Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Genul Shigella
1. Definiie. ncadrare
Genul Shigella include bacili Gram-negativi, imobili, nesporulai, necapsulai,
oxidaz-negativi, lactoz-negativi. Shigella spp. nu aparine florei normale intestinale.
Genul Shigella ar trebui s fac parte, conform studiilor de biologie molecular, dintr-un
gen care s includ i Escherichia spp., genul Escherichia-Shigella. Cu toate acestea, este
n continuare acceptat tratarea separat a celor dou genuri nrudite. Exist mai multe
specii. Pe baza structurii antigenice au fost difereniate patru subgrupe (A-D) respectiv
Shigella dysenteriae (serotipuri), S. flexneri (6 serotipuri care se pot subdiviza n
subserotipuri), S. boydii (18 serotipuri) i S. sonnei (1 serotip cu 2 faze sau variante,
respectiv R i S).
2. Caractere generale
1. Habitat
Germenii se pot gsi n intestinul i scaunul omului bolnav. n funcie de anumite
condiii, shigellele se pot izola din ap, alimente sau de pe obiecte. Pot fi transmise prin
intermediul mutelor.
2. Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram-negativi, imobili, cu dimensiuni de 2-3 m / 0,5-0,8 m, necapsulai,
nesporulai.
3. Caractere de cultur
Cresc pe medii simple i produc colonii de tip S. Pe mediile cu lactoz (ex. ADCL,
AABTL) formeaz colonii de tip S, lactoz-negative. Pentru izolare din materiile fecale
sunt utilizate medii difereniale (cu lactoz i indicator de pH) i/sau medii selective
(mediul Shigella-Salmonella cu sruri biliare, etc).
4. Caractere biochimice
Sunt germeni aerobi facultativ anaerobi, glucoz-pozitivi fr producere de gaz,
lactoz-negativi, nu produc H2S, ureaz-negativi, indol-negativi, imobili. Subgrupele
A-D se pot diferenia pe baza fermentrii manitei (subgrupul A este manit-negativ).
5. Rezistena fa de factori fizici i chimici
Shigellele sunt inactivate n 10 minute la 50-60C. n praf uscat rezist circa 10 zile, pe
lenjerie pot supravieui peste 2 sptmni. n ape, la o temperatur de 7-10 C pot
supravieui circa 9 zile, n alimente circa 1-2 sptmni, iar n ghea pn la 2 luni.
6. Structur antigenic
Subgrupele sunt divizate pe baza structurii antigenului O (LPZ). Subgrupul A
(Sh. dysenteriae) include 10 serotipuri dintre care cel mai patogen este tipul 1, Shigella
shiga. Subgrupul B (Sh. flexneri) include mai multe tipuri i subtipuri serologice.
Subgrupul C (Sh. boydii) cuprinde 15 serotipuri iar subgrupul D (Sh. sonnei) cuprinde o
singur specie n 2 faze distincte antigenic (S i R).
Exist tulpini care prezint la suprafa structuri antigenice de tip K.
Sh. shiga elaboreaz i o exotoxin termolabil, cu structur proteic.
2.7. Rspuns imun
Infecia cu Shigella spp. duce la stimularea rspunsului imun umoral, cu apariia de
anticorpi care ns nu confer protecie. Apariia de anticorpi locali de tip IgA (eventual
dup administrarea de vaccinuri vii atenuate) ar putea avea o utilitate n prevenirea
infeciei.
2.8. Caractere de patogenitate
Shigella este patogen prin multiplicare i invazivitate. n cazul serotipului 1 din
subgrupul A (Sh. shiga) este implicat i toxigeneza.
La fel ca toate microorganismele Gram-negative, shigellele elaboreaz lipopolizaharidul
parietal, care se elibereaz ca endotoxin, dup distrugerea bacteriei. Endotoxina
(antigenul O) este implicat n patogenia dizenteriei, avnd o aciune iritativ la nivel
intestinal.
Exotoxina shiga afecteaz att intestinul (fiind implicat n mecanismul de producere al
diareei), ct i sistemul nervos central (putnd conduce la apariia unor fenomene de
meningism sau chiar pierderea strii de contien, com). Fa de animalele de
experien are efect letal.
3. Patogenie i patologie. Principalele afeciuni produse
Infeciile cu Shigella spp. sunt de regul limitate la nivelul tractului intestinal. Dizenteria
poate aprea dup ingestia a numai 100 de bacterii, care se localizeaz, se multiplic i
invadeaz epiteliul intestinal (pot aprea abcese la nivelul peretelui intestinului gros, la
nivelul ileonului terminal, abcese care evolueaz spre ulceraie, necroz, hemoragie).
Dup o perioad de incubaie de circa 2-5 zile, n cazul unei dizenterii tipice apar brusc
febr, diaree apoas, dureri abdominale intense. Ulterior se elimin scaune foarte
numeroase (20-40/zi), nefecaloide, cu mucus, puroi i snge, nsoite de colici intestinale
i tenesme rectale. Starea general se nrutete (mai grav n cazul unei infecii produse
de Sh. shiga) i problema principal este reprezentat la fel ca i n cazul altor diarei, de
pierderile hidro-electrolitice i instalarea unui sindrom de deshidratare acut. n lipsa
tratamentului corespunztor (n special n lipsa reechilibrrii hidro-electrolitice) evoluia
poate fi fatal.
n afar de dizenterie, shigelele pot produce i toxiinfecii alimentare de tip infecios.
4. Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din genul
Shigella
Genul Shigella ar trebui s fac parte conform studiilor de biologie molecular
dintr-un gen care include i Escherichia spp., genulEscherichia-Shigella. Cu toate
acestea, n momentul actual este acceptat tratarea separat a celor dou genuri nrudite.
Pe baza structurii antigenice au fost difereniate patru subgrupe (A-D) respectiv Shigella
dysenteriae (13 serotipuri), S. flexneri (6 serotipuri care se pot subdiviza n
subserotipuri), S. boydii (18 serotipuri) i S. sonnei (1 serotip cu 2 faze sau variante,
respectiv R i S).
prezena hematiilor este sugestiv pentru dizenteria bacterian. Anumii autori recomand
utilizarea imunofluorescenei directe; examenul este costisitor n special datorit
existenei numeroaselor serotipuri.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct
s se poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. Se vor
utiliza mediile de cultur recomandate: Shigella se dezvolt pe mediile slab i moderat
selective i nu se multiplic pe mediile nalt selective. n cazul apariiei unor colonii
lactozo-negative, repicm 3-5 colonii izolate pe mediile multitest (TSI, MIU, MILF) sau
procedm conform protocolului de lucru pentru galeriile tip API.
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai
multor caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: Sunt bacili gram-negativi cu cu dimensiuni de 0,5-0,8 m /
2-3 m
b) Caractere de cultur:
produc colonii de tip S, lactozo-negative, semitransparente, cu diametrul de 1-2 mm pe
MacConkey sau ADCL (S. sonnei poate produce colonii care devin roz deoarece poate
fermenta tardiv, lactoza) i roii pe XLD
c) Caractere biochimice:
- se pot investiga analiznd rezultatele obinute pe mediile multitest sau pe galeriile API;
caracterele biochimice sunt utile i n diferenierea subgrupelor genului
- microorganismele din genul Shigella sunt glucozo-pozitive, fr producere de gaz,
lactozo negative, nu produc H2S, imobile, ureaz negative, indol-negative
- pot fi necesare teste biochimice suplimentare
d) Caractere antigenice:
- se utilizeaz seruri imune polivalente pentru subgrup sau seruri imune specifice de tip,
prin reacii de aglutinare pe lam, conform unor scheme stabilite
- n cazul n care o tulpin izolat are un comportament biochimic sugestiv dar reacia de
aglutinare este negativ, trebuie s realizm o suspensie (destul de dens) din respectiva
tulpin, pe care o meninem timp de 30-60 minute la o temperatur de 100C i ulterior
repetm reacia de aglutinare
Testarea sensibilitii la bacteriofagi (lizotipia) se poate utiliza n studii epidemiologice
sau n scop de cercetare, fiind rezervat laboratoarelor de referin; schemele de lizotipie
au fost utilizate n special pentru S. flexneri 2a i S. sonnei
e) Alte caractere / teste utilizate n identificare la nivelul centrelor de referin:
- teste biochimice suplimentare (biotipie)
- bacteriocinotipie (ex. pentru S. sonnei)
- rezistotipie (tipare prin patern-ul rezistenei la antibiotice), util n scop epidemiologic
- testul Sereny (producerea cheratoconjunctivitei la cobai); repicm colonia suspect pe
geloz nclinat iar dup 8 ore, introducem o ans de cultur sub pleoapa unui cobai;
dup 12-24 ore n cazul unei reacii pozitive apare congestie conjunctival, secreie
purulent i opacifiere a corneei cu accentuarea acestor fenomene i evoluie spre
cheratoconjunctivit (testul poate fi pozitiv i n cazul unor tulpini de Escherichia coli)
- tehnici ale biologiei moleculare (stabilirea profilului plasmidic, ribotipia, sondele ADN,
etc).
10
Un alt aspect foarte util pentru identificare este reprezentat de studierea caracterelor
antigenice folosind seruri cunoscute (preparate pe animale de laborator), cu ajutorul
diferitelor reacii Ag-Ac. Toate enterobacteriile dein Ag O. Enterobacteriile mobile dein
Ag H. Enterobacteriile capsulate dein Ag K. Salmonella typhi prezint i Ag Vi, Yersinia
pestis prezint Ag F1 etc.
Infeciile enterobacteriene sunt destul de variate. Pot fi localizate la nivel digestiv
(dizenterie i sindroame asemntoare dizenteriei, sindroame asemntoare holerei, toxiinfecii alimentare etc), la nivelul tractului urinar, la nivelul aparatului respirator sau la
nivelul sistemului nervos. Infeciile enterobacteriene pot avea i alte localizri sau pot fi
generalizate (de ex. n febra tifoid, febrele paratifoide, pest).
n majoritatea infeciilor produse de enterobacterii diagnosticul este bacteriologic,
direct. n febra tifoid diagnosticul poate fi att bacteriologic ct i imunologic
(serologic).
Datorit faptului c n multe dintre aceste infecii produsul patologic este reprezentat
de ctre materiile fecale, n continuare vom discuta examenul bacteriologic al materiilor
fecale.
Coprocultura
n multe dintre infeciile produse de enterobacterii, care se manifest prin sindrom
diareic, utilizm coprocultura. n cele ce urmeaz vom discuta coprocultura n general, nu
numai din punctul de vedere al unei infecii enterobacteriene.
Boala diareic acut
Boala diareic acut (BDA) a fost i rmne o entitate patologic foarte rspndit la
nivel mondial. Spre exemplu, n ara noastr n ultimii ani, numrul de cazuri de boli
diareice acute a fost de 85.055 n anul 2000, 81.268 n anul 2001 i respectiv 97.317 n
anul 2002, cu o inciden de 446,5 0/0000 n 2002. n aceeai perioad de timp, n fiecare an
au decedat datorit BDA circa 100 de pacieni.
Sindromul diareic include eliminarea a peste 3 scaune n 24 de ore iar scaunele au
consistena diminuat (pn la emiterea unor scaune apoase, cu pierderea a pn la 20-30
litri / zi n holer). Materiile fecale pot avea aspect patologic (apos, mucos, purulent,
sanguinolent etc), culoare modificat, miros particular etc. De regul sindromul diareic
asociaz i alte semne i simptome digestive (dureri abdominale, tenesme, grea,
vrsturi etc) sau generale (febr, stare general alterat etc). Foarte important i
obligatoriu de reinut este c BDA duce la pierderi de ap i electrolii iar intervenia cea
mai important care trebuie avut n vedere este reechilibrarea hidroelectrolitic.
Ageni etiologici
Boala diareic acut poate fi de etiologie infecioas i neinfecioas. n continuare
vom discuta pe scurt etiologia infecioas n general, nu numai cea bacterian sau
fungic. Este de menionat c marea majoritate a BDA infecioase au etiologie viral.
Etiologia bacterian include:
Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli (EPEC / enteropatogen, ETEC /
enterotoxigen, EHEC / enterohemoragic, EIEC / enteroinvaziv, EAEC / enteroagregant,
DAEC / aderent difuz), Klebsiella spp., alte enterobacterii (Yersinia enterocolitica,
Citrobacter spp., Proteus spp. etc.), Vibrio cholerae i ali vibrioni, ali bacili gram
12
negativi (Aeromonas spp., Alcaligenes spp., Pseudomonas spp., etc.) Bacillus cereus,
Campylobacter jejuni, Clostridium perfringens, Clostridium difficile, Clostridium
botulinum, Staphylococcus aureus etc.
Etiologia fungic include:
Candida albicans (la pacieni cu SIDA) etc
Etiologia parazitar include:
Giardia lamblia, Entamoeba hystolitica i Entamoeba coli, Trichinella spiralis,
Cryptosporidium parvum, Strongyloides stercoralis etc.
Etiologia viral include:
Rotavirusurile, virusurile Norwalk i asemntoare virusurilor Norwalk, calicivirusurile,
astrovirusurile, coronavirusurile, enterovirusurile, adenovirusurile etc.
Gruparea agenilor etiologici n funcie de mecanismul patogenic
Att din punct de vedere diagnostic ct i pentru tratament poate fi important
elucidarea tipului de mecanism implicat. Astfel, BDA ar putea fi produse prin:
- mecanism neinflamator, atunci cnd din punct de vedere microscopic n preparatul ntre
lam i lamel nu se evideniaz leucocite (ex. BDA produse de Vibrio cholerae, ETEC,
Clostridium perfringens, Staphylococcus aureus, Giardia lamblia, rotavirusuri, virusuri
Norwalk,Cryptosporidium parvum etc.)
- mecanism inflamator, atunci cnd din punct de vedere microscopic n preparatul ntre
lam i lamel se evideniaz leucocite polimorfonucleare (ex. BDA produse de Shigella
spp., EIEC, Salmonella enteritidis, Vibrio parahaemolyticum, Entamoeba hystolitica etc.)
- mecanism de penetrare, atunci cnd din punct de vedere microscopic n preparatul
ntre lam i lamel se evideniaz leucocite mononucleare (ex. BDA sau sindrom diareic
produs de Salmonella typhi, Yersinia enterocolitica etc).
Dup cum se poate remarca, simpla recoltare a produsului patologic urmat de
realizarea unui preparat nativ i examinarea microscopic a acestuia pot da informaii
importante cu privire la etiologia probabil precum i atitudinea terapeutic de urmat.
Este evident c ntr-o BDA pentru care agenii etiologici sunt virali sau mecanismul
patogenic include aciunea unei toxine este contraindicat administrarea de antibiotice
sau chimioterapice antibacteriene.
Indicaiile coproculturii n bacteriologie:
- atunci cnd este suspicionat o infecie cu Shigella spp., Vibrio cholerae, E. coli
(tipurile patogene), Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica sau Salmonella spp. n
special la pacieni cu vrste extreme sau imunodepresie
- dup circa 1 sptmn de la debutul febrei tifoide etc.
- atunci cnd BDA prezint riscul extinderii la nivelul unei colectiviti (cree, grdinie,
tabere, uniti de alimentaie public, staii de distribuie a apei potabile etc)
- atunci cnd BDA apare la pacieni care au fost tratai cu antibiotice, iar sindromul
diareic persist i dup ntreruperea antibioticoterapiei
- atunci cnd sindromul diareic persist mai mult de o sptmn sau are loc o recdere
- n scopul verificrii strii de sntate a persoanelor care lucreaz n uniti de
alimentaie public (conform normativelor stabilite de ctre ministerul sntii)
- n scop de cercetare etc.
Recoltarea i transportul materiilor fecale
13
Realizm o suspensie omogen n mediul lichid. Prelevm o ans (sau o pictur) din
suspensie i o depunem pe mediul MacConkey.
Modul de nsmnare: ntindem p.p. n striuri paralele pe o jumtate de plac, pn
aproape de marginile plcii fr s le atingem. Fr s sterilizm ansa, atingem ultimile
3-4 striuri i dispersm p.p. n alte striuri paralele, perpendiculare pe primele, pe jumtate
din mediul disponibil, pn aproape de marginile plcii fr s le atingem. Atingnd din
nou ultimele 3-4 striuri, dispersm p.p. n mod similar pe mediul nc nensmnat.
Incubm timp de 18-24 de ore la 35-37 C.
n ziua urmtoare, pornind de la tubul cu bulion selenit nsmnm aa cum am
menionat mai sus o plac cu MacConkey i o plac cu ADCL (sau XLD); incubm
aceste plci timp de 18-24 de ore la 35-37 C. Examinm plcile nsmnate precedent n
vederea selectrii coloniilor suspecte.
Pe mediul MacConkey coloniile lactozo-pozitive au dimensiuni de 1-3 mm, sunt
roii, pot prezenta un halou opalescent, de regul sunt de tip S dar pot fi i de tip M.
Coloniile lactozo-negative au dimensiuni de 1-2 mm, nu sunt colorate, sunt transparente,
de regul sunt de tip S.
Pe mediul ADCL majoritatea bacteriilor lactozo-pozitive sunt inhibate; pot aprea
tardiv colonii de dimensiuni mai mici, roii, de tip S. Coloniile lactozo-negative au
dimensiuni de 1-2 mm, nu sunt colorate, sunt semitransparente, de tip S; dac produc H 2S
centrul coloniei este de culoare neagr.
De regul urmrim apariia coloniilor lactozo-negative, iar pentru etapele de
identificare vom repica (fr a atinge mediul de cultur) 3 colonii n cazul n care
pacientul este copil i 3-5 colonii n cazul n care pacientul este adult. n cazul n care nu
exist colonii lactozo-negative, pentru identificare vom repica (fr s atingem mediul de
cultur) 10 colonii la copil i respectiv 10 colonii la adult (dac se consider c
identificarea este necesar, de ex. n izbucniri epidemice de BDA).
Aadar, dup apariia coloniilor izolate pe mediile selectivo-difereniale trecem la
identificarea speciilor implicate patogenic pe baza caracterelor morfo-tinctoriale, de
cultur, biochimice, antigenice, de patogenitate, pe baza sensibilitii la bacteriofagi i
eventual pe baza unor caractere moleculare. Pentru interpretare vom utiliza diferitele
tabele disponibile n tratatele de specialitate sau recomandrile productorilor n cazul
utilizrii unor sisteme comerciale de diagnostic.
Pentru tulpinile considerate a fi implicate patogenic vom realiza studiul sensibilitii
la antibiotice i chimioterapice, de regul prin metode difuzimetrice (antibiograma
difuzimetric standardizat, comparativ, E test).
BIBLIOGRAFIE
1. Popa G.L., Popa M.I., Genul Salmonella, n Popa M.I. (coord.), Microbiologie Medical, vol 1
i 2 - curs UMF Carol Davila, 2010.
2. Popa M.I., Popa G.L., Genul Shigella, n Popa M.I. (coord.), Microbiologie Medical, vol 1 i
2 - curs UMF Carol Davila, 2010.
15