Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
INGENIERA
Facultad de Ingeniera Ambiental
INFORME DE
LABORATORIO N 1:
DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE
MICROORGANISMOS
DOCENTE: Jorge Tello Cebreros
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
ALUMNA: Alarcn Olivera Ambar Tiffany
Lima-Abril 2015
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
1.- Objetivos:
-Aprender el correcto funcionamiento de los elementos de laboratorio as como la
seguridad e higiene en los experimentos.
-Conocer, aprender sobre las funciones de los equipos de laboratorio como
incubadora,autoclave,etc.
-Conocer, aprender cmo preparar los medios de cultivo para el crecimiento de
microorganismos.
-Anticipar la importancia de las condiciones fsicas del ambiente en las prcticas de
laboratorio.
-Identificar los tipos de microorganismos en los diversos ambientes de la facultad y el
grado de contaminacin percibido.
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro,
aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la
presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano
pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales.
Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C.
Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas
superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en
rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen
rangos ms amplios.
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn
ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las
protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms
simples de nitrgeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades
nutritivas especficas por lo que se aade a muchos medios sustancias como suero,
sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y
sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica. Muy a menudo se
aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas
actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos
de ciertos microorganismos.
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos
como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o
slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de
fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los
medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin
gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio.
Medios de cultivos utilizados:
Agar nutritivo :
El agar Nutritivo garantiza el crecimiento de todos los microorganismos de importancia
clnica tanto grampositivos como gramnegativos, hongos y levaduras, adems de
proporcionar una herramienta para el mantenimiento y confirmacin de aislamientos
primarios El agar Nutritivo se prepara a partir del medio de cultivo deshidratado, materia
prima producida por la casa BBL y tiene la siguiente composicin:
g/l Extracto de carne.................................... 3.0 g
Peptona........ ........................................... 5.0 g
Agar........................................................ 15.0 g
Agar Nutritivo (Concentracin: 20 g en 1 litro)
Se utiliz 2.76 g de agar en 120 ml de agua.
Caldo Nutritivo :
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de
microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Est descripto en muchos
procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia
sanitaria. Contiene
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
pluripeptona (una mezcla de partes iguales de peptona de carne y de casena) y extracto
de carne que constituyen la fuente de carbono y nitrgeno necesarias para el adecuado
desarrollo bacteriano. Puede ser utilizado adems, como preenriquecimiento en la
bsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas
daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias inhibitorias. Composicin ( gr /litro)
Pluripeptona......................................................................................................................5.0.
Extracto de carne.....................................................................................................3.0.
pH final: 6.9 0.2
Caldo Nutritivo (Concentracin: 8 g en 1 litro)
Se utiliz 1.08 gr de caldo en 135 ml de agua.
Agar Sabouraud :
Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y
saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.Recomendado para el aislamiento
y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel,
pelo). En el medio de cultivo, la peptona, la triptena y la glucosa son los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol
y el pH cido, inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y
levaduras. El agar es el agente solidificante. Puede ser suplementado con otros agentes
selectivos de crecimiento. Glucosado Composicin (en gramos por litro)
Peptona..........................................................................................................................5.0.
Triptena.........................................................................................................................5.0.
Glucosa..........................................................................................................................40.0.
Cloranfenicol......................................................... .....................................................0.05.
Agar...............................................................................................................................15.0.
pH final: 5.6 0
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
casos color caractersticos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se
encuentren, es constante bajo condiciones controladas y depende de la especie
bacteriana que la forme.
MARGEN O BORDE:
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
ELEVACIN DE LA COLONIA :
SUPERFICIE
Lisa
Rugosa
Plegada
COLOR :Se usan trminos comunes para definirlo y se especifica si el pigmento
producido difusible o no.
CARACTERSTICAS PTICAS
LUZ TRANSMITIDA ( observar a traves de la colonia)
Opaca: no permite el paso de luz
Traslcida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad de los objetos observados
a travs de la colonia.
Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramentelos objetos observados a
travs de la colonia.
LUZ REFLEJADA ( observar la superficie de la colonia)
Opaca
Brillante
CULTIVO EN CALDO Al igual que en los medios slidos, en los medios lquidos las
caractersticas de la bacteria sembrada se reflejan en las caractersticas que presenta el
caldo inoculado como son: Turbidez: Opacidad ms o menos densa, signo de crecimiento.
Pelcula: Crecimiento casi continuo sobre el lquido
Sedimento: Depsito de clulas en el fondo del tubo que se re suspende al agitar.
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
3.- PROCEDIMIENTO-CARACTERSTICAS:
PROCEDIMIENTO A :
1.- Se tienen 4 tubos a 45 con Agar nutritivos previamente preparados .Flamear en el
mechero y verter el contenido en 4 placas Petri de la siguiente manera :
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
RESULTADOS PROCEDIMIENTO A :
Placa
GRUPO Nro. 1
estril
1
Nmero
de
colonias
Tamao
Margen
Elevacin
Cromogn
esis
Laboratorio
de
Microbiolog
a
Plac
Placa
a
Nro.
Nro.
4 no
3
estri
est
l
ril
Sector A
( Pelo)
Sector B
(huella
dactilar)
Sector C
(inoculad
or estril)
Sector D
(inoculad
or no
estril)
1
16
(8) 0.1 cm
(1) 1.7
dimetro
(1) 1 cm
(1) 1.3 cm
(1) 0.5 cm
(4) 0.25
cm
Ondulante
Plana
1 mm
NO
ABRIR
NO
ABRIR
57
(3) 1mm
(1) 2mm
(1)3mm
(2)1cm
(54)1m
m
Liso
Liso
(2) liso
(55)
ondulant
e
plana
plana
plana
crema
crema
crema
opaco
opaco
Opaco y
traslcid
a
Crema
Caractere
opaco
s pticos
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
Placa
GRUPO Nro. 1
estril
3
Nmero
de
colonias
Tamao
Margen
Centro de
Estudiante
s
Sector A
( Pelo)
6
X= 1 mm
x = 3mm
x= 3mm
x = 2mm
x= 4mm
x=1mm
Liso
ondulante
liso
liso
liso
liso
5
X=0.1mm
X=0.1mm
X=0.1mm
X=0.1mm
Sector B
(huella
dactilar)
Placa
Nro.
4 no
estr
il
NO
ABRIR
Sector C
(inoculad
or estril)
Sector D
(inoculad
or no
estril)
NO
ABRIR
limpio
limpio
X= 2cm
x= 1cm
x=0.5cm
limpio
Elevacin
Todas
planas
X= blanco
x=blanco
x=crema
Cromogn
X=naranj
esis
a
X=rosado
X=rosado
Caractere Todas
s pticos opacas
-
Plac
a
Nro.
3
est
ril
X=liso
X=liso
X=liso
X=liso
x=lobular
Todas
planas
Todas
blancas
Todas
opacas
15
X=ondula
Pequea
s
< 1mm
(4) liso
(11)
nte
X=liso
X=liso
Todas
convexas
con botn
Todas
planas
Todas
cremas
Todas
cremas
(9)
traslcid
as
(6)
opacas
Todas
opacas
ondulant
es
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
Procedimiento B
1.- Se prepara el caldo nutritivo y se extrae del autoclave ,para despus con pipeta
extraer el medio en otras 3 pipetas distribuidas de la siguiente manera :
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
RESULTADOS:
Grupo
Cantidad de
crecimiento
Distribucin
de
crecimiento
Olor
Grupo
Cantidad de
crecimiento
Distribucin
de
crecimiento
Olor
Tubo estril
Pipeta
estril (1)
Tubo no
estril
Pipeta
estril (3)
Tubo estril
Pipeta no
estril (2)
escaso
abundante
Tubo roto
sedimento
amarillo
imperceptible
ftido
Tubo estril
Pipeta
estril (1)
Tubo no
estril
Pipeta
estril (3)
Tubo estril
Pipeta no
estril (2)
nulo
abundante
nulo
No hay
turbidez
aromtico
ptrido
aromtico
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
Procedimiento C
1.- En una placa estril se vierte Agar Sabouroud especial para hongos , y cada grupo lo
deriva a diversos ambientes de la siguiente manera :
Grupo 1 :Laboratorio de microbiologa
Grupo 2: Centro de estudiantes
Grupo 3 : Bao de caballeros FIA
Grupo 4: Biblioteca FIA
Grupo 5: Saln de clases vaco
Las placas se dejan en el ambiente por 15 minutos
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
LABORATO
RIO
DE
MICROBIOL
OGA
2
CENTRO
DE
ESTUDIANT
ES FIA
Bao de
caballeros
FIA
Biblioteca
FIA
Saln de
clases
vaco FIA
12 hongos
11
levaduras
7 hongos
3
levaduras (
2 blancas ,
1 marrn)
7 hongos
5
levaduras (
4 blancas,
1 marrn)
TIPO DE
HONGOS
S.Apiosper
mun
Aspergilus
Niger
Aspergilus
Fumigatus
1 Levadura
1
alternaria
0 rhizopus
11
aspergilus
4
alternarias
0 rhizopus
3
aspergilus
1
alternaria
1 rhizopus
5
aspergilus
CARACTER
STICAS
X1:
color
:crema
X1 :
marrn
oscuro,filam
entoso
vesculas
grandes
conidios
radiados
Alternaria:O
pacas de
color verde
oliva y
consistencia
lanosa en
los bordes
Alternaria:O
pacas de
color verde
oliva y
consistencia
lanosa en
los bordes
Alternaria:O
pacas de
color verde
oliva y
consistencia
lanosa en
los bordes
Aspergilus :
opacas de
color verde
oliva y
filamentoso,
borde
circular liso
y elevacin
convexa
Aspergilus :
opacas de
color verde
oliva y
filamentoso,
borde
circular liso
y elevacin
convexa
Rhizopus:Co
lonia
algodonosa
Rhizopus:Co
lonia
algodonosa
NMERO
DE
HONGOS
x2 :
color
:blanco
Elevado
,rugoso,
Conidias
ovales
abundantes
que surgen
de anlides
solitarias o
ramificadas.
x2:marrn,r
ugoso
x3: crema
x4: blanco
cremoso
x5:levadura
Aspergilus :
opacas de
color verde
oliva y
filamentoso,
borde
circular liso
y elevacin
convexa
Rhizopus:Co
lonia
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
algodonosa
de color
blanca que
alcanza el
borde de la
placa petri
de color
blanca que
DISCUSIN Y OBSERVACIONES :
PROCEDIMIENTO A :
-El nmero de colonias en el grupo 1 (laboratorio de microbiologa ) es mayor al
nmero de colonias en el grupo 3 (CEIA ) para la placa Petri N 1 , se observan
las diferentes caractersticas de los ambientes como ventilacin , hmedas ,
partculas ,nmero de personas presentes ,etc.
-Para las placa N 2 del grupo 3 sector B huella digital , no se observ ninguna
colonia a pesar de la exposicin de la piel humana al medio contaminado.
-La falta de colonias en la placa N3 tanto para el grupo 1 y el grupo 3 se debe a
que el inoculador expuesto sobre el cultivo ha sido anticipadamente esterilizado.
PROCEDIMIENTO B :
-Tanto para el grupo 2 como para el grupo 4 , en pipeta y tubo no estril se
observa el crecimiento de bacterias con sus respectivas caractersticas.
- No se puede observar las condiciones de tubo estril y pipeta no estril debido al
rompimiento del tubo en el grupo N 2 y de realizar un experimento fallido por el
grupo N4, hecho que ocasiona que no se pueda comparar el grado de
crecimiento de bacterias con pipeta estril y tubo no estril .
-Para los dos grupos las condiciones de pipeta y tubo estril muestran un escasonulo crecimiento de bacterias ,lo cual se puede deber a un cierto grado de
contaminacin al momento de transportar los tubos.
PROCEDIMIENTO C :
-Se observaron en todas las placas el crecimiento de hongos y levaduras.
-En la placa del grupo 5 ,donde tal muestra fue tomada en un saln de clases
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
vaco ,se encontraron hongos y levaduras .Hecho que demuestra una falta de
ventilacin ,higiene y seguridad dentro de los salones de clases de la
facultad.Posteriormente se pas a la identificacin.
-El ambiente ms contaminado de hongos fue observado a travs de la placa del
grupo 3 ,donde la muestra fue tomada en el bao de caballeros de la FIA .
CONCLUSIONES PROCEDIMIENTO A :
Las condiciones del medio influyen en el crecimiento de diversos tipos de
microorganismos,es importante preservar la higiene del ambiente.
CONCLUSIONES PROCEDIMIENTO B:
El cuidado de los elementos de laboratorio, en este caso tubos de ensayo, es
importante en la realizacin del experimento, ya que si alguno sufre falla puede
alterar los resultados.
Es posible identificar microorganismos mediante diversos medios de cultivo .Para
este caso se utiliz el caldo nutritivo.
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
CONCLUSIONES PROCEDIMIENTO C :
Los microorganismos como los hongos se desarrollan en ambientes hmedos, por
lo cual cada ambiente de la facultad presenta esta caracterstica por lo cual se han
podido desarrollar.
Para cada ambiente de la facultad existe una diferencia entre el nmero de hongos
y su clasificacin, depende mucho del medio. Por ejemplo el ambiente ms
contaminado en este procedimiento es el Bao de Caballeros FIA , donde se
puede apreciar hongos y levaduras en mayor cantidad.
RECOMENDACIONES GENERALES:
En todos los experimentos se debe tomar muy en cuenta la seguridad del
procedimiento y el correcto uso de los materiales de laboratorio.
No contaminar los materiales ya esterilizados como las pipetas, placas ,tubos
de ensayo,etc.
Al momento de hacer el trasvase del agar nutritivo hacia los recipientes de
prueba demorar el menor tiempo posible, ya que si la temperatura de este baja
de 45 tiende a solidificarse.
Se debe asegurar la correcta ubicacin de las placas Petri en el ambiente a
tomar las muestras, a fin de obtener resultados ptimos en condiciones
identificadas previamente.
Se debe tomar en cuenta la vida media de los microorganismos ,los cuales
viven aproximadamente 48 horas luego de ser cultivados ,pasado ese
tiempo ,su identificacin y su estudio no dara resultados ptimos.
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
CUESTIONARIO
1.-Qu
factores
influyen
en
la
flora
microbiana
del
aire?
Explique
En el aire no hay suficientes nutrientes para el desarrollo bacteriano, por ello, no es muy buen
medio para los microorganismos. Adems, la inadecuada disposicin de la basura y las excretas
expuestas al medio aire son algunos de los emisores ms importantes de microorganismos,
quistes, esporas, polen, etc, que pueden salir estar adheridos al polvo
Los factores son:
Humedad
Temperatura
Partculas en suspensin
Ventilacin
Aerosoles
Radiacin: La energa q brinda el sol.
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
Rhizopus.- Es un gnero de mohos que incluyen especies
cosmopolitas de hongos filamentosos hallados en el suelo,
degradando frutos y vegetales, heces animales, y residuos.
5.-Qu clase de nutrientes proporciona cada uno de los ingredientes del caldo nutritivo,agar
sabourdou
y
agar
nutritivo?
Caldo Nutritivo: Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que constituye la
fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.
Puede ser utilizado adems, como pre enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella spp. A partir
de alimentos, ya que permite recuperar clulas daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias
inhibitorias.
Agar Nutritivo: En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una
sustancia espesa, con colonias difcilmente observables. El agar nutritivo contiene normalmente
MICROBIOLOGA SANITARIA 1
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS
0.5 % Peptona
1.5 % agar
0.5% [NaCl]
Agua destilada