Sunteți pe pagina 1din 64

Prof.dr.ing.

Brandusa Ghiban

CURS 12

ENZIME
Enzimele sunt compui macromoleculari de natur proteic,
produi i prezeni numai n organismele vii, cu rol de biocatalizatori
ai tuturor transformrilor biochimice caracteristice metabolismului.
Necesitile plastice i energetice ale organismelor vii sunt
acoperite, pe de o parte, din substanele nutritive, relativ stabile
chimic, iar pe de alt parte de o serie de reacii de ardere la care
particip oxigenul. Apariia i evoluia fiinelor vii organizate a fost
nsoit de selecionarea i perfecionarea unor mecanisme capabile s
asigure o vitez mare de desfurare a proceselor biochimice, n
condiii de activitate relativ menajate (soluii apoase, temperaturi
joase, mediu neutru etc.). Aceast problem, a fost rezolvat n
decursul evoluiei, prin apariia catalizatorilor biologici care sunt
enzimele.
Enzimele au rol esenial n biosinteza i biodegradarea
substanelor din materia vie. In lipsa enzimelor, majoritatea reaciilor
chimice din organism nu s-ar putea produce i deci nu ar mai exista
procese metabolice i nici fenomene de via.
2

Bogate n enzime sunt plantulele, frunzele tinere, esuturile


meristematice, seminele n stare de germinaie, fructele. In general,
plantele tinere au un coninut mai ridicat de enzime dect plantele
adulte. Activitatea catalitic a enzimelor din organismele n cretere
este mai mare dect a celor din organismele adulte.
Dup locul unde acioneaz, se pot evidenia:
endoenzime (enzime intracelulare);
exoenzime (enzime extracelulare).
Endoenzimele, acioneaz n celulele n care s-au sintetizat. Ele
sunt lioenzime (legate mai slab n celul) i desmoenzime (legate mai
puternic n celule).
Exoenzimele, dup etapa de formare n celule, sunt eliminate n
lichidele din organism, unde i exercit activitatea catalitic. Astfel,
acioneaz de exemplu, enzimele din lichidele interstiiale, din diferite
caviti, din seva elaborat etc.
Substana asupra creia acioneaz enzimele se numete
3
substrat.

STRUCTURA CHIMIC GENERAL A ENZIMELOR


Enzimele se pot clasifica, din punct de vedere chimic n dou clase:
enzime monocomponente (holoproteice);
enzime bicomponente.
a) Enzimele monocomponente (holoproteice, proteine biocatalitice) sunt
constituite numai din proteine. Aciunea lor biocatalitic se datoreaz
anumitor fragmente din catena polipeptidic, care includ grupe funcionale
componente ale catenelor laterale ale aminoacizilor (-OH, -NH2, -SH, -COOH
etc.), constituind centrul activ sau situsul catalitic. Prin acest centru activ
enzima fixeaz substratul (l recunoate) sub forma unui complex enzimsubstrat, simbolizat E-S, i biocatalizeaz transformarea substratului.
Pentru recunoaterea i formarea complexului E-S, geometria
centrului activ trebuie s fie complementar cu cea a substratului. Blocarea
sau inactivarea centrului activ (de exemplu denaturarea proteinei) conduce la
pierderea activitii catalitice a enzimei holoproteice. In schimb, denaturarea
unei pri a proteinei, care nu cuprinde centrul activ, nu modific activitatea
catalitic a enzimei.
4

b) Enzimele bicomponente (heteroproteice) sunt constituite din:


componenta proteic (apoenzim, apoferment), care determin
specificitatea enzimei (o anumit secven a aminoacizior prin care enzima
recunoate substratul i l fixeaz), este caracterizat prin mas molecular
mare, termolabilitate etc.;
componenta neproteic (prostetic, coenzim, cofactor), care
determin mecanismul i viteza reaciei enzimatice poate fi: o vitamin, un
hormon, un colorant, nucleotide, metale. Ea este caracterizat prin mas
molecular mic, termostabilitate.
n majoritatea cazurilor, aciunea catalitic a enzimelor se manifest
numai n prezena unor substane speciale, denumite cofactori, care se clasific
n trei grupe:
coenzime sau cofermeni specifici, sunt substane organice cu mas
molecular mic, termostabile i care dializeaz uor din soluiile enzimei.
Coenzimele se caracterizeaz prin nsuirea lor de a reaciona reversibil cu
proteina care intr n structura enzimei (apoenzima sau apofermentul);
gruprile prostetice, substane combinate mult mai strns cu
apoenzima, se disociaz greu i, n general, rmn fixate pe o singur
apoenzim;
activatorii, denumii uneori i cofactori anorganici, sunt substane
nespecifice (diferite metale, ageni reductori etc.), care mediaz trecerea
5
enzimei ntr-o stare catalitic activ.

Este greu de precizat o demarcaie clar ntre cele trei grupe


de cofactori, clasificai dup natura i raportul lor fa de apoenzim.
Multe dintre coenzime i grupri prostetice sunt de fapt derivai ai
vitaminelor hidrosolubile. O mare parte dintre coenzime i grupri
prostetice identificate n componena unor enzime sunt nucleotide sau
derivai ai acestora. Dei n cazul enzimelor bicomponente,
componenta care particip efectiv la realizarea procesului biocatalitic
enzimatic este coenzima, totui, pentru manifestarea activitii
enzimatice, prezena apoenzimei de natur proteic este absolut
obligatorie, deoarece gruparea prostetic luat separat are slabe
proprieti catalitice. In complexul format de apoenzim i coenzim
(holoenzim) activitatea catalitic crete de 1000 de ori, comparativ
cu activitatea catalitic a coenzimei libere.
Legturile dintre apoenzim i coenzim sunt de natur
diferit, variind de la o enzim la alta i pot fi: legturi covalente,
legturi van der Waals etc. Datorit structurii proteice
macromoleculare, enzimele au o mas molecular mare i formeaz
soluii coloidale. Starea coloidal a enzimelor prentmpin difuzia
lor dintr-o celul n alt celul, condiionnd o localizare strict a
reaciilor biochimice n organism la nivelul diferitelor organe,
esuturi, celule.
6

CARACTERISTICI ALE ACTIVITII ENZIMATICE


Enzimele, asemntor catalizatorilor chimici obinuii,
biocatalizeaz numai acele reacii metabolice posibile din punct de
vedere termodinamic (care se desfoar spontan, avnd energia
liber G < 0). Rolul enzimelor, ca i al catalizatorilor chimici, este de
a reduce energia de activare (nu modific echilibrele chimice, dar
grbete atingerea lor).
Energia de activare n cazul enzimelor este ns mult mai mic.
De exemplu, energia de activare la descompunerea apei oxigenate
conform reaciei:
2 H2O2 = O2 + 2 H2O
este diferit, n funcie de tipul de catalizator utilizat:
fr catalizator: 18 kcal/mol;
cu catalizatorul chimic FeCl3: 11,7 kcal/mol;
cu biocatalizatorul catalaz: 5,5 kcal/mol
7

Viteza reaciei enzimatice este mult mai mare dect n cazul


reaciei catalizat de catalizatori chimici. De exemplu, enzima
catalaza realizeaz descompunerea H2O2 de 10 miliarde de ori mai
repede dect FeCI3 (ambii catalizatori au n structur cationul Fe3+).
Sensibilitatea reaciei enzimatice este foarte mare, astfel o
molecul de catalaz descompune 5 milioane de molecule de H2O2
ntr-un minut, la 0 0C i la pH = 6,8.
Enzimele catalizeaz reacii de desfacere i formare de
legturi n condiii fiziologice compatibile cu viaa. Aceleai reacii ar
necesita n laborator condiii de temperatur, presiune, pH,
improprii vieii.
Spre deosebire de catalizatorii chimici, enzimele se
caracterizeaz prin specificitate (absolut sau relativ) de substrat
sau de aciune.
Specificitatea de substrat absolut este proprietatea enzimelor
de a aciona asupra unui singur substrat (de exemplu, ureaza
catalizeaz numai descompunerea ureei). Acest tip de specificitate
este determinat de o anumit secven a aminoacizilor componeni ai
8
apoenzimei.

Specificitatea de substrat relativ este proprietatea enzimelor de


a aciona asupra unui grup de substraturi cu structur chimic
apropiat. De exemplu, maltaza catalizeaza hidroliza poliglucidelor n
care componentele glucide sunt legate -glicozidic.
Specificitatea de substrat poate fi: stereochimic, dac enzima
catalizeaz transformarea doar a unui singur izomer din mai muli
posibili (de exemplu: a izomerului trans, sau a izomerului cis; a
izomerului dextrogir, sau a celui levogir).
Specificitatea de substrat poate fi specificitate de legtur, dac
enzima catalizeaz formarea sau scindarea unui anumit tip de legtur
(peptidic, glicozidic, eteric, esteric etc.), indiferent de natura
substanei care o conine. De exemplu: lipazele catalizeaz hidroliza
gliceridelor indiferent de natura acidului gras component.
Specificitatea de aciune absolut este caracteristica enzimelor de
a cataliza o singur reacie, dintre multiplele reacii posibile.
Specificitatea de aciune relativ este proprietatea enzimelor de a
cataliza un anumit tip de reacie, dat de un grup de substraturi
nrudite. Acest tip de specificitate a enzimelor este determinat mai ales
de natura cofactorilor (gruparea prostetic, coenzima) i mai rar de
9
natura apoenzimei.

MECANISMUL DE ACIUNE A ENZIMELOR.


CINETICA REACIILOR ENZIMATICE
Mecanismul de aciune a enzimelor este analog cu cel al catalizatorilor
chimici. Enzimele sunt capabile s accelereze viteza de desfurare a diferitelor reacii
(micoreaz energia de activare), absolut necesare pentru meninerea i reproducerea
materiei vii. Enzimele catalizeaz numai reacii termodinamic posibile, care se pot
produce i fr participarea lor, dar ntr-un timp mai ndelungat i uneori n condiii
incompatibile cu materia vie.
Spre deosebire de catalizatorii nebiologici, enzimele au un randament mult
mai ridicat, care asigur mersul reaciei biochimice, n majoritatea cazurilor ntr-un
singur sens, fr reacii secundare. Ele prentmpin descompunerea unor substane
instabile n anumite condiii i permit realizarea unor procese chimice complexe, cu o
cantitate minim de energie.
Enzimele particip activ la procesele catalitice, parcurgnd urmtoarele
etape:
activarea moleculelor substratului (S), prin scderea energiei de activare a
acestuia, i formarea complexului intermediar disociabil, enzim-substrat (ES), mai
activ dect substratul ca atare;
transformarea complexului enzima-substrat (ES) n produsul de reacie
(procesul catalitic efectiv), mai nti legat de enzim (EP), i n final, prin eliberarea
10
enzimei, obinerea produsului de reacie, (P).

Schematic, mecanismul catalizei enzimatice,


conform teoriei etapelor intermediare, poate fi
reprezentat astfel:
E + S = ES ; ESEP ; EP P + E
sau considerat ca echilibru:
innd cont c transformarea ES EP este
practic instantanee iar reacia de transformare P + E
EP este nul (enzima fiind specific pentru substrat nu
i pentru produs), sistemul de ecuaii de mai sus devine:
i poart denumirea de echilibrul Michaelis-Menten.

11

FACTORII CARE INFLUENEAZ VITEZA


REACIILOR ENZIMATICE
Reaciei de formare i de descompunere a compusului enzim-substrat i se poate aplica legea
aciunii maselor i se poate determina astfel constanta de echilibru. Viteza reaciilor enzimatice
depinde n mare msur de concentraia enzimei i de concentraia substratului.
a) Influena concentraiei enzimei asupra vitezei reaciei enzimatice
Viteza reaciei enzimatice este direct proporional cu concentraia enzimei prezente n
mediul de reacie.

Fig. 6.1. Influena concentraiei enzimei


asupra vitezei reaciei enzimatice
12

n unele cazuri, de obicei cnd sunt prezeni n sistem i ali factori,


curba care reprezint dependena vitezei de concentraia enzimei, este
deviat fa de cea normal.
Abaterile de la aceast comportare se pot datora prezenei
inhibitorilor, folosirea unei concentraii de substrat sub limita de saturare a
enzimei etc.
b) Influena concentraiei substratului asupra vitezei reaciei
enzimatice
S-a constatat c dac se pleac de la o cantitate fix de enzim i se
mrete treptat concentraia substratului, se va forma o cantitate mai mare
de complex enzim-substrat, viteza reaciei va crete treptat, pn cnd toat
enzima s-a combinat cu substratul. Acest stadiu reprezint momentul de
saturare a enzimei, iar viteza va fi maxim (vmax). Dac se mrete n
continuare concentraia substratului, viteza de reacie nu se va mri,
deoarece nu exist enzim liber care s intre n reacie cu substratul.
Momentul de saturare a enzimei este dificil de stabilit, deoarece acesta
variaz n funcie de concentraia enzimei i de concentraia substratului. n
practic, activitatea enzimatic se apreciaz dup concentraia substratului,
cnd jumtate din cantitatea de enzim este combinat cu substratul sub
form de complex enzim-substrat. n acest caz, viteza reaciei este jumtate
13
din valoarea sa maxim.

Acest punct reprezint constanta Michaelis (KM) i reprezint concentraia


substratului pentru care viteza de reacie este jumtate din viteza maxim.
Deci, pentru v = vmax/2, rezult KM = [S].

Fig. 6.2. Influena concentraiei substratului


asupra vitezei reaciei enzimatice

Constanta Michaelis are valorile unor concentraii i se exprim n moli/L.


Constanta Michaelis se poate utiliza pentru a determina afinitatea enzimei fa
de substrat. Cu ct KM va avea o valoare mai mare, cu att afinitatea enzimei
fa de substrat va fi mai mic i invers. Relaia cantitativ dintre viteza
reaciei enzimatice, concentraia substratului i valoarea KM, care exprim
viteza reaciei enzimatice n fiecare moment, este dat de ecuaia Michaelis14
Menten:

Constanta lui Michaelis este o mrime important nu doar din


punct de vedere al cineticii enzimatice ci i pentru msurtorile
cantitative ale activitii enzimatice din esuturi. Cercetri recente au
pus n eviden importana medical a constantei KM. Unele cazuri de
leucemie (n care are loc o cretere enorm a numrului de leucocite)
pot fi regresate prin administrarea intravenoas a enzimei
asparaginaza care catalizeaz reacia de hidroliz a asparaginei la acid
aspartic i amoniac. Prin injectarea intravenoas a asparaginazei
(factor de cretere a leucocitelor), fenomenul de cretere a leucocitelor
este stopat. Cercetrile asupra surselor de asparaginaz au demonstrat
ca enzima are valori diferite ale KM n funcie de provenien (bacterii,
plante, animale). Deoarece concentraia de asparagin din snge este
foarte mic, cantitatea de asparaginaz injectat va avea efect
terapeutic, doar dac valoarea KM va fi suficient de mic pentru a
hidroliza rapid asparagina aflat n concentraii mici n snge.
Activitatea enzimatic se exprim prin unitatea enzimatic,
respectiv cantitatea de enzim care poate cataliza transformarea unui
micromol de substrat n timp de un minut. Activitatea enzimatic n
cazul enzimelor pure se determin prin numrul de molecule de
substrat care pot fi metabolizate ntr-un minut de o singur molecul de
enzim. Aceast mrime se numete raport de transformare (turnover
15
number).

c) Influena temperaturii asupra vitezei reaciei enzimatice


Activitatea enzimelor este foarte mult influenat de
temperatur. Asemntor celor mai multe dintre reaciile
chimice, viteza reaciei enzimatice crete cu creterea
temperaturii (se dubleaz la creterea temperaturii cu 10 0C).
Pentru fiecare enzim exist o temperatur la care
activitatea enzimatic este maxim, numit temperatur optim
(n general, cuprins ntre 20-40 0C. Pn la atingerea
temperaturii optime, activitatea enzimatic crete proporional cu
creterea temperaturii.
Dup atingerea acestei temperaturi, activitatea enzimatic
scade rapid cu creterea temperaturii, datorit denaturrii prii
proteice a enzimei, acelai fenomen avnd loc la scderea
temperaturii sub cea optim (fenomene utilizate n practic la
pstrarea alimentelor prin fierbere sau congelare). Cele mai
multe enzime sunt inactivate la temperaturi peste 55-600C, cu
excepia enzimelor din bacteriile termofile (din izvoarele termale),
16
active i peste 85 0C.

Fig. 6.3. Influena temperaturii


asupra vitezei reaciei enzimatice

Unele enzime, cum ar fi ribonucleazele, i pierd activitatea la


nclzire, dar i-o regsesc rapid la rcire, fapt care indic refacerea
conformaiei iniiale a catenelor polipeptidice desfcute. Temperatura
critic a unei enzime este temperatura la care enzima pierde jumtate
din activitatea sa, n timp de o or. Temperatura optim a enzimelor
variaz cu durata de expunere a acestora la o anumit temperatur.
Pentru o durat de timp mai scurt, temperatura optim are valori
mai mari dect pentru o perioad de timp mai lung. Aceast
comportare este important deoarece reprezint un mod de adaptare
a enzimelor la condiiile de mediu.
17

Legarea enzimei de substrat mrete rezistena acesteia la


temperaturi ridicate. Enzimele n stare uscat sau sub form
cristalin rezist la nclzire pn la temperaturi de 100 0C
(bobul de cereal uscat suport temperaturi mai ridicate dect
acelai bob n stare umed). Temperaturile joase nu distrug
activitatea enzimelor ci numai o micoreaz sau o opresc n mod
reversibil. Soluiile enzimatice diluate (1%) prin congelare,
urmat de topire, i mresc activitatea enzimatic, datorit
eliberrii de noi centri activi din molecula enzimei, n urma
proceselor de nghe-dezghe. n cazul soluiilor concentrate,
activitatea enzimatic se micoreaz dup nghe, datorit
formrii unor agregate moleculare care blocheaz centrii activi.
Fiecrei enzime i se poate stabili o temperatur minim
(ncepnd cu 0 0C) la care ncepe activitatea enzimatic, o
temperatur optim, la care activitatea enzimatic este maxim,
i o temperatur maxim la care activitatea enzimatic nceteaz.
18

d) Influena valorii pH asupra activitii enzimatice


Activitatea enzimelor este influenat n mod accentuat i de concentraia
ionilor de hidrogen din mediul de reacie, deci de pH. Enzimele i manifest
activitatea numai ntre anumite limite de pH (limite inferioare i limite superioare).
Cele mai multe enzime manifest activitate maxim la valori caracteristice ale pH-ului
(pH optim). Valoarea pH-ului optim depinde de natura i de originea enzimei, de
mediul de reacie, de proprietile acido-bazice ale enzimei i de factorii biologici.

Fig. 6.4. Influena valorii pH


asupra activitii enzimatice

19

n general, pH-ul optim coincide cu pH-ul lichidelor din


organism, unde enzimele i exercit activitatea. Astfel, pH-ul optim al
pepsinei din stomac este cuprins ntre 1,4-1,5; pH-ul optim al tripsinei
din pancreas ntre 7,8-8,7; al amilazei din mal ntre 4,7-5,2 etc.
Majoritatea enzimelor vegetale au un pH optim cuprins ntre 5,3-7,6. n
afara limitelor de pH stabilite, enzimele devin inactive.
Valori prea mari ale pH-ului (alcalinitate mrit) sau prea mici
(aciditate mrit), afecteaz activitatea enzimatic prin denaturarea
prii proteice sau perturbarea echilibrelor de disociere ale grupelor
funcionale ale centrului activ al enzimei, ca i modificarea geometriei
centrilor activi.
Valoarea pH-ului optim este influenat de temperatur, de ionii
din soluie, de natura i de concentraia substratului, de originea
enzimei, de factorii biologici etc.
Aciunea pH-ului asupra activitii enzimatice se explic prin
influena ionilor de hidrogen asupra gradului de ionizare a enzimei i a
substratului. Unele enzime au activitate maxim sub form nedisociat,
20
altele sub form disociat.

e) Influena activatorilor enzimatici


Activatorii sunt compui chimici care mresc activitatea enzimelor
(intervin n mecanismul aciunii enzimatice), fie prin stimularea direct a
acestora, fie prin ndeprtarea unor inhibitori din sistem. Activatorii se
clasific dup efectul produs n:
Activatori care acioneaz prin deblocarea centrilor activi din molecula
enzimelor. Unele enzime, denumite proenzime, sunt secretate sub form
inactiv, cu gruprile active blocate (mascate) de polipeptide sau de alte
substane. Proenzimele se transform n enzime active sub influena unor
enzime kinaze, care ndeprteaz substanele inhibitoare.
Activatori care acioneaz asupra enzimei prin nlturarea din sistem a unor
inhibitori ai enzimei. Substanele, adugate unei soluii enzimatice pentru
protejarea enzimei mpotriva factorilor care o inactiveaz sau o denatureaz,
se numesc protectori. De exemplu, proteinele activeaz ureaza prin captarea
ionilor inhibitori din sistem (de exemplu, ionul cianur (CN) nltur efectul
inhibitor al Cu2+ asupra ureeazei, prin formarea cianurii complexe de cupru,
stabil).
Activatori care sunt componente ale enzimelor sau care stimuleaz direct
activitatea acestora. Sunt activatori specifici pentru anumite enzime o serie de
cationi metalici i anioni, astfel, fosforilaza este activat de Mg2+,
fosfoglucomutaza de Mg2+, i de Mn2+, fosfataza de Ca2+ i de Mn2+, amilaza
salivar este activ numai n prezena ionilor de clor, proteazele vegetale sunt
activate de glutationul redus etc.
21

f) Inhibitori ai enzimelor

Inhibitorii sunt substane care acionnd asupra enzimelor,


influeneaz negativ desfurarea activitii enzimatice pn la anularea ei,
reversibil sau ireversibil.
Studiul inhibitorilor furnizeaz informaii utile asupra specificitii
de substrat, tipului de grupe funcionale i mecanismului de aciune
enzimatic.
Inhibitorii ireversibili modific profund structura moleculelor
enzimatice, provocnd denaturarea proteinei i deci anularea activitii
catalitice a enzimei.
Complexul enzim-inhibitor format, este nedisociabil, iar prin
ndeprtarea inhibitorului, enzima nu-i mai recapt funcia catalitic,
partea proteic fiind distrus. Astfel de inhibitori ireversibili sunt: compuii
cu Pb2+, Hg2+, CN, cu CO, compuii cu arsen etc.
Inhibitorii reversibili acioneaz asupra cineticii reaciei enzimatice,
fr a produce modificri la nivelul structurii enzimei. Inhibiia produs de
aceti inhibitori poate fi (n funcie de natura i de specificul ei) de tip:
competitiv, necompetitiv i alosteric.
Inhibiia competitiv rezult dintr-o competiie (pentru ocuparea
situsului activ al enzimei), ntre substrat i inhibitorul care are o structur
molecular asemntoare cu a substratului. Deoarece o parte din enzim se
combin cu inhibitorul, se micoreaz cantitatea de enzim care se combin
cu substratul i scade astfel viteza de reacie. Influena inhibitorului se poate
22
micora prin mrirea concentraiei substratului.

Exemple de inhibiie competitiv: acidul malonic HOOC-CH2-COOH,


care prezint analogie structural cu acidul succinic HOOC-CH2-CH2-COOH,
poate fi inhibitor competitiv n reacia de dehidrogenare a acestuia cu
succinatdehidrogenaza (reacie din ciclul Krebs):
HOOC-CH2-CH2-COOH + FAD HOOC-CH=CH-COOH + FADH2
acid succinic

acid fumaric

n afar de acidul malonic, i ali acizi dibazici (acidul oxalic, acidul


oxalilacetic, acidul pirofosforic) pot fi inhibitori competitivi ai
succinatdehidrogenazei. Inhibiia competitiv se produce i n cazul vitaminelor
de ctre antivitamine, hormoni-antihormoni, enzime-antienzime.
Inhibiia necompetitiv se caracterizeaz prin faptul c inhibitorul nu
are o structur asemntoare cu substratul. n inhibiia necompetitiv,
inhibitorul reacioneaz cu enzima, cu complexul enzim-substrat i foarte rar
cu substratul, formnd complexe inactive enzim-inhibitor (EI), sau enzimsubstrat-inhibitor (ESI). Prin formarea acestor complexe inactive (EI, ESI),
care nu conduc la formare de produs de reacie (P), viteza reaciei enzimatice
este micorat, deoarece chiar dac se mrete concentraia substratului (S),
inhibitorul nu poate fi nlturat din complexul EI.
23

Inhibiia necompetitiv se poate realiza n mai multe moduri:


Inhibiia prin blocarea sau transformarea grupelor funcionale
tiolice (-SH), centrii activi ai enzimelor, prin reacii cu metale grele (Hg, Pb,
Ag, As etc.) cu formare de mercaptide, prin reacii de oxidare sau reacii de
alchilare.
Inhibiia prin blocarea metalului din componena enzimei sau a
activatorilor din mediul de reacie. De exemplu, fluorurile i oxidanii extrag
ionii de Mg2+ i de Ca2+ din molecula enzimei, iar cianurile, H2S i CO scot
fierul din enzimele feroporfirinice.
Inhibiia prin combinarea inhibitorului cu substratul se datoreaz
scderii concentraiei substratului.
Tipul de inhibiie se poate determina dac se menine constant
concentraia inhibitorului i se modific concentraia substratului. Dac se
constat creterea vitezei de reacie cu creterea concentraiei substratului,
are loc o inhibiie competitiv, n caz contrar inhibiia este necompetitiv.
Inhibarea enzimelor se produce i prin agitare ndelungat, sub
aciunea diferitelor radiaii ionizante (UV, X etc.), la presiuni ridicate i24sub
influena substanelor care determin precipitarea proteinelor (acid
tricloracetic, tanin etc.).

NOMENCLATURA I CLASIFICAREA ENZIMELOR


Denumirea enzimelor s-a acordat iniial, innd cont de
numele substratului asupra cruia acioneaz, sau de numele
reaciei catalizat, la care se adaug sufixul aza.
De exemplu, enzima care biocatalizeaz descompunerea
amidonului se numete amilaza cea care acioneaz asupra
zaharozei se numete zaharaza etc., enzimele care biocatalizeaz
reacii de hidroliz se numesc hidrolaze, cele care catalizeaz
reacii de oxido-reducere se numesc oxido-reductaze etc.
Odat cu creterea numrului de enzime izolate i
caracterizate, pentru prevenirea confuziilor n stabilirea numelui
enzimelor, innd cont c ele pot manifesta specificitate relativ
(pot aciona asupra mai multor substraturi) i c asupra unui
substrat pot aciona enzime diferite, a fost adoptat noua
nomenclatur i sistemul de clasificare (Congresul Internaional
de Biochimie, Moscova, 1961).
25

Sistemul de clasificare i numerotare a enzimelor, precum i noua


nomenclatur sistematic se bazeaz pe reacia chimic catalizat de
enzim, unicul criteriu care permite deosebirea enzimelor ntre ele. n
acest sistem enzimele sunt mprite n clase, dup tipul reaciei
catalizate, iar acestea sunt mprite n subclase care definesc mai exact
caracterul reaciei enzimatice respective. Numele fiecrei enzime se
definete printr-un termen alctuit din trei pri:
denumirea substratului asupra cruia acioneaz enzima;
denumirea tipului de reacie catalizat de enzim;
sufixul aza.
De exemplu, enzima care catalizeaz dehidrogenarea acidului
lactic se numete lactatdehidrogenaza, cea care catalizeaz decarboxilarea
acidului piruvic se numete piruvatdecarboxilaza. Denumirea
transferazelor se formeaz din prefixul trans, numele substratului i
sufixul aza (transaminaze, transmetilaze, transfosfataze etc.).
Noua clasificare prin sistemul zecimal prezint avantajul c
reaciile chimice catalizate de enzime pot fi grupate ntr-un numr mic
26
de tipuri de reacii.

Conform acestui sistem zecimal de clasificare, fiecare enzim


este caracterizat printr-un cod format din patru cifre. Prima cifr
precizeaz clasa din care face parte enzima. Enzimele cunoscute n
prezent sunt grupate n 6 clase principale:
1. Oxidoreductaze
2. Transferaze
3. Hidrolaze
4. Liaze
5. Izomeraze
6. Ligaze (Sintetaze).
A doua cifr a codului definete subclasa, furniznd informaii
asupra tipului de grup funcional, respectiv asupra tipului de
legtur chimic implicat n reacie. De exemplu, din clasa hidrolazelor
fac parte subclasele esteraze (hidrolizeaz legtura esteric), glicozidaze
(hidrolizeaz legtura glicozidic), amidaze (hidrolizeaz legtura
amidic) etc. n cazul transferazelor, a doua cifr indic natura grupelor
funcionale transferate; la ligaze i liaze, tipul de legturi chimice care
se formeaz i se degradeaz; la oxidoreductaze se specific natura
chimic a grupei funcionale supus oxidrii (alcoolic, aldehidic,
27
cetonic etc.) iar la izomeraze se indic tipul reaciilor de izomerizare.

Cifra a treia precizeaz subdiviziunile din cadrul unei subclase


(de exemplu, natura unei grupe funcionale transferate, natura
acceptorului etc.). Astfel, n subclasa esterazelor exist mai multe grupe
de enzime care acioneaz asupra anumitor substraturi. De exemplu:
fosfolipazele acioneaz numai asupra fosfolipidelor, clorofilazele numai
asupra cloroglobinelor etc. n cazul oxidoreductazelor, cifra a treia
indic natura acceptorului care ia parte la reacie (NADPH+, citocromi,
oxigen molecular etc.).
Cifra a patra din cod reprezint numrul de ordine al enzimei n
subdiviziunea din interiorul subclasei. De exemplu: enzima ATP: Dfructozo-6-fosfotransferaza, are cifrul 2.7.1.4. dup care se identific
drept o transferaz (2, clasa 2), care transfer reziduu fosfat (cifra 7,
subclasa 7), la gruparea alcoolic (cifra1, subdiviziunea 1 a subclasei 7)
i are numrul de ordine 4.
Pentru unele dintre enzime se mai pstreaz denumirile vechi,
conferite cu mult nainte de stabilirea regulilor referitoare la noua
nomenclatur (pepsina, tripsina, papaina, emulsina, chimozina etc.).
28

Este prezentat n continuare, la nivelul clasificrii n clase i subclase:


Cheia codului de numerotare i clasificare a enzimelor

1.1. Acioneaz asupra gruprilor CH-OH ale donorilor


1.2. Acioneaz asupra gruprilor aldehidice sau cetonice ale donorilor
1.3. Acioneaz asupra gruprilor CH-CH ale donorilor
1.4. Acioneaz asupra gruprilor CH-NH2 ale donorilor
1.5. Acioneaz asupra gruprii C-NH a donorilor
1.6. Acioneaz asupra NAD+ i NADP+ n form redus, ca donori
1.7. Acioneaz asupra altor compui cu azot, ca donori
1.8. Acioneaz asupra gruprilor sulfurice ale donorilor
1.9. Acioneaz asupra gruprilor hemului ca donor
1.10. Acioneaz asupra difenolilor i substanelor asemntoare lor
1.11. Acioneaz asupra H2O2 ca acceptor
1.12. Acioneaz asupra H2 ca donor
1.13. Acioneaz asupra unui singur donor cu ncorporare de oxigen
(oxigenaze)
1.14. Acioneaz asupra unei perechi de donori cu ncorporarea
oxigenului ntr-un singur donor (hidrolaze)

29

2.1. Transfer grupri care conin un singur atom de carbon


2.2. Transfer resturi aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze
2.4. Glicoziltransferaze
2.5. Transfer grupri alchil sau nrudite
2.6. Transfer grupri cu azot
2.7. Transfer grupri care conin fosfor
2.8. Transfer grupri care conin sulf

3.1. Acioneaz asupra legturilor esterice


3.2. Acioneaz asupra compuilor glicozilici
3.3. Acioneaz asupra legturilor eterice (tiolice)
3.4. Acioneaz asupra legturilorilor peptidice (peptidhidrolaze)
3.5. Acioneaz asupra legturilor C-N, altele dect cele din
legturile peptidice
3.6. Acioneaz asupra legturii acidoanhidridice din acizi
3.7. Acioneaz asupra legturii C-C
30
3.8. Acioneaz asupra legturii halogenilor
3.9. Acioneaz asupra legturii P-N

4.1. C-C liaze


4.2. C-O liaze
4.3. C-N liaze
4.4. C-S liaze
4.5. C-halogen liaze

5.1. Racemaze i epimeraze


5.2. Cis-trans izomeraze
5.3. Oxidoreductaze intramoleculare
5.4. Transferaze intramoleculare
5.5. Liaze intramoleculare

6.1. Particip la formarea legturilor C-O


6.2. Particip la formarea legturilor C-S
6.3. Particip la formarea legturilor C-N
6.4. Particip la formarea legturilor C-C

31

REPREZENTANI AI PRINCIPALELOR CLASE DE ENZIME


Oxidoreductaze sunt enzime care biocatalizeaz reaciile
de oxidoreducere din organismele vegetale i animale. Ele au un
rol important deoarece, prin reaciile de oxidoreducere,
organismele i procur cea mai mare parte din energia necesar
activitilor fiziologice. Reaciile de oxidoreducere se realizeaz
prin transfer de electroni i prin transfer de atomi de hidrogen.
Dup mecanismul de aciune, oxidoreductazele se
clasific n trei subgrupe:
dehidrogenaze;
transelectronaze;
oxidaze.
32

Dehidrogenaze
Oxidrile biologice decurg preponderent n absena oxigenului, fiind
de fapt dehidrogenri, care au loc prin transfer de atomi de hidrogen de pe o
molecul (care se oxideaz) pe alt molecul (care se reduce). Enzimele care
catalizeaz transferul atomilor de hidrogen de la un substrat la altul sunt
dehidrogenazele. Coenzimele lor particip continuu la oxidri i reduceri, fr
s se consume n timpul reaciei. Atomii de hidrogen nu rmn legai n mod
permanent pe molecula coenzimei, ci sunt transferai printr-o nou reacie
redox pe o alt molecul.
Dup natura acceptorului de atomi hidrogen, dehidrogenazele pot fi:
dehidrogenaze anaerobe;
dehidrogenaze aerobe.

a) Dehidrogenaze anaerobe
Dehidrogenazele anaerobe sunt oxidoreductaze care transport
hidrogenul n interiorul celulelor, de la un substrat donor la altul acceptor (cu
excepia O2 atmosferic). Coenzimele care realizeaz aceast transformare sunt
codehidrazele de natura piridinnucleotidic:
33
codehidraza I (Co I): NAD nicotinamidadenindinucleotida;
codehidraza II (Co II): NADP nicotinamidadenindinucleotida fosfat.

Structura chimic a NAD


Codehidrazele piridinnucleotidice au o structur dinucleotidic.
n compoziia lor intr nicotinamida (vitamina PP), dou
molecule de riboz, acid pirofosforic i adenin.
NADP-ul are n plus fa de NAD un rest de acid fosforic la
atomul C2 al ribozei legate de adenin.

34

n condiii anaerobe mecanismul transferului de hidrogen


este urmtorul:

S-H2

substrat donor
forma redus

NADH
coenzima
forma redus

NAD+

coenzima
forma oxidat

+ H+ + S'
substrat donor
forma oxidat

NADH + H+

substrat donor
forma oxidat

NAD
coenzima
forma oxidat

coenzima
forma redus

S'- H2
substrat donor
forma redus

Ambele coenzime (NAD i NADP) se pot prezenta n dou


forme: o form redus i o form oxidat.
Mecanismul
reaciei
de
oxidoreducere
implic
transformarea reversibil a structurii bazei azotate
nicotinamidice (NAD, respectiv NADP) din forma oxidat n
forma redus, prin transferul reversibil al atomilor de hidrogen,
astfel:

35

n transportul hidrogenului, rolul principal revine


nucleului piridinic. Codehidraza oxidat preia de pe substrat doi
atomi de hidrogen, pe care i fixeaz unul la C4 i unul la atomul
de N1 (structur de ion cuaternar de amoniu). Se formeaz un
produs instabil, care prin eliminarea unui proton de la N1 se
transform n forma redus. Deoarece formele oxidate au la
atomul de azot sarcina pozitiv, este corect s se scrie formula
acestor coenzime NAD+ i NADP+, iar pentru formele reduse
NADH+H+ (nu NADH2 i NADPH2).
Codehidrazele I i II pot suferi reacii de interconversiune
n prezena ATP-ului i sub aciunea fosfatazei:
NAD+ + ATP NADP+ + ADP
Exemple de enzime dehidrogenaze anaerobe care au n
structur NAD+ sau NADP+: alcooldehidrogenaza (implicat n
fermentaia alcoolic), aldehiddehidrogenaza, izocitricdehidrogenaza (implicat n ciclul Krebs) etc.
36

b) Dehidrogenaze aerobe
Dehidrogenazele aerobe sunt enzime oxidoreductaze care
transport hidrogenul de la un substrat donor la oxigenul liber
(acceptor), formnd apa oxigenat, care va fi descompus ulterior de
peroxidaze sau catalaze.
Coenzimele componente care realizeaz aciunea biocatalitic
sunt de natur flavinnucleotidic:
FMN flavinmononucleotida
FAD flavinadenindinucleotida.
Ambele coenzime au ca i component principal vitamina B2
cu structur izoaloxazinic. Componenta proteic (apoenzima) este de
obicei o albumin. Legtura dintre apoenzim i coenzim se desface
uor n mediu acid i n prezena sulfatului de amoniu.
Flavinmononucleotida (FMN) este
format dintr-un nucleu izoaloxazinic,
din ribitol i acid fosforic.

37

Legtura dintre FMN i apoenzim se poate realiza la


nivelul nucleului izoloxazinic i la nivelul acidului fosforic.
Dintre flavinenzimele mononucleotidice se pot meniona:
fermentul galben respirator, L-aminoacidoxidaza etc.
Flavinadenindinucleotida (FAD) este format dintr-un
nucleu izoloxazinic, ribitol, acid pirofosforic i adenin. FAD are
o structur de dinucleotid, fiind format prin unirea a dou
mononucleotide: FMA i AMP.

38

n condiii aerobe mecanismul transferului de hidrogen este


urmtorul:

S-H2

substrat donor forma


redus

FADH2
coenzima
forma redus

FAD+

coenzima
forma oxidat

O2
substrat acceptor

FADH2

substrat donor
forma oxidat

FAD
coenzima
forma oxidat

coenzima
forma redus

H2O2
catalaza
H2O + O2

Mecanismul transferului de atomi de hidrogen n condiii


aerobe este posibil datorit transformrii reversibile a structurii
nucleului izoaloxazinic (vitamina B2) din structura FAD. Nucleul
izoaloxazinic se poate prezenta sub o form oxidat, cu duble legturi
conjugate i o form redus, fr legturi duble la atomii de azot N1 i
N10. Forma oxidat a flavinenzimelor este colorat, iar forma redus
este incolor.

39

Dintre flavinenzimele cu FAD se pot meniona: xantinoxidaza,


D-aminoacidoxidaza, succindehidrogenaza, glucozoxidaza, aldehidoxidaza etc.
Glucozoxidaza acioneaz asupra substratului glucoz, pe care o oxideaz la
acid gluconic:
RCH=O + FAD RCOOH + FADH + H+
FADH + H+ + O2 FAD + H2O + O2
Aldehidoxidaza acioneaz asupra acetaldehidei, pe care o oxideaz la acid
acetic:
CH3CH=O + FAD + H2O CH3COOH + FADH + H+
FADH + H+ + O2 FAD + H2O + O2
Transelectronaze
Transelectronazele sunt enzime care catalizeaz reacii de oxidoreducere care decurg prin transfer de electroni de pe un donor pe un acceptor.
Dac donorul este:
Oxigenul, enzimele sunt transelectronaze aerobe;
Nu este oxigenul, enzimele sunt transelectronaze anaerobe.
Transelectronazele sunt reprezentate prin cromoproteidele citocromi,
constituii dintr-o parte proteic (apoenzima cu caracter bazic) i o coenzim cu
40
structur feriporfirinic (citocromul propriu-zis).

Transportul de electroni se realizeaz prin modificarea cifrei de


oxidare a fierului:
Fierul porfirinic se leag prin dou legturi coordinative de atomul
de azot imidazolic al aminoacidului histidina din catena polipeptidic a
enzimei.
Citocromii sunt prezeni numai n celulele aerobe i particip la
realizarea procesului de respiraie. Cantitatea lor n celule depinde de
capacitatea respiratorie a celulei. Se cunosc mai multe tipuri de citocromi
care se deosebesc ntre ei prin substituenii nucleelor pirolice, potenialul
redox etc. Eliberarea i transportul de electroni se realizeaz prin trecerea
citocromului din starea feroas (Cit. Fe2+) n starea feric (Cit. Fe3+), n
prezena O2 i a citocromoxidazei.
Citocromii dein, ca transportori de electroni, un rol important n
catena de respiraie celular (lanul respirator). Ei particip, ca
intermediari, la procesul de formare a apei, produs final al metabolismului
glucidic. Energia eliberat n procesele de oxidare (H - e = H+) este stocat
n moleculele de ATP care se sintetizeaz. Transferul de electroni de la un
tip de citocrom la altul se face n ordinea potenialelor redox:
citocrom b citocrom c1 citocrom c citocrom a citocrom a3
n toate organismele vegetale i animale s-au identificat citocromii
a1, a3, b, b1, b5, c1 etc.
41
Citocromii b3, b6, b7, f, s-au identificat numai n plante, iar
citocromii c2, c3, b4 numai n microorganisme.

Oxidaze
Oxidazele sunt enzime oxidoreductoare care catalizeaz
reaciile dintre diferite substraturi i oxigenul molecular sau cel
peroxidic.
Oxidazele se clasific n:
oxigenaze;
hidroxilaze;
oxidaze transportoare de electroni.
a) Oxigenazele determin combinarea direct a
substratului cu oxigenul molecular. Ele catalizeaz reacii de
tipul:
AH + O2 AOOH sau A + O2 AO2
Exemple de enzime oxigenaze: lipoxidaza, care catalizeaz
oxidarea acizilor nesaturai din esuturilor vegetale,
42
indoloxidaza, triptofanoxidaza etc.

b) Hidroxilazele (monooxigenaze) sunt enzime care


catalizeaz oxidarea substratului cu formarea concomitent a
apei. Din oxigenul molecular, un atom va servi la oxidarea
substratului iar cellalt la formarea apei:
AH2 + O2 + S H2O + SO + A sau AH2 + 1/2 O2 A +
H2O
Reaciile au loc n prezena unui donor de hidrogen (AH2)
care poate fi: NADH + H+, NADPH + H+, FADH2 etc. Cele mai
importante
dintre
enzimele
hidroxilaze
sunt:
fenilalaninhidroxilaza, lizinhidroxilaza, steroidhidroxilaza etc.
c) Oxidazele transportoare de electroni conin n molecul
ioni metalici (Cu, Fe) i catalizeaz reacia de oxidare a
substratului cu ajutorul oxigenului atomic foarte reactiv.
Enzimele care conin atomi de cupru se numesc
cuproxidaze, cele care conin atomi de fier se numesc feroxidaze.
Dintre cuproxidaze fac parte fenolazele (fenoloxidaze, rspndite
n regnul vegetal), enzime care catalizeaz oxidarea fenolilor la
43
chinone, ascorbicoxidaza, care catalizeaz oxidarea acidului
ascorbic la acid dehidroascorbic, tirozinaza etc.

Dintre feroxidaze, cele mai importante sunt peroxidazele


i catalazele.
Peroxidazele descompun apa oxigenat numai n prezena
unui acceptor de oxigen sau a unui donor de hidrogen:
H2O2 + AH2 2 H2O + A
H2O2 + A AO + H2O
Peroxidazele catalizeaz i reacii de polimerizare, cum ar
fi, formarea melaninei i a ligninei. Ele sunt rspndite
preponderent n plante, n organite denumite peroxizomi.
Catalazele descompun apa oxigenat cu degajare de
oxigen:
H2O2 H2O + 1/2 O2
Ca i peroxidazele, catalazele sunt rspndite n celulele
vegetale unde acioneaz prin descompunerea apei oxigenate,
substan toxic pentru organismele vii, care se formeaz sub
aciunea unor flavinenzime sau a radiaiilor. Ca donatori de
atomi de hidrogen pot funciona: metanolul, etanolul, fenolii,
44
aminoacizii etc.

TRANSFERAZE
Sunt enzime care biocatalizeaz reaciile de transfer de
atomi sau grupe de atomi de la o molecul donor la una acceptor.
Coenzimele care realizeaz aciunea catalitic a
transferazelor sunt foarte diferite din punct de vedere chimic, iar
energia de legtur a gruprii transferate este pstrat.
n funcie de natura gruprii transferate deosebim
urmtoarele tipuri de enzime transferaze:
metiltransferaze (transmetilaze), enzime care transfer
grupe metil (-CH3);
transaminaze, care transfer grupa amino (-NH2);
transfosfataze, care transfer resturi de acid fosforic (H2PO3);
transaldolaze, transfer grupe carbonil aldehidice
(RCH=O);
45
transcetolaze, transfer grupe carbonil cetonice (R2C=O);
transacilaze, transfer grupe acil (R-C=O) etc.

Dintre substanele donatoare de grupe metil se pot


meniona: colina, diferite betaine, nicotina etc. Aceste substane
donatoare au, n general, grupa metil legat de un atom de azot
sau de sulf. Dintre acceptorii de grupri metilice fac parte:
colamina, cisteina, nicotinamida, glicina.
Dintre coenzimele transaminazelor importan deosebit
au piridoxalfosfatul i piridoxaminfosfatul.

Transferul diferiilor radicali acil (provenii din acizi


organici) este catalizat de coenzima A (HS~CoA), care particip
la numeroase procese biochimice. Coenzima A este un precursor
important n biosinteza colesterolului, a acizilor grai, de care se
leag printr-o legtur macroergic (~). Partea activ 46a
coenzimei A este gruparea tiolic (-SH) din cisteamin, de aceea
coenzima se noteaz prescurtat HSCoA.

Formarea acil-CoA din acizii organici, se realizeaz cu


consum de energie i decurge n prezena ATP-ului i a enzimelor
tiokinaze:
RCOOH + HS~CoA + ATP RCO~SCoA + AMP + P P
Coenzima A este format din adenin, riboz fosforilat,
acid pirofosforic, acid pantotenic i cisteamin. Structura chimic a
coenzimei A este:

47

Legtura dintre coenzima A i radicalul acil este o legtur


macroergic, care elibereaz la hidroliz 8 Kcal/mol.
Coenzima A i acetilcoenzima A (CH3-CO~SCoA) apar frecvent, n
organismele vii, la ncruciarea unor ci biochimice, contribuind la stabilirea
unor corelaii metabolice ntre glucide i lipide. Este un precursor important
n biosinteza acizilor grai, a fitolului (component al clorofilei), n
biodegradarea aerob a glucidelor etc.
Transfosfatazele (fosfotransferaze) sunt enzime care catalizeaz
transferul de radicali fosfat -H2PO3 de pe un donor pe un acceptor, fr
formare de acid fosforic liber (H3PO4). Transfosfatazele poart denumiri
caracteristice, n funcie de natura donorului i a acceptorului:
- fosfomutaze (transfosfataze), dac transferul grupei fosfat se
produce n aceeai molecul, de la o poziie la alta:

48

- fosfokinaza catalizeaz transferul restului de acid fosforic sau


pirofosforic de pe ATP pe un acceptor A, conform reaciei:
ATP + A A- P + ADP
ATP + A AMP + A- P P

catalizeaz
biosinteza
i
biodegradarea
oligoglucidelor, poliglucidelor i a unor glicozide, reacii care decurg
cu transfer de radicali glicozil.
- Nucleozidfosforilazele catalizeaz reaciile reversibile de
biosintez, respectiv biodegradare a nucleozidelor prin transferul
bazelor purinice pe riboz sau deoxiriboz.
- Nucleotidfosforilazele catalizeaz reaciile de biosintez i
biodegradare a nucleotidelor.
- Polizaharidfosforilazele catalizeaz reaciile de transfer 49
de
resturi glicozil de pe un ester fosforic pe o poliglucid acceptoare, cu
formarea unei poliglucide superioare.
Transglicozidazele

HIDROLAZE
Sunt enzime care catalizeaz scindarea legturilor chimice din
compuii biochimici cu implicarea ionilor apei. Hidrolazele au un rol
important n procesul de germinare a seminelor i n procesul de
digestie. Ele determin hidroliza unor substane compuse care conin
n molecul legturi covalente: C-O, C-N, C-S, C-C, P-N etc.
n general, reaciile de hidroliz sunt reversibile, nsoite de
variaii de energie, mai ales n cazul hidrolizei tioesterilor cu coenzima
A.
Unele dintre cele mai importante hidrolaze sunt:
C-O hidrolazele (esteraze i glicozidaze);
C-N hidrolazele (amidaze i peptidaze).
a) Esterazele sunt enzime care scindeaz legturi esterice i anume:
fosfoesteraze, care catalizeaz scindarea hidrolitic a
monoesterilor i diesterilor acidului fosforic cu formarea acidului
ortofosforic i a unui alcool:
50

Fosfodiesterazele scindeaz hidrolitic legtura fosfodiesteric dintre


nucleotide.
Din clasa esterazelor fac parte i lipazele, lecitinazele,
colesterolesterazele, clorofilazele, pectinazele, sulfatazele etc.
carboxilesterazele scindeaz legturile din esterii acizilor carboxilici:

Din aceast subclas a hidrolazelor fac parte:


-lipazele (glicerolesterhidrolazele), care catalizeaz hidroliza gliceridelor
cu formare de glicerol i acizi grai superiori;
-fosfolipazele, care elibereaz acizii grai superiori din - i glicerofosfatide;
- tioesterazele, enzime care catalizeaz scindarea moleculelor tioesterilor.
R-CO-S-R' + HOH R-COOH + R'-SH
De exemplu, acil-SCo A hidrolazele scindeaz legtura tioesteric din
51
acil-coenzima A:
R-CO~SCoA + HOH R-COOH + HS-CoA

b) Glicozidazele (carbohidrazele) sunt hidrolaze care catalizeaz


scindarea legturilor glicozidice din oligo- i poliglucide,
conform reaciei generale:
G1-O-G2

HOH

G1-OH

diglucid

G2-OG

monoglucid 1

monoglucid 2

Glicozidazele prezint specificitate fa de: tipul de glucid


(glicozidaze, galactozidaze etc.), natura legturii (-sau glicozidic), tipul de stereoizomer (D sau L).
Exemple de glicozidaze:
Substrat

Enzima

Legtura scindat

Produs de reacie

maltoza

maltaza (oligoglucozidaza)

glicozidic C1-C4

glucoza

celobioza

celobiaza
(oligoglucozidaza)

glicozidic C1-C4

glucoza

zaharoza

zaharaza
(oligofructozidaza)

fructozidic C1-C2

glucoza + fructoz

amilaza (poliglicozidaza)

glicozidic C1-C4 i
C1-C6

amidon

52

dextrine; maltoz;
glucoz

c) Amidazele sunt hidrolaze care scindeaz legtura C-N din amide. De


exemplu, ureeaza catalizeaz descompunerea ureei n CO2 i amoniac:

Amidazele catalizeaz i transformarea amidelor n amoniac i acizii


corespunztori; de exemplu, amidaza glutaminaza catalizeaz scindarea
glutaminei n acid glutamic i amoniac.
d) Peptidazele sunt hidrolaze care acioneaz asupra legturilor
peptidice -CO-NH- din interiorul moleculelor peptidice sau proteice
(endopeptidaze), sau de la capetele catenelor peptidice (exopeptidaze), elibernd
aminoacizii componeni. Endopeptidaze mai importante sunt: pepsina, tripsina,
catepsina, chimozina etc.
Exopeptidazele (enzimele care elibereaz aminoacizii terminali din
catena peptidelor sau proteinelor) se clasific n:
aminopeptidaze, sunt exopeptidaze care catalizeaz scindarea hidrolitic a
legturii peptidice de la extremitatea catenei care posed un aminoacid terminal
cu grupa -NH2 liber;
53
carboxipeptidaze, sunt exopeptidaze care catalizeaz scindarea hidrolitic
a
legturii peptidice de la extremitatea catenei care posed un aminoacid terminal
cu grupa -COOH liber.

LIAZE
Liazele sunt enzime care catalizeaz reaciile de scindare
de legturi chimice i ndeprtarea unor grupe din substrat,
printr-un mecanism care decurge fr implicarea proceselor
redox sau hidrolitice. Liazele determin scindarea legturilor CC, C-N, C-O, C-S, C-X etc. Dintre liazele mai importante fac
parte:

decarboxilazele (C-C liaze);


dehidratazele (C-O liaze);

dezaminazele (C-N liaze);


desulfhidrazele (C-S liaze).

54

a) Decarboxilazele sunt liaze care catalizeaz reaciile de


decarboxilare a substraturilor cetoacizi i aminoacizi, conform
reaciilor:

Enzima liaza implicat n decarboxilarea aminoacizilor


are drept grupare prostetic piridoxalfosfatul (derivat al
vitaminei B6), iar liaza care catalizeaz decarboxilarea
cetoacizilor are drept grupare prostetic tiaminpirofosfatul
(derivat al vitaminei B1).
b) Aldehidliazele catalizeaz scindarea legturii C-C cu
formare de produi carbonilici. De exemplu, o enzim implicat
n metabolismul glucidic este aldolaza (fructozo-1,6difosfatliaza), care scindeaz fructozo-1,6-difosfatul n dou
55
trioze: aldehida fosfogliceric i hidroxoacetonfosfatul.

c) Dehidratazele catalizeaz scindarea legturilor C-O cu


formare de ap.
Exemple de dehidrataze sunt: aconitaza, fumaratdehidrataza
care catalizeaz transformarea acidului malic n acid fumaric
(reacie din ciclul Krebs de biodegradare aerob a glucidelor):

Dehidrataza enolaza catalizeaz transformarea acidului 2fosfogliceric n acid fosfoenolpiruvic (vezi biodegradarea anaerob
a glucidelor).
d) Dezaminazele sunt liaze care catalizeaz reaciile de
dezaminare intramolecular cu formarea acizilor nesaturai. De
exemplu, aspartaza, catalizeaz dezaminarea acidului aspartic cu
formare de acid fumaric:
56

IZOMERAZE
Izomerazele sunt enzime care catalizeaz reaciile de
izomerizare ale diferitelor substraturi. Dup natura reaciei de
izomerizare catalizat se pot clasifica astfel:
racemaze;
epimeraze;
izomeraze cis-trans;
oxidoreductaze intramoleculare.
a) Racemazele acioneaz asupra substraturilor cu un
singur centru de simetrie, cataliznd interconversia formelor D i
L ale aminoacizilor, hidroxiaminoacizilor, monoglucidelor etc.
De exemplu, alaninracemaza izomerizeaz izomerul steric
L-alanina la D-alanina:

57

b) Epimerazele acioneaz asupra substraturilor cu mai multe


centre de simetrie, cataliznd reaciile de epimerizare ale
monoglucidelor. Importan biologic au racemazele i epimerazele care
intervin n metabolismul glucidic.
De exemplu, epimerizarea UDP-glucozei n UDP-galactoz sub
aciunea UDP-glucozoepimerazei:

c) Izomerazele cis-trans catalizeaz interconversia celor doi


stereoizomeri. Izomerazele cis-trans sunt larg rspndite n natur, la
procesul de interconversie participnd i glutationul. De exemplu,
maleatcistransizomeraza catalizeaz transformarea acidului maleic n
acid fumaric:
58

d) Oxidoreductazele intramoleculare catalizeaz reaciile de


interconversiune a aldozelor i cetozelor, care implic reducerea
concomitent a grupei aldehidice la alcool primar i oxidarea
grupei alcool secundar la ceton. De exemplu, sub aciunea
fosfotriozizomerazei, aldehida 3-fosfogliceric se izomerizeaz la
hidroxoacetonfosfat:

e) Transferazele moleculare catalizeaz reaciile de transfer


intramolecular a unor grupe acil, fosfat, amino etc. De exemplu,
transferul grupei fosfat de la un atom de carbon al unei glucide la
alt atom de carbon din molecula glucidei respective.
59

LIGAZE
Ligazele sunt enzime care catalizeaz formarea de
legturi chimice noi ntre dou substraturi. Deoarece formarea
noilor legturi se realizeaz cu consum de energie, aceste reacii
sunt cuplate cu hidroliza unor legturi din compuii
macroergici (n special din nucleotidele trifosforilate, ATP, UTP,
CTP, GTP):

n funcie de tipul de legturi chimice noi formate liazele pot fi:


carboxilaze (C-C ligaze);
aminoacilsintetaze (C-O ligaze);
aminoacidamidsintetaze (C-N ligaze);
acilcoenzima A sintetaze (C-S ligaze).
60

a) Carboxilazele sunt enzime care catalizeaz fixarea CO2 pe un substrat.


De exemplu: piruvatcarboxilaza catalizeaz transformarea acidului piruvic n
acid oxalilacetic (vezi biodegradarea aerob a glucidelor):
H-CH2-CO-COOH + ATP + CO2 (activat)
HOOC-CH2-CO-COOH + ATP + H2PO4
Carboxilazele au ca i coenzim vitamina biotin i sunt rspndite
n regnul vegetal.
b) Aminoacidsintetazele catalizeaz activarea aminoacizilor din citoplasm n
vederea participrii lor la biosinteza proteinelor, prin intermediul tARN (vezi
biosinteza proteinelor).
c) Aminoacidamidsintetazele catalizeaz formarea legturilor C-N n reacia
de sintez a amidelor unor aminoacizi.
De exemplu: asparaginsintetaza catalizeaz formarea asparaginei din acidul
asparagic (aspartic):

d) Acil-CoA-sintetazele catalizeaz reaciile de activare a acizilor grai din


metabolismul lipidic:
61

SISTEME MULTIENZIMATICE
n organism, alturi de enzimele bine individualizate, cu structur
specific, care prezint specificitate de substrat i de aciune, sunt prezente i
sisteme enzimatice sau complexe multienzimatice constituite din dou sau
mai multe enzime, care catalizeaz reacii succesive sau cuplate, a cror
aciune catalitic este interdependent.
Reaciile succesive se pot reda prin urmtoarea schem de reacii:

Enzimele E1, E2, E3, care acioneaz asupra substraturilor A, B, C,


sunt dependente funcional, se intercondiioneaz. Produsul de reacie
obinut prin aciunea enzimei E1 formeaz substratul de aciune pentru
enzima E2, iar asupra produsului su de reacie va aciona enzima E3 etc.
Interdependena funcional a sistemelor enzimatice se bazeaz pe
un suport morfologic comun, respectiv, enzimele au o distribuie spaial
dependent de structura organitelor celulare.
Un asemenea sistem multienzimatic este cel din mitocondrii, care
catalizeaz reaciile care decurg n procesul de respiraie, sistemul format
din enzimele participante la biosinteza i biodegradarea acizilor grai,
62
sistemul multienzimatic format din cinci componente: hexakinaza,
izomeraza, fosfohexokinaza, aldolaza, glicofosfodehidrogenaza, care
acioneaz n metabolismul glucidic, n procesul glicolizei etc.

ENZIMELE ALOSTERICE (EFECTUL ALOSTERIC)


Enzimele alosterice sunt constituite din mai multe uniti
proteice, care pe lng situsul catalitic, mai posed i un situs alosteric
la care se poate lega efectorul alosteric (activator sau inhibitor).
Controlul alosteric al enzimelor este foarte important n reglarea
metabolismului. Prefixul alo se refer la existena pe moleculele
enzimelor a unuia sau mai multor centrii de legtur (situs alosteric),
alii dect cei ai situsului activ, de care se leag efectorii alosterici,
modificnd structura spaial a enzimei. Pentru o concentraie de
substrat dat, un efector pozitiv crete activitatea enzimatic, cnd se
leag la centrul alosteric, pe cnd un efector negativ scade activitatea
enzimatic.
O enzim poate, datorit unui efector alosteric, s se modifice
att de mult, nct s nu mai poat cataliza o reacie dect n prezena
activatorului alosteric (efectul vitezei maxime). Un exemplu l
63
constituie piruvatcarboxilaza care este practic inactiv n absena
efectorului acetilcoenzima A.

Se poate concluziona c, n general, un efector alosteric


stabilizeaz o anumit conformaie a unei enzime (fie ea cea activ
sau cea inactiv).
Inhibiia alosteric are o importan fiziologic deosebit i
se desfoar prin mecanism de inhibiie feed-back sau
retroinhibiie), aflat sub control genetic.
De exemplu, la biosinteza ferporfirinelor sau a
colesterolului, produsul final al reaciei enzimatice acioneaz ca
inhibitor alosteric asupra produsului de la nceputul lanului de
reacii. Creterea concentraiei lui stopeaz practic reacia; dac
produsul este utilizat n ntregime, sinteza se reia, deoarece efectul
alosteric este reversibil.
Enzimele alosterice reflect capacitatea organismelor vii,
vegetale i animale, de a coordona activitile lor celulare, astfel
nct s se realizeaz un echilibru ntre procesele anabolice i
catabolice eseniale pentru via.
64