Universitatea de Vest

Vasile Goldi, Arad

Biologie Celular

Replicarea i biosinteza ADN

Balt Diana
Nutriie i Dietetic
Anul I

Data: 8.01.2015

Introducere

Replicarea ADN este procesul prin care se produc dou replici identice a unei molecule
originale de ADN. Acest proces biologic apare la toate organismele vii i reprezint baza
motenirii biologice. ADN-ul este constituit din dou catene, iar fiecare dintre aceste catene din
molecula original de ADN, servesc drept matri pentru producerea catenelor complementare,
proces numit replicare semiconservativ.
n timpul replicrii, cele dou laturi se desfoar ntr-o anumit zon de-a lungul dublei
elice. n prezena unei enzime numit polimeraza ADN (DNA-polymerase) lanul desfurat
servete drept matri pentru formarea unei secvene complementare de nucleotide, care sunt
adugate la lanul complementar una cte una. Multe segmente scurte sunt formate, i acestea
sunt legate mpreun ntr-o reacie catalizat denumit ligaza ADN (DNA ligase). Exist
mecanisme pentru repararea erorilor care apar n timpul procesului de replicare, ce apare n
timpul mitozei.
Replicarea presupune copierea fidel a bazelor nucleotidice specifice ADN-ului iniial
prin secvenele specifice din care sunt constituite nucleotidele. Acest lucru este posibil prin
structura moleculei de ADN descoperit de Watson si Crick pentru care au fost distin i cu
premiul Nobel.
Replicarea ADN poate fi de asemenea efectuat i n Vitro (artificial, n afara unei
celule). Polimerazele ADN izolate de celule, precum i primerii artificiali de ADN pot fi folosii
pentru a iniia sinteza ADN, la secvene cunoscute dintr-o molecul matri de ADN. Reac ia n
lan a polimerazei (polymerase chain reaction - PCR), o tehnic obinuit utilizat n laborator,
aplic n mod ciclic o astfel de sintez artificial pentru a amplifica un fragment int de ADN
din bazinul de ADN.
Strcutura moleculei de ADN:
Molecula de ADN care conine informaia genetic nscris n lan ul de nucleotide este
constituit din dou structuri polinucleotidice sub forma de lan uri care formeaz un dublu helix.
n dublul helix sunt nscrise moleculele de dezoxiribonucleotide care sunt legate ntre ele prin
baze azotate (baze purinice si pirimidinice) cu ajutorul unor puni de hidrogen. Lan urile
polinucleotidice sunt complementare, formand helixuri ntre bazele purinice i cele pirimidinice,
distana ntre dou helixuri fiind de 3.4 nm, care constituie pasul helixului. Un helix cuprinde 10
baze azotate purinice i pirimidinice, distana dintre baze fiind de 0.4 nm. Aceste structuri con in
o specificitate a lanului de nucleotide care asigur moleculei de ADN posibilitatea men inerii
informaiei genetice la nivelul moleculei de ADN. Lanurile, prin structura lor sunt antiparalele
deoarece dezoxirobozele sunt legate prin puni fosfodiesterice care se afl la exteriorul
duplexului, n timp ce bazele purince si pirimidinice se afl la interiorul helixului

Replicarea i biosinteza ADN

2

Fazele replicrii ADN

Replicarea este iniiat ntr-un punct al dublului helix, numit origine o regiune cu
secven recunoscut de o protein iniiatoare a replicrii aceste regiuni sunt de obicei bogate n
perechi AT, mai uor de desfcut.
Pornind de la origine, dublul helix este despiralat, cu o enzim topoizomeraza, apoi este
desfcut asemntor cu un fermoar, fiind rupte toate punile de hidrogen pe o anumit poriune
din helix de ctre o enzim - helicaza. Sunt astfel expuse liber spre exterior bazele azotate, n
succesiunea lor, ale ambelor lanuri ale helixului. Lanul care este desfcut de la 35 nct
completarea s apar n succesiunea fireasc 5 3 se numete lan conductor (leading
strand), iar cellalt este lan ntrziat ( lagging strand) (figura 1)
Pe lanul conductor poziiile expuse sunt ocupate succesiv de ctre nucleotidele
corespunztoare (conform perechilor posibile A-T i G-C), proces condus de o enzim numit
ADN-polimeraz. ns sinteza pe cellalt lan nu poate fi realizat natural, succesiunea de sintez
fiind invers, de la 35. De aceea, informaia pentru un set de baze azotate libere este nti
transpus n ordinea posibil 53 pe nite fragmente denumite Okasaki, fragmente ce sunt
apoi cuplate pe lan cu ajutorul enzimei ADN-ligaza.
Fiecare din lanurile iniiale este acum completat cu un lan pereche, care este spiralat i
devine un dublu helix identic cu originalul.
n eucariote procesul de replicare poate ncepe n mai multe poziii din dublul helixurilor
de ADN.
Replicarea poate s fie incomplet i s nu ajung chiar pn la captul fiecrui
cromozom, numit telomer, rezultnd o scurtare generaie dup generaie, fenomen considerat a
avea un rol n procesul de mbtrnire, n apoptoz sau n apariia unor boli (inclusiv unele forme
de cancer).
Genomurile eucariote sunt replicate cu o fidelitate aproape absolut de fiecare dat cnd
celulele se divid. Cu toate acestea, condiiile de replicare ale ADN-ului sunt rareori ideale. De
exemplu, toxinele din mediul nconjurtor sau medicamente provoac deteriorarea ADN-ului i
interfereazp cu replicarea ADN-ului. Cum poate o celul ocoli astfel de probleme? Cum
reuete aceasta s genereze o copie exact a materialului genetic n aceste condiii?
n timpul fiecrei diviziuni celulare, o celul trebuie s-i dubleze cantitatea de ADN
cromozomial printr-un proces numit replicarea ADN-ului. ADN-ul duplicat este apoi separat n
dou celule "fiice" care motenesc aceeai informaie genetic. Deoarece ADN-ul este un
depozitar de informaii genetice, replicarea ADN-ului i segregarea trebuie s fie realizate cu o
fidelitate extrem. Nerespectarea acestor procese poate provoca mutaii cromozomiale i
rearanjamente, care conduc la boli sau chiar moarte.
Obstacole ntlnite pe catena matri a ADN-ului
Factorii din mediul nconjurtor pot duna ADN-ului. De exemplu, lumina UV creeaz
dimeri pirimidinici de ciclobutan (ntre dou resturi de timin din ADN), care ncetinesc
progresia mecanismului de replicare. Drogurile sau toxine sunt de asemenea cauze majore care
duneaz ADN-ului. Oamenii de tiin tiu c metil-metanosulfonatul (MMS) i hidroxiureea
(HU) sunt ageni care ntrerup furculia de replicare, astfel nct ace tia sunt adesea folosii n
3

experimentele cu ADN. MMS alchilaii ADN ablon, n timp ce HU epuizeaza

deoxiribonucleotide (dNTP), ceea ce duce la o oprirea sintezei de ADN, ceea ce duce la
stagnarea furculiei de replicare. De asemenea, este important de remarcat faptul c speciile
reactive la oxigen generate de metabolismul celular normal pot provoca, de asemenea,
deteriorarea ADN-ului i replicarea blocului de ADN.
Blocarea replicrii nu este cauzat numai de deteriorarea ADN-ului (figura 2). Legturile
proteice din ADN reprezint, de asemenea, obstacole semnificative n replicarea ADN-ului,
deoarece proteinele aflate pe furca de replicare pot intra in coliziune i s se deplaseze de pe
ADN. Acestea includ diferite legturi proteice din ADN, cum ar fi mecanismul de transcripie.
O alt barier fizic o poate reprezenta chiar structura ADN-ului n sine. Secven ele
repetitive de ADN pot forma structuri complexe 3-dimensionale, cum ar fi: telomerii, centromerii
i ribozomii ADN, care pot fi greu de reprodus. Structurile de cromatin foarte ordonate pot de
asemenea provoca probleme ale replicrii, deoarece ele sunt foarte compacte i se nf oar n
jurul proteinelor histonice, i n rezultat rndul su, n structuri extrem de ordonate. Toate acestea
pot provoca o ntrziere replicare furcii de ADN (figura 2).
O modalitate de a ne imagina furculia de replicare este s ne gndim la mersul pe
biciclet. Este destul de uor s ne pstrm echilibrul atunci cnd suntem n mi care. Dar odat
ce ncetm, este dificil s ne pstrm poziia vertical fr a pi pe pmnt. Dac nu facem acest
pas pe pmnt, s-ar putea s cdem. n mod similar, furculiele care au stagnat sunt n mod
inerent instabile i predispuse colapsului, reprezentnd o ameninare grav la adresa integritii
genomice deoarece furcile care au stagnat se pot rupe sau rearanja (figura 3). Cum poate o celul
ocoli aceste probleme? Cum reuete o celul s realizeze o replicare exact a genomurilor n
aceste condiii descurajatoare?
Oprirea ciclului celular
n 1989, Leland Hartwell i Ted Weinert au propus ca o celul s posede sisteme de
control ale calitii care monitorizeaz problemele aprute pe abloanele de ADN. Aceste sisteme
sunt denumite puncte de control ale ciclului celular i sunt reglementate de o serie de proteine
(figura 4) (Hartwell & Weinert 1989). Punctele de control detecteaz diverse probleme gsite
asupra ADN-ului. Odat ce proteinele punctului de control identific aceste probleme, celula
activeaz cile de transducie a semnalului, cu scopul de a opri progresia ciclului celular i
furniza timp suficient pentru rezolvarea problemelor ADN-ului. tim, de asemenea, c punctele
de control activeaz programele de reparare a ADN-ului pentru a se coordona cu oprirea ciclului
celular.
Printre diversele puncte de control care sunt cunoscute pentru detectarea diverselor
obstacole din ADN, punctul de control al replicrii ADN este sistemul principal de supraveghere
care intervine atunci cand o celula are probleme n timpul replicrii ADN-ului. Dar ce
monitorizeaz de fapt acest punct de control? Acest punct de control monitorizeaz cel mai
important loc atunci cnd celula se afl n procesul de replicare al ADN-ului. Acest loc este
furculia de replicare ADN, care conine mecanismul de replicare care efectueaz sinteza ADN.
Atunci cnd furculia tarage de timp din cauza unui obstacol ntlnit n ADN (figura 2), celula
activeaz punctul de control de replicare cu scopul de a trimite un semnal pentru a opri naintarea
ciclului celular. tim multe despre modul n care punctul de control al replicrii repar
4

prejudiciul creat prin coordonarea programelor de reparare a ADN-ului (Figura 3) i oprirea

ciclului celular. n cazul n care furculia se blochez sau se rupe, celula activeaz secven ial
proteine de transductie a semnalului pentru a se asigura c urmaii vor mo teni copii exacte ale
ADN-ului parental. La baza acestui sistem stau protein-kinazele conexe ATM / ATR, care
transmit semnalul pentru a stopa ciclului celular. Aceste activiti mpiedica celula s ajung n
fazele ulterioare ale ciclului celular, asigurndu-se c celulele nu transmit informa ii genetice
incomplete sau alterate celulelor fiice. ATR i ATM fosforileaz de asemenea histonele H2AX
precum i alte proteine care repar ADN pentru a ajuta la repararea eficient a ADN-ului.
Protejarea furculielor de replicare a ADN-ului
Pstrarea integritii genomice a ADN-ului expus n cazul n care furculiele de replicare
se opresc este o alt responsabilitate major a punctului de control de replicare. Prin urmare, este
de asemenea important prevenirea deteriorarrii ADN-ului la bifurcaia de replicare prin
meninerea asamblrii componentelor replisome-urilor (eng.: mecanismul de replicare). Studii
recente au identificat un grup de proteine care sunt necesare pentru a stabiliza furculi ele de
replicare (Figura 4). n timp ce noi nc ncearcm s neleagem modul n care aceste i alte
proteine stabiliza furculiele de replicare, se pare c aceste protectori de furc au cel pu in
urmtoarele funcii (Figura 4):
1. Coordoneaz diverse activiti necesare pentru sinteza ADN-ului. De exemplu, este important
s mbini activitate de replicarea de ADN a ADN polimerazei cu activitatea de desf urare a
ADN helicazei de la bifurcaia furculiei de replicare.
2. Stabilizarea componentelor replisome-ului (eng.: mecanismul de replicare) la bifurcaie de
replicare n cazul n care furculia de replicare se oprete, astfel nct furculia se poate reporni
dup ce problemele sunt rezolvate.
3. Prevenirea ruperii furculiei. Dac furculia este rupt, protectoarii furculiei poat fi necesari
pentru a reasambla componentele replisome-ului. Aceast funcie este esenial pentru a relua
replicarea ADN-ului odat ADN-ul este reparat.
4. Stabilizarea structurilor neobinuite ale ADN-ului la bifurcaia furculiei oprite, evitndu-se
astfel recombinri nedorite ale ADN-ului.
5. Protejarea furculielor de replicare printr-o configuraie care este recunoscut de proteinele de
replicare a punct de control (Figura 3).

Concluzii
5

Atunci cnd furculia de replicare se oprete , punctul de control al replicrii intervine i

identific problemele ADN-ului. Acest punct de control activeaz o cascad a semnalului de
transducie pentru a opri ciclul celular i pentru a se coordona cu programul de reparare a ADNului.
Acest punct de control, de asemenea, protejeaz n mod direct furculiele de replicare
pentru a preveni instabilitatea genetic. Astfel, este evident c furculia de replicare este un ocup
un loc important n reglementarea celular, care n cele din urm pstreaz integritatea genomic.
Furculia nu particip doar la replicarea ADN-ului. Aa cum s-a descris mai sus, mai
multe evenimente au loc la aceast bifurcaie. n prezent, ncercm s nelegem modul n care
procesele multiple sunt reglementate i coordonate la bifurcaia de replicare. Studiile viitoare ne
vor arta n ce mod reglamentarea replicrii a ADN-ului se afl n legtur cu alte procese
celulare la locul bifurcaiei de replicare.

Imagini i grafice
6

Figura 1. Mecanismul replicrii ADN

Figura 2. Obstacole aflate pe lanul ADN care genereaz

Figura 3. Rspunsurile punctelor de control

Figura 4. Protejarea furculielor de replicare

Bibliografie:

http://en.wikipedia.org/wiki/DNA_replication (28.12.2014, ora 16:09)

http://www.unibuc.ro/prof/niculae_c_m/bioinfo/replicarea_adn.htm (28.12.2012, ora
16:18)
http://ro.scribd.com/doc/91635088/Curs-13-Replicarea-Si-Biosinteza-Adn#scribd
(28.12.2014, ora 16:46)
http://www.nature.com/scitable/topicpage/the-dna-replication-checkpoint-and-preservinggenomic-14157692 (28.12.2014, ora 17:00)
http://www.medinfo.umft.ro/dim/bioinformatica_files/master-poli/cursuri_pdf/bioinf4.pdf (3.01.2015, ora 14:30)
Branzei, D. & Foiani, M. Interplay of replication checkpoints and repair proteins at
stalled replication forks. DNA Repair (Amst) 6, 9941003 (2007).
Lambert, S., Froget, B. & Carr, A. M. Arrested replication fork processing: interplay
between checkpoints and recombination. DNA Repair (Amst) 6, 10421061 (2007).