
Tripsina atac legturile peptidice n care gruparea
provine de la aminoacizi
bazici (lizin sau arginin). Substituirea gruprii NH 2 din catenele laterale ale
aminoacizilor inhib puternic activitatea enzimatic, n timp ce substituirea gruprii
NH2 terminale favorizeaz aciunea sa.

Chimotripsina are aciune hidrolitic asupra legturilor peptidice la care particip

aminoacizii aromatici.
Carboxipeptidazele scindeaz legtura peptidic cea mai apropiat de captul Cterminal, dac ultimul aminoacid este aromatic.
Leucinaminopeptidazele scindeaz legtura peptidic cea mai apropiat de captul Nterminal, cu condiia ca acest aminoacid
(N-terminal) s fie leucina, norleucina,
norvalina sau acidul aminocaproic.

Specificitatea Ser-Proteazelor
Trypsina
Taie la nivelul Lys, Arg

Buzunar incarcat negativ

O
O
CNCCN
C
C
C
C
NH3
+
COOC
Asp

Chymotrypsina
T rp, Phe, Tyr
O
O
CNCCN
C

Elastaza
Taie la nivelul Ala,
Gly
O
O
CNCCN
CH3
Non polar

Non polar

Centrul activ

EXEMPLE DE SPECIFICITATE ENZIMATIC

COLINESTERAZELE
Sunt enzime care hidrolizeaz esterii colinei:

CH3
+
R CO O CH2 CH2 N CH3 + H2O
CH3
Ester al colinei

CH3
R COOH + HO CH2 CH2 N CH3
CH3
Colin
+

Celulele creierului necesita acetilcolina pentru a

transmite mesaje ntre celulele creierului i alte pri ale
corpului. Nivelurile reduse ale neurotransmitorului
acetilcolin sunt asociate cu niveluri mai sczute de
activitate cognitiva. Pacientii cu boala Alzheimer au un
nivel crescut de acetilcolinesteraza. n plus fa de
inhibarea acetilcolinesterazei din creier, huperzina A
crete efectiv concentraiile acetilcolin, ceea ce
mbuntete i mai mult de memoria, procesarea
cognitiv i altele functii legate de activitatea creierului.
huperzina A ,extractul activ din Huperzia
serrata, actioneaza ca un puternic
inhibitor al unei enzime numite
acetilcolinesteraza ( AChEI )

EXEMPLE DE SPECIFICITATE
ENZIMATIC
GLICOZIDAZELE
Sunt enzime care scindeaz legturile
glicozidice; frecvent aceste enzime sunt
specifice unei monozaharide particulare
(glucozidaz, galactozidaz, manozidaz, etc).

EXEMPLE DE SPECIFICITATE
ENZIMATIC
AMINOACIDOXIDAZELE

Sunt enzime ce catalizeaz reacile de oxidare ale

aminoacizilor
Enzimele fac distincie net ntre L- sau D-aminoacizi; prin
urmare se cunosc L-aminoacidoxidaze sau Daminoacidoxidaze
R C COOH + 1/2O2
NH2
Aminoacid

aminoacidoxidaz

R C COOH + NH3
O
Cetoacid

CONCLUZII

Specificitatea pentru o structur complex coninnd numeroase grupri

funcionale dispuse ntr-un mod bine determinat, arat c legarea enzimei
cu substratul se face prin mai multe puncte. Aceast necesitate a
contactelor multiple i simultane este cea care explic remarcabila
specificitate steric a enzimelor, incluznd posibilitatea de
difereniere ntre grupe aparent identice ale moleculelor simetrice.
Pe de alt parte, diversitatea gruprilor chimice care determin o
specificitate dat, implic participarea a numeroase fore pentru
asigurarea formrii complexului enzim-substrat. Dac substratul conine
grupri ncrcate, interaciunea cu enzima va fi ntotdeauna de tip
electrostatic; dac substratul conine grupri fr sarcin, intr n joc
alte fore ca: legturi de hidrogen, fore Van der Waals, etc.

CINETICA ENZIMATIC

Studiul fundamental al procesului catalitic se bazeaz

pe msurarea cantitativ a vitezei reaciilor
catalizate
Factori care acioneaz asupra vitezei
concentraia enzimei
concentraia substratului
temperatura
pH-ul
efectorii enzimatici

CONCENTRAIA ENZIMEI

n condiii adecvate, viteza unei reacii enzimatice

este funcie liniar de concentraia enzimei:
V = k(E)
unde E reprezint concentraia enzimei.

B
A
C

[E]

80

Produs

Concentratia substratului

60
40
20
0

Substrat (mol)

S
+
E

ECUAIA LUI MICHAELIS-MENTEN

E+S

K1

K 1

ES

K2

K 2

E+P

Dup cum reiese, K1, K1, K2 i K2 sunt constantele de vitez ale reaciilor considerate.
Vitezele de reacie corespunztoare acestor echilibre sunt:
V1=K1[E][S]
V-1=K-1[ES]
V2 =K2[ES]
V-2=K-2[E][P]

Pentru simplificarea deducerii ecuaiei lui Michaelis-Menten facem urmtoarele presupuneri:

probabilitatea ca E+P s treac n complexul ES este nul; deci:

V2=0
cantitatea de enzim din amestec rmne nemodificat pe tot parcursul reaciei; rezult c:
[Et]=[ES]+[E]
etapa limitant de vitez este V2, putnd afirma c:
V=V2=K2[ES]

Km

K 1 K 2
K1

concentraia complexului [ES] rmne constant; V1=V1+V2

[S ]
V Vmax
K m [S ]

V Vmax

[S]n
K m [S]n

SEMIFICAIA LUI K m I V max

Km (constanta lui Michaelis-Menten) este o concentraie de

substrat i anume acea concentraie pentru care viteza de
reacie este jumtate din viteza maxim.
Vmax
V =
2
1
[S]
Vmax Vmax
2
K m [S]
1
[S]

, sau
2 K m [S]
K m [S] 2[S]

Km = [S]

Semnificaia lui Km este bine definit; Km reflect afinitatea enzimei pentru substrat
i anume cu ct Km este mai mic cu att afinitatea enzimei pentru substrat este mai mare i invers. Explicaia
Vmax
este simpl: Km mic arat c la o valoare mic a concentraiei substratului
se atinge
2
, ceea ce bineneles demonstreaz afinitatea mare a acesteia pentru substrat i invers.

Vmax reprezint viteza maxim de reacie; ea reflect capacitatea catalitic maxim a

enzimei i teoretic poate fi atins numai la concentraii infinite de substrat

DETERMINAREA LUI Km I Vmax

Din curba lui Michaelis-Menten nu poate fi determinat Vmax deoarece nu se pot atinge concentraii
infinite ale substratului, iar de aici nici Km. Pentru determinarea lor se procedeaz la linearizarea
ecuaiei lui Michaelis-Menten obinndu-se ecuaia lui Lineweawer-Burk; n aceast ecuaie 1/V este
exprimat n funcie de 1/S

Se msoar unghiul , iar din tg se determin Km deoarece

Km = tgVmax

Km
1
1
1

V
Vmax [S]
Vmax

1/V

1/Vmax
1/[S]

Concluzii

Ecuaia lui Michaelis-Menten este fundamental n studiul de cinetic

enzimatic, permind analiza cantitativ a majoritii reaciilor enzimatice.
Ea a fost dedus pornind de la ideea formrii unui singur intermediar ES,
cum am vzut; comportarea cinetic a enzimelor este ns mult mai complex,
deoarece chiar n reaciile cu un singur substrat pot aprea mai muli
intermediari.
De asemenea, majoritatea reaciilor implic mai multe substrate i mai
muli produi; analiza cinetic a lor este prin urmare mult mai complex, dar
punctul de plecare rmne tot ecuaia lui Michaelis-Menten.
Menionez c formarea complexului ES postulat de Michaelis-Menten nu
este o speculaie teoretic, existena sa fiind dovedit pe mai multe ci.

TEMPERATURA

Creterea temperaturii determin creterea vitezei de reacie, mrindu-se

micarea moleculelor. S-a constatat c pentru creterea temperaturii cu 10 C,
viteza de reacie se dubleaz sau tripleaz; aceasta ns numai pn la o
anumit temperatur numit temperatura optim, la care viteza de reacie este
maxim, dup care viteza de reacie scade rapid, deoarece enzimele fiind
proteine se denatureaz ireversibil la temperaturi ridicate.
Temperatura optim de aciune a enzimelor n organism este 37 C; la 40
C majoritatea enzimelor sunt inactivate, pentru ca la 60 C toate enzimele s
fie denaturate ireversibil.
V
Vmax

temperatur 60o C
optim

TEMPERATURA

K
A
E
R
T

=
=
=
=
=

constanta de vitez
factor de frecven
energia de activare
constanta general a gazelor
temperatur absolut

K Ae

E
RT

E 1
ln K ln A
R T

lnK

lnA

tg

1/T

E
R

sau

E
, de unde
R
E R tg
tg

TEMPERATURA

Semnificaia fizic a energiei de activare a fost exprimat prin teoria

complexului activat sau teoria vitezelor absolute de reacie.
Conform acestei teorii, ntre moleculele iniiale i produii de reacie
exist o barier de energie numit energie de activare; pentru a reaciona,
moleculele trebuie s aib o energie cel puin egal cu energia de activare.
Desigur, cu ct aceast energie este mai mic numrul moleculelor care
vor reaciona va fi mai mare i deci viteza de reacie mai mare i invers, la
o energie de activare mare viteza de reacie va fi mai mic.

pH-ul
Enzimele i desfoar activitatea la anumite valori ale pHului. Aceasta este firesc deoarece enzimele sunt proteine, iar
gruprile care fac parte din centrul activ pot fi disociate.
Rolul enzimelor n fixarea substratului, sau n cataliz poate
depinde de forma (disociat sau nedisociat) sub care se
afl. Substratul poate, de asemenea, s se afle ntr-o form
disociat sau nedisociat, ceea ce determin complexarea
enzimei aflat n una sau alta din forme.
n general enzimele sunt active ntr-un interval de pH. n
cadrul acestuia exist o valoare la care activitatea
enzimatic este maxim; acesta este pH-ul optim.

pH-ul

Pentru a ilustra efectul pH-ului asupra activitii enzimelor

prin modificri ale gradului de ionizare vom considera un
exemplu general.
Presupunem c activitatea unei enzime depinde de dou grupri
disociabile prezente la centrul activ: COOH (rest al acidului
glutamic) i gruparea imidazol (rest al histidinei). Dac noi
ne referim exclusiv la aceste dou funciuni, putem considera
enzima ca putnd exista sub urmtoarele trei forme (aceasta n
funcie de pH): AH2+, AH, A

Vmax

pH optim

pH

Dac substratul este sub forma S+, el va putea interaciona cu forma A, prezent
numai n mediu bazic; dac substratul este sub forma S , el va putea interaciona
numai dac enzima este sub forma AH2+, iar aceasta este posibil numai n mediu
puternic acid.

COOH

NH
NH

= AH2

COO

NH
NH

COO

= AH

N
NH

=A

pH-ul

Schimbarea conformaiei spaiale

O alt modificare a enzimei sub aciunea pH-ului este schimbarea
conformaiei spaiale a acesteia. Deseori, n regiunea n care se leag
substratul este necesar un grup distal ncrcat, pentru a menine
structura teriar sau cuaternar nativ. Dac sarcina acestei grupri
este schimbat, enzima i modific conformaia n sensul c devine
fie mai compact, fie disociaz n protomeri, prin aceasta pierzndui activitatea.
Dat fiind multitudinea de ci prin care pH-ul influeneaz
activitatea enzimatic, la determinarea activitii unei enzime trebuie
s se in seama de pH-ul optim de aciune al acesteia.

pH-ul

Pentru majoritatea enzimelor activitatea optim are loc la pH=5,09,0, dar se cunosc numeroase enzime a cror pH optim de aciune
este n afara acestor limite:

ENZIMA

pH-UL
OPTIM

LOCUL DE ACIUNE

pepsina
tripsina
chimotripsina
amilaza
lipaza
fosfataza alcalin
fosfataza acid

1,8
8,0
8,1-8,6
7,0
7,0-7,5
8,6-9,1
5,0-5,6

sucul gastric
sucul pancreatic
sucul pancreatic
sucul pancreatic
pancreas
oase
prostat

Mecanismul de actiune al enzimelor

Enzimele nu acioneaz toate dup un singur
mecanism de reacie universal valabil
Dintre numeroasele mecanisme de aciune propuse,
cele mai importante sunt:
cataliza acido-bazic,
cataliza covalent
cataliza prin ioni metalici
cataliza prin distorsiune.

Mecanismul de actiune al enzimelor

Cataliza acido-bazica
Este cel mai frecvent mecanism ntlnit n cataliza
enzimatic
Consta in procese de transfer de protoni intre gruparile
acido-bazice ale enzimei si cele ale substratului
n calitate de catalizatori acido-bazici generali pot
funciona gruprile carboxilice sau aminice libere ale
resturilor aminoacizilor acizi sau bazici; gruparea tiol
a cisteinei, gruparea imidazol a histidinei i gruparea
hidroxil a tirozinei.

Mecanismul de actiune al enzimelor

Cataliza acido-bazica
Viteza reactiilor catalizate de acizi sau baze este influentata de
doi factori importanti:
Taria acizilor sau a bazelor: gruparea imidazol a histidinei are
pka=6, actionand ca donor/acceptor la pH fiziologic
Viteza cu care acidul sau baza cedeaza/accepta protoni; si din
acest punct de vedere este eficienta His
In chimotripsina, aminoacizii Asp 102 si His 57 functioneaza
ca grupe cu caracter acid si, respectiv caracter bazic.

Mecanismul de actiune al enzimelor

Cataliza covalenta
Serin proteazele (tripsina, chimotripsina, trombina)
actioneaza dupa acest mecanism.
Inainte de a se lega la enzima, substratul adopta o
stare de tranzitie caracterizata
prin entropie
scazuta, pentru care enzima are afinitate mai mare

Cataliza covalenta
Cea mai comun cale n cataliza covalent implic
atacul unei grupri nucleofile a catalizatorului
asupra atomului de carbon electrofil al substratului.
Gruprile nucleofile conin atomi ce posed
electroni neparticipani capabili s-i pun n comun;
aceste grupri sunt catalizatori extrem de eficieni,
putnd cataliza reacii foarte diferite.

Cataliza covalenta

Moleculele enzimelor conin mai multe grupri nucleofile,

capabile s iniieze procese catalitice; amintim:

gruparea imidazol a His

CH2 CH COOH

.
HN
N.
NH2

C
H

..
gruparea OH a Ser
CH2 ..
O H

H2N CH COOH

..
gruparea SH a Cys
CH S H
2 ..
H2N CH COOH

Cataliza covalenta

Vom exemplifica acest tip de cataliz prin

hidroliza unui acil-derivat:
RX, unde R = acil:

RX + H2O
R OH + X + H+
n absena catalizatorului

rapid
n prezena catalizatorului
RX + Y
R Y + X
nucleofil (Y):
rapid
R Y + H2O
R OH + Y + H+

rapid
Global:
RX
+
H
O
R OH + X + H+

lent

n prezena catalizatorului nucleofil (Y) se formeaz intermediarul covalent

RY,
care coboar mult bariera energiei de activare, mrind viteza de reacie.

EFECTORII ENZIMATICI

Sunt compui care modific reaciile enzimatice; unii le

activeaz i se numesc activatori, alii le inhib i prin urmare
se numesc inhibitori. Efectorii enzimatici i exercit aciunea
foarte diferit, producnd modificri asupra: - enzimei
- substratului
- coenzimei
- complexului enzim-substrat

INHIBITORII

Sunt substane care opresc sau reduc viteza reaciilor

enzimatice. Mecanismul de aciune este foarte complex,
deoarece:
- inhib formarea complexului ES;
- blocheaz metalele implicate n procesul catalitic;
- acioneaz asupra protein-enzimei modificndu-i structura,
etc.
Inhibiia unei reacii enzimatice poate fi reversibil sau
ireversibil; n primul caz activitatea enzimatic se reia prin
eliminarea inhibitorului din mediu, dar n cel de-al doilea
enzima nu-i mai poate relua activitatea

INHIBIIE IREVERSIBIL

n acest tip de inhibiie se formeaz un complex enzimE+I

EI
inhibitor stabil, nedisociabil:
(reacie
ireversibil)

Inhibiia ireversibil prezint urmtoarele caracteristici:

inhibiia se accentueaz progresiv, pn la nlturarea
complet a activitii enzimatice i nu poate fi anulat prin
ndeprtarea inhibitorului;
se datoreaz unor modificri covalente i permanente ale
gruprilor funcionale necesare catalizei, transformnd
enzimele n molecule inactive;
la nceput acest tip de inhibiie este incomplet, dar crete n
timp, pe msur ce apar modificrile chimice respective.

INHIBIIE IREVERSIBIL

Acidul iodacetic (ICH2COOH) este un inhibitor al ribonucleazei la pH = 5,5.

Prin tratarea enzimei cu acest compus se obin mai multe forme inactive ale
enzimei; una n care se formeaz un produs alchilat al His119, alta n care se obine
un produs alchilat al His12 i n fine o form n care ambele histidine sunt alchilate.
Concluzia cert a acestei experiene este c cele dou histidine sunt implicate n
activitatea catalitic a enzimei.
2. DIPFP este un inhibitor ireversibil al mai multor enzime ca: tripsina,
chimotripsina, trombina, elastaza, acetilcolinesteraza, etc., enzime ce conin n
centrul activ serina. DIPFP, compus ce face parte din clasa organofosforicelor,
reacioneaz cu gruparea OH a serinei, oprind activitatea enzimatic. Printre
enzimele serinice este i acetilcolinesteraza, enzim implicat n transmiterea
influxului nervos; datorit aciunii toxice pe care o are asupra SNC, DIPFP a fost
numit i otrava nervilor.
3. Ionii metalelor grele ca Hg2+, Pb2+, sunt inhibitori ireversibili pentru enzimele ce
conin aminoacizi cu sulf n centrul activ

INHIBIIE REVERSIBIL

competitiv,
necompetitiv.

INHIBIIE COMPETITIV
Inhibitorii competitivi prezint dou
particulariti:
- au o structur asemntoare cu
substratul;
- ntre inhibitor i substrat are loc o
competiie pentru a se lega de centrul
activ al enzimei.

INHIBIIE COMPETITIV
E + S
+ I

ES

E+P

[E] [I] =
Ki
[EI]

EI

[Et] = [E] + [ES] + [EI]

V = Vmax

[ES]
[Et]

V = Vmax

[E] [S] =
Km
[ES]

[S]
.
Km (1+ [ I ] ) + [S]
Ki

INHIBIIE COMPETITIV
Ecuaia lui Lineweawer-Burk

inhibiiei competitive

1
[S]

tinde spre zero

1 Km 1
1

V Vmax [S] Vmax
1 Km 1
[ I]
1

(1 )
V Vmax [S] K i Vmax

1
1

V
Vmax

Prin urmare, n cazul inhibiiei competitive

viteza de reacie poate atinge V max, ca i cum
inhibitorul nu ar fi prezent, dac se mrete
suficient de mult concentraia substratului

INHIBIIE COMPETITIV
V
Vmax
a

Vmax
2

Kma Kmb

curba Michaelis-Menten fr inhibitor

curba Michaelis-Menten cu cantiti mici de inhibitor
curba Michaelis-Menten cu cantiti mari de inhibitor

[S]

Kmc

Curba Michaelis-Menten n absena i prezena inhibitorilor

competitivi
1/V

b
a

1
Kma

1
Kmb

1
Kmc

curba Lineweawer-Burk fr inhibitor

curba Lineweawer-Burk cu cantiti mici de
inhibitor
curba Lineweawer-Burk cu cantiti mari de
inhibitor

1/[S]

Curba Lineweawer-Burk n absena i prezena inhibitorilor

competitivi

INHIBIIE NECOMPETITIV

ntre inhibitor i substrat nu se realizeaz o

competiie pentru a se lega de enzim;
inhibitorul nu prezint asemnri structurale cu
substratul;
inhibitorul se leag de enzim n alt loc dect
centrul activ;
inhibitorii necompetitivi scad Vmax dar nu afecteaz
Km-ul.

INHIBIIE NECOMPETITIV

INHIBIIE NECOMPETITIV
V
Vmax
a
Vmax
2

Curba Michaelis-Menten n absena i prezena inhibitorilor

necompetitivi

[S]

Km

1/V

1
Vmax
b

1
Vmax
a
1
Km

1/[S]

Curba Lineweawer-Burk n absena i prezena inhibitorului

necompetitiv

INHIBIIE NECOMPETITIV
n cazul inhibiiei necompetitive inhibitorul, chiar
dac nu se leag de centrul activ al enzimei,
acioneaz asupra acesteia deformnd-o, astfel nct
ea nu mai poate forma complexul ES la vitez
normal pe de o parte, iar pe de alt parte
complexul ES format nu se mai descompune cu
vitez normal pentru a forma produsul de reacie.
Este evident c n acest caz inhibiia nu poate fi
nlturat prin mrirea concentraiei substratului.

ENZIME ALOSTERICE
sunt proteine oligomere, alctuite din mai multe subuniti, identice sau diferite, de
regul n numr par: doi (mai rar), patru, ase, etc;
reaciile catalizate de aceste enzime sunt endergonice i ireversibile; ele imprim
sensul unic al cilor metabolice din care fac parte;
intervin de obicei n prima etap a unui lan de reacii, asigurnd prin aceasta
controlul intensitii procesului i ireversibilitatea lui;
fiecare monomer posed un centru activ, o molecul de enzim putnd lega
concomitent mai multe molecule de substrat; fixarea substratului pe una din
subuniti influeneaz legarea lui pe celelalte, existnd deci fenomenul de
cooperativitate;
pe lng centri activi monomerii prezint i centri alosterici, de care se vor lega
efectorii alosterici; sunt compui cu mas molecular mic, fr analogie cu
substratul i pot activa reaciile enzimatice (efectori pozitivi), sau le pot inhiba
(efectori negativi). Efectorii alosterici sunt, n general, prezeni la locul de aciune al
enzimelor, variind doar concentraia lor;
enzimele alosterice sunt inhibate de produsul final de reacie printr-un proces numit
retroinhibiie sau inhibiie feedback.

ENZIME ALOSTERICE

n procesul de biosintez a hemului, peste o anumit

concentraie acesta devine un inhibitor al ALA-sintetazei,
enzima alosteric a acestui proces.

Succinil-CoA ALA-sintetaz
+
Gly

ALA-sintetaza = Amino-Levulinat-sintetaza

Hem

IZOENZIME

Forme multiple ale unei enzime , cu structuri diferite , care catalizeaza

aceeasi reactie
Lactat dehidrogenaza LDH catalizeaza transformarea acidului piruvic in
acid lactic.
LDH se gaseste sub forma a 5 izoenzime care se diferentiaza prin
compozitia lor in subunitatile H si M
LDH1 = H4 (4 subunitati de tip heart)
LDH2 = H3M
LDH3 = H2M2
LDH4 = HM3
LDH5= M4 (4 subunitati de tip muscle)
LDH1 si LDH2 se gasesc in miocard , eritocite si rinichi
LDH3 se gaseste in plamani
LDH4 et LDH5 se gaseste in ficat si musculatura striata.
Aceste enzime pot fi separate prin electroforeza
Cresterea activitatii enzimatice serice ale LDH indica necroza sau lezarea
celulelor care contin enzima

LDH

Valori normale : 240-480 UI/L

LDH1 14-26%
LDH2 29-39%
LDH3 20-26%
LDH4 8-16%
LDH5 6-16%

LDH
Interpretarea rezultatelor
Valori crescute

Infarct miocardic cresterile sunt de 2-10 ori valoarea superioara a

normalului , incep la 12-24 de ore de la debutul infarctului , se mentine
crescut 6-10 zile
Infarct pulmonar
Anemie megaloblastica
anemii hemolitice
Leucemii
Distrofie musculara
Mononucleoza infectioasa
Cresteri usoare: hepatite, ciroza, delirium tremens

CREATINFOSFOKINAZA

CPK

Catalizeaza fosforilarea creatinei in celulele musculare, miocardice si

cerebrale
Exista 3 izoenzime ale CPK
CPK MM - in muschii scheletici si in miocard
CPK MB in miocard
CPK BB- in creier, tub digestiv si tractul genitourinar

CPK

Valori normale
CPK total femei : 24-170 UI/L
CPK total barbati: 24-195 UI/L
CPK MB < 24UI/L

CPK
Interpretarea rezultatelor

Cresteri ale izoenzimelor

CPK MB : infarct miocardic ( apare la 6-12 ore de la debut)
CPK MM: boli musculare, interventii chirurgicale cu afectarea
musculaturii scheletice
CPK BB: leziuni cerebrale, sindrom Reye, anumite forme de cancer
pulmonar, prostatic si de san

Modaliti de exprimare a activitii enzimatice

Determinarea activitii enzimatice se efectueaz prin stabilirea vitezei de

reacie care este proporional cu concentraia enzimei prezente n mediu.

Pentru o exprimare unitar a activitii enzimelor a fost adoptat, dup recomandrile I.U.B.
(Uniunea Internaional de Biochimie), exprimarea n uniti internaionale (U.I. )
Unitatea internaional (U.I.) reprezint cantitatea de enzim care catalizeaz transformarea
unui mol de substrat, timp de un minut n condiii optime de pH, temperatur i concentraie a
substratului.
Alte modaliti de exprimare a activitii enzimatice:
Katalul reprezint cantitatea de enzim ce poate transforma un mol de substrat pe secund.
cel mai adesea activitile se exprim n subdiviziuni ale acestei activiti:
Kat = 10-6 Kat
nKat = 10-9 Kat
pKat = 10-12 Kat
se pot stabili corelaii ntre unitile enzimatice UI i Katal
1 Kat = 1 mol/s = 60 mol/min = 60 .106 mol/min = 6 .107 UI
1 UI = 1 mol/min = 1/60 mol/s = 1/60 Kat = 16,67 nKat
Pentru enzimele serice activitatea enzimatic se raporteaz la ml ser, sau l,
exprimndu-se n UI/ml, respectiv UI/l.

Modaliti de exprimare a activitii enzimatice

Pentru enzimele din preparate biologice sau enzimele pure

activitatea enzimatic se exprim ca activitate specific.
Aceasta este expresia puritii unei enzime. Valoarea ei pentru
o enzim dat, crete odat cu creterea puritii enzimei; este
maxim i constant la puritate maxim.
Activitatea enzimatic specific reprezint numrul de
uniti enzimatice raportat la un miligram protein.
Activitatea molecular sau molar, numit i numr de
turnover (TN) reprezint numrul de molecule de substrat
transformate ntr-un minut de o molecul de enzim, respectiv
de un mol de centru activ, n condiii optime de pH,
temperatur i concentraia substratului