Tehnica hibridrii artificiale la tomate este simpl, castrarea
florilor mam fiind obligatorie, cu excepia cazului n care se utilizeaz forme materne la care stigmatul este dispus deasupra nivelului anterelor i autopolenizarea este mpiedicat. Castrarea trebuie efectuat cu 1-2 zile nainte de deschiderea sepalelor i petalelor, de preferat cnd sepalele sunt nc paralele cu axul florii, i cel trziu cnd sepalele ajung s se deschid la 45 grade fa de axul florii; dac se ntrzie castrarea, exist riscul ca florile s se autopolenizeze i s nu se obin fructe autentic hibride (din combinaia dorit de ameliorator), ci din autofecundare. Cu ajutorul unei pensete cu vrful ascuit se prinde ntreaga corol, de la baz, i se smulge mpreun cu garnitura anterelor cu care este concrescut, astfel nct n floare rmn doar sepalele, iar n mijloc ovarul sferic, stilul subire i alungit, care se termin cu stigmatul. Operaiunea trebuie efectuat cu mult finee, ntruct orice rnire a pistilului, duce la avortarea florii; imediat dup castrarea florilor dintr-o inflorescen matern, inflorescenele astfel lucrate se izoleaz n pungi de hrtie de pergament (izolarea nu este necesar dac hibridrile se execut n sere compartimentate n care nu exist insecte polenizatoare).
Momentul optim pentru polenizarea florilor castrate este indicat de apariia
pe stigmat a secreiei lipicioase (aa numita pictur de nectar), care semnific maturitatea fiziologic i receptivitatea maxim a stigmatului pentru polen. Polenizarea propriu zis const n depunerea polenului genitorului patern pe stigmatul florilor mam, cu ajutorul unei pensule fine, printr-o atingere uoar, pentru a se evita vtmarea elementelor sexuale femeieti. Se pot folosi orice alte tehnici, important fiind ca operaiunea s reueasc i s lege un numr ct mai mare de flori polenizate artificial. Polenul se recolteaz n ziua polenizrii, deoarece are o viabilitate de scurt durat (2-3 zile). Pentru a se obine o proporie mare de flori fecundate, se poate repeta polenizarea artificial dup 1-2 zile. Recoltarea fructelor hibride se face la maturitatea fiziologic, strict pe combinaii, pentru a se evita amestecurile, seminele extrase se spal, se usuc i se pstreaz n spaii uscate pn la nsmnare.
Seminele de tomate sunt mici, cu un
diametru de 2-4 mm, reniforme, mtsos proase, cu o culoare galben cenuie; numrul de semine ce se formeaz n fruct poate fi extrem de variabil, n general, obinndu-se ntre 150-300 semine/fruct (Stan i colab., 2003). Rezult c de la o plant elit se poate obine o descenden destul de numeroas, chiar dac se renun la o parte din fructe (la cele mai tardive, mai mici, cu abateri de la forma de baz etc.).
Autopolenizarea si hibridarea la ceapa
Chiar dac florile sunt hermafrodite, ceapa este o specie
alogam, la care polenizarea strin, sau ncruciat, se realizeaz entomofil, principalii ageni polenizatori fiind albinele i bondarii; polenizarea anemofil are loc ntr-o proporie relativ redus, ntruct polenul este lipicios i nu poate fi luat de vnt. n cadrul aceleiai flori, autopolenizarea este aproape exclus datorit protandriei (maturarea elementelor sexuale brbteti, naintea celor femeieti). Autopolenizarea este posibil prin fenomenul de geitonogamie (fecundarea ntre ele a florilor din aceeai inflorescen, sau de pe aceeai plant), iar n lucrrile de ameliorare se recurge deseori la autopolenizarea forat, n special pentru obinerea liniilor consangvinizate necesare crerii hibrizilor comerciali. Proporia seminelor obinute prin autofecundare este mai sczut dect cea rezultat la polenizarea strin, fiind variabil n funcie de mai muli factori i, n mod deosebit, de genotip. Se pot obine ntre 3-20% semine legate, cele mai mari procente rezultnd la speciile A. fistulosum, A. rotundum, A. senescens (Ustinova, 1950, citat de Neagu, 1975).
Autopolenizarea forat se efectueaz prin izolarea
inflorescenelor n pungi de hrtie pergamentat, sau alte tipuri de izolatori (pungi de tifon), nainte de deschiderea membranei pergamentoase care nvelete umbela globuloas. Pe parcursul deschiderii florilor, inflorescenele se scutur pentru a asigura polenizarea unui numr ct mai mare de flori, sau sub izolator se introduc insecte (mute sau bondari), sporindu-se rocentul se semine obinute la 10-20% sau chiar mai mult. Tulpinile florifere cu inflorescenele izolate se paliseaz pe tutori pentru a se evita ruperea lor i pierderile de semine.
Cnd se efectueaz hibridarea artificial, aceasta se poate realiza,
la ceap, n dou variante sau metodologii de lucru: fr castrarea sau cu castrarea florilor genitorului matern. Att n cazul hibridrilor artificiale, ct i la autopolenizare, pe plantele mam nu se pstreaz toate tulpinile florifere emise din bulb, ci, de regul, doar cea mai bine dezvoltat, de la care exist premizele obinerii unui numr mare de semine, apte pentru a germina i da natere unor descendeni cu o bun cretere. Varianta fr castrare se poate aplica atunci cnd genitorul patern posed o gen marker dominant, care determin manifestarea unui caracter fenotipic distinct, pe baza cruia pot fi identificai uor hibrizii autentici, de cei rezultai prin autopolenizare. Genitorii sunt amplasai n cmpul de hibridare n rnduri foarte apropiate, care s permit izolarea inflorescenelor celor doi genitori dintr-o combinaie sub acelai izolator (se pot folosi i izolatori mari, care s cuprind mai multe plante de pe rnduri apropiate). Izolarea se face nainte de deschiderea florilor mpreun cu inflorescenele introducndu-se i insecte polenizatoare.
Seminele recoltate de la plantele mam se
semn anul urmtor n cmp (ser, solar), dintre plantele rezultate fiind identificate cele hibride, purttoare a caracterului determinat de gena marker dominant a tatlui.
Varianta n care se efectueaz castrarea se impune
atunci cnd forma patern dintr-o combinaie hibrid nu posed un caracter marker dominant.
n acest caz, inflorescenele plantelor mam se
fasoneaz, operaiune prin care se nltur florile nc nedeschise din vrful i de la baza inflorescenei, reinndu-se doar 50-150 flori, care urmeaz s fie castrate cu ajutorul unei pensete cu vrful ascuit, nainte de-a apare riscul unei eventuale autopolenizri. Evident, pentru evitarea polenizrii strine, inflorescenele genitorului matern trebuie obligatoriu izolate. Polenizarea se execut prin introducerea, sub izolatorul inflorescenei plantei mam, cu florile castrate, a inflorescenei plantei tat mpreun cu insectele polenizatoare. Recoltarea seminelor se face strict pe combinaii hibride, la maturitatea fiziologic, evitndu-se ns pierderile prin scuturare i, ulterior, amestecurile de semine
Hibridarea la varza
La Cruciferae, florile sunt hermafrodite, pe tipul 4,
aezate n inflorescene racemoase, dispuse etajat pe tulpin. Varza este o plant strict alogam, la care polenizarea strin se realizeaz prin intermediul insectelor (albine, bondari, mute, fluturi etc.). Polenizarea strin (ncruciat, alogam) este obligatorie la varz, ntruct, datorit sistemelor de incompatiblitate gametofitic i sporofitic, autopolenizarea nu poate avea loc. In lucrrile de hibridri artificiale nu este necesar castrarea florilor genitorului matern. Hibridarea dirijat se efectueaz adesea prin introducerea sub un izolator comun a inflorescenelor genitorului matern i patern, nainte de deschiderea florilor, mpreun cu cteva insecte polenizatoare. Seminele se pot recolta de pe ambele plante, i vor fi hibride n proporie de peste 95%.
Dac hibridarea artificial se efectueaz n sere
compartimentate (1,0-1,5 mp), n fiecare compartiment trebuie amplasai (plantai) cei doi genitori din combinaiile dorite, iar n preajma nfloritului se introduc insecte polenizatoare. La varz fructele sunt silicve, iar n urma hibridrilor artificiale acestea se recolteaz n momentul n care ncep s se nglbeneasc, strict pe combinaii hibride. Cnd hibridrile artificiale se efectueaz n cmp, pungile izolatoare (din tifon sau hrtie pergamentat) pot rmne peste inflorescene pentru a proteja silicvele de atacul psrilor i insectelor. Dup extragerea seminelor din silicve i condiionarea lor, acestea se pot pstra (bine uscate) o lung perioad de timp (4-5 ani) fr s-i piard facultatea germinativ. La varza alb pentru cpn exist mai multe tipuri de cultivaruri, care se pot clasifica n funcie de metoda de ameliorare prin care s-au obinut (soiuri cu polenizare liber i hibrizi comerciali).
Autopolenizarea si hibridarea la morcov
Chiar dac florile sunt hermafrodite, datorit mecanismelor de
autoincompatibilitate, polenizarea la morcov este alogam (strin) i se realizeaz preponderent prin intermediul insectelor i ntr-o msur foarte mic anemofil. Polenizarea alogam, entomofil are loc ntr-o proporie de 95%, de aceea, n producerea de semine trebuie asigurate distane de izolare de 1500-2000 m pentru prevenirea infuziei de gene strine. Autoincompatibilitatea este mai puin strict ca la alte specii, astfel c autopolenizarea natural este posibil, ns are loc n proporii sczute. n ameliorare, se recurge la autopolenizarea forat pentru obinerea liniilor consangvinizate utilizate n producerea hibrizilor comerciali. n vederea obinerii unui procent ct mai mare de smn prin autopolenizare, se efectueaz polenizarea ntre florile din aceeai inflorescen sau din inflorescene diferite, dar de pe aceeai plant (geitonogamie). Pentru obinerea hibrizilor comerciali la morcov se folosesc i mecanismele de andosterilitate, utilizndu-se linii materne androsterile la care nu este necesar castrarea florilor. Restaurarea fertilitii mascule este condiionat dup Thompson (1961) de dou sau mai multe gene.
Hibridarea artificial se realizeaz prin introducerea
inflorescenelor celor doi genitori sub un izolator comun, mpreun cu cteva insecte polenizatoare. Cnd se urmrete crearea de variabilitate, nu se efectueaz neaprat castrarea florilor la genitorul matern (care este o operaiune dificil, datorit faptului c acestea sunt mici i nfloresc ealonat), iar smna se poate recolta de la ambii genitori. Obinerea unor plante hibride autentice este simplificat cnd unul dintre genitori posed o gen marker dominant. n scopul efecturii unor analize hibridologice foarte precise, se impune efectuarea castrrii; n acest caz, doar o parte din florile din inflorescenele alese pe plantele mam se rein i se castreaz, restul se elimin
n urma fecundrii, se formeaz fructe
indehiscente, numite impropriu semine, care sunt dicariopse prevzute cu epi i ajung la maturitate dup 60-65 de zile de la fecundare. Recoltarea fructelor provenite din hibridrile artificiale se efectueaz pe combinaii hibride, evitndu-se pierderile care pot avea loc la maturitatea fiziologic a fructelor datorit scuturrii uoare a acestora. Facultatea germinativ a seminelor este sczut, de 60-70%, i se pstreaz 2-4 ani. Morcovul fiind o specie bienal, n lucrrile de ameliorare, fiecare verig sau cmp, va fi reprezentat de dou faze, cea vegetativ (obinerea plantelor mam - a rdcinilor) i cea generativ (obinerea semincerilor i a seminei).