LICEUL TEORETIC DE SERVICII SF.

APOSTOL ANDREI
PLOIETI
PROIECT
EXAMEN DE CERTIFICARE A
COMPETENELOR PROFESIONALE NIVEL 3+
CALIFICARE PROFESIONAL ASISTENT
MEDICAL DE LABORATOR

TEMA
ENZIME IMPLICAII BIOLOGICE
COORDONATOR

ABSOLVENT

PROF. GHEORGHE EVELINE

BOGDAN ADRIANA
ANUL III AML

PROMOIA 2015

Enzime
Introducere generaliti

Enzimele sunt catalizatori biochimici propriu-zi i, a adar ele

sunt compui care mresc viteza reaciilor chimice ce se desf oar
in sistemele biologice, fr s se consume n timpul acestora.
Din cele mai vechi timpuri (din antichitate), sunt cunoscute
procese enzimatice cum sunt: fermentaia vinului, dospirea pinii,
etc. Dar cunotinele sistematice n acest domeniu s-au ob inut
ncepnd cu identificarea primelor enzime: amilaza din mal
(Kirchoff, 1814 ), amilaza salivar (Leuchs, 1831 ) i pepsina
(Schwann, 1836 ). Ulterior progrese importante s-au realizat prin
lucrrile privind cataliza i biocataliza ale lui Berzelius Liebig, prin
studiile asupra cineticii ale lui Michaelis i Menten (1912), prin
obinerea enzimelor n stare cristalizat (Sumner, 1926).
S-au efectuat lucrri numeroase de-a lungul anilor, dovedindu-se
prin acestea c enzimologia constituie studiul bazelor moleculare ale
vieii. n organismele vii, mii de reacii chimice se desf oar foarte
rapid n condiiile de presiune i temperatur ale acestora. Toate
eceste transformri sunt mediate de enzime (denumite ini ial fermen i
sau diastaze), proteine specializate s catalizeze reac iile metabolice.
Ca i catalizatorii industriali, enzimele duc la cre terea reac iilor
biochimice posibile. n timpul acestor reacii, enzimele nu i
modific compoziia.
E+SESE+P
E = enzim
S = substrat
ES = complex ntre enzim i substrat
E = enzim
P = produs de recie
Din punct de vedere biochimic, enzimele sunt molecule
proteice. n marea majoritate au structur i propriet i deosebite. La
nivelul organismului uman exist cteva mii de enzime func ionale.
Fiecare poriune de enzim, respectiv molecul, dispune de o
poriune la nivelul creia are loc transformarea biochimic. De obicei
aceast poriune se situeaz n interiorul moleculei i este numit
centru i miezul activ al enzimei.
Prin determinarea felului i naturii reaciei catalizante centrul
activ stabilete i specificitatea de aciune a enzimei.
2

Substratul se fixeaz n apropierea centrului, ac ionnd pe o

alt poriune a suprafeei enzimei, respectiv n centrul de legare,
determinnd astfel specificitatea de substrat.
n unele cazuri, centrul activ face parte din structura enzimei, n
altele ns se leag separat de molecula enzimei.
Viteza reaciilor catalizate poate fi stimulat , dar i inhibat. n
cazul catalizatorilor anorganici, temperatura sisitemului influen eaz
direct proporional rata de reacie.

Caracteristicile enzimelor
Enzimele pot fi definite drept biocatalizatori care prezint
urmtoarele trsturi caracteristice:
1. Enzimele au o putere catalitic enorm, accelernd viteza reac iilor
cu pn la 1016 fa de viteza reaciei necatalizate. Aceast capacitate
depete puterea oricrui catalizator folosit n sinteza organic.
Enzimele au aceast imens putere catalitic n solu ii diluate, n
condiii moderate de pH i temperatur. Puterea catalitic poate fi
definit ca: raportul ntre viteza reaciei catalizate i viteza reac iei
necatalizate enzimatic.
2. Enzimele nu se consum i nu se transform n reaciile catalizate.
3. Enzimele se caracterizeaz printr-o mare specificitate. Orice enzim
este foarte selectiv att n ceea ce prive te substan a pe care o
transform (substrat) ct i din punctul de vedere al reac iei
catalizate.
4. Enzimele scad energia de activare a moleculelor de substrat pe care le
transform, accelernd astfel viteza reaciei biochimice.
5. Capacitatea de reglare- Reglarea activit ii enzimatice se realizeaz
n moduri diferite, ce variaz de la controlul calit ii de enzim
sintetizat de celul, pna la modularea activit ii sale, interac iuni
reversibile cu activatori i inhibatori metabolici. Enzimele contribuie
astfel la coordonarea i reglarea proceselor metabolice.
6. Enzimele se gsesc n celule i acioneaz n cantitate foarte mic,
dar cu efect semnificativ.
3

7. Enzimele pot cataliza reaciile n condi iile organismului, la

temperatura de aproximativ 37 oC, pH optim i la presiune
atmosferic. Fiecare enzim are un pH optim de ac iune deoarece n
centrul activ al enzimei exist de obicei mai mul i aminoacizi.
Variaiile pH-ului n organism au loc n limite relative restrnse, adic
de la 6,9 - 7,8 maxim, cele mai multe enzime ac ionnd optim n
acest interval. Exist i excepii precum:
- Pepsina secretat la nivelul lumenului gastric, avnd un pH= 1,5 - 2,0
- Tripsina i chimiotripsina din sucul pancreatic cu un pH optim alcalin
- Enzimele lizozomale care acioneaz la pH acid
Orice afeciune fizic denaturat ca: radia iile, cldura din
mediu, sau aciunile chimice, prezena unor metale grele n organism
Pb, Sn, Hg fac posibil denaturarea reac iei biochimice i duce la
imposibilitatea manifestrii funciilor enzimatice.
Modul de clasificare al reaciilor biochimice n mediul apos i la
temperatur constant o constituie viteza reaciilor chimice reversibile.
Aceast vitez determinat de concentraia partenerilor de reac ie,
ducnd la instalarea unei stri de echilibru la care cele dou viteze V 1
i V2 sunt considerate identice.
n cursul reaciei enzimatice exist mai multe etape:
- Prima etap - prima faz o constituie fixarea substratului S adic
formarea complexului enzim - substrat
- A doua etap - are loc eliberarea procesului de reac ie
- A treia etap - are loc eliberarea enzimei. Prin eliberarea enzimei se
produce regenerarea ei i, deci aceasta devine capabil pentru a intra
din nou n reacie. Un numr relativ mic de particule catalizatoare pot
realiza transformarea chimic a unor cantit i nsemnate de substrat
fr ca ele s se consume.
n cadrul reaciilor biochimice exist mai mul i factori care
afecteaz activitatea enzimelor serice , respectiv:
- Cantitatea enzimei eliberate n circula ie
- Gradul dilurii enzimei n volumul plasmatic
- Viteza eliberrii enzimei n plasm
Activitatea enzimelor poate s creasc n ser din urmtoarele
cauze:
4

1. Creterea permeabilitii membranei celulelor fr a exista

manifestarea unor leziuni perceptibile. Astfel de cazuri se ntlnesc n
cazul fazei de incubaie a hepatitelor virale, atunci cnd activitatea
GPT crete mult n ser fr a se observa vre-o leziune morfologic
hepato - celular.
2. Manifestarea unor leziuni celulare perceptibile, ntlnite mai ales la
glandele exocrine. n pancreatita acut cre te valoarea seric a
amilazei i a lipazei. Activitatea tripsinei i chimotripsinei eliberate
de celulele pancreatice exocrine care sunt lezate la nceput se
neutralizeaz de ctre alte enzime existente deja n plasm.
3. Obstrucia canalelor excretoare ale glandelor exocrine din cauza
calculilor sau litiazei. n acest caz are loc o cre tere a amilazei, a
fosfatazei alcaline, producndu-se o reducere a fluxului biliar.
4. Eliminarea renal sczut a unor enzime n cursul insuficien ei renale
ducnd la creterea activitii enzimelor n ser i lipsa leziunilor
celulare.
5. Producerea fiziologic n exces a unor enzime cauzeaz n mod
similar creterea activitii serice a enzimelor ; fosfataza alcalin la
copii este mare.

Nomenclatura i clasificarea enzimelor

La nceputul enziomatologiei au fost caracterizate n special
enzime ce catalizau reacii de hidroliz a legturilor covalente din
molecula diverselor substraturi i de aceea erau denumite prin
adugarea sufixului aza la numele substratului asupra cruia
acionau.
De exemplu:
Ureaza= enzima care hidrolizeaz ureea
Lipaza= enzima care hidrolizeaz lipidele
Fosfataza= enzima care hidrolizeaz legturile fosfat din compu ii
organici fosforilai
Amilaza= enzima care hidrolizeaz amidonul
Proteaza= enzima care scindeaz proteinele.
5

Altele erau denumite cu nume uzuale mai vechi: pepsina,

tripsina.
Aceast nomenclatur a condus la o serie de confuzii, i din
acest motiv, Comisia pentru Enzime a Uniunii Interna ionale de
Biochimie a introdus n 1956 o baz sistematic pentru denumirea
enzimelor.
n prezent fiecrei enzime i este atribuit un cod i un nume
sistematic.
Numrul de cod este format din patru cifre precedate de
prescurtarea EC (Enzyme Comission) acestea indicnd:
- Prima cifr - clasa de enzime (n funcie de reacia catalizat)
- A doua cifr - subclasa (d indicaii asupra donorului din reacie)
- A treia cifr - subsubclasa (face referire la natura acceptorului din
reacie)
- A patra cifr - indic enzima individual.
n funcie de reacia pe care o catalizeaz, multe din enzime sunt
repartizate n ase clase:
1. Oxidoreductoare
2. Transferaze
3. Hidrolaze
4. Liaze
5. Izomeraze
6. Ligaze
Numele sistematic conine informaii referitoare la:
a. Natura donorului
b. Natura acceptorului
c. Tipul reaciei catalizate
1. Oxidoreductaze = catalizeaz reacii de oxidoreducere prin care se
transfer hidrogen sau electroni ntre dou substraturi.
Cifra subclasei indic donorii echivalenilor de reducie:
- alcool
- aldehide sau cetone
- catene hidrocarbonate
- amina primar
- amina secundar
6

- formele reduse ale coenzimelor p313c26d iridinice

- ali compui azotai
Cifra a treia se refer la acceptorul de hidrogen sau electroni
- Formele oxidate ale coenzimelor piridinice
- Citocromii
- Oxigen
- Ali acceptori
Subclasele oxidoreductazelor au i denumiri uzuale: oxidaze,
peroxidaze, dehidrogenaze, monoxigenaze.
Coenzimele oxidoreductazelor sunt diferite:
- Coenzime piridinice NAD+, NADP+
- Coenzime flavinice
FAD, FMN
- Coenzime hematinice citocromi
Exemplu:
EC1.1.1.27L- lactat
NAD+ oxidoreductaza (usual lactate dehidrogenaza)
L-lactat+NAD+ - piruvat+NADH
n cazul n care n reacia catalizat de oxidoreductaze se
realizeaz i o alt transformare, se men ioneaz n parantez
aciunea secundar a enzimei.
Exemplu:
EC1.1.1.41L- izocitrat: NAD+ oxidoreductaza (decarboxilant)
catalizeaz cu decarboxilarea acestuia.
2. Transferazele = sunt enzime care catalizeaz transferul unor grupe
variate ntre dou substraturi. Numele acestora este n func ie de
natura grupei transferate:
- Metiltransferaze
- Aminotransferaze
- Formiltransferaze
- Fosfotransferaze
A doua cifr indic tipul de grup transferat:
2.1- grupa cu un atom de carbon
2.2 grupe aldehidice sau cetonice
2.3 grupe acil
2.4 grupe glicozil
7

2.5 grupe alchil

2.6 grupe ce conin azot
2.7 grupe ce conin fosfor
2.8 grupe ce conin sulf
A treia cifr descrie exact grupa care este transferat n cazul n
care subclasa presupune mai multe grupe:
2.1.1 metiltransferaze
2.1.2 hidroximetiltransferaze
2.6.1 aminotransferaze
Coenzimele transferazelor sunt numeroase:
- Piridoxal fosfatul
- Tiamin pirofosfatul
- Coenzima A
- Acizi folici
- Coenzimele B12
- Biotina
- S- adenozil metionina
- Nucleotid polifosfai (ATP)
- Formele active ale unor compusi: UDP- glucoza; CDPcolina
Exemplu:
EC2.7.1.2 ATP: D-glucoza-6
Fosfotransferaza (glucokinaza)
D-glucoza + ATP = D- glucoza-6-fosfat + ADP
n cazul transferazelor de grupe fosfat denumirea face
obligatoriu referire la acceptor:
2.7.1- alcool
2.7.2- carboxil
2.7.3- grupa azot
Pentru fosfotransferaze ce necesit ATP ca donor de grupe fosfat
se utilizeaz denumirea uzual kinaza.
3. Hidrolazele = sunt enzime care particip la hidroliza unor legturi
diverse, fiind subclasificate (a doua cifr) n func ie de natura
acestora:
3.1 legtur esteric esteraze
3.2 legtur glicozidic glicozidaze
8

3.3 legtur fosfat fosfataze

3.4 legtur peptidic peptidaze
3.5 legturi ntre carbon i azot
A treia cifr indic mai exact tipul de legatur hidrolizat:
3.1.1 hidroliza esterilor carbonici
3.1.6 hidroliza esterilor acidului sulfuric
Exemplu:
EC3.1.3.9 D glucozo 6 fosfat fosfohidrolaz
(glucozo 6 fosfataza)
D glucozo 6 fosfat + H2O = D glucoz + Pi
4. Liazele = sunt enzime care particip la formarea unor legturi duble CC, C-N, C-O prin ndeprtarea nehidrolitic a unor grupe din substrat.
A doua cifr indic tipul legturii scindate:
4.1 C-C
4.2 C-O
4.3 C-N
4.4 C-S
A treia cifr face referire la natura grupei ndepartate:
1 carboxil
2 aldehid
3 - cetocarboxil
Se poate face referire la acestea i folosesc denumirile uzuale :
aldolaze, hidrataze, sintaze,decarboxilaze.
Exemplu:
EC
4.1.1.22
L-histidin-carboxi-liaza
(histidin
decarboxilaza)
Histidina = Histamina + CO2
5. Izomerazele = sunt enzime care permit desfurarea reac iilor de
izomerizare fiind subclasificate n funcie de tipul reac iei catalizate.
5.1 racemaze i epimeraze
5.2 izomeraze cis- trans
5.3 oxidoreductaze intramoleculare
5.4 mutaze
A treia cifr indic tipul de molecul ce este supus izomerizrii:
racemaze ce transform aminoacizii
9

 epinmeraze ce transform carbohidrai

Exemplu:
EC 5.1.1.1 Alaninracemaza transform L alanina n D
alanin
6. Ligazele = sunt enzime care intervin n formarea unor noi legturi C-C,
C-O, C-N, C-S folosind ATP- ul ca surs de energie.
A doua cifr indic legtura format:
6.1 C-O
6.2 C- S
6.3 C- N
6.4 C- C
A treia cifr descrie mai exact legtura ce se formeaz:
6.3.1 amidosintetaze
6.3.2 - peptidsintetaze
6.4.2 carboxilaze
Exemplu:
EC 6.4.1.1 piruvatcarboxilaz
L piruvat + CO2 = L oxalilacetat
Enzimele sunt enzime proprii ale plasmei:
- Eliberate ocazional de ctre glandele exocrine
- Eliberate n condiii fiziologice n cantiti reduse
Se exprim la nivelul lichidului biologic, nu pe baza cantit ii ,
ci n funcie de activitatea lor.
Din punct de vedere al activitii, unitatea de msur din cadrul
sistemului internaional (S.I.) este: KATAL.
KAT-UL unitatea care reprezint acea cantitate de enzim
care la temperatura constant de 25 oC, transform n 1 sec. 1mol de
substrat / 1 litru de soluie.
Pentru aplicaiile medicale s-s considerat c se ob in rezultate
foarte mari, incomod de folosit n practic, i de aceea s-a definit
unitatea internaional biochimic U/L sau U.I.
U/L (U.I.) reprezinta acea cantitate de enzim care
transform intr-un minut 1mol de substan dizolvat ntr-un litru de
soluie.
Structura Enzimelor
10

Enzimele sunt proteine globulare putnd avea o structur:

Unitar enzime monocomponente, alctuite numai din
aminoacizi: tripsina, chimotripsina, pepsina, lipaza, ribonucleaza.
Binar enzime alctuite dintr-o parte proteic (apoenzima) i o
grup neproteic; definite de Euler astfel:
Holoenzima = Apoenzima + Cofactor
Studiul structurii enzimelor s-a realizat prin tehnici exacte:
difracia cu raze X, dicroism circular, fluorescen , analize n UV i
IR, RMN, spectometrie Raman.
Cunoaterea localizrii intracelulare a diverselor enzime are i
valoare diagnostic, ntruct o lezare celular care duce la eliberarea
din celule a enzimelor mitocondriale, este mai grav dect o leziune
limitat la membrana celular i care duce doar la ie irea enzimelor
citoplasmatice.
S-a stabilit ca enzimele glicolitice (aldolaza, LDH) sunt
localizate n citoplasm pe cnd enzimele implicate n respira ia
celular, enzimele afectate ciclului acizilor tricarboxilici
(piruvatdehidrogenaza, izocitrat dehidrogenaza) sunt localizate n
mitocondrii.
Dintre
transaminaze,
alanil-amino-transferaza
i
malicodehidrogenaza se gsesc att n citoplasm ct i n
mitocondrii.
La nivelul lizozomilor se gsesc incluse enzime cu rol n
degradarea lipidelor, proteinelor i acizilor nucleici (ribonucleaz,
dezoxiribonucleaz, fosfataze, proteaze, colagenaze). Ct timp
membrana lipoproteic a lizozomilor rmne intact, enzimele
lizozomale nu atac substratele din citoplasm. Dezintegrarea acestei
membrane este urmat de liza celulei.
Enzimele care se gsesc n plasm pot fi clasificate n doua
grupe:
a. Enzimele specifice plasmei, denumite i enzime plasmatice
funcionale, includ toate enzimele care au o func ie bine definit i
specific n plasm. Plasma este locul lor de ac iune i ele se gsesc
la un nivel mai ridicat dect n majoritatea esuturilor.

11

Aceste enzime sunt sintetizate n ficat i sunt eliberate constant

n plasm. Ele prezint interes clinic cnd n plasm au o concentra ie
mai sczut fa de normal.
Dintre aceste enzime amintim: enzimele coagulrii, lecitincolesterol-acil-transferaza
(LCAT),
pseudocolinesteraza,
ceruloplasminarenina.
2. Enzimele nespecifice plasmei, care nu prezint funcii fiziologice n
plasm. Ele se gsesc n plasm n concentra ii mult mai mici dect
concentraia lor n esuturi. n multe cazuri plasma este deficitar n
activatori sau coenzime necesare pentru activitatea optim a acestor
enzime.
Acest grup conine:
a. Enzimele de secreie, provenind din glandele exocrine i pancreas ;
sunt secretate i acioneaz la nivelul tubului digestiv i dintre acestea
amintim: amilaza, lipaza, tripsina, pepsinogenul. Dei ele se secret
n cantiti ridicate, sunt rapid i complet eliminate prin canalele
excretoare obinuite, n tractul gastrointestinal, bil, urin i
concentraia plasmatic este sczut i constant. Ori de cte ori o
cale uzual de excreie este blocat, sau dac eliberarea n lichidul
extracelular este brusc accelerat, rata de producere este crescut,
concentraia n plasm a acestor enzime va crete semnificativ.
b. Enzime celulare (AST, ALT, CK, LDH) au loc de aciune n celulele
din care provin, unde se gsesc ntr-o concentraie ridicat. Dac
membrana celular este intact, aceste enzime sunt absente n lichidul
extracelular i plasm sau n concentra ie extrem de mic. Prezen a
lor n plasm se datorete unor scurgeri minime n cadrul procesului
de uzur celular sau n cursul diviziunii celulare, sau cnd exist o
perturbare a proceselor energetice celulare, caracterizate printr-o
scdere a concentraiei ATP din celule, care se repercuteaz asupra
permeabilitii membranei celulare. Aa se explic cre terea
moderat a CK (creatinkinazei) n cursul unui efort muscular intens.
Dup ce enzimele celulare s-au scurs n plasm, activitatea lor
scade rapid, avnd timp de njumtire (ndeprtare) de cteva ore,
de exemplu pentru AST este de 46- 58 ore.
Scderea activitii plasmatice a enzimelor s-ar datora ctorva
mecanisme:
12

a. n cursul trecerii prin membrana celular poate suferi modificri

structurale. De exemplu CK sufer un proces de oxidare a grupelor
SH.
b. Enzimele cu greutate molecular mic, cum este - amilaza se
elimin pe cale urinar, iar fosfataza alcalin pe cale biliar.
c. Majoritatea enzimelor sunt ndeprtate din plasm printr-un proces de
captare i degradare n macrofage.
Viteza cu care enzimele ptrund din celule n lichidul intersti ial
i de acolo n plasm i limf, precum i viteza de njumt ire,
variaz de la enzim la enzim. Acest lucru prezint importan
diagnostic pentru cunoaterea perioadei de timp cnd trebuie
recoltate probele de snge. De exemplu: activitatea AST-ului crete la
4-8 ore de la producerea infarctului de miocard i revine la normal
dup 3-6 zile. LDH-ul ptrunde mai greu n torentul circulator,
creteri semnificative nregistrndu-se dup 8-12 ore, valori care se
menin 10-15 zile. Mecanismul de trecere a acestor enzime n plasm
implic o cretere a permeabilitii membranelor celulare care denot
de regul o lezare a celulelor.
Mecanismul trecerii enzimelor i izoenzimelor tisulare n plasm
este foarte complex. Ele pot ajunge n plasm direct sau prin sistemul
limfatic, ducnd la modificarea concentra iei lor plasmatice. Aceste
disenzimii sunt datorate interaciunii mai multor factori dintre care
amintim:
- Localizarea intracelular a enzimei i permeabilitatea membranei
celulare, mitocondriale i nucleare;
- Gradul de vascularizare a organului lezat;
- Prezena sau absena unei bariere inflamatorii;
- Greutatea molecular a enzimelor, cele cu greutate mai mare
traversnd mai greu membranele.
Datorit acestor eliberri exist posibilitatea localizrii leziunii
celulare indicat prin modificri enzimatice ce permit concluzii
diagnostice cu caracter de specialitate.

13

Principalele enzime plasmatice cu valoare

diagnostic
Lactatdehidrogenaza (LDH)
Se gsete n cantiti mari n muchiul striat, ficat, miocard,
rinichi i ganglionii limfatici, i n cantit i mai reduse n pancreas,
eritrocite i plmni.
LdH poate fi separat n 5 izoenzime. Ele difer prin raportul n
care sunt asociate lanurile polipeptidice de baz. Cele dou lan uri
de baz n cadrul LDH sunt H (de la heart = inima) i M (de la
muscle = muchi). Izoenzimele LDH sunt tetrameri cu urmtoarele
asocieri:
LDH1; LDH2; LDH3; LDH4; LDH5
H4
H3M
H2M2
HM3
M4
Cele cinci izoenzime sunt repartizate diferit n esuturi. Astfel :
LDH1- predomin muchiul cardiac
LDH5- n ficat i muchii scheletici
Valori normale: 120240U/L
Variaii patologice
Creteri:
infarct miocardic (de 4 ori valorile normale) - cre terea debuteaz la
10 ore dup infarct cu maximum la 48-72 ore i revine la normal
dup 15 zile
miocardita, miopatie
hepatita
leziuni hepatice toxice
14

 infarct pulmonar
anemie hemolitic cnd poate crete pna la 200 U/L i anemie
pernicioas (valori pna la 8000 U/L)
Valoarea diagnostic specific o au modificrile izoenzimatice.
Astfel, creteri ale LDH1 i LDH2 se ntlnesc n infarctul miocardic
i anemie, iar LDH4 i LDH5 n leziuni hepatice i procese
neoplazice.
Determinarea activitii LDH
Principiul metodei se bazeaz pe transformarea NADH n NAD +
sub aciunea LDH n prezena piruvatului. Viteza de oxidare a NADH
este proporional cu activitatea LDH.
Izoenzimele LDH pot fi separate din ser prin electroforez pe
folii de acetat de celuloz, n gel de amidon, agar, poliacrilamid prin
vizualizare pe baza unei reacii de culoare.
Transaminazele
Aspartat aminotransferaza (AST) se gsete n special n ficat,
miocard, muchii striai. La nivelul ficatului 60% din AST este
localizat n citoplasm i 40% n mitocondrii. Cantit i mai reduse de
enzim se gsesc n rinichi, pancreas, plmni i eritrocite.
Valori normale:
- brbai = 37U/L
- femei = 31U/L

Valori patologice: mai mari de 40U/L

Creteri:
1. patologia hepatic (raportul AST/ALT mai mic dect 1 cu excep ia
cirozei)
cresteri marcate se ntlnesc n:
o hepatita viral
o necroza toxic a ficatului
15

 creteri moderate (maxim de 10 ori valorile normale) pot

apare n:
o hepatita cronic
o hepatita medicamentoas
o ciroz
o icter
2. patologia cardiac (raportul AST/ALT mai mare dect 1)
creteri marcate ( de 10-100 ori valorile normale) s-au observat n
infarctul miocardic (cretere dup 4 ore maxim 16-48 ore, revine la
normal dup 4-6 zile)
creteri moderate ( maxim 10 ori valorile normale)
o miocardit
o chirurgie cardiac
o embolie pulmonar
3. patologie muscular sindrom de strivire
poli i dematomiozit
distrofii musculare
intervenii chirurgicale
4. stri hemolitice
5. hipotiroidie cu mixedem
Determinri de laborator
Principiul metodei este bazat pe reacia dintre L- aspartat si 2oxo- glutarat cu formare de oxalacetat care va oxida NADH la NAD +.
Viteza oxidrii NADH este proporional cu activitatea catalitic a
AST.
Se mai poate doza colorimetric prin determinarea piruvatului n
cursul reaciei cu 2,4- dinitrofenilhidrazin i formare a hidrazinei
respective n mediu alcalin.
Alanil aminotransferaza (ALT)
Se gsete n cantiti mari n citoplasma celulelor hepatice i n
cantiti mai reduse n musculatura striat, miocard, rinichi, pancreas.
16

Valori normale:
- Brbai = 13-30 U/I
- Femei = 10-20 U/I

Valori patologice - mai mari de 30U/I

Creteri:
Patologia hepatic ( raportul AST/ALT mai mic dect 1 cu
excepia cirozei)
Creteri marcate ( de 10-100 ori valorile normale)
o Hepatita viral acut
o Necroza toxic a ficatului
Creteri moderate (de maxim 10 ori valorile normale)
o Hepatita cronic
o Ciroze
o Icter mecanic
Creterea ALT semnific o citoliz hepatic care permite
evoluia bolii i o eventual recdere.
Determinri n laborator
La fel ca n cazul AST-ului (SFBC i IFCC) recomand acelea i
condiii de reacie, i anume: reacia de transfer a gruprii aminice de
la L-alanin la 2-oxoglutanat n prezena ALT i oxidarea NADH la
NAD+. Viteza oxidrii este proporional cu activitatea catalitic a
ALT.
Creatinfosfokinaza (CK)
Este localizat cu predominan n musculatura scheletic,
creier, miocard. S-au pus n eviden trei izoenzime : CK/MM de
origine muscular i miocardic, CK/BB gsit n esutul cerebral i
CK/MB provenit doar din miocard.
Aceast enzim catalizeaz formarea de ATP din creatinfosfat i
ADP i se inactiveaz foarte repede prin oxidarea gruprii SH.
17

Valori normale
- Femei = 25-175 U/I
- Brbai = 25/200 U/I
- CK-MB sub 24 U/I
Risc crescut de infarct miocardic:
- Creteri ale CK-MB i CK, iar CK-MB reprezint ntre 6 i 25% din
activitatea total a CK.
Variaii patologice:
Creteri marcate (de 8 ori valorile normale) n infarct miocardic, ele
sunt foarte precoce, survin n primele 3-6 ore, cu maximum n 24-36
ore, i revin la normal dup 3-4 zile paralel cu creterea CK-MB.
o Distrofii, miopatii
o Infecii musculare repetate
o Tetanos
Creteri ale CK-BB
o Accident cerebral vascular
o Traumatism cerebral
o Meningit, encefalit
Determinri de laborator: prin metoda colorimeric, bazat pe
reacia de culoare (albastru de molibden) a acidului fosforic eliberat
de reacie. Spectofotometric se determin prin dou metode de
hexokinaz i glucozo-6-fosfatdehidrogenaz ca reactiv enzimatic i
metoda cu fosfoenolpiruvat, enolaz, piruvat-kinaz.
Amilaza
Este o enzim de secreie exocrin i prezent n ser cu dou
forme izoenzimatice principale: salivar i pancreatic.
Enzima este prezent n saliv, pancreas, ficat, suc duodenal,
intestin subire.
Valori normale:
- 230-2700 U/I
- 30-110 U/I metoda cinetic
18

370C
- 8-30 U/I Wolghemuth
- 5-100 U/I Domogyi
Variaii patologice:
Creteri marcate ale amilazei (de 30-40 ori valoarea normal) se
ntlnesc n pancreatita hemoragic. Cre terea se manifest la 3-6 ore
de la debutul bolii, maxim la 20-30 ore i se normalizeaz dup 2-8
zile. Determinarea amilazei se completeaz cu amilazuria deoarece
amilaza se elimin prin urin. Decalajul cre terii amilazuriei fa de
amilazemie este de 6-12 ore.
Creteri moderate se intlnesc n:
o Cancer de cap de pancreas
o Afeciuni abdominale acute (ulcer perforat, ocluzie intestinal,
colecistit acut, litiaz biliar)
o Afeciuni ale glandelor salivare ( parotida, calculi salivari)
o Sarcin extrauterin, administrri de narcotice opiode.
O cretere a amilazemiei se poate ntlni i n caz de defect de
eliminare renal prin diminuarea filtrrii glomerulare. Amilaza se
poate combina cu glicoproteinele sanguine (imunoglobulinele IgG
sau IgA) formnd macroamilaze care nu se pot filtra prin
glomerul. n acest caz se observ o hiperamilazemie fr
hiperamilazurie.
Determinri de laborator:
a) Msurarea degradrii amidonului prin aciunea alfa-amilazei.
Amidonul d cu iodul un compus de adiie de culoare albastr,
intensitatea culorii iod-amidon, msurat fotometric, este
proporional cu concentraia amidonului rmas dup incuba ia cu
enzime i deci invers proporional cu activitatea enzimatic.
b) Degradarea polimerilor de amidon insolubili n ap, legate de un
colorant (remazo/briliant-blau-B). Evaluarea se face pe baza cre terii
extinciei dotorit colorantului eliberat.

19

Fosfataza alcalin
Fosfataza alcalin seric este alctuit din trei forme
izoenzimatice: hepatobiliar, intestinal, la care se adaug n timpul
sarcinii o form tranzitorie, forma placentar.
Fosfataza alcalin osoas este produs de osteobla ti i are rol n
formarea esutului osos.
Valori normale:
- copii = 110-400 U/I
- femei = sub 104 U/i
- brbai = sub 117 U/I

o
o
o

Variaii patologice:
Creteri patologice ale fosfatazei alcaline se observ n afec iuni
hepatice i osoase.
Creterea fosfatazei alcaline hepatobiliare
Colesteaz de orice cauz (extra i intrahepatic). n cazul unui icter
cu valoarea fosfatazei alcaline crescute dar cu transaminazele
normale sau moderat crescute, denot un icter colestatic.
Forma intestinal ajuns pe cale limfatic n ser cre te n cirozele
hepatice i ulcer duodenal
Forme atipice se ntlnesc n procesele neoplazice, n special hepatice
Creterea fosfatazei alcaline osoase
o n perioada creterii
o Rahitism
o Osteomalacie
o Metastaze osoase
n rahitism creterea fosfatazei alcaline ntre 150-1000 U/I este
considerat a fi cel mai sigur criteriu de diagnostic, cre te cu o lun i
jumtate nainte de manifestarea clinic i scade dup tratamentul cu
vitamina D2
n hipertiroidism primar fosfataza alcalin seric cre te pn la 500
U/I dup ce survin modificri scheletice extensive
20

 Modificrile fosfatazei alcaline sunt nsoite de hipercalcemie i

hipofosfotemie
o n boala Paget apar valori crescute ale fosfatazei alcaline, dar calciul
i fosforul rmn n limite normale
o Fosfataza alcalin de origine placentar apare n ser n ultimele luni
de sarcin
o Semnificaia fosfatazei alcaline placentare n diagnosticul tumorilor
maligne a fost evaluat ntmpltor prin descoperirea izoenzimei
placentare n serul unui bolnav cu cancer bron ic i a fost numit
Regan dup numele acestuia.
Izoenzima Regan crete n plasm n tumorile maligne, cancer
ovarian, cancer de col uterin, cancer pulmonar.
Incidena izoenzimei placentare n serul bolnavilor de cancer
variaz ntre 5-33%. Ea poate fi utilizat pentru urmrirea evolu iei
prognosticului n tratamentul cancerului.Valoarea ei scade dup un
tratament eficient, reaprnd odat cu reluarea procesului neoplazic.
A mai fost identificat o izoenzim Nagao n unele tumori
(testiculare, timus). Aceste dou forme patologice se diferen iaz de
fracia placentar prin proprietile lor imunologice.
Mai exist o alt form intestinal fetal. Este o enzim care
exist la nivelul intestinului ftului pn n sptmna 25-32 de
gestaie (i poate fi dozat n lichidul amniotic). Este alctuit din
dou forme de origine intestinal i placentar i posed propriet i
biochimice ale celor dou enzime.
S-a observat creterea fosfatazei alcaline i n boala Hodgkin i
mielomul multiplu, n insuficiena cardiac concestiv, n bolile
intestinale inflamatorii.
Determinri de laborator: colorimetric, prin metoda
standardizat internaional, bazat pe hidroliza paranitrofenilfosfatului.
Izoenzimele se pun n eviden i se caracterizeaz prin :
electroforez n gel de amidon sau poliacrilamid, vizualizarea
fcndu-se prin azocuplare cu sarea de diazoniu, Fast blue BB, cu
naftolul provenit din alfa-naftil fosfat.
21

Fosfataza acid
Se gsete n cantiti mai mari n prostat i n cantt i mult mai
mici n ficat, splin, rinichi, eritrocite, trombocite i glandele
endocrine.
Fraciunea prostatic a fosfatazei acide este inhibat de tartrat
ceea ce permite dozarea difereniat a acestei frac iuni.
Valori normale:
- Fosfataza acid total = 0-9
U/I
- Fosfataza acid prostatic = 03 U/I
Variaii patologice:
Creterea fosfatazei acide totale are loc n:
o Carcinom de prostat
o Adenom de prostat (creteri moderate)
Creterea fosfatazei acide trombocitare are loc n :
o Infarct, embolie pulmonar
o Trombocitoz
o Hemoliz
o Boala Paget
Creterea fosfatazei acide prostatice:
o Carcinom de prostat
o Adenom de prostat (creteri moderate)
Determinri de laborator: colorimetric, bazat tot pe reacia de
hidroliz a paranitrofosfatului, dar n mediu acid. Izoenzimele se
caracterizeaz prin mobilitate electroforetic sau inhibi ie chimic
difereniat:
- L-tartratul inhib activitatea izoenzimei prostatice ( i
leucocitare)
- Formaldehida
inhib
izoenzimele
eritrocitare
i
trombocitare.
22

Lipaza
Lipaza pancreatic degradeaz trigliceridele n digliceride, n
monogliceride i apoi acesta sunt transformate n glicerol i acizi
grai.
Valori normale:
- 7-60 U/I (metoda Cormway la
550nm)
- 20-210 U/I (turbidimetric la
400nm)
Variaii patologice:
Hiperlipazemie apare n :
Pancreatit acut i cronic
Cancer de cap de pancreas
n pancreatita acut lipaza se menine mai mult timp crescut
dect amilaza.
Determinri de laborator: prin metoda turbidimetric, bazat pe
hidroliza trigliceridelor la mono- i digliceride solubile i citirea la
400 nm sau cinetic colorimetric la 550 nm.
Aldolaza
Este de origine muscular i hepatic. Ea scindeaz fructoza 1,6
difosfatul n 3-fosfogliceraldehid i fosfodihidroxiaceton la nivelul
tuturor celulelor i fructozo-1-fosfat n fosfodihidroxiacetona i
gliceral-aldehid la nivelul ficatului.
Valori normale:
- 0,5-7,6 U/I la 370C (cinetic la
340nm)
Variaii patologice:
Crete marcat n miopatii
Aldolaza mpreun cu CK crete n patologia muscular
23

 Crete marcat n hepatita viral, dar n general aceast enzim nu se

utilizeaz pentru depistarea sau urmrirea evolu iei unei hepatite
virale.
Pseudocolinesteraza seric (PsCE)
Este o enzim secretat activ n plasm de ctre ficat.
Pseudocolinesteraza seric aeste un indicator al func iei
proteosintetice a ficatului. Ea scade mult n insufucien ele hepatice
(hepatite, ciroze), n intoxicaii cu organofosforice i la bolnavii cu
denutriie proteic grav.
Scderile moderate se pot ntlni n:
o anemiile grave de tip Biermer,
o infecii acute,
o dup infarct miocardic.
Creteri ale pseudocolinesterazei serice se ntlnesc n :
o sindromul nefrotic,
o perioada de vindecare a unei hepatite,
o la obezi, diabetici,
o hiperparatiroidismul nensoit de ceexie.
Determinri de laborator:
Pseudocolinesteraza elibereaz prin hidroliza butirilcolinei,
ticolina care reacioneaz cu DTNB (acid 5,5-ditiobis-2-nitrobenzoic)
dnd un compus colorat galben colorimetrabil.
Gamma-glutamyl-transferaza (- -GT sau GGT)
Gamma-glutamyl-transferaza se gsete predominant n celulele
hepatice, renale, pancreas, prostat. Activitatea plasmatic a gammaglutamyl-transferazei este mai crescut la brba i dect la femei.

24

Valori normale:
- Cinetic la 450nm = 5-80U/I
- Femei (la370C colorimetric) =
7-32U/I
- Brbai = 11-50 U/I
Cauzele creterii gamma-glutamyl-transferazei:
Icter colestatic, cnd activitatea cre te paralel cu fosfataza
alcalin
Creteri marcate se mai ntlnesc n :
o Hepatite alcoolice
o Administrare de anticonvulsivante, fenitonin,
fenobarbital
o Administrare de tratament anticoncepional
o n maladiile hepatocelulare ca hepatita infec ioas este de preferat
determinarea transaminazelor serice care este mai relevant dect
GGT
o Atingeri pancreatice (pancreatit, cancer)
Determinri de laborator:
Metoda cinetic colorimetric utiliznd -glutamil-4 nitroanilin.
Viteza formrii de 4-nitroanilin corespunde activit ii gammaglutamyl-transferazei.

25

Factorii care influeneaz activitatea enzimelor

Fiind proteine, enzimele sunt sensibile la aciunea unor factori
externi care pot s influeneze disocierea grupelor implicate n
cataliz, legarea substratului la situsul catalitic sau structura n
ansamblu a prii proteice. Astfel de factori sunt:
- Temperatura
- pH-ul
- efectorii enzimaici (activatori sau inhibitori)
Influena temperaturii
Efectul temperaturii asupra activitii enzimelor este rezultanta
aciunii a doi factori opui, creterea vitezei de reac ie cu temperatura
i denaturarea termic a enzimelor. Activitatea oricrei enzime
variaz cu temperatura.

Influena temperaturii asupra activitii enzimelor

Fiecare enzim este caracterizat de un coeficient termic al
reaciei notat Q10, ce reprezint creterea vitezei de reac ie pentru o
cretere cu 100C a temperaturii, n condiiile meninerii constante a
celorlali parametri. Pentru reaciile enzimatice Q10 este ntre 1 i 2
26

fiind mai mic dect pentru reaciile necatalizate, pentru care Q10 este
ntre 2 i 4. Aceast relaie este valabil numai pn la temperatura
optim, pentru care viteza de reacie este maxim. Cre terea
temperaturii peste temperatura optim determin scderea vitezei de
reacie, datorit denaturrii prii proteice a enzimei.
Temperatura optim pentru enzimele organismului uman este
37-400C, la plante 50 - 600 C, iar pentru cele din microorganismele
din apele termale este 80-1000 C.
Determinarea activitii unei enzime trebuie sa se fac la o
temperatur de 25-370C.
Influena pH-ului
Pentru enzimele din organismul uman pH-ul optim de ac iune
este pH-ul normal al mediului n care ele i manifest ac iunea.
Centrul activ al enzimelor conine grupe ionizabile, acide sau
bazice, deci modificarea pH-ului are ca efect modificarea gradului de
disociere i implicit modificarea vitezei de reac ie.

pH-ul optim de aciune al unor enzime

Pentru enzimele din organismul uman pH-ul optim este ntre 59, dar exist enzime ce acioneaz i n afara acestui interval.
De exemplu:
Pepsina acioneaz la pH = 1,5-2
27

Fosfatazele alcaline acioneaz la pH = 9-10

Fosfatazele acide acioneaz la pH = 4,5-5

Aplicaii practice ale enzimelor

sunt aplicate n laborator la msurarea
activitii enzimatice n scop diagnostic i a concentra iei de substrat.
Enzimele plasmatice sunt: enzime plasmatice func ionale, active
asupra unor substraturi plasmatice (de exemplu, lipoprotein lipaza) i
A. Principiile enzimologiei

28

enzime plasmatice nefuncionale ce ajung n plasm n cantitate

foarte mica n condiii normale, activitatea lor crescnd n cazul unor
afeciuni ale organelor ce le conin. Dintre acestea cele mai
importante sunt enzimele celulare. Modificarea permeabilit ii
membranelor sau distrugerea celulelor sunt nsoite de eliminarea
enzimelor n spaiul extracelular. Enzimele citoplasmatice apar
naintea enzimelor mitocondriale. De exemplu, transaminazele, LDH,
CK, aldolaza.
Pentru diagnosticarea unor afeciuni specifice unui anumit organ
este ideal cunoaterea unor enzime specifice organului respectiv,
numite enzime marker. Gsirea unor markeri exclusivi este extrem de
dificil totui se poate considera c unele dintre enzimele a caror
activitate se determina n laborator au aceasta calitate.
De exemplu, amilaza este marker pentru pancreas, fosfataza
acid pentru prostat, OCT pentru ficat, izoenzimele LDH 1 si CKMB sunt markeri n afeciunile miocardului, izoenzimele LDH 4 si
LDH5 sunt markeri pentru ficat i muchi.
n laborator, enzimele se folosesc i ca reactivi pentru
dozarea unor componente plasmatice prin metode enzimatice, cum ar
fi glucoza, colesterolul, ureea, creatinina, etc.
B. Enzimele imobilizate sunt enzimele legate chimic de un suport
diferit ca structura: gel de silice, alumin, crbune activ, r ini
schimbatoare de ioni, polizaharide modificate (DEAE -sephadex,
carboximetil celuloza). Suportul trebuie s ndeplineasc anumite
caracteristici: s permit atacul enzimei fr pierdere de activitate
enzimatic, nu trebuie s fie inactivat de snge, nu trebuie s
provoace hemoliza sau s reacioneze cu plachetele sanguine, nu
trebuie s prezinte toxicitate sau s genereze rspuns imun, s
elibereze produi toxici (n cazul n care enzimele imobilizate pe
acesta vin n contact cu organismul uman).
1. Tehnicile moderne de imunologie (EIA, ELISA) folosesc
enzimele ca indicatori. Anticorpii specifici pentru un antigen sunt
cuplai cu enzime indicatoare (peroxidaza din hrean, fosfataza
alcalin). Acestea, dup transformarea unui substrat specific,
genereaz produi colorai a cror concentra ie este propor ional cu
cea de antigen.
29

2. Enzimele imobilizate se folosesc ca reactivi n analizoarele de

chimie uscat. Ele sunt imobilizate ntr-un suport de dimensiuni
reduse cu tamponul adecvat, cofactorii, cosubstratul si indicatorul de
culoare. Plasma furnizeaz substratul i apa necesara activrii
sistemului. Enzimele sunt stabile prin legarea de o matrice i
pstrarea ntr-un loc uscat.
3. Enzimele imobilizate pe o matrice insolubila se folosesc i n
reactoarele chimice din industria farmaceutic, ca reactivi specifici.
Molecula int
Antigene
Anticorpi
Lectine
Glicoconjugai
Enzime
Receptori
Acizi nucleici
Virusuri,
bacterii
Celule,
organite
subcelulare

Ligand
Anticorpi
Antigene
Glicoconjugai
Lectine
Substraturi
inhibitori
Hormoni,
toxine
Probe
ADN/ARN
Toate

C. Enzimele ageni terapeutici.

Prob
Enzime
Markeri
radioactivi
Compui
fluoresceni
cromofori

Se utilizeaz cu pruden, deoarece

datorit naturii proteice pot fi hidrolizate de enzimele digestive sau
pot provoca reacii imunologice n cazul unei prelucrri i purificri
ineficiente.
Enzimele n medicaia vascular. Streptokinaza, amestec enzimatic
obinut din streptococ, are aciune fibrinolitic (trombolitic), fiind
util pentru activarea hidrolizei trombilor forma i n condi ii
patologice, de exemplu n infarct miocardic.
Urokinaza obinut din urin are acelai rol.
Diferitele produse farmaceutice ce reprezint activatorul tisular
al plasminogenului (tPA) sunt folosite pentru dizolvarea cheagului de
30

fibrin. Heparinaza microbian imobilizat poate fi folosit pentru

ndeprtarea heparinei folosite n tratament ca anticoagulant.
Hemocoagulaza
(reptilaza)
activeaz
transformarea
fibrinogenului n fibrin i este folosit pentru tratarea hemoragiilor
nedeterminate de deficitul unor factori ai coagulrii.
Enzimele n terapia antitumoral. Ex. asparaginaza este folosit de
pacienii cu leucemie deoarece celulele tumorale au afinitate mare
pentru asparagin i scznd nivelul acesteia nu mai este posibil
dezvoltarea lor. Fenilalanin amonioliaza este o alt enzim ce se
poate utiliza imobilizat pentru a reduce cantitatea de fenilalanin la
pacienii cu cancer sau fenilcetonurie.
Enzimele folosite n tulburarile digestive. Enzimele digestive se folosesc
ca terapie de substituie pentru a realiza digestia proteinelor ( pepsina,
chimotripsina, tripsina, carboxipeptidaza), glucidelor (amilaza) i
lipidelor (lipaza). Se utilizeaz asocieri de mai multe enzime, dar i
cu substane utile digestiei (bila, hemicelulaze). Exist i preparate ce
conin enzime proteolitice de natur vegetal ( ficina, bromelina,
papaina).
Enzimele folosite ca antiinflamatoare i cicatrizante . Sunt diferite
endopeptidaze i enzime ce acioneaza asupra proteoglicanilor care
degradeaz esuturile alterate de la suprafa a unor leziuni facilitnd
penetrarea medicamentelor, vindecarea rnilor, reducerea edemelor
(se asociaz n medicaia dermatologic, ORL, oftalmic):
hialuronidaza, tripsina, chimotripsina, papaina, lizozim.

31

Variaiile enzimelor serice n cteva boli

caracteristice
Infarctul miocardic
Infarctul miocardic se nsoete de modificri enzimatice
caracteristice. Creterea AST, CPK, i LDH prezint o anumit
dinamic , ceea ce face ca n aprecierea rezultatelor date de laborator
s se in cont de intervalul de timp care a trecut de la producerea
infarctului, respectiv de la aparaia manifestrilor clinice. Acest
interval de timp corespunde decalajului ntre producerea obstruc iei
coronariene i modificrile suferite de celulele lezate, ie irea
enzimelor din aceste celule i trecerea lor n circula ia sanguin. CPK
se modific cel mai precoce, dar creterea ecestei enzime este de
scurt durat. AST-ul prezint o cretere maxim n ser dup 16-48
ore de la producerea infarctului, normalizndu-se dup 4-6 zile, iar
modificrile LDH (LDH1 si LDH2) sunt cele mai persistente. LDH
crete la 10 ore dup infarctul miocardic i revine la normal dup 15
zile. Intensitatea modificrilor enzimatice n ser d o orientare destul
de fidel asupra extinderii zonei lezate. Cre teri ale AST peste 150
mU/I i ale LDH la peste 4 ori limita superioar a normalului, denot
o leziune extins.
Interpretarea datelor se face n strns legtur cu rezultatele
obinute la ECG. Explorarea enzimelor serice are valoare diagnostic
deosebit, n special atunci cnd ECG este necaracteristic pentru
infarct i n special n microinfarcte.
enzim
Debutul
Concentraia
Durata
a
creterii
max. dup
mentinerii
(ore)
producerea
concentraie
32

CK
(total)
AST
LDH

infarctului (ore)

i crescute
(zile)

4-6

24-48

3-5

6-8
12-24

24-48
7-12

4-6
7-12

Boli ale ficatului

n mod normal raportul AST i ALT n ser, raportul De Ritis,
este de aproximativ 1,3. Ficatul este principala surs de ALT, deci o
cretere a acestei enzime care dep e te nivelul AST (scade raportul
De Ritis) atrage atenia asupra unei suferine hepatice.
- Hepatita viral acut = se caracterizeaz prin cre terea progresiv a
transaminazelor serice i n special a ALT. Se poate afirma c nu
exist hepatit acut fr modificri ale transaminazelor. Cre terea
acestor enzime ncepe nainte de creterea bilirubinei, iar n cursul
primelor dou sptmni atinge valori maxime. Valori excesiv de
mari ale transaminazelor serice denot existen a unei hepatite severe,
cu zone ntinse de necroz. O importan prognostic mai mare dect
gradul de cretere al transaminazelor se atribuie duratei acestei
creteri. Lipsa tendinei de normalizare a ALT-ului dup 8-10
sptmni de boal este un indiciu de trecere spre hepatita
persistent. Nu se poate vorbi despre o vindecare a hepatitei acute
dect atunci cnd transaminazele s-au normalizat i rmn normale i
dup eforturi moderate.
- Hepatita acut = se nsoete de o scdere moderat a pseudocolinesterazei serice, fenomen care denot o alterare a func iei
proteosintetice a ficatului, dnd indicii asupra gravit ii procesului. n
perioada de vindecare a hepatitei acute se constat o cre tere a
pseudocolinesterazei i indic un prognostic favorabil.
- Hepatitele cronice = se caracterizeaz prin valoarea moderat-crescut
a transaminazelor serice (20-100 mU/ml). n aceste situa ii trebuie
efectuate i testele de disproteinemie pentru explorarea
mezenchimului hepatic.
33

- n cirozele hepatice creterea enzimelor este de regul moderat,

deoarece masa celular este redus. Diminuarea sintezelor proteice la
nivelul ficatului n ciroz, duce la o srcire a celulelor n ALT, astfel
nct n formele avansate ale unor ciroze aceast enzim nu mai
crete nici mcar n cursul exacerbrilor acute.
- Tumorile hepatice nu dau modificri enzimatice caracteristice, dar n
ficatul metastazat se constat o cre tere moderat a transaminazelor
i totodat o cretere marcat a LDH i a GGT. Fosfataza alcalin i
bilirubina cresc n funcie de gradul n care se perturb eliminarea
bilei.
Boli ale cilor biliare
Litiaza biliar = nu se nsoete de modificri ale enzimelor
serice, att timp ct nu apar complicaii.
n icterul mecanic se produce o retenie a enzimelor eliminate
prin bil constatndu-se o cretere a fosfatazei alcaline sau a GGT.
n procesul de colestaz alturi de creterea bilirubinei
conjugate i a acizilor biliari n ser cresc i unele enzime cum
sunt : fosfataza alcalin, GGT, 5-nucleotidaza (5-NT) i
leucinaminopeptidaza (LAP).
Importan diagnostic prezint fosfataza alcalin i GGT care
prezint creteri i cnd valoarea bilirubinei este normal. Dar
fosfataza alcalin poate crete i n bolile osoase precum i n bolile
intestinului. Din acest motiv, ori de cte ori se observ o cre tere a
fosfatazei alcaline, fr semne clinice, trebuie determinate
izoenzimele sale. Cnd crete fosfataza alcalin i este nso it i de o
cretere a GGT, se poate afirma existena unui proces colestatic.
Nivelul GGT nu crete n maladiile osoase. n sindroamele
colecistice GGT crete de 10-50 ori fa de normal, iar fosfataza
alcalin de 3-10 ori.
Trebuie subliat faptul c determinrile GGT nu pot face
diferenierile ntre colestaza intrahepatic i cea extrahepatic.

34

Creterea izolat a GGT sugereaz un alcoolism cronic. Dar

aceast cretere se poate produce i dup tratament prelungit cu
antidepresive sau anticonvulsivante.
Leziunile toxice ale ficatului pot duce i ele la cre teri
importante ale GGT. n intoxicaiile cu solven i organici alturi de
creteri ale AST, ALT, LDH crete i GGT.
Bolile pancreasului
n bolile pancreasului se urmresc n primul rnd cre terile amilazei i lipazei, care survin n pancreatita acut i n puseurile
acute ale pancreatitei cronice. Creterea -amilazei are loc la 3-6 ore
de la debutul pancreatitei acute i atinge valori maxime dup 20-30
ore, cnd poate depi de 10 ori limita superioar. O necroz extins
a pancreasului duce la creteri de 40 de ori valoarea normal.
Datorit eliminrii prin urin a acestei enzime, valorile normale n ser
revin dup 48-72 ore. Din acest motiv determinrile activit ii amilazei n urin sunt superioare ca valoare diagnostic
determinrilor efectuate pe ser. Trebuie avut n vedere c activitatea
seric a amilazei poate fi datorat i amilazei provenite din glandele
salivare.
Parotidele se nsoesc de creteri importante ale -amilazei. n
aceste situaii cele dou izoenzime se diferen iaz prin separri
electroforetice sau prin absorbia pe schimbtori de ioni.
n pancreatita cronic i n carcinomul pancreatic -amilaza
crete doar n cursul unor pusee.
Pancreatita cronic are un caracter lent progresiv i poate ajunge
cu timpul la insuficien pancreatic. n astfel de situa ii -amilaza ar
trebui s scad, dar aceste scderi nu au importan diagnostic
deoarece 2/3 din -amilaza seric este provenit din glandele
salivare. Din acest motiv o scdere a amilazei pancreatice
influeneaz n mic msur valoarea amilazei totale serice.
Boli ale musculaturii
35

Distrofiile musculare sunt nsoite de creteri ale CK, aldolazei,

transaminazelor i LDH. Leziunile traumatice ale musculaturii (dup
accidente sau intervenii chirurgicale) dau modificri ale CK,
transaminazelor, LDH i aldolazei.
n cazul de debut al distrofiilor musculare progresive, cnd
manifestrile locomotorii sunt nc diminuate se constat cre teri ale
CK i ale aldolazei. Cnd boala progreseaz i musculatura este
nlocuit cu esut conjunctiv i grsime, nivelul enzimelor serice
scade.
n patologia muscular se mai determin mioglobina, miozina i
creatinina care cresc n miopatii.
Boli ale oaselor
Cnd se poate exclude pe baze clinice o afec iune hepatobiliar,
fosfataza alcalin reflect starea funcional a osteoblastilor.
Fosfataza alcalin este crescut n afec iunile osoase care
evolueaz cu reacie osteoblastic. n rahitism au loc cre teri
importante ale fosfatazei alcaline. Valori crescute se mai ntlnesc n
hiperparatiroidism primar sau secundar, cnd s-a ajuns la afectarea
oaselor. n hiperparatiroidismul primar (adenom al parotidelor)
decalcifierea oaselor este nsoit de hipercalcemie i hipofosfatemie,
n boala Paget (osteodistrofia deformant) nivelul calcemiei
este normal deoarece calciul rezultat din procesele de osteoliz
dintr-o zon, este reutilizat ntr-o alt zon n osteogenez. Din acest
motiv determinarea fosfatazei alcaline este foarte important pentru
punerea diagnosticului. Creterea fosfatazei alcaline la un bolnav cu
o afeciune neoplazic poate sugera dezvoltarea metastazelor osoase.
Neoplazii
Diagnosticarea sigur a tumorilor maligne pe baza
determinrilor enzimatice nu poate fi efectuat. Interpretarea ns n
lumina datelor clinice poate fi de ajutor n problemele de diagnostic.
36

Creterea LDH constant n 40-90% din cazuri cu tumori

maligne, este o modificare nespecific, ntlnindu-se i n numeroase
alte afeciuni: infarct, hepatit, anemie de tip Biermer.
Metastazele n ficat produc creteri ale transaminazelor, al LDH,
glutamatdehidrogenazei (GLDH), iar fosfataza alcalin cre te mai
mult dect ar putea explica eventuala reten ie biliar. Astfel de
manifestri la un bolnav cu carcinom gastric, pancreatic sau intestinal
sugereaz apariia metastazelor hepatice.
Carcinomul pancreatic produce creteri ale amilazemiei doar n
50% din cazuri.
Carcinomul de prostat produce creteri ale fosfatazei acide
tartrat-inhibat n 80% din cazuri, de asemenea crete i GGT.
Carcinoamele mamare cu metastaze n oase i ficat se nso esc i
ele de creteri ale fosfatazei acide.

Importana enzimelor pentru organismul uman

Sunt proteine sau proteide fr de care celule vii nu pot nfptui
reacii complexe ntr-un timp scurt, la temperatura mediului
nconjurtor. Enzimele numite i fermeni, sunt substane naturale
produse doar de ctre celulele vii. Ele intervin n numeroase reacii
biochimice, ndeplinind rolul de biocatalizatori. Activitatea
enzimatic este una dintre nsuirile eseniale ale materiei vii.
Ele sunt substane care catalizeaz reaciile biochimice din
organism, avnd un rol esenial n biosinteza i degradarea
37

substanelor din materia vie, ntlnindu-se n toate organismele

animale, vegetale i n microorganisme, mai fiind denumite din
aceast cauz biocatalizatori. Fr enzime, procesele biochimice s-ar
desfura cu viteze foarte mici.
Conform teoriei chimice, catalizatorul este o substan care
grbete desfurarea unei reacii, fr s se modifice structural n
timpul desfurrii acesteia i fr s se regseasc n produsul final
al reaciei respective. n lipsa catalizatorului, oricum reacia ar putea
avea loc, ns ntr-un timp mai ndelungat. Aplicat sistemelor vii,
teoria catalizatorului, are o conotaie deosebit, cci reaciile
biochimice ntrziate, care teoretic pot avea loc i n lipsa enzimelor,
nu sunt compatibile cu viaa.
Dac degradrile i sintezele celulare s-ar desfura mult
ncetinit, celulele s-ar sufoca i neca n propriile deeuri iar nutriia
celular ar fi blocat, ceea ce ar conduce la moartea lor.
Enzime endogene
n corpul omului, se produc n fiecare secund, mii i mii de
enzime. Orice deficit enzimatic este resimit destul de dur de ctre
organism.
Exist dou mari categorii de enzime endogene:
- enzimele digestive = descompun proteinele, carbohidra ii i
grsimile n alimente. Enzimele digestive sunt, de asemenea,
responsabile cu extragerea, asimilarea, metabolizarea i absorb ia
substanelor nutritive, a vitaminelor i amineralelor.
- enzime metabolice = acioneaz pe post de catalizatori la
creterea oaselor, refacerea esuturilor, reglarea metabolismului,
vorbire, respiraie, reproducere, auz i contrac ia oricrui mu chi.
Aceste enzime metabolice se gsesc n mod natural n biochimia
organismului nostru. Totui, pe msur ce mbtrnim, activitatea
enzimelor metabolice slbete.
Toate enzimele digestive sunt extracelulare ( sunt eliberate i
acioneaz n afara celulei ). Fermenii metabolici pot fi att
intracelulari, ct i interstiiali.
Enzime exogene
Multe din enzimele produse de vieuitoarele aflate n diverse
stadii ale evoluiei, acioneaz, dac sunt introduse n corp, asupra
38

organismului uman. Aceast aciune poate fi direct ( enzimele

particip la reaciile metabolice sau n altfel de reacii, ca
biocatalizatori ) sau indirect ( enzimele exogene nu se comport n
organismul uman ca fermeni, dar prezint un alt tip de aciune
fiziologic ). Din acest motiv, enzimele produse de ctre
microorganisme, de ctre plante sau de ctre animale, au fost
valorificate din cele mai vechi timpuri de ctre om. Pe baza lor s-au
obinut att produse de fermentaie ( buturi alcoolice, murturi,
lactate, etc. ), ct i stimulente digestive i metabolice.
Enzimele determin digestia, detoxifierea, imunitatea i toate
celelalte procese metabolice i regeneratoare. Enzimele, ntlnite n
toate organismele vii, sunt molecule de proteine care diger hrana,
descompunnd-o n fragmente suficient de mici nct s treac n
snge prin porii minusculi ai intestinelor. Ele reprezint clas
muncitoare a organismului. Pe lng aciunea de digerare a hranei,
enzimele distrug toxinele, descompun grsimile i celuloza, i
metabolizeaz amidonul i proteinele. Oamenii de tiin au
identificat peste 2500 de enzime diferite n corpul uman.
Enzimele sunt implicate n orice funcie biochimic i
fiziologic. Fiecare aciune a noastr n calitate de fiin e vii necesit
enzime. Toate procesele vieii sunt formate dintr-o re ea complex de
reacii chimice cunoscute sub denumirea de metabolism. Enzimele
sunt chiar catalizatorii care fac posibil metabolismul. Deci
catalizatorul, enzimele n cazul oamenilor, reprezint materialul
biochimic ce determina reaciile chimice necesare pentru c viaa s
fie posibil. Aadar, fr enzime, am nceta s existm.
n cazul n care avem o activitate sczut a enzimelor, putem s
ne confruntm cu nite afeciuni destul de severe.
Dr. Anthony Cichoke, n cartea sa Enzimele i terapia cu
enzime, nu contenete s arate importana enzimelor prntru specia
uman. El afirma c organismele noastre depind de enzime pentru a
gndi, respire, vorbi, digera mncarea i a funciona la capacitate
optim. Pentru ca organismul s funcioneze n cea mai bun stare, s
nving bolile i s refac celulele afectate, este necesar ca enzimele
s fie vii i n cantitate mare. Enzimele ne refac organismul, l apr
i l susin.
39

Activitatea sczut a enzimelor este poate cea mai rspndit

problem n zilele noastre. O via trepidant, ndreptat spre
performan, acompaniat de mncarea de tip fast - food are ca
rezultat o populaie practic lipsit de enzime digestive. Implica iile
sunt multiple i grave. Totui, sunt reversibile i pot fi corectate.

Bibliografie
40

1. Prof. Univ. Dr. Denisa Mihele Biochimie clinic,

Ed.Medical, Bucureti-2001
2. Prof.dr. Bbeanu Ileana Cristina Biochimie Manual
pentru nvmntul la distan, Craiova-2010
3. Dinu V, Truia E, Popa Cristea E, Popescu A Biochimie
medical,Ed.Medical-1998
4. Dobjanschi Luciana Biochimie Medical -internet

41