Sunteți pe pagina 1din 31

Curs 11.

SEPARAREA I PURIFICAREA PRODUSELOR DE


BIOSINTEZ

Scopul procesrilor ulterioare fermentaiei:


- ndeprtarea substanelor strine (impuritile);
- reducerea volumului total, concomitent cu concentrarea
produsului util;
- purificarea produsului.
Alegerea operaiilor de separare i purificare se face innd cont :
- criterii tehnologice;
- natura i proprietile fizico-chimice ale produsului;
- locul de obinere al acestuia (intra-sau extra-celular);
- criterii conomice.

BIOREACTOR

Schema general de
separare
p
i ppurificare
f
a
metaboliilor din mediile
de fermentaie

SEPARARE BIOMAS
(Flotaie,Filtrare,
Centrifugare,Microfiltrare.
Ultrafiltrare)

Produs intracelular

Produs extracelular

PURIFICARE
INIIAL

DISTRUGEREA
MEMBRANEI
CELULARE

(Precipitare, Extracie cu
solveni, cu membrane
emulsionate
emul
sionate lichide, n
condiii
supercritice,
Adsorbie, Schimb ionic)

Mecanic mcinare
Chimic oc osmotic
Chimic,oc

SEPARARE RESTURI
CELULARE
(Filtrare,
(Filtrare
Microfiltrare)

Centrifugare
Centrifugare,

CONCENTRARE
(Evaporare,
Cristalizare,
precipitare,
Extracie,
Adsorbie, Ultrafiltrare, Osmoz
invers)

Deeu

DESHIDRATARE,
ELIMINARE SOLVENT

PURIFICARE FINAL

Uscare
prin
atomizare,
atomi
are,
congelare, n strat fluidizat

Cromatografie: permeaie de gel,


faz invers, afinitate, schimb
ionic; Procedee membranare:
electrodializ,
electroforez,
diafiltrare

PRODUS FINIT

FILTRAREA
este operaia cea mai comun de separare a unui sistem
eterogen lichid-solid sau gaz-lichid;
const n reinerea particulelor solide aflate n suspensie pe o
structur poroas;
Factori:
proprietile sistemelor disperse ce urmeaz a se separa;
natura fazei solide, forma i dimensiunile acestora;
raportul solid/lichid;
faza care se recupereaz: lichid, solid sau ambele;
volumul ce urmeaz s fie separat;
modul de operare: continuu sau discontinuu;
necesitatea sau nu a condiiilor aseptice;
necesitatea crerii de suprapresiune sau depresiune.

Filtrul pres:
- funcionare discontinu;
- suprafa mare de filtrare concentrat ntr-un volum de
dimensiuni relativ reduse;
- operaia de filtrare este accelerat prin trimiterea suspensiei
sub presiune de 3-4 at.
Materiale filtrant
straturi granulare
straturi fibroase:
esturi;
site metalice confecionate din form de inox, Ag, Ni, alam;
plci
l i poroase
membrane

Avantaje:

Dezavantaje:

obinerea unui precipitat cu coninut


mic de umiditate;
flexibilitatea condiiilor de operare;
suprafa
p
mare de filtrare;;
posibilitatea protejrii mpotriva
coroziunii;
costuri de investiie sczute
sczute.

manoper voluminoas;
uzur
rapid
id a pompelor
l
filtrante;
splarea
p
defectuoas a
precipitatului.

Filtrul nuce:
funcionare
f
i
di
discontinu;
ti
filtrarea se produce datorit diferenei de presiune create ntre
partea superioar
p
p
i cea inferioar care p
poate rezulta datorit:
- presiunii hidrostatice a lichidului;
- pomprii soluiei;
- realizrii de vid la partea inferioar.
inferioar
Avantaje:
ndeprtarea avansat a lichidului din precipitat;
construcie simpl i exploatare uoar.
Dezavantajele:
D
t j l
volum mare;
manoper voluminoas n special la descrcare i splare;
manoper
splare defectuoas (posibilitatea apariiei de fisuri n precipitat).

Filtrul celular cu discuri orizontal sau vertical:


pot fi operate ca filtre de presiune sau de vid;
constructiv se poate realiza ca una sau ambele fee ale discurilor
s fie acoperite de mediu;

Filtre rotative cu tambur:


funcionare continu;
funcioneaz cu vid;
se folosesc n special la filtrarea maselor celulare;
asigur:
suprafa mare de filtrare;
posibilitatea de splare a miceliului pe filtru;

CENTRIFUGAREA
Este esenial

cnd:
filtrarea se realizeaz cu dificultate i are o durat mare;
celulele sau alte materiale aflate n suspensie trebuie s se
obin n stare ct mai uscat;
este necesar separarea continu i n condiii igienice avansate;
nu se admit pierderi de lichid n precipitat.
Separarea n cmp centrifugal se caracterizeaz prin:
intensitate variabil;
direcie radial a cmpului de fore;
Factorii care influeneaz viteza de sedimentare n cmp
centrifugal sunt:
viteza unghiular de rotaie;
de densitate dintre celule i
faza lichid;;
diferena
diametrul (dimensiunea) celulelor;
vscozitatea fazei lichide.

Centrifuga cu camere

Centrifuga elicoidal orizontal

Centrifuga
g cu talere

Centrifuga
C
t if
t b l
tubular
(supercentrifuga)

MICROFILTRAREA
operaia de separare cu membrane a soluiilor coloidale sau a
suspensiilor de particule (dimensiuni ntre 0,02 i 10m);
membranele microfiltrare - mat. polimerice (structur cristalina)
clasificare:
- filtrarea de suprafa
- filtrarea n adncime.
Microfiltrarea tangenial, permite separarea de microparticule
cu dimensiuni cuprinse ntre 0. 2 2 m;
- se folosete la limpezirea sucurilor de fructe, purificarea primar
a extractelor vegetale/animale
ULTRAFILTRAREA , permite
it separarea d
de molecule
l
l d
de
dimensiuni mai mari (ex. zaharuri) din soluie;
- se aplic la: filtrare lapte n scopul separrii lactozei, separarea
acidului lactic din medii de fermentaie (fermentatoarele cu
recirculare extern).

DISTRUGEREA MEMBRANEI CELULARE


Aceste metode se mpart n:
metode fizico-mecanice:
- mcinarea
umed
uscat p
prin congelare
g
cmp ultrasonic
- ngheare-dezgheare
metode chimice
folosire de detergeni
oc osmotic
tratament alcalin sau enzimatic

SEPARAREA PRODUSELOR UTILE


Principalele proprieti care trebuie cunoscute sunt:
proprietilefizico-chimice ale metaboliilor
solubilitatea
solubilitatea
n soluii apoase de electrolii sau ap;
n solveni polari, nepolari sau slab polari
stabilitatea n soluie: funcie de pH, temperatur, efectul
soluiilor tampon, prezena solvenilor organici, efectul liofilizrii.
stabilitatea n stare solid:
efectul temperaturii
efectul oxigenului i a umiditii.
proprietile fizico-chimice n soluie posibilitate de adsorbie,
migrare n cmp electric, sedimentare la ultracentrifugare,
stabilitate la aciunea unor enzime sau ageni chimici
chimici.
comportrii acestora n anumite condiii de mediu ambiant

SEPARAREA I PURIFICAREA INIIAL


precipitare
extracie cu solveni
adsorbie
distilare
schimb ionic
PRECIPITAREA
n anumite cazuri precipitare se utilizeaz la ndeprtarea unor
impuriti.
impuriti
obinerea tetraciclinelor, acidului citric sub form de citrat de
calciu; obinerea

acidului L-glutamic
g
sub form de g
glutamat de
sodiu, separarea proteinelor sub fom de sare;
ca ageni de precipitare pentru proteine se pot folosi polimeri
cu mas molecular
l
l
mare (d
(dextran, polietilenglicol,
li il
li l etc);
)
solvenii organici, metanolul, etanolul sau acetona

EXTRACIA CU SOLVENI (LICHID-LICHID)


- este o operaie de separare a amestecurilor lichide
omogene, bazat pe diferena de solubilitate a componenilor
ntr-unul sau mai muli dizolvan
corespuztor
p
alei;
;

Principiul pentru o singur unitate de extracie:


A+B amestec binar omogen;
S solvent n care se solubilizeaz componentul B i parial A
E extract
t t format
f
t din
di soluia
l i B n
solvent,
l
t
R rafinat (conine majoritar compusul A)

- etape:
contactarea amestecului de separat cu dizolvantul n
vederea realizrii transferului de solut din solventul A n
solventul S
separarea celor dou faze
recuperarea dizolvantului
- criterii la alegerea solventului:
s prezinte selectivitate pentru compusul ce urmeaz a fi
separat
s aib proprieti fizice (densitate, viscozitate) care s
permit o dispersie uoar a fazelor
posibilitatea recuperrii n vederea recirculrii
siguran n exploatare (toxicitate, inflamabilitate redus),
impact ecologic
costuri reduse

Extracia reactiv
procedeu n care solubilizarea produsului de biosintez ntrun solvent organic se realizeaz ca urmare a unei reacii
chimice cu un agent de extracie (extractant, agent purttor)
extractanii: compui chimici organici cu structuri
voluminoase, solubili, de regul, n faz organic, capabili s
reacioneze cu metaboliii i s formeze compui solubili la
rndul
d l lor
l n
faz
f organica
i
performanele
extraciei
comparativ
ti cu extracia
t i fizic
fi i

reactive

sunt

superioare

Extracia cu fluide supercritice permite:


evitarea degradrii produilor extrai, datorit condiiilor
blnde n care se realizeaz ;
extracia rapid i complet la temperaturi moderate ;
eficiena sporit,
sporit datorit proprietilor fazei de solvatare n
condiii supercritice .
Sisteme de extracie bifazice apoase - pentru separarea a
moleculelor proteice.

ADSORBIA
Procesul prin care unul sau mai muli componeni ai unui mediu
omogen sunt reinui
i i pe un adsorbant
d b
(
(structur
solid)
lid)
Operaie de separare datorit selectivitii adsorbantului

pe solid se ndeprteaz
p
p
prin desorbie
p
nedestructiv:
Reinutul
- cu vapori supranclzii,
- cu aer cald
- prin nclzire sau detent destructiv: calcinare.
calcinare
Alegerea adsorbanilor se face n funcie de:
- Suprafaa specific,
- Capacitate
C
it t de
d adsorbie.
d bi
tipuri de adsorbani:
- crbune activ,,
- crbune de oase,
- silicagel,
- pmnturi decolorante,
decolorante
- alumin (Al2O3),
- magnezie activ(MgO - 90%, MgCO3 - 10%).

SCHIMBUL IONIC, procesele de schimb ionic fac parte din categoria


reaciilor de dublu schimb care au loc n sisteme eterogene: L S , L L
Clasificare:
cationii RH (forma acid) sau RNa (forma neutr);
RH + M+ R-M + H+
Tipuri: - anorganici naturali sau sintetici: aluminosilicai,
aluminosilicai zeolii
- crbuni fosili: turb, lignit, sulfonai
- cationii pe baz de lignin, celuloz
- rini fenolice sau poliesterice sulfonate sau carboxilice
anionii ROH
ROH + A- R-A + HOTipuri: - rini aminice,
aminice melaminice
- rini pe baz de celuloz, lignin modificate
Caracteristici: capacitate de schimb; stabilitate termic i chimic
Regenerarea:
RM + HCl (NaCl) RH (RNa) + MCl
RA + NaOH ROH + NaA
A li ii n
Aplicaii
biotehnologie:
bi t h l i - separarea streptomicinei
t t i i i pe sulfocationii
lf
ti ii
puternic acizi i eluarea cu soluie de acid sulfuric sulfat de
streptomicin.

PROCEDEE DE CONCENTRARE I PURIFICARE FINAL


EVAPORAREA reprezint operaia prin care se concentreaz o
soluie format dintr-un dizolvant volatil i un component, lichid
sau solid, nevolatil prin ndeprtarea unei pri din dizolvant.
vaporii
p
rezultai sunt formai dintr-un singur
g component.
p
trecerea n stare de vapori se poate face att prin:
evaporare superficial;
fierbere.
fierbere
Scopul evaporrii: - obinerea substanelor considerate
nevolatile, care se gsete dizolvat ntr-un lichid,
Factorii care influeneaz evaporarea:
capacitatea de evaporare
concentraia soluiei
presiunea de lucru
p labilitate termic,, care se
muli metabolii se caracterizeaz prin
manifest prin: - volatilizare; - descompunere; - pierderea
proprietilor organoleptice (degradarea).

DISTILAREA, RECTIFICAREA
procedeele de separare a componenilor unui amestec lichid
omogen, bazat pe diferena dintre temperaturile de fierbere ale
componenilor amestecului.
este practic o operaie dubl de fierbere a amestecului lichid,
urmat de condensarea vaporilor
p
rezultai;
; operaia
p multipl
p de
fierbere condensare se numete rectificare; se realizeaz n
vederea obinerii de separri mai avansate.
n biotehnologie distilarea se aplic rareori pentru separarea sau
concentrarea de metabolit (ex. Separarea solventului n
fermentaia butiric), n schimb se utilizeaz pentru recuperarea
solvenilor organici utilizai n operaii de separare/purificare.

SEPARRI I PURIFICRI CU MEMBRANE


domeniile
domeniile de utilizare ss-au
au extins n special spre sfera industriei
- alimentare, - biochimice, - biomedicale, - tratarea efluenilor
industriali
Procesul de transport al unui component printr-o membran
poart denumirea de permeaie; fora motoare:
diferena
d e e a de p
presiune,
es u e, p
p
diferena de temperatur, t
diferena de concentraie, c
diferena de potenial chimic,
chimic
Avantaje:
consum energetic
g
redus;;
posibilitatea separrii continue;
condiii simple de operare;
posibilitatea cuplrii cu procedeele tradiionale;
costuri reduse de investiie i separare.

Dintre procedeele membranare cele mai utilizate n domeniul


biotehnologiei sunt:
microfiltrarea;
ultrafiltrarea;
electrodializa
Electrodializa permite modificarea compoziiei sau concentraiei
soluiei
unor compui
p ionizabili prin
p migrarea
g
selectiv a ionilor
sub aciunea cmpului electric.
Membranele de electrodializ sunt membrane schimbtoare
de ioni.
ioni
Caracteristic proceselor de electrodializ este intensificarea
fluxului de substan prin membran ca urmare a suprapunerii
peste
t diferena
dif
d
de concentraie
t i a uneii dif
diferene
de
d potenial
t i l
datorat cmpului electric (U)mai mult sau mai puin intens.
Aceast consideraie este valabil i n cazul electroultrafiltrrii, respectiv electro-microfiltrrii.

SEPARRI I PURIFICRI CROMATOGRAFICE


Cromatografia este adsorbia-desorbia selectiv a unor substane
prezente ntr
ntr-o
o soluie care se realizeaz la trecerea soluiei prin
coloana cromatografic.
cromatografie
cromatografie de adsorbie bazat pe adsorbia fizic prin
legturi slabe de tip Van der Waals
cromatografie de schimb ionic definit ca un proces
reversibil de schimb ionic ntre faza lichid respectiv cea solid;
cromatografia de permeaie de gel separ moleculele pe
baza dimensiunilor lor;
cromatografia de afinitate separarea i purificarea moleculelor
biologice pe baza funciunii sau structurii lor chimice.
Tehnica se bazeaz pe interaciunile specifice dintre materialele
biologice i suportul cromatografic.
Tehnica ss-a
a utilizat la nceput la izolarea i purificarea proteinelor
proteinelor,
enzimelor, dar s-a extins i pentru diferite substane de
diagnosticare, anticorpi, acizi nucleici.