CAPITOLUL I.

AGENI BIOLOGICI UTILIZAI N BIOTEHNOLOGIILE

FARMACEUTICE
Nomenclatorul agenilor biologici utilizai n biotehnologie se extinde n permanen.
ntre cele mai importante grupe de ageni biologici, pe primul loc se situeaz cel mai
tradiional dintre ei celula microbian. Numai n secolul al XX lea s-au realizat progrese
majore n cunoaterea structurii i funciilor acestor microorganisme utile, precum i a
geneticii lor. S-a nceput, de pild, inducerea artificial de mutaii cu ajutorul radiaiilor X, al
radiaiilor ultraviolete sau cu cel al unor substane chimice, fapt care a permis intensificarea
procesului de selecie a unor microorganisme utile. De exemplu, suele slbatice de
Penicillium erau capabile s produc numai circa 60 mg de penicilin per litru de mediu de
cultur n perioada cnd s-a descoperit c acest antibiotic este capabil s vindece unele infecii
bacteriene. Dup un proces intens de selecie, realizat prin folosirea att a unor mutaii
naturale, ct i a celor induse artificial, s-au obinut sue care sunt capabile s produc circa
20g de penicilin la litru de mediu de cultur, adic de peste 10.000 ori mai mult dect cele
slbatice neameliorate.
Dup 1970, odat cu apariia ingineriei genetice, s-au creat condiii favorabile pentru
manipularea informaiei genetice a microorganismelor industriale, pentru transferul de gene
de la o specie la alta, pentru crearea de programe genetice artificiale. S-au putut astfel obine
sue noi de microorganisme capabile s mreasc considerabil eficiena proceselor
microbiologice n producerea de substane utile cu rol terapeutic.
Cerina care trebuie ntotdeauna respectat se refer la concordana dintre alegerea
agentului biologic i principiul tehnologic. Astfel, dac pe parcursul a mai multe cicluri de
cultivare propietile agentului biologic dispar sau sufer modificri eseniale, atunci
respectivul agent biologic trebuie acceptat ca fiind netehnologic, deci neutilizabil pentru
stadiile ulterioare. Pn la obinerea unui agent biologic care s corespund principiului
tehnologic, nici un produs biofarmaceutic nu trebuie recomandat pentru producerea n sistem
industrial. Cele mai importante grupe de microorganisme utilizate n procesele biotehnologice
farmaceutice clasice i moderne sunt drojdiile, mucegaiurile i bacteriile.

1. Drojdiile
Sunt un grup de peste 500 de specii care aparin, n conformitate cu modul lor de
reproducere sexuat sau asexuat, la trei clase de fungi i anume: Ascomycetes, Basidiomycetes
1

i Deuteromycetes. Ele sunt organisme de tip eucariot, avnd nucleu prevzut cu membran
nuclear, diviziune celular de tip mitotic i meiotic, precum i un anumit numr de
cromozomi ce constituie o caracteristic de specie. Cele mai utilizate tulpini de drojdii n
procesele biotehnologice farmaceutice sunt: Saccharomyces cerevisiae, S. boulardii,
Hansenula polymorpha, Candida boidinii, C. utilis,C. lipolytica, Kluyveromyces fragilis,
Eremothecium ashby, etc.
La drojdii, talusul fungal este generat de o singur celul. Drojdiile sunt predominant
fungi unicelulari, de form redus, oval sau alungit.Lungimea variaz de la 2 la aproximativ
10 milimicroni. Un numr limitat de drojdii elaboreaz capsule extracelulare. Un exemplu
este Cryptococcus neoformans, un patogen uman care produce o form grav de meningit la
bolnavii de SIDA. n acest caz, capsula mucopolizaharidic, creeaz drojdiei rezisten la
mecanismele de aprare ale organismului uman, putnd astfel cauza meningita.
Drojdiile, n general, se reproduc prin proces asexuat de nmugurire. Celula parental
dezvolt o protuberan, care eventual se separ de celula iniial. n fisiune, ntlnit la
drojdiile de tipul Schizosaccharomyces pombe, celula parental este divizat n doi
descendeni, ntr-un mod similar cu fisiunea binar transversal ntlnit la reproducerea
bacterian.
Drojdiile formeaz rar structuri multicelulare. Unele drojdii, cum ar fi Candida
boidinii, formeaz lanuri celulare numite pseudomicelii sau pseudohife. Pseudomiceliul este
format din celule de drojdii alungite, care provin de la mugurii care ader unul de altul, sub
forma unui lan. Celulele individuale din structura pseudomiceliului sunt independente una de
alta i spre deosebire de unitile din structura hifelor septate, nu sunt conectate ntre ele prin
pori. Drojdiile cu morfologie unicelular tipic se pot prinde terminal sau de-a lungul
pseudomiceliului, formnd un blastospor secundar. Unele drojdii pot produce perei
despritori formnd micelii adevrate, care cu siguran sunt subordonate condiiilor de
cretere.

2. Bacteriile
Sunt un alt mare grup de microorganisme cu importan n biotehnologiile
farmaceutice. Ele sunt organisme de tip procariot, adic cu celule care nu posed nucleu,
membran nuclear i diviziune celular de tipul mitozei i meiozei. Sunt microorganisme
unicelulare sporulate sau nesporulate. Caracterizarea bacteriilor se poate face n funcie de
2

morfologia lor (coci, bacili, vibrioni), de afinitatea fa de coloraii de anilin (bacili acido
rezisteni, germeni gram pozitivi sau negativi), de propietile biologice (rezisten la
temperatur ridicat, tipul de nutriie, respiraie, patogenitate). Rezistena la temperatur
ridicat a celulei bacteriene vegetative este mult mai mic dect a sporilor bacterieni, care este
dat de acidul dipicolinic n special de o sare a acestuia, diploconatul de Ca. Printre cele mai
utilizate tulpini bacteriene n procesele biotehnologice farmaceutice se numr: Escherichia
coli, Bacilus subtilis, B.macerans, Micrococcus glutamicus, Corynebacterium glutamicum,
Brevibacterium

lactofermentum,

B.brevis,

Lactobacillus

acidophylus,

L.plantarum,

L.fermenti, Bifidobacterium bifidum, Acetobacter suboxidans, Xanthomonas. campestris,

Streptomyces sp., etc.
Bacteriile reprezint un grup de microorganisme procariote, unicelulare, de dimensiuni
microscopice, cu morfologie variat i cu un echipament enzimatic mai mult sau mai puin
complex n funcie de specie. Fiecare bacterie prezint o form i dimensiuni caracteristice,
dar supuse, ntre anumite limite, variabilitii n funcie de condiiile mediului nconjurtor, de
vrsta celulei, iar pentru unele specii i de etapele ciclului lor evolutiv.
Forma i dimensiunile bacteriilor sunt elemente importante pentru diferenierea i
clasificarea lor. Morfologia tipic a bacteriilor este dat de aspectul pe care l prezint celulele
tinere, active din punct de vedere fiziologic, n condiii favorabile de mediu.
n general, la bacterii, se disting trei tipuri morfologice fundamentale: rotund (cocoid),
alungit cilindric (bacilar), i spiralat.
Tipul cocoid cuprinde bacteriile numite coci. Ei pot fi sferici, elipsoidali sau
neregulai, cu diametrele celulei aproximativ egale. Celulele sunt sferice la stafilococi
(Staphylococcus aureus), elipsoidale la streptococi (Streptococcus viridans), lanceolate la
pneumococi (Diplococcus pneumoniae) i meningococi (Neisseria meningitiolis).
Unul din criteriile de identificare i clasificare a cocilor l constituie modul de grupare
a celulelor dup diviziune, determinat de planurile dup care se face diviziunea i de tendina
celulelor noi de a rmne unite unele de altele. Cnd diviziunea se face dup un singur plan,
iar celulele noi formate rmn izolate, acestea poart numele de micrococi (Micrococcus
uraea).Dac celulele nou formate rmn ataate cte dou, n perechi, formeaz diplococii
(pneumococ, gonococ, meningococ), iar dac tendina de ataare a celulelor este mai
pronunat, se formeaz lanuri mai lungi sau mai scurte de coci, constituind forma de
streptococ. n urma unei diviziuni dup dou planuri, perpendiculare ntre ele, celulele mai
rmn ataate cte patru formnd tetrade (Safkia tetragens). Dup o diviziune n trei planuri
perpendiculare rezult pachete cubice de coci numite sarcina (Sarcina lutea). Atunci cnd
3

diviziunea se face dup mai multe planuri neregulate, celulele se dispun sub form de
ciorchine alctuind stafilococul.
Tipul bacilar cuprinde bacterii cilindrice, sub form de bastonae cu diametrul
longitudinal de cteva ori mai mare dect cel transversal. Forma bacililor prezint unele care
se refer la marginile i extremitile celulelor. Marginile pot fi paralele sau sunt deprtate la
una sau la ambele extremiti, dnd aspectul de mciulie sau haltere (Corynebacterium
diphteriae), sau, din contra, sunt apropiate la capete, bacilul avnd aspect de fus
(Fusobacterium fusiforme). La majoritatea speciilor extremitile sunt rotunjite, la unele ns
retezate (Bacillus anthracis).
Bacilii pot fi grupai n diplo i se numesc diplobacili, sau n lanuri streptobacili. Unii
se dispun sub form de palisade ori pachete de ace cu gmlie (Corynebacterium diphteriae),
iar alii formeaz grupri caracteristice de rozet sau stea (Agrobacterium radiobacter,
Agrobacterium stellatum).
Tipul spiralat cuprinde bacterii cilindrice, alungite dar care prezint curburi ale axului
longitudinal. Se deosebesc trei subtipuri:
-

vibrionul (Vibrio cholerae) bacterie n form de virgul;

spirilul (Spirillum volutans) n form de spiral rigid, cu mai multe ture de spir;

spirocheta (Treponema pollidum, Leptospira, Borrelia) n form de spiral, cu mai

multe ture de spir, dar flexibile.
n

afar

de

aceste trei

tipuri morfologice

fundamentale exist i un tip

morfologic
intermediar, situat ntre tipul cocoid i bacilar, numit tip cocobacilar. La acest tip cele dou
diametre ale celulei se apropie de unitate. Unele bacterii dispun de un anumit grad de
pleomorfism. Celulele de Haemophilus influenze pot crete sub form de filamente, pot fi
rotunde, netede, ncadrndu-se n tipul cocobacililor. n culturi artificiale unele bacterii ale
genului Rhizobium cresc sub form de bacili cu form regulat i dimensiuni uniforme, pe
cnd unele bacterii din rdcinile plantelor fixatoare de azot, prezint celule cu o mare
degenerare, de form neregulat, fiind numite bacteroizi.
2.1. Dimensiunile bacteriilor
Bacteriile au dimensiuni de ordinul micronilor din care cauz nu pot fi observate dect
la microscop. Mrimea bacteriilor este cuprins ntre 0,2 10 m, dei organismele spiralate
pot avea o lungime de 100 m. Dimensiunile cocilor variaz ntre 0,2 2 m. Bacilii au
4

diametrul longitudinal de 0,5 10 m, iar cel transversal de 0,3 2 m. Dimensiunile

spirililor i spirochetelor variaz ntre 0,25 3,5 m, diametrul transversal i 6 100 m,
diametrul longitudinal.

2.2. Structura celulei bacteriene

Celula bacterian poate fi constituit din dou tipuri de elemente structurale:
a. elemente structurale constante, prezente la toate bacteriile, nucleoid, perete celular,
membran citoplasmatic, citoplasm, organite citoplasmatice, incluziuni citoplasmatice;
b. elemente structurale inconstante ntlnite numai la unele specii bacteriene, capsula i
stratul mucos, flagelii, pilii, sporul, cromatoforii.

3. Mucegaiurile
Sunt un grup de fungi filamentoi, organisme de tip eucariot i care mpreun cu
drojdiile formeaz o grupare mare de organisme denumit Mycota. Ele sunt microorganisme
ce se prezint sub form de filamente de diverse dimensiuni, ce formeaz un miceliu care
provoac degradarea mediului n care se dezvolt. Important pentru biotehnologiile
farmaceutice au speciile care produc antibiotice i enzime cu rol terapeutic:Penicillium
natatum, P. erysogenum, Aspergillus niger, A. oryzae.
Odat cu dezvoltarea biotehnologiei o importan deosebit capt bncile specializate
de ageni biologici, n particular coleciile de microorganisme caracterizate genetic, ca i
bncile de crioconservare a celulelor vegetale i animale, care pot fi folosite cu succes pentru
crearea de noi organisme, productoare de substane biologic active cu rol terapeutic.
Pe plan mondial, exist centre independente de colecionare a microorganismelor,
caracterizate genetic, de exemplu cele create n S.U.A.; Coli Center, Bacillus Center,
Centrul pentru ciuperci, etc. Coleciile de culturi au un rol deosebit de important n procedura
de protecie juridic a noilor culturi i n standardizarea proceselor biotehnologice. Coleciile
urmresc pstrarea i meninerea tulpinilor i tot ele asigur lucrrile de cercetare tiinific i
aplicativ cu tulpinile de microorganisme, plasmide, fagi, linii celulare.
Cercettorii acord o atenie deosebit crerii direcionate de noi ageni biologici
inexisteni n natur. n primul rnd, trebuie remarcat crearea de noi celule de
microorganisme, plante i animale prin metodele ingineriei genetice. A aprut i o orientare
5

care se ocup de construcia celulelor artificiale. n prezent exist metode care permit
obinerea de celule artificiale prin folosirea diferitelor materiale sintetice i biologice, de
exemplu a membranelor celulare artificiale, cu permeabilitate selectiv stabil i avnd
propieti tensioactive de suprafa. n interiorul unor astfel de celule pot fi incluse sisteme
enzimatice, extracte celulare, anticorpi, antigeni, hormoni, etc. Utilizarea celulelor artificiale a
dat rezultate pozitive n producerea de interferoni i anticorpi monoclonali, n crearea
imunosolvenilor.
Procesul de creare artificial a agentului biologic (a microorganismului sau celulei de
esut) const n modificarea informaiei lui genetice, n scopul eliminrii nsuirilor nedorite i
pentru imprimarea unor nsuiri calitative cu totul noi. Cele mai importante modificri se
obin prin recombinare, respectiv prin redistribuirea de gene sau particule de gene i
unificarea ntr-un singur organism a informaiei genetice derivate din dou sau mai multe
organisme. Obinerea organismelor recombinante, n particular, poate fi realizat cu metode
de fuziune a protoplatilor, pe calea transferului de plasmide naturale sau prin alte metode de
inginerie genetic.
n etapa actual de dezvoltare a biotehnologiei, celulele de esuturi printre care
hibridomii, transplantele sunt considerate ageni biologici netradiionali. n prezent, culturile
de celule provenind de la mamifere sunt productoare de interferon, vaccinuri virale, anticorpi
monoclonali, antigeni celulari tensioactivi umani, factori angiogeni.
n mod special, trebuie evideniat grupul de ageni biologici reprezentat de ctre
enzimele catalizatoare de provenien biologic, de al cror studiu, sub aspect aplicativ se
ocup ingineria enzimologic. Principala sa sarcin const n elaborarea proceselor
biotehnologice n care se folosete aciunea catalitic a enzimelor, de regul separate din
compoziia sistemelor biologice sau care se gsesc n interiorul celulelor. n funcie de
domeniul de utilizare se modific i cerinele fa de enzime n ceea ce privete gradul de
puritate, compoziia, sursa de obinere. De exemplu n scopuri farmaceutice i medicale sunt
utilizate doar enzimele individuale de mare puritate, n timp ce pentru prelucrarea deeurilor
agricole sunt suficiente preparatele enzimatice complexe, multicomponente.
Un domeniu independent de creare i folosire a agenilor biologici este cel al agenilor
biologici imobilizai. Agentul biologic imobilizat este un sistem armonios, a crui aciune este
determinat prin alegerea corect a trei componente de baz: a agentului biologic, a suportului
i a modului de conexiune dintre agent i suport. n principiu se folosesc urmtoarele grupe de
metode pentru imobilizarea agenilor biologici:
introducerea n gel, microcapsule;
6

 absorbia pe suporturi insolubile;

legarea covalent cu suportul;
mbinarea prin reactivi bifuncionali, fr folosirea suportului;
autoreglarea n cazul celulelor intacte.
Microcapsularea agenilor biologici n celule artificiale const n
obinerea acestor celule dintr-o membran artificial ultrafin, provenind dintr-un polimer,
protein sau alt material i coninutul incapsulat. n calitate de catalizator ncapsulat pot fi
folosite enzime, sisteme polifermentative, organite celulare, celule i culturi celulare. Pentru
ncapsulare se pot folosi simultan mai multe materiale polimerice. De exemplu, o substan
biactiv (hormoni, anticorpi, enzime) suspendat n soluia apoas a polimerului cationic sau
anionic formeaz particule lichide cu acest sistem polimeric. n final se formeaz capsule cu
membrana, n interiorul crora se gsete un material bioactiv. Catalizatorii ncapsulai n
celule artificiale pot s acioneze n substrat, penetrnd liber prin membrana moleculelor, ceea
ce ofer posibilitatea utilizrii lor n obinerea produselor biofarmaceutice i medicin
Se extind metodele de imobilizare a agenilor biologici, ndeosebi a enzimelor i a
celulelor microbiene pe materiale textile. De exemplu, lizozimul imobilizat pe material textil
are o eficien sporit n tratamentul rnilor purulente, comparativ cu lizozimul nativ.
Utilizarea agenilor biologici imobilizai prezint urmtoarele avantaje eseniale:
reinerea n interiorul reactorului;
activitate puternic;
posibilitatea controlului asupra micromediului din jurul agentului biologic;
posibilitatea separrii rapide i totale a produselor;
posibilitatea realizrii unor procese continue, cu refolosirea multipl a
agentului biologic imobilizat.
n operarea cu ageni biologici imobilizai se poate ajunge la accelerarea
formrii produsului, mbuntindu-se n acest mod tehnologiile existente i crendu-se altele
noi. De exemplu, viteza de biosintez a acidului citric (ce intr n compoziia diferitelor
preparate farmaceutice) cu miceliu imobilizat de A. niger este de 2,4 ori mai mare dect cea
realizat cu miceliu liber.
Pentru prima dat pe plan mondial s-a realizat hidroliza asimetric a acetil-DLaminoacidului, la nivel industrial, prin utilizarea aminoacilazei imobilizate prin legtur
ionic pe DEAE-sefadex, obinndu-se o-metionin, o-valin, o-fenilalanin cu 40% mai
ieftin i care au utilizare farmaceutic.
7

Din cele spuse mai sus reiese c n procesele biotehnologice farmaceutice este posibil
utilizarea unei ntregi serii de ageni biologici, caracterizai prin nivele diferite de
complexitate a reglrii biologice, de exemplu celular, subcelular, molecular. O astfel de serie
convenional se poate deschide cu microbiocenoza (asociaie de microorganisme) i nchide
cu enzima individual de puritate ridicat. n mod nemijlocit, abordrile pentru crearea
ntregului sistem biologic depind de particularitile agentului biologic utilizat.
Microorganismele industriale au nevoie pentru creterea i nmulirea lor de energie i
de o multitudine de substane organice pe care le sintetizeaz cu ajutorul unor variate ci
metabolice. n ce privete necesitile fa de mediul de cultur, ele pot fi clasificate n aerobe,
anaerobe i facultative.
Microorganismele aerobe sunt capabile s i desfoare metabolismul exclusiv n
prezena oxigenului atmosferic. Din acest grup fac parte specii ale ganului Streptomyces care
sunt utilizate pentru biosinteza diferitelor antibiotice.
Microorganismele anaerobe au un metabolism care nu se poate realiza dect n
absena oxigenului liber, cum este de pild bacteria Lactobacillus delbrueckii productoare de
acid lactic de uz farmaceutic.
Din grupul microorganismelor facultative fac parte cele care pot s-i modifice
metabolismul nct s realizeze att unul de tip aerob (respirator) ct i unul anaerob
(fermentativ). Un exemplu de astfel de microorganisme facultative l reprezint drojdiile, care
pot att respira ct i fermenta anumite substraturi.
n ce privete metabolismul de tip fermentativ, ca rezultat al su se poate obine un
singur produs principal i atunci el se cheam homofermentativ. De pild, bacteriile lactice
transform glucoza n acid lactic.
Organismele heterofermentative realizeaz un metabolism din care rezult dou sau
mai multe produse principale. Ca exemplu poate fi citat specia bacterian Clostridium
acetobutylicum care convertete glucoza ntr-un amestec de aceton, alcool etilic, izopropanol
i butanol.
Prin activitatea microorganismelor pro- i eucariote se realizeaz dou tipuri de
metabolii: primari i secundari.
Metaboliii primari sunt compui chimici sintetizai de celule i necesari creterii i
nmulirii lor. Printre acetia putem cita: aminoacizi, nucleotide purinice i pirimidinice, acizi
organici i vitamine. De regul celulele microorganismului produc numai cantiti relativ
reduse din aceti metabolii primari, strict necesare metabolismului lor. S-a demonstrat c
sinteza acestor substane este reglat genetic, n sensul c funcionarea genelor care determin
8

sinteza acestor substane, se realizeaz numai atta timp ct este necesar, n funcie de ciclul
vital al organismului respectiv i de mediul ambiant. Prin mutaii ale genelor care intervin n
reglajul genetic al activitii celulelor, acestea pot produce cantiti disproporionate dintr-un
anumit metabolit.
De exemplu, bacteriile Corynebacterium glutamicum i Brevibacterium flavum
sintetizeaz n mod normal toi cei 20 de aminoacizi necesari pentru producerea proteinelor cu
rol structural i metabolic foarte important n viaa celulelor. Dac ns se produc mutaii ale
genelor de reglaj genetic al unor ci metabolice, aceste bacterii produc cantiti foarte mari de
anumii aminoacizi, cum sunt lizina i acidul glutamic, ce pot fi utilizai n industria
alimentar i biofarmaceutic. Mutantele respective ale celor dou specii bacteriene pot
transforma circa o treime din zahrul coninut de mediul de cultur n lizin i acid glutamic.
De asemenea, prin intervenia n reglajul genetic al activitii celulare la
microorganisme, se pot produce i ali metabolii primari utili economic i cu rol terapeutic
cum sunt vitaminele. De pild microorganismul Ashbya gossypii poate astfel sintetiza o
cantitate necesar creterii sale. n mod similar mutante bacteriene de Pseudomonas
dinitrificans pot sintetiza de 50.000 ori mai mult vitamin B12 dect tipul normal.
Metaboliii secundari sunt compui chimici sintetizai de celule vii, care nu sunt
indispensabili pentru creterea lor n cultur pur. Din acest grup fac parte: antibioticele,
alcaloizii, hormonii de cretere, etc. n general microorganismele au o faz de cretere rapid
n timpul creia sinteza metaboliilor secundari este foarte redus, dup care, cnd mediul de
cultur se epuizeaz n substane nutritive, are loc o reducere a creterii i se realizeaz sinteza
de metabolii secundari.
Antibioticele sunt astfel de metabolii secundari sintetizai de unele microorganisme i
care au importan practic n medicina uman i veterinar, pentru combaterea unor maladii
infecioase. Din cele 5500 de antibiotice cunoscute astzi, numai circa 100 sunt utilizate n
terapeutic.
S-a constatat c sinteza antibioticelor se realizeaz n cadrul unor ci metabolice, n
care intervin 10 30 de gene diferite ce determin sinteza unor enzime care favorizeaz
desfurarea diferitelor etape succesive necesare n procesul de sintez a antibioticelor. Ca
urmare obinerea unei sue de microorganisme care s produc mari cantiti de antibiotice
este un proces complex ce se realizeaz artificial prin cicluri succesive de mutaie i selecie.
Pe msur ce o mutant util este selecionat ea servete din nou ca loc de plecare pentru
tratamente cu ageni mutageni i selecia unei noi mutaii mai productive. n cazul unor specii
de microorganisme eucariote (drojdii) la care exist i reproducere sexuat, se utilizeaz
9

hibridarea prin care se realizeaz fenomenul de recombinare genetic a patrimoniului ereditar

al speciilor genitoare i apariia unor noi programe genetice, care permit selecia de sue mai
productive.
Schimbrile n procesul de selecie a unor microorganisme utile s-au realizat dup
apariia ingineriei genetice. Descoperirea structurii moleculare a genelor a fcut posibil
sinteza lor artificial i transferul de gene peste barierele de specie. S-au creat astfel premize
pentru dezvoltarea rapid a biotehnologiilor farmaceutice moderne i utilizarea lor eficient n
vederea obinerii unei game variate de substane utile cu rol terapeutic.
CAPITOLUL II. BIOTEHNOLOGIA ANTIBIOTICELOR
Descoperirea n anul 1928 de ctre Alexander Fleming a faptului c fungul Penicillium
notatum poate s produc un compus capabil s inactiveze selectiv un gen mare de bacterii,
fr a influena nejustificat gazda, a pus n micare o serie de studii tiinifice care arat
influena bolilor bacteriene asupra oamenilor. Din aceste studii au rezultat antibiotice fungice:
penicilina i cefalosporina, i antibiotice actinomicinice: streptomicina, aureomicina,
cloramfenicolul, tetraciclinele i multe altele. Multe din bolile bacteriene au fost nvinse prin
folosirea antibioticelor. Pneumonia, tuberculoza, holera i lepra, i sunt doar cteva, nu au
dominat societatea mult i n frit n locurile dezvoltate ale lumii au fost catalogate ca fiind
boli rare. Griseofulvina, un antibiotic activ mpotriva fungilor, a adus un mare ajutor
mpotriva infeciilor datorate bolilor de piele produse de fungi.
Antibioticele sunt compui antimicrobieni produi de microorganisme vii, i sunt
folosii terapeutic i uneori profilactic n controlul bolilor infecioase. Peste 4000 de
antibiotice au fost izolate, dar numai 50 au o utilizare larg (Tabelul 1). Ali compui cu rol
antibiotic nu sunt folosii din unele motive, cum ar fi toxicitatea la animale i oameni, costuri
de producie mari.
Antibioticele au fost folosite nc din 1945, cnd a nceput s se utilizeze penicilina.
Noile antibiotice au extins rapid limitele controlului antimicrobian i antibioticele sunt acum
larg utilizate n medicina uman i veterinar i (ca msur mai puin important) n fermele
de animale, unde unele antibiotice influeneaz creterea longevitii psrilor. Antibioticele
pot fi utilizate i pentru a limita extinderea bolilor la plante i ca insecticide.

10

Tabelul 1. Principalele antibiotice importante din punct de vedere economic

Componentul antibiotic

Microorganismul productor

Spectrul de activitate

Actinomicina D

Streptomyces sp.

Antitumoral

Bacitracina

Bacillus sp.

Antibacterian

Bleomicina

Streptomyces sp.

Anticancer

Cefalosporina

Acremonium sp.

Antibacterian

Cloramfenicol

Cephalosporium sp.

Antibacterian

Daunorubicina

Streptomyces sp.

Antiprotozoar

Fumagillina

Aspergillus sp.

Amoebicidal

Griseofulvina

Penicillium sp.

Antifungic

Mitomicina C

Streptomyces sp.

Antitumoral

Natamicina

Streptomyces sp.

Conservant de hran

Nisina

Streptococcus sp.

Conservant de hran

Penicilina G

Penicillium sp.

Antibacterian

Rifamicina

Nocardia sp.

Antituberculozic

Streptomicina

Streptomyces sp.

Antibacterian

Tetraciclina

Streptomyces sp.

Antibacterian, antimoebic

Antibioticele care afecteaz un gen mare de microorganisme sunt denumite de

spectru mare, de exemplu: cloramfenicolul i tetraciclina, care pot controla organismele fr
nrudire ntre ele ca specii de Rickettsia, Chlamydia i Mycoplasma. n contrast cu acestea,
streptomicina i penicilina sunt exemple de spectru mic (limitat, ngust) fiind eficiente
mpotriva a numai ctorva specii de bacterii. Cele mai multe antibiotice sunt derivate din
actinomicete i mucegaiuri.
Producia de antibiotice a fost fr nici un dubiu o parte profitabil a industriei
farmaceutice din lumea industrializat. Piaa lumii pentru antibiotice valoreaz peste 10
bilioane USD/an i este cel mai valoros segment din toat piaa farmaceutic (adic 100
miliarde USD).
n 1992, cefalosporinele (produse derivate din cefalosporina C sau penicilina C sau X),
au fost una din marile afaceri pe piaa farmaceutic cu vnzri de 8,3 miliarde $. Procesele de
acum au o eficien mrit i au fost realizate cu puine cunotine despre genetica
organismelor productoare. Acestea se datoreaz, n parte, lipsei unui ciclu sexuat evident
11

care limiteaz experimentele de mperechere a speciilor. n orice caz, tehnici noi cum sunt
fuziunea protoplatilor i tehnologiile transferului de gene au dus la dezvoltarea unor noi
specii cu productivitate mrit, mbuntind stabilitatea i la apariia de produi noi. Aceste
mbuntiri au dus la scderea continu a costurilor de producie. n prezent fermentaiile
pentru antibiotice implic n principal reactoare care funcioneaz n condiii batch i
continue. Modificri n procesele de producie pot fi bine urmrite de la proiectul
fermentatorului care este acceptat industrial.
Este regretabil observaia c cele mai multe studii despre antibiotice au interesat rile
dezvoltate asupra bolilor obinuite. Multe boli ale rilor n curs de dezvoltare, incluznd
multe importante boli tropicale, au primit o mic atenie din partea marilor industrii
farmaceutice. n parte, aceasta poate fi datorat nivelului nalt de tehnologie necesar,
incluznd pregtirea cadrelor de specialitate, asociate n mod normal cu cercetri i dezvoltri
n domeniul antibioticelor. Mult mai probabil, cauza o constituie economia politic de
dezvoltare a noilor medicamente pentru ri cu resurse financiare limitate. Se sper c
avansrile n biotehnologie vor face posibil descoperirea cii de dezvoltare a antibioticelor
necesare pentru combaterea problemelor legate de bolile masive specifice rilor n curs de
dezvoltare. Biotehnologia poate s fac posibil producerea economic a medicamente cu
utilizri specifice i profit mic.
O observaie ngrijortoare a fost creterea gradual a rezistenei medicamentelor la
multe bacterii. Posibilitatea ca aceast rezisten cptat s fie transmis la alte specii de
bacterii este acum realizat. De exemplu: gonoreea (o boal veneric) rezistent la tratamentul
cu penicilin, este acum prezent n 19 ri. Este cunoscut faptul c factorii ce dau rezisten
sunt localizai n plasmide n interiorul bacteriei i din aceast cauz pot fi transmii cu mai
mult uurin ntre organisme. Esena tehnologiilor de transfer de gene deriv din acest
fenomen. Rezistena antibioticelor n cazul multor boli bine cunoscute este n cretere i
cauzeaz serioase ngrijorri n societate. De exemplu, tuberculoza, un chin vechi al
oamenilor, a fost aproape eredicat, dar este acum din nou n cretere fiind ntlnit i n rile
din Vest.
Piaa de antibiotice folosite n hrana animalelor i pentru conservarea hranei este acum
considerabil reapreciat. Fr nici un dubiu, adiia unor cantiti relativ mici de anumite
antibiotice (exemplu: bacitracina, clortetraciclina, penicilina) n stocul de hran sau n hrana
psrilor de curte influeneaz producia animalelor care sunt mai sntoase, cresc mai repede
i dau rezultate importante rapide. n orice caz, nu exist nici un dubiu c introducerea
antibioticelor importante din punct de vedere medical n hran a dus la creterea numrului de
12

microorganisme rezistente la medicamente, crescnd protecia periculoasei bacterii

Salmonella n blegarul animalelor i transferul de reziduri de antibiotice n hrana oamenilor.
Ca o consecin a pericolului utilizrii antibioticelor cu relevan uman n hrana
animalelor, s-au depus eforturi masive pentru producerea de antibiotice specifice pentru
introducerea lor n hrana animalelor i deci nlocuirea antibioticelor folosite n medicin.
Astfel, antibioticele cu potenial terapeutic mic pentru oameni sau cu un spectru insuficient de
activitate sunt acum utilizate mai mult n nutriia animalelor. Lupta pentru producerea hranei
pentru populaia continuu crescnd a lumii este mare. O parte major a acestei strategii
implic btlia contra microbilor. Biotehnologia va juca un rol major n dezvoltarea i
producerea unor compui antibiotici noi i de efect.
Combinarea tehnologiilor noi cu cele tradiionale n industria farmaceutic conduce la
un potenial ieit din comun pentru valorificarea utilizrii microorganismelor n producia de
antibiotice i izolarea unor noi produi antibiotici.
Antibioticele formeaz o grup important de medicamente cu toxicitate selectiv,
inhibnd, n concentraii foarte mici, unele procese metabolice din celula microbian sau
producnd adevrate ruperi ale acesteia, fr a fi nocive pentru celulele gazd. Interesul lor
economic provine din utilizarea medical n lupta contra maladiilor infecioase. Se cunosc
antibiotice produse de microorganisme i plante superioare, dar importan terapeutic au
cptat numai unele din antibioticele produse de microorganisme. Genul Streptomyces de
exemplu conine o mare parte din microorganismele productoare de antibiotice.
Producia de antibiotice utilizeaz sue ameliorate prin mutagenez, prin recombinare
i eventual prin inginerie genetic. Ingineria genetic permite de exemplu, transferul genei
(penicilinacilaz) de Penicillium la diverse sue. Gena de rezisten la aminoglicozide poate
de asemenea fi transferat, aceasta traducndu-se prin posibilitatea unei hiperproducii fr
inhibiie.
Exprimarea coninutului n antibiotic se face n uniti gravimetrice sau uniti
internaionale de activitate. Aceste sisteme de uniti sunt folosite att n procesul
biotehnologic ct i n terapeutic.
Unitatea internaional de activitate, reprezint cantitatea minim de antibiotic pur,
necesar pentru a inhiba o cultur de 18 ore de stafilococ auriu n 50 ml bulion. Pentru cteva
antibiotice, mai uzuale, corespondena dintre unitile internaionale de antibiotice de
activitate i concentraia gravimetric, precum i activitile standard i cele ale produselor
comerciale sunt prezentate n Tabelul 2.

13

Tabelul 2. Corespondena dintre unitile gravimetrice i cele internaionale ale ctorva

antibiotice
Denumirea antibioticului

Greutate corespunztoare
pentru 1 UL/mg

Activitate standard UI/mg

Penicilin G

5,98 10-4

1670

Penicilin V

5,90 10-4

1965

Streptomicin

12,80 10-4

780

Tetraciclin

10,0 10-4

980

Clortetraciclin

11,0 10-4

990

Oxitetraciclin

11,1 10-4

990

Eritromicin

10,53 10-4

950

Polimixin

1,27 10-4

7874

Metodele chimice i fizico chimice sunt recomandate n prezent ca metode oficiale

de identificare i dozare a antibioticelor. Pentru identificarea antibioticelor se folosesc reacii
specifice, metode cromatografice i metode spectroscopice n U. V. I. R., iar pentru dozarea
activitii se folosesc metode titrimetrice, electrochimice, cromatografice, polarimetrice i
colorimetrice.
Clasificarea antibioticelor
Numrul foarte mare de antibiotice cunoscute pn n prezent a pus problema
clasificrii acestor produse. S-au propus mai multe criterii de clasificare funcie de originea
microorganismului productor, structura chimic a antibioticelor i aciunea farmacologic.
Clasificarea dup structura chimic ofer posibilitatea formrii unor grupe, care elucideaz
legtura dintre constituia chimic i propietile antimicrobiene.
Antibiotice - lactanice: peniciline i cefalosporine
Penicilinele naturale (G i V) sunt substane ce conin heterociclul - lactamic
thiazolidin, produse de ctre Penicillium chrysogenum i care difer ntre ele prin structura
catenei laterale i activitate antibacterian. Penicilinele au urmtoarea structur general:

14

Sistemul biciclic tiazolidin - - lactamic care este comun tuturor penicilinelor rezult
prin nlnuirea biogenetic a 2 aminoacizi i anume l-cistein i d-valin. Structura
molecular a penicilinelor este:
d valina
R C NH

S
1

C6

2C

H
4

CH3

C COOH

H
Ciclul
lactanic

Grupa
catenei
laterale

CH3

Ciclul
tiazolidinic

Nucleul de penicilin (acid 6 - amino - penicilanic)

R C6H5

CH2

CO

Penicilina G
R C6H5

O CH2

CO Penicilina V

CH CO
NH2

CO Oxacilina
N

R COOH CH(NH2)

Ampicilina

O
(CH2)3

CH3
CO Cefalosporina N

Penicilinele de biosintez se obin printr-un proces biotehnologic comun care cuprinde

urmtoarele faze:

pregtirea mediilor de cultur i sterilizarea lor;

fermentaia biochimic;

filtrarea soluiilor native;

separarea i purificarea penicilinelor.

15

Mediul de cultur are n compoziie extract de porumb, lactoz, glucoz, CaCO3, KHPO4,
NH4NO3, Na2SO4, ZnSO4, MnSO4, fenilacetamid, tiosulfat de sodiu.
Fermentaia este faza fundamental a procesului de biosintez i se realizeaz n trei
trepte inoculator, intermediar, regim care corespund anumitor stadii de dezvoltare a
microorganismelor.

Astfel

inoculator

se

petrece

procesul

de

aclimatizare

microorganismelor productoare de penicilin, la noile condiii de dezvoltare, n intermediar

ncepe creterea exponenial a numrului de microorganisme, iar n regim se desavrete
procesul de cretere a microorganismelor i de elaborare a penicilinelor.
Eficacitatea procesului de biosintez este determinat de conformaia genetic a
tulpinii productoare. O tulpin bun se caracterizeaz prin capacitate mare de nmulire,
utilizare rapid a azotului i a precursorului, lipsa pigmenilor n biomas i miceliu fibros.
Procesul de fermentaie a penicilinelor cuprinde trei faze metabolice distincte: faza de
cretere, faza de producere i faza autolitic. Faza de cretere se caracterizeaz prin acumulare
de mas micelian i utilizarea intensiv a componentelor mediului de cultur. Glucoza este
asimilat foarte rapid att pentru formarea materialului celular, ct i pentru furnizarea
energiei necesare. Cerinele de oxigen sunt maxime n aceast perioad, iar activitatea
respiratorie, caracterizat prin degajare de CO2 este ridicat.
Faza de producere a penicilinelor se caracterizeaz prin ncetinirea creterii miceliului
fie datorit epuizrii constituenilor uor asimilabili, fie scderii consumului de oxigen,
meninerii pH la 6,8 7,5 i acumulrii de penicilin. n aceast faz lactoza este folosit lent
de ctre miceliu i furnizeaz energia necesar proceselor de biosintez sau pentru formarea
constituenilor celulari.
Faza autolitic corespunde stadiului n care microorganismul se epuizeaz ca urmare a
activitii metabolice prelungite, iar sursele de carbon din mediu sunt consumate. Coninutul
n azot al miceliului descrete considerabil i ncepe procesul de acetoliz al acestuia cu
eliberare de amoniac i creterea pH peste 8. Producerea penicilinelor nceteaz i apare un
proces de hidroliz alcalin a penicilinelor formate. n practica industrial nu este permis
prelungirea fermentaiei pn la apariia autolizei.
Cantitatea de peniciline formate ntr-o fermentaie biochimic normal este rezultatul
mbinrii raionale a urmtorilor factori:

conformaia genetic a tulpinii care decide capacitatea de producere a

penicilinelor;

folosirea unor constitueni adecvai n mediu i un echilibru corect n proporiile

acestora;
16

meninerea pH optim n mediul de fermentaie;

dozarea corect a raportului ntre hidraii de carbon;

adugarea de precursori care vor decide natura catenei laterale i tipul de penicilin
produs;

asigurarea necesitilor n substane minerale;

meninerea temperaturii optime.

Pentru faza de cretere a masei celulare pH optim este de 4,5 5,0, iar pentru faza
de producere a penicilinelor este de 7,0 7,5. Dac fermentaia penicilinei se realizeaz prin
proces continuu, atunci realizarea regimului optim de pH pentru faza de cretere a
microorganismelor i pentru faza de elaborare a produsului este uor de realizat. Pentru
procese discontinui pH este cuprins ntre 6,4 7,0.
Regimul optim de temperatur este de 25 10C, iar necesarul de aer, deoarece
procesul este aerob, este de 1 1,5 aer/l mediu min., la o turaie a agitatorului de 140 rot/min.
Dirijarea procesului de biosintez spre o anumit penicilin se face cu ajutorul unor
substane care sunt nglobate n catena lateral a penicilinelor i poart numele de precursori.
Pentru penicilina G se utilizeaz ca precursor fenilacetamida, iar pentru penicilina V acidul
fenoxiacetic. Precursorii se adaug n poriuni, deoarece n concentraii mai mari de 0,1
0,2% sunt toxici pentru microorganisme.
Lichidul de cultur obinut n fermentaie se separ de miceliu prin filtrare sub vid.
Datorit diluiei foarte mari, separarea penicilinelor se poate face, rentabil numai prin extracii
repetate cu solveni.
Pentru separarea penicilinei prin extracie lichid lichid au fost studiai muli solveni
organici, determinndu-se valorile coeficienilor de repartiie ntre ap i solvent, funcie de
temperatur i pH. Dintre solvenii studiai pentru extracia penicilinelor cel mai economic
este acetatul de butil.
Penicilinele de semisintez sunt obinute pe cale chimic sau enzimatic plecnd de la
penicilinele naturale; prin hidroliz chimic sub aciunea unei acilaze microbiene (Escheria
coli, Bacillus megaterium, Kluyvera citrophila, Pseudomonas melagenum, Streptomyces sp.)

se formeaz acid 6-aminopenicilanic (6 APA) care este reciclat chimic pentru a se obine
noi compui activi (meticilin, oxacilin, ampicilin, carbenicilin).
Penicilinele sunt capabile s inhibe sinteza peretelui bacterian. Ele sunt active asupra
bacteriilor G+ (Staphylococcus, Streptococcus), asupra ctorva bacterii G-, Neisseria i

17

Treponema care este agentul sifilisului. Mai multe peniciline pot fi descompuse de germeni ce

conin o penicilaz (E. Coli, Bacillus) care sunt transformate n acid peniciloic inactiv.
Cefalosporinele sunt molecule foarte apropiate de peniciline.
HOOC
H2N

CH2

(CH2)3

CO NH HC

HC

S
C

CH
C

CH2
COOH

O C CH3
O

Cefalosporina C
H2C

CH

C CH CH2OH
CH

COOH

Acid cluvulanic
S

CH3
HO HC

HC

CH2

(CH2)2

NH2

C
C
COOH

Tienamicina
Prin ciclizarea unei tripeptide de ctre Cephalosporium acremonium se obine
penicilina N sau cefalosporina N, apoi cefalosporina C. Cefalosporinele acioneaz mai ales
asupra bacteriilor G+ prin inhibarea sintezei peretelui bacterian. Cefalosporina N este de
asemenea activ asupra genului Salmonella.
Alte antibiotice - lactanice sunt: acidul clavulanic care conine un ciclu - lactanic i
un ciclu oxazolidinic; tienamicinele care sunt sintetizate plecnd de la acetil CoA, acid
glutamic, cistein i etanolamin, nocardicinele care sunt sintetizate plecnd de la
homoserin, serin, hidroxifenilglicin, care este un derivat de tirozin.
Antibiotice polipeptidice sunt peptide liniare (gramicidine A, B, C) sau circulare (tirocidine,

polimixine, gramicidine S, bacitrocine) i sunt produse de genul Bacillus (B. brevis,

B.licheniformis, B. polymyxa).

18

Polimixinele conin acid L diaminobutiric, acid 6 metil octanoic i cteodat D

leucin. Elaborarea antibioticului se realizeaz n faza staionar de dezvoltare a
microorganismului. Modul de aciune este variabil. Polimixinele acioneaz asupra
membranei celulare prin fisurarea unor molecule mici i liza celulelor. Ele sunt active asupra
bacteriilor G-, n special polimixina E sau colimicina. Alte substane din aceast grup sunt
mai ales active asupra bacteriilor G+. Bacitracina A inhib sinteza peretelui bacterian i
mpiedic traversarea membranei citoplasmatice de ctre mucopeptide. Gramicidina S este un
inhibitor a fosforilrii oxidative, iar tirocidinele i alte gramicidine afecteaz de asemenea
funciile energetice de la nivelul membranei citoplasmatice.

Antibioticele aminoglicozidice reprezinta o grup complex de substane produse n mod

esenial de genul Streptomyces i conin diveri aminociclitoli, dezoxistreptamina, streptidin,

actinamid. Ele acioneaz n special prin inhibarea sintezei de proteine.
Streptomicina produs de Streptomyces griseus este un antibiotic foarte valoros i
acioneaz asupra a numeroase bacterii G- i micobacterii. Producia de streptomicin
intervine n faza staionar de dezvoltare ntr-un mediu de cultur foarte aerat i la un pH de 7
8. Neomicina, gentamicina i kanamicina sunt derivai de dezoxistreptomicin i sunt
produse de tulpini ale genului Streptomyces.
Antibiotice macrociclice

Mantidele sunt antibiotice ciclice i pot fi de natur polienic sau nepolienic. Cele
nepolienice, cum ar fi eritromicina, tilosina sunt produse de Streptomyces i sunt inhibitori ai
sintezei proteice. Biosinteza lor este stimulat de propanol sau propionat, iar producia se
efectueaz n timpul fazei staionare de dezvoltare.
Mantidele polienice de tipul nistatinei sunt produse de Streptomyces i prezint
particularitatea de a fi active asupra fungilor microscopici. Ele acioneaz la nivelul sterolilor
prezeni n membran, modificnd permeabilitatea.
Rifamicina formeaz un grup particular de antibiotice macrolactanice, produse tot de
Streptomyces, care inhib sinteza ARN.
Antibiotice quinonice

n aceast grup se gsesc tetraciclinele, cu toate c anthrociclinele i anthroquinonele

de origine fungic, adesea sunt considerate ca micotoxine.
19

R1H3C OHH R2 N(CH3)2

OH

OH

OH
OH O

CO NH2

R1 = H R2 = H tetraciclin
R1 = Cl R2 = H aureomicin (clortetraciclin)
R1 = H R2 = OH teramicin (oxitetraciclin

Tetraciclinele sunt antibiotice tetraciclice i sunt produse de Streptomyces. Producia

de tetracicline ncepe s se realizeze n timpul fazei de dezvoltare exponeniale a miceliului,
aceasta continund i n timpul fazei staionare. Sinteza nucleului tetraciclic este stimulat de
prezena n mediul de cultur a benziltiocianatului. Tetraciclinele sunt antibiotice cu spectru
larg (coci, bacili G+ i Enterobacteriaceae) asupra crora acioneaz prin inhibarea sintezei
proteice.
Antibiotice cu nucleu aromatic

Cloramfenicolul, antibiotic cu nucleu nitrobenzenic, care este produs de Streptomyces

venezuelae poate fi obinut i prin sintez chimic.Biosinteza se desfoar paralel cu

dezvoltarea miceliului. Nitrofenilserinolul este precursorul direct al cloramfenicolului. Acest

antibiotic are un larg spectru de aciune asupra bacteriilor, el acionnd prin blocarea sintezei
proteice la nivelul transferului de acizi aminai ntre ARN i ribozomi.
Griseofulvina, produs de Penicillium notatum, posed o structur triciclic i deriv
din griseofenon. Ea este activ asupra fungilor, aciunea sa fiind asemntoare cu cea a
mamelidelor polienice.
Novobiocina este un antibiotic cu structur policiclic i este produs de Streptomyces
sphaeroides. Eliberarea antibioticului n mediul de cultur se realizeaz n faza staionar.

Modul de aciune este asemntor cu a penicilinei.

20