Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Existen 3 mtodos:
1. Biolgicos
2. Qumicos
3. Fsicos
4. Nuevo mtodo - Combinacin de Transfeccin por puntosdirectos y de mRNA (RNA mensajero)
Transfeccin Estable
Es una tcnica mediante la cual
se introduce material gentico
que usualmente tiene un gen
marcador
de
seleccin
(Transgenes) se integran en el
genoma del husped y mantener
la expresin del transgen, incluso
despus de las clulas husped
se replican.
Transfeccin Transitoria
Genes
transfectadas
transitoriamente slo se expresan
por un perodo limitado de tiempo y
no se integran en el genoma (Fig.
1b)
[1].
Transitoriamente
transfectadas materiales genticos
se pueden perder por factores
ambientales y la divisin celular,
por lo que la eleccin de la
transfeccin estable o transitoria
depende
del
objetivo
del
experimento.
Ir a:
Los mtodos qumicos
Mtodos de transfeccin qumica son los mtodos ms utilizados en la
investigacin contempornea y fueron los primeros en ser utilizados para
introducir genes extraos en clulas de mamfero [10]. Los mtodos qumicos
comnmente utilizan polmero catinico (uno de los productos qumicos ms
antiguos utilizados), fosfato de calcio, lpido catinico (el mtodo ms popular),
y el cido amino catinico [10-12]. El principio subyacente de mtodos
qumicos es similar. Productos qumicos cargados positivamente hacen
complejos de cido / qumicas nucleicos con cidos nucleicos cargados
negativamente. Estos complejos de cido / qumicas nucleicos cargados
positivamente son atrados a la membrana celular cargada negativamente. El
mecanismo exacto de cmo nucleico complejos de cido / qumicos pasan a
travs de la membrana celular es desconocida, pero se cree que la endocitosis
y fagocitosis estn involucrados en el proceso. ADN transfectado debe ser
entregado al ncleo para ser expresado y de nuevo el mecanismo de
translocacin al ncleo no se conoce.
Ir a:
Los mtodos fsicos
Los mtodos de transfeccin fsicos son los mtodos ms recientes y utilizar
diversas herramientas fsicas para suministrar cidos nucleicos. Los mtodos
incluyen la inyeccin directa micro, suministro de partculas biolstico, la
electroporacin, y basado en lser de transfeccin [13]. En resumen, el mtodo
micro inyeccin inyecta directamente el cido nucleico en el citoplasma o
ncleo [14, 15]. Este mtodo proporciona cidos nucleicos en las clulas, pero
exige habilidad, a menudo causa la muerte celular, y es muy intensivo en
mano de obra. Suministro de partculas biolstico emplea partculas de oro que
conjugan con los cidos nucleicos [16, 17]. Los conjugados de cido / partculas
nucleicos se dispararon a continuacin, en las clulas receptoras a una
velocidad alta ("pistola de genes"). Este mtodo es sencillo y fiable pero
requiere instrumentos caros y provoca dao fsico a las muestras. La
electroporacin es el mtodo fsico ms ampliamente utilizado. El mecanismo
exacto es desconocido, pero se supone que un impulso elctrico corto perturba
las membranas celulares y hace agujeros en la membrana a travs de la cual
pueden pasar los cidos nucleicos [18]. Debido a que la electroporacin es fcil
y rpido, que es capaz de transfectar un gran nmero de clulas en un corto
perodo de tiempo una vez que se determinan las condiciones ptimas de
electroporacin. Laser-transfeccin mediada (tambin conocido como
optoporation o phototransfection) utiliza un lser de pulso para irradiar una
membrana celular para formar un poro transitorio [19-22]. Cuando el lser
induce un poro en la membrana, cidos nucleicos en el medio se transfieren a
la clula debido a la diferencia osmtica entre el medio y el citosol. El mtodo
lser permite a uno observar la transfeccin de clulas y para hacer poros en
cualquier ubicacin en la clula. Este mtodo se puede aplicar a clulas muy
pequeas, ya que utiliza un lser, pero requiere un sistema de lser
microscopio caro. Adems de los mencionados anteriormente, hay otros
mtodos fsicos utilizando ultrasonido (sonoporacin) y el campo magntico
(magnetofection) [23-25].
Ir a:
La transfeccin de ARN
La transfeccin de mRNA tiene varios mritos ms de transfeccin de ADN
[26]. Los mritos incluyen ningn riesgo de integracin en el genoma del
husped, la eficiencia de transfeccin del ciclo celular independiente, sin
necesidad de vectores inducibles inmunes, y la expresin regulable y rpida.
Uso de mRNA transfeccin, se puede introducir cualquier nmero de mRNAs en
una clula, superando as la sobreexpresin de los genes. Estas ventajas se
originan principalmente en el hecho de que el ARNm no necesita ser situado en
un ncleo para ser expresado. ADN transfectado debe llevar a una clula
husped o promotor especfico de tejido que se transcribe a ARNm y el nivel de
expresin se determina por la fuerza del promotor. En contraste con la
Fig. 3
Fig. 3
Una ilustracin de phototransfection. Los rayos lser (flashes verdes) crean
agujeros en regiones especficas de una sola clula (localizaciones
subcelulares) y cidos nucleicos (puntos rojos) se entregan en las reas locales
Ir a:
Panorama
Mtodos de transfeccin estn evolucionando rpidamente. Incluso dentro de
una clase, muchos productos y tecnologas nuevas se ponen en marcha cada
ao con una mejor eficiencia y menor citotoxicidad. Desde el mtodo mediada
por virus al mtodo lser mediada, cada mtodo tiene sus propias ventajas y
desventajas por lo que la seleccin del mejor mtodo depende de objetivos
experimentales del experimentador.