Sunteți pe pagina 1din 15

Curs 21.

Genul Salmonella. Genul Shigella


Genul Salmonella
1. Definiie. ncadrare
Importana clinic a microorganismelor din genul Salmonella a fost cunoscut cu mult
nainte de studiile omologiei ADN sau de realizarea secvenelor ARNr 16S. Pe baza unei
omologii ADN-ADN de aproximativ 90%, Salmonella i E. coli ar fi s fac parte din
acelai gen, dar protestul microbiologilor i clinicienilor obinuii cu vechile denumiri a
mpiedicat acest lucru.
Una dintre clasificrile acceptate la ora actual grupeaz genul n 3 specii (Ewing):
- S. typhi patogen numai pentru om;
- S. choleraesuis, patogen la porc i ocazional la om (numit ulterior S. enterica), cu
1.416 serotipuri;
- S. enteritidis, cauz de diaree la om i la animal.
Serotipurile nu se scriu cu litere italice. De ex. S. typhimurium ar putea fi scris actual
Salmonella ser. Typhimurium, sau Salmonella Typhimurium sau pe scurt Typhimurium.
Sunt autori care consider c serotipul corespunde speciei i n acest caz, n genul
Salmonella ar putea fi luate n considerare peste 2.390 specii.
Salmonella, ca i E. coli, a reprezentat un subiect de studiu, servind ca model pentru
metabolismul bacterian, genetica bacterian sau studii de virulen. Este de asemenea un
indicator al gradului de siguran al conductelor de ap, dar relativ de curnd a aprut
rolul ei n a onora o persoan public cum ar fi S. mjordan (cu referire la
baschetbalistul american).
2. Caractere generale
2.1. Habitat
Salmonelele sunt foarte larg rspndite n natur i prezente la toate speciile de animale,
psri, peti, erpi, insecte. Pentru S. typhi omul este unicul rezervor. Veriga alimentar
este esenial n infectarea uman.
2.2. Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram-negativi, cu dimensiuni de 2-4 mm / 0,4-0,6 mm, mobili cu cili
peritrichi (cu excepia S. galinarum pullorum), necapsulai, nesporulai.
2.3. Caractere de cultur
Se multiplic pe medii de cultur simple i formeaz colonii de tip S sau R (prin
mbtrnire). Salmonella ser. Paratyphi B poate produce colonii de tip M.
Pe mediile selective cu lactoz dau natere unor colonii lactoz-negative. Pe geloza
Wilson-Blair formeaz colonii caracteristice, opace, cu suprafaa rugoas i margini
neregulate, prezentnd un halou negru i luciu metalic.
2.4. Caractere biochimice
Fermenteaz glucoza cu formare de gaz (nu i S. typhi), nu fermenteaz lactoza, formeaz
hidrogen sulfurat (exist i excepii), nu formeaz indol, nu produc ureaz, cresc pe
mediul cu citrat ca unic surs de carbon (Simmons pozitiv), sunt aerobi, facultativ
anaerobi.

2.5. Rezistena fa de factori fizici i chimici


Se pot multiplica ntr-un interval larg de temperatur (7-48C) i la un pH ntre 4 i 8.
Sunt puin rezistente la cldur (spre exemplu sunt distruse n 5-7 minute la 100); pe sol
(puni) rezist circa 200 de zile, n alimente rezist 10-180 de zile (rezist 4 ani n
pulberea de ou, a crei utilizare n alimentaie este contraindicat). Dezinfectantele
obinuite le distrug n intervale de timp cuprinse ntre 30 de minute i 2 ore.
2.6. Structur antigenic
Modul n care o tulpin este definit din punct de vedere antigenic cuprinde 3 pri
(antigenul O, faza 1 de la antigenul H i faza 2 de la antigenul H).
Antigenul O este caracteristic tuturor microbilor Gram-negativi. Exist peste 60 de
structuri antigenice O diferite care definesc 46 de serogrupuri O; unul sau mai muli
factori asociai determin formula antigenic a unei anumite grupe serologice care este
notat cu literele mari ale alfabetului sau doar cu cifrele respective (AZ, O 51O67)
(1 ... 51 ... 67). A fost descris fenomenul de variaie genetic n legtur cu antigenul O.
Antigenele de nveli includ de exemplu antigenul Vi la S. typhi i Salmonella ser.
Paratyphi C; structurile antigenice Vi reprezint substratul de fixare a bacteriofagilor,
acoper antigenul O i nu permit reacia de aglutinare; se asociaz virulenei i
invazivitii (determin leucopenie, nu permit legarea componentei C3b i n acest mod
inhib fagocitoza i determin capacitatea de multiplicare intrafagocitar).
Antigenul H este de natur proteic, se gsete la nivelul cililor peritrichi, este
determinant de tip, cu posibilitatea unei variaii de faz. Majoritatea serotipurilor de
Salmonella pot exprima alternativ dou tipuri de flageli cu specificiti antigenice
diferite. Din 1986 s-a vzut c unele tulpini de Salmonella pot exprima trei sau mai multe
tipuri de flageli cu antigenicitate distinct.
Variaia antigenic se poate realiza de ex. prin transducie existnd mai multe posibiliti:
pot pierde antigenul H i devin imobile; pot pierde antigenul O, coloniile S se
transform n colonii R; pot pierde parial sau total antigenul Vi (homopolimer de acid
N acetil-galactosaminuronic).
Exist antigene i la nivelul fimbriilor. Apariia anticorpilor anti fimbrii de tipul 1 la
pacieni cu febr tifoid sau la persoane care au fost vaccinate, poate duce la apariia unor
reacii fals-pozitive n cadrul analizei serice cantitative (reacia de aglutinare n tuburi).
Schema de clasificare Ewing a fost prezentat anterior. Schema de identificare serologic
Kaufmann-White submparte genul Salmonella n foarte multe grupe i specii, spre ex.
n grupul A, S. paratyphi A; n grupul B, S. paratyphi B, S. typhimurium; n grupul C,
S. paratyphi C; n grupul D, S. typhi, S. enteritidis etc. Conform schemei Kaufman-White
exist S. dublin, care n schema Ewing poart numele de S. enteritidis serotipul dublin.
Exist i alte scheme de clasificare.
2.7. Rspuns imun
Apare rspuns imun umoral detectabil n special dup infeciile extraintestinale. Este
cert apariia rspunsului imun dup infecii produse de S. typhi i paratyphi (Paratyphi),
cu punerea n eviden a anticorpilor circulani anti O, anti H i anti Vi. Anticorpii anti O
i anti Vi au rol protector. Apariia anticorpilor din clasa IgA secretorii pot mpiedica
ataarea la nivelul epiteliului intestinal.
2.8. Caractere de patogenitate
Salmonella spp., devine patogen prin multiplicare i invazivitate. Primul pas,
obligatoriu, este reprezentat de colonizare, realizat cu ajutorul unor structuri de aderare,

adezinele i fimbriile, care induc modificri la nivelul membranei celulare. Studii de


fiziopatologie fundamental au reprezentat prima dovad a existenei unui receptor
hormonal afectat prin ataare i invazie bacterian.
De menionat faptul c la genul Salmonella a fost pus n eviden un grup de gene (genele
de invazivitate), unele din ele fiind asemntoare cu gene identificate la genul Yersinia.
Salmonella spp., supravieuiete intrafagocitar datorit prezenei unor structuri de
suprafa precum i prin sinteza unor proteine (peste 40 de proteine diferite) care apar ca
rspuns la fagocitare. Antigenul Vi contribuie (pentru S. typhi i Salmonella Paratyphi C
la rezistena la fagocitoz i rezistena dup fagocitoz).
Endotoxina (antigenul O, LPZ) eliberat dup distrugerea germenilor, are un rol important
n patogenitate.
Tulpinile care produc toxiinfecii alimentare secret enterotoxine cu proprieti
antigenice i biologice asemntoare toxinei holerice.
3. Patogenie i patologie. Principalele afeciuni produse
Principial infeciile produse de salmonele se pot mpri n salmoneloze minore
(enterocolite) i salmoneloze majore (febra tifoid).
Enterocolita (gastroenterita, toxiinfecia alimentar de tip infecios, salmoneloza) apare
dup ingestia a 105-108 salmonele. Dup ingestie are loc ataarea i adsorbia la nivelul
celulelor epiteliale n poriunea terminal a intestinului subire, apoi penetrarea prin
celule i migrarea n lamina propria, n regiunea ileocecal. La acest nivel are loc
multiplicarea n foliculii limfoizi determinnd hipertrofia i hiperplazia SRE (sistemului
reticulo-endotelial). Acumularea de PMN determin o reacie inflamatorie cu eliberare de
prostaglandine care duc la stimularea secreiei intestinale, urmat de diaree
(nesanguinolent), grea, vrsturi; mai pot aprea febr, dureri abdominale, mialgii,
dureri de cap (cefalee). Persoana infectat poate fi contagioas timp de circa 3 luni.
Simptomele sunt mai severe la copiii mai mici de 10 ani i la bolnavii imunocompromii
(ex. infectai cu HIV / SIDA).
Febra tifoid (febra enteral) poate aprea dup ingerarea a circa 10 3 salmonele.
Dup ingestie are loc ataarea i trecerea S. typhi prin i printre celulele epiteliale de la
nivelul ansei ileocecale, urmat de multiplicarea activ n submucoas i de fagocitarea
de ctre macrofage. Aici bacilii rmn vii i se multiplic (n macrofagele din
formaiunile limfoide intestinale), apoi trec n ganglionii mezenterici, apoi n canalul
toracic, producnd bacteriemia iniial (care reprezint debutul clinic al bolii), urmat de
invadarea altor organe i formaiuni limfatice.
Multiplicarea crescut mai ales n organele SRE (ficat, splin) este urmat de o a doua
bacteriemie masiv i de eliminarea prin bil i / sau urin. La sfritul primei sptmni
de boal, salmonella se elimin din foliculii intestinali i prin bil n materiile fecale,
excreia prelungindu-se mult timp n convalescen. Pot aprea angiocolit, colecistit;
bolnavul poate deveni purttor (portaj de Salmonella) dup vindecare.
Simptomatologia general (afectarea strii generale, febr, stare de oc) este determinat
n special de endotoxin care activeaz diferite cascade inflamatorii i producerea de
citokine, iar simptomatologia digestiv (anorexie, dureri, constipaie sau diaree) este
consecina agresiunii intestinale, hepatice i asupra vezicii biliare.

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din genul


Salmonella.
Exist mai multe clasificri pentru microorganismele care aparin genului Salmonella.
Una dintre clasificrile acceptate (Ewing) grupeaz genul n 3 specii i anume: S. typhi
(patogen doar pentru om), S. cholerae suis (patogen la porc, ocazional i la om) i S.
enterica (produce boli diareice la om i la animal, cu aproximativ 2000 de serotipuri).
Este nc bine cunoscut schema de identificare serologic (Kaufmann-White) care
submparte genul Salmonella n grupe care includ foarte multe specii, spre ex. grupul A
(S. paratyphi A), grupul B (S. paratyphi B, S. typhimurium), grupul C (S. paratyphi C),
grupul D (S. typhi, S. enteritidis) etc.
Genul Salmonella include bacili gram negativi, cu dimensiuni de 2-4 m / 0,4-0,6
m, mobili cu cili peritrichi (cu excepia S. galinarum pullorum), necapsulai,
nesporulai, glucozo-fermentativi (cu producere de gaz cu excepia S. typhi), nu
fermenteaz lactoza, produc H2S (exist i excepii) i utilizeaz citratul ca unic surs de
carbon.
Infeciile produse de microorganismele care aparin genului Salmonella se pot mpri
n salmoneloze minore (enterocolite, toxiinfecii alimentare) i salmoneloze majore (febra
tifoid, febre enterale).
Enterocolita (gastroenterita, toxiinfecia alimentar de tip infecios) apare dup
ingestia a 105-108 salmonele. Febra tifoid (febra enteral) poate aprea dup ingerarea a
circa 103 salmonele. Febra tifoid este o boal grav care n lipsa tratamentului poate
conduce la deces. S. typhi trece prin i printre celulele epiteliale de la nivelul ansei
ileocecale, se multiplic activ n submucoas i este fagocitat de macrofage unde
supravieuiete i continu s se multiplice. Microorganismele trec apoi n ganglionii
mezenterici, n canalul toracic i conduc la apariia unei prime bacteriemii urmat de
invadarea altor organe i formaiuni limfatice. Multiplicarea important, n special la
nivelul organelor cu sistem reticulo-endotelial bine reprezentat (ficat, splin), este urmat
de o a doua bacteriemie masiv i de eliminarea prin bil i / sau urin. La sfritul primei
sptmni de boal, S. typhi se elimin din foliculii intestinali i prin bil n materiile
fecale, excreia prelungindu-se mult timp n convalescen. Pot aprea angiocolit,
colecistit; bolnavul poate deveni purttor (ex. la nivelul veziculei biliare) dup
vindecare.
n cazul afeciunilor strict digestive, diagnosticul de laborator microbiologic este
bacteriologic, direct. n cazul afeciunilor sistemice, diagnosticul poate fi bacteriologic
i / sau serologic.
Diagnosticul de laborator microbiologic n infeciile cu localizare digestiv
Diagnosticul bacteriologic (direct) cuprinde etapele cunoscute.
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd
regulile cunoscute. Produsul patologic este reprezentat de obicei de materiile fecale dar
am putea recolta i lichid de vrstur, un anumit aliment incriminat etc. Materiile fecale
se examineaz macroscopic i se trimit ctre laborator (a se vedea coprocultura).
2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea preparatului
nativ, ntre lam i lamel; putem remarca prezena granulocitelor mononucleare.

3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct


s se poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care urmeaz a fi
identificat. Pentru izolarea i identificarea agentului patogen p.p. este nsmnat pe un
mediu lichid de mbogire (bulion selenit) i pe dou medii gelozate
selectivo-difereniale (MacConkey i ADCL / XLD). Dup o incubare de 18-24 ore la
35-37 C, pe mediile solide pot aprea colonii bacteriene suspecte (lactozo-negative) din
care obinem cultura pur n scopul identificrii i stabilirii sensibilitii la antibiotice.
Pentru a crete ansa depistrii agentului cauzal, cultura de 18-24 ore n bulion selenit va
fi trecut pe mediile solide (pe MacConkey i ADCL / XLD).
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic izolat n cultur pur se va
realiza pe baza mai multor caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: Sunt bacili gram-negativi.
b) Caractere de cultur:
- produc colonii de tip S, lactozo-negative, cu diametrul de 1-3 mm (necolorate i
semitransparente pe MacConkey; necolorate dar cu centrul negru pe ADCL; roii,
semitransparente, cu centrul negru pe XLD). n cazul n care a fost folosit i mediul
Wilson Blair (foarte selectiv, care nu include lactoz) coloniile sunt negre, cu margini
neregulate i halou metalic.
c) Caractere biochimice i de mobilitate:
- fermenteaz glucoza (cu producere de gaz), sunt lactozo-negativi, produc H 2S, (exis i
excepii) i utilizeaz citratul ca unic surs de carbon.
- nu produc indol, sunt ureaz-pozitivi, mobili, produc lizindecarboxilaz i
ornitindecarboxilaz etc.
Pentru punerea n eviden a caracterelor biochimice se pot folosi mediile multi-test
convenionale (TSI, MIU, MILF) sau galeriile multi-test (API 10 S, API 20 E, API Rapid
20 E sau alte variante).
d) Caractere antigenice:
- se utilizeaz seruri imune specifice, n scheme care folosesc iniial Ac anti-O i ulterior,
n funcie de rezultatul obinut, Ac anti-H, prin reacii de aglutinare pe lam conform
schemei Kauffmann-White (exist tabele i scheme care trebuie respectate);
- n cazul n care o tulpin izolat are un comportament biochimic sugestiv dar reacia de
aglutinare este negativ, trebuie s realizm o suspensie (destul de dens) din respectiva
tulpin, pe care o meninem timp de 30-60 minute la o temperatur de 100C i ulterior
repetm reacia de aglutinare.
e) Alte teste ce pot fi realizate n scopul identificrii germenilor, de regul la nivelul
centrului de referin:
- scheme suplimentare pentru testarea caracterelor antigenice (serotipie)
- teste suplimentare biochimice (biotipie)
- teste privind sensibilitatea la bacteriofagi specifici (lizotipie)
- teste de biologie molecular (determinarea profilului plasmidic, ribotipia, studiul
unor secvene specifice la nivel cromozomial etc).
5. Antibiograma este recomandat de regul numai n cazul pacienilor cu vrste
extreme sau pentru supravegherea apariiei fenomenului de rezisten la antibiotice i
chimioterapice; se realizeaz prin metode difuzimetrice.
5

Diagnosticul de laborator microbiologic n febrele enterale este bacteriologic i / sau


serologic.
Diagnosticul definitiv (cert) este reprezentat de izolarea i identificarea S. typhi n
p.p.
Diagnosticul bacteriologic, direct respect etapele cunoscute ale acestui tip de
diagnostic, cu anumite particulariti. Multe din aspecte au fost prezentate anterior.
Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd
regulile cunoscute, n special recoltarea ct mai rapid dup debutul bolii i nainte de
iniierea antibioterapiei. Produsul patologic este reprezentat n prima sptmn de snge,
ulterior putem recolta materii fecale, urin, lichid biliar, mduv hematogen etc. n cazul
n care p.p. este reprezentat de materii fecale, respectm ceea ce am prezentat mai sus,
cu o serie de sublinieri:
- sunt n studiu metode de identificare a prezenei S. typhi, direct n p.p. (ex. materii
fecale) prin latexaglutinare i PCR
- coloniile de S. typhi pot s nu prezinte centrul de culoare neagr pe ADCL sau XLD.
- S. typhi n general nu produce gaz din glucoz, iar H2S poate fi produs n cantiti
mici i tardiv; nu folosete citratul ca unic surs de carbon i este ornitindecarboxilaz
negativ.
- pentru identificarea Ag O poate fi necesar o inactivare prealabil (termic, folosind
o substan acid sau aceton). Pentru identificarea Ag H poate fi necesar inactivarea cu
formaldehid. Prezena Ag Vi poate crea probleme n ceea ce privete identificarea Ag O.
- dei lizotipia este o metod laborioas, de multe ori se dovedete superioar din
punctul de vedere al rezultatelor obinute n comparaie inclusiv cu metode ale biologiei
moleculare.
- testarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice este recomandat pentru fiecare
tulpin de S. typhi izolat.
Diagnosticul serologic
Unii autori consider c nici unul dintre testele utilizabile n diagnosticul serologic nu
este suficient de specific, sensibil i rapid. Diagnosticul serologic se realizeaz respectnd
principiile generale ale acestui tip de diagnostic. Reacia Widal a fost imaginat n finalul
secolului al IX-lea i standardizat la mijlocul secolului XX. Serodiagnosticul Widal,
folosind culturi vii de S. typhi nu se mai practic astzi. Cea mai cunoscut metod
utilizabil actual este analiza seric cantitativ, realizat tot prin tehnica aglutinrii n
tuburi. Utilizm serii separate de tuburi, cte o serie pentru fiecare Ag cunoscut folosit,
serul de cercetat fiind diluat corespunztor protocolului de lucru. Atunci cnd
presupunem o febr tifoid sau paratifoid utilizm spre ex. 6 serii de tuburi, cu Ag
cunoscute i inactivate, pentru a evidenia Ac anti-O (TO S. typhi, AO S. paratyphi A,
BO S. paratyphi B), i anti-H (d S. typhi, a S. paratyphi A, b S. paratyphi B).
Dup realizarea diluiilor, incubm tuburile pentru Ac anti-O timp de 18-20 ore la 52 C
urmat de 10 minute la temperatura camerei iar tuburile pentru Ac anti-H timp de 2 ore la
52 C urmat de 10 minute la temperatura camerei i citim reacia. Un titru de 1/250 n
cazul Ac anti-O i respectiv 1/2500 n cazul Ac anti-H ar putea fi sugestiv. Creterea de
4 ori a titrului, la 2 determinri succesive (interval de 7-10 zile) poate confirma
suspiciunea de diagnostic. La persoanele vaccinate n antecedente diagnosticul serologic
6

nu poate fi utilizat (rezultatele nu sunt interpretabile) i este strict necesar izolarea n


culturi a S. typhi.
Att n cazul bolnavilor, dar mai ales n cazul convalescenilor i purttorilor a fost
recomandat reacia de aglutinare n tuburi pentru identificarea prezenei i titrului Ac
anti-Vi. Se consider c un titru de peste 1/40 poate fi considerat sugestiv.

Genul Shigella
1. Definiie. ncadrare
Genul Shigella include bacili Gram-negativi, imobili, nesporulai, necapsulai,
oxidaz-negativi, lactoz-negativi. Shigella spp. nu aparine florei normale intestinale.
Genul Shigella ar trebui s fac parte, conform studiilor de biologie molecular, dintr-un
gen care s includ i Escherichia spp., genul Escherichia-Shigella. Cu toate acestea, este
n continuare acceptat tratarea separat a celor dou genuri nrudite. Exist mai multe
specii. Pe baza structurii antigenice au fost difereniate patru subgrupe (A-D) respectiv
Shigella dysenteriae (serotipuri), S. flexneri (6 serotipuri care se pot subdiviza n
subserotipuri), S. boydii (18 serotipuri) i S. sonnei (1 serotip cu 2 faze sau variante,
respectiv R i S).
2. Caractere generale
1. Habitat
Germenii se pot gsi n intestinul i scaunul omului bolnav. n funcie de anumite
condiii, shigellele se pot izola din ap, alimente sau de pe obiecte. Pot fi transmise prin
intermediul mutelor.
2. Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram-negativi, imobili, cu dimensiuni de 2-3 m / 0,5-0,8 m, necapsulai,
nesporulai.
3. Caractere de cultur
Cresc pe medii simple i produc colonii de tip S. Pe mediile cu lactoz (ex. ADCL,
AABTL) formeaz colonii de tip S, lactoz-negative. Pentru izolare din materiile fecale
sunt utilizate medii difereniale (cu lactoz i indicator de pH) i/sau medii selective
(mediul Shigella-Salmonella cu sruri biliare, etc).
4. Caractere biochimice
Sunt germeni aerobi facultativ anaerobi, glucoz-pozitivi fr producere de gaz,
lactoz-negativi, nu produc H2S, ureaz-negativi, indol-negativi, imobili. Subgrupele
A-D se pot diferenia pe baza fermentrii manitei (subgrupul A este manit-negativ).
5. Rezistena fa de factori fizici i chimici
Shigellele sunt inactivate n 10 minute la 50-60C. n praf uscat rezist circa 10 zile, pe
lenjerie pot supravieui peste 2 sptmni. n ape, la o temperatur de 7-10 C pot
supravieui circa 9 zile, n alimente circa 1-2 sptmni, iar n ghea pn la 2 luni.
6. Structur antigenic
Subgrupele sunt divizate pe baza structurii antigenului O (LPZ). Subgrupul A
(Sh. dysenteriae) include 10 serotipuri dintre care cel mai patogen este tipul 1, Shigella
shiga. Subgrupul B (Sh. flexneri) include mai multe tipuri i subtipuri serologice.

Subgrupul C (Sh. boydii) cuprinde 15 serotipuri iar subgrupul D (Sh. sonnei) cuprinde o
singur specie n 2 faze distincte antigenic (S i R).
Exist tulpini care prezint la suprafa structuri antigenice de tip K.
Sh. shiga elaboreaz i o exotoxin termolabil, cu structur proteic.
2.7. Rspuns imun
Infecia cu Shigella spp. duce la stimularea rspunsului imun umoral, cu apariia de
anticorpi care ns nu confer protecie. Apariia de anticorpi locali de tip IgA (eventual
dup administrarea de vaccinuri vii atenuate) ar putea avea o utilitate n prevenirea
infeciei.
2.8. Caractere de patogenitate
Shigella este patogen prin multiplicare i invazivitate. n cazul serotipului 1 din
subgrupul A (Sh. shiga) este implicat i toxigeneza.
La fel ca toate microorganismele Gram-negative, shigellele elaboreaz lipopolizaharidul
parietal, care se elibereaz ca endotoxin, dup distrugerea bacteriei. Endotoxina
(antigenul O) este implicat n patogenia dizenteriei, avnd o aciune iritativ la nivel
intestinal.
Exotoxina shiga afecteaz att intestinul (fiind implicat n mecanismul de producere al
diareei), ct i sistemul nervos central (putnd conduce la apariia unor fenomene de
meningism sau chiar pierderea strii de contien, com). Fa de animalele de
experien are efect letal.
3. Patogenie i patologie. Principalele afeciuni produse
Infeciile cu Shigella spp. sunt de regul limitate la nivelul tractului intestinal. Dizenteria
poate aprea dup ingestia a numai 100 de bacterii, care se localizeaz, se multiplic i
invadeaz epiteliul intestinal (pot aprea abcese la nivelul peretelui intestinului gros, la
nivelul ileonului terminal, abcese care evolueaz spre ulceraie, necroz, hemoragie).
Dup o perioad de incubaie de circa 2-5 zile, n cazul unei dizenterii tipice apar brusc
febr, diaree apoas, dureri abdominale intense. Ulterior se elimin scaune foarte
numeroase (20-40/zi), nefecaloide, cu mucus, puroi i snge, nsoite de colici intestinale
i tenesme rectale. Starea general se nrutete (mai grav n cazul unei infecii produse
de Sh. shiga) i problema principal este reprezentat la fel ca i n cazul altor diarei, de
pierderile hidro-electrolitice i instalarea unui sindrom de deshidratare acut. n lipsa
tratamentului corespunztor (n special n lipsa reechilibrrii hidro-electrolitice) evoluia
poate fi fatal.
n afar de dizenterie, shigelele pot produce i toxiinfecii alimentare de tip infecios.
4. Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din genul
Shigella
Genul Shigella ar trebui s fac parte conform studiilor de biologie molecular
dintr-un gen care include i Escherichia spp., genulEscherichia-Shigella. Cu toate
acestea, n momentul actual este acceptat tratarea separat a celor dou genuri nrudite.
Pe baza structurii antigenice au fost difereniate patru subgrupe (A-D) respectiv Shigella
dysenteriae (13 serotipuri), S. flexneri (6 serotipuri care se pot subdiviza n
subserotipuri), S. boydii (18 serotipuri) i S. sonnei (1 serotip cu 2 faze sau variante,
respectiv R i S).

Genul Shigella include bacili gram negativi, imobili, cu dimensiuni de 0,5-0,8 m /


2-3m, nesporulai, necapsulai, aerobi facultativ anaerobi, glucozo pozitivi fr
producere de gaz oxidazo negativi, lactozo negativi. Subgrupele se pot diferenia de ex.
pe baza fermentrii manitei (subgrupul A este manito negativ). Cresc pe medii simple i
produc colonii de tip S n 24 de ore.
Microorganismele din genul Shigella sunt patogene prin multiplicare i invazivitate.
n cazul serotipului 1 din subgrupul A (Sh. shiga) este implicat i toxigeneza. Exotoxina
shiga afecteaz att intestinul ct i sistemul nervos central (putnd conduce la apariia
unor fenomene de meningism sau chiar pierderea strii de contien, pn la com). Fa
de animalele de experien are efect letal.
Infeciile cu Shigella spp. sunt de regul limitate la nivelul tractului intestinal.
Dizenteria poate aprea dup ingestia a numai 10-100 bacterii, care se localizeaz, se
multiplic i invadeaz epiteliul intestinal (pot aprea abcese la nivelul peretelui
intestinului gros, la nivelul ileonului terminal, abcese care evolueaz spre ulceraie,
necroz, hemoragie). Dup o perioad de incubaie de circa 2-5 zile, n cazul unei
dizenterii tipice apar brusc febr, diaree apoas, dureri abdominale intense. Ulterior se
elimin scaune foarte numeroase (20-40 / zi), nefecaloide, cu mucus, puroi i snge,
nsoite de colici intestinale i tenesme rectale. Starea general se nrutete (mai grav
n cazul unei infecii produse de Sh. shiga). n lipsa tratamentului corespunztor
(n special n lipsa reechilibrrii hidro-electrolitice) evoluia poate fi fatal. n afar de
dizenterie, Shigella spp. poate produce i toxiinfecii alimentare de tip infecios.
Diagnosticul de laborator microbiologic este bacteriologic (direct) i trebuie fcut de
urgen datorit implicaiilor posibile ale unei dizenterii.
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd
regulile cunoscute, n special recoltarea ct mai rapid dup debutul bolii i nainte de
iniierea antibioterapiei. Produsul patologic este reprezentat de materii fecale, dar s-ar
putea recolta i lichid de vrstur. La nceputul bolii este mai uor s izolm bacteria
patogen, deoarece iniial se elimin circa 10 3-109 bacterii / gram de materii fecale. Din
punct de vedere macroscopic materiile fecale pot fi n cantitate mic, coninnd mucus,
puroi i snge (uneori sngele nu este vizibil macroscopic). Recomandm recoltarea i
cultivarea n special a fragmentelor care conin mucus, puroi i snge. Transportul trebuie
s fie realizat rapid, dar este preferabil nsmnarea la patul bolnavului. Dac aceast
recomandare nu poate fi urmat, recomandm folosirea unui mediu de transport, mediul
bacteriostatic Cary-Blair. O alt variant de recoltare posibil (de ex. n cazuri atipice sau
pentru controlul strii de purttor) este reprezentat de utilizarea sondei Nelaton
introdus n colonul sigmoid (10-15 cm la copil sau 15-20 cm la adult) aspirnd p.p. cu
ajutorul unei seringi. Materiile fecale se vor suspensiona n soluie cloruro-sodic sau n
mediul Cary-Blair. Exist i posibilitatea de a recolta p.p. atunci cnd se presupune
diagnosticul dizenteriei bacteriene prin rectosigmoidoscopie.
2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea unui preparat
proaspt ntre lam i lamel (nu efectum frotiuri din acest tip de produsul patologic, n
cazul n care suspectm o infecie cu Shigella spp.). Preparatul se examineaz la
microscopul optic cu obiectivul 40. Evidenierea a numeroase PMN vine n sprijinul
stabilirii mecanismului bolii diareice, iar un procent de peste 75% PMN nsoit de
9

prezena hematiilor este sugestiv pentru dizenteria bacterian. Anumii autori recomand
utilizarea imunofluorescenei directe; examenul este costisitor n special datorit
existenei numeroaselor serotipuri.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct
s se poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. Se vor
utiliza mediile de cultur recomandate: Shigella se dezvolt pe mediile slab i moderat
selective i nu se multiplic pe mediile nalt selective. n cazul apariiei unor colonii
lactozo-negative, repicm 3-5 colonii izolate pe mediile multitest (TSI, MIU, MILF) sau
procedm conform protocolului de lucru pentru galeriile tip API.
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai
multor caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: Sunt bacili gram-negativi cu cu dimensiuni de 0,5-0,8 m /
2-3 m
b) Caractere de cultur:
produc colonii de tip S, lactozo-negative, semitransparente, cu diametrul de 1-2 mm pe
MacConkey sau ADCL (S. sonnei poate produce colonii care devin roz deoarece poate
fermenta tardiv, lactoza) i roii pe XLD
c) Caractere biochimice:
- se pot investiga analiznd rezultatele obinute pe mediile multitest sau pe galeriile API;
caracterele biochimice sunt utile i n diferenierea subgrupelor genului
- microorganismele din genul Shigella sunt glucozo-pozitive, fr producere de gaz,
lactozo negative, nu produc H2S, imobile, ureaz negative, indol-negative
- pot fi necesare teste biochimice suplimentare
d) Caractere antigenice:
- se utilizeaz seruri imune polivalente pentru subgrup sau seruri imune specifice de tip,
prin reacii de aglutinare pe lam, conform unor scheme stabilite
- n cazul n care o tulpin izolat are un comportament biochimic sugestiv dar reacia de
aglutinare este negativ, trebuie s realizm o suspensie (destul de dens) din respectiva
tulpin, pe care o meninem timp de 30-60 minute la o temperatur de 100C i ulterior
repetm reacia de aglutinare
Testarea sensibilitii la bacteriofagi (lizotipia) se poate utiliza n studii epidemiologice
sau n scop de cercetare, fiind rezervat laboratoarelor de referin; schemele de lizotipie
au fost utilizate n special pentru S. flexneri 2a i S. sonnei
e) Alte caractere / teste utilizate n identificare la nivelul centrelor de referin:
- teste biochimice suplimentare (biotipie)
- bacteriocinotipie (ex. pentru S. sonnei)
- rezistotipie (tipare prin patern-ul rezistenei la antibiotice), util n scop epidemiologic
- testul Sereny (producerea cheratoconjunctivitei la cobai); repicm colonia suspect pe
geloz nclinat iar dup 8 ore, introducem o ans de cultur sub pleoapa unui cobai;
dup 12-24 ore n cazul unei reacii pozitive apare congestie conjunctival, secreie
purulent i opacifiere a corneei cu accentuarea acestor fenomene i evoluie spre
cheratoconjunctivit (testul poate fi pozitiv i n cazul unor tulpini de Escherichia coli)
- tehnici ale biologiei moleculare (stabilirea profilului plasmidic, ribotipia, sondele ADN,
etc).
10

5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice) se


realizeaz prin metoda difuzimetric standardizat, n special n scopul supravegherii
apariiei unor tulpini rezistente la medicamentele antimicrobiene dar i pentru stabilirea
tratamentului antimicrobian corespunztor.

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de enterobacterii.


Coprocultura.
Familia Enterobacteriaceae cuprinde un important numr de genuri de
microorganisme semnificative din punct de vedere medical (28) i numeroase specii
(peste 100, n cazul n care nu lum n considerare clasificarea genului Salmonella n
peste 2000 de specii). Dintre genurile incluse n aceast vast familie, vom aminti
urmtoarele: Escherichia, Shigella, Salmonella, Yersinia, Klebsiella, Proteus,
Citrobacter, Edwarsiella, Enterobacter, Morganella, Providencia i Serratia.
Enterobacteriile sunt bacili gram negativi care nu se pot diferenia prin microscopie
optic, mobili cu cili peritrichi (ex. Salmonella spp., Proteus spp.), sau imobili (ex.
Shigella, Yersinia, Klebsiella), nesporulai; unele specii prezint capsul (ex. Klebsiella
pneumoniae).
Sunt germeni nepretenioi care se pot multiplica pe medii simple, aerobi facultativ
anaerobi, utilizeaz fermentativ glucoza cu sau fr producere de gaz, sunt oxidazonegativi, catalazo-pozitivi, reduc nitraii. Formeaz colonii de tip S, R (n cazul culturilor
vechi) sau M (pentru speciile capsulate), pot fermenta lactoza (ex. Escherichia coli,
Klebsiella) sau sunt lactozo negativi (ex. Salmonella, Shigella, Yersinia). Pentru izolarea
speciilor de enterobacterii putem folosi medii selective, difereniale i
selectivo-difereniale. Exist medii cu selectivitate mai redus care inhib majoritatea
bacteriilor gram pozitive i permite dezvoltarea tuturor enterobacteriilor (ex. mediul
MacConkey cu sruri biliare n concentraie mic; se poate aduga i cristal violet), medii
cu selectivitate medie care inhib multiplicarea enterobacteriilor lactozo-pozitive (ex.
mediul ADCL cu dezoxicolat, citrat i lactoz, mediul Shigella-Salmonella cu sruri
biliare i verde briliant sau mediul XLD cu xiloz, lizin i dezoxicolat, preferat n multe
dintre rile Uniunii Europene) i medii cu selectivitate nalt (ex. mediul Wilson-Blair cu
verde briliant n concentraie crescut).
Caracterele biochimice sunt eseniale pentru identificarea enterobacteriilor. Dup
examinarea caracterelor de cultur (pe mediile selectivo-difereniale se poate identifica i
comportamentul enterobacterian n ceea ce privete fermentarea lactozei), prin repicarea
coloniilor suspecte pe medii potrivite (TSI, MIU / MILF, Simmons etc), n ziua
urmtoare se pot examina diferite caractere biochimice (fermentarea zaharurilor,
evidenierea unui anumit metabolit, metabolizarea unui anumit substrat, utilizarea
citratului ca unic surs de carbon, identificarea unor enzime etc) sau alte caractere
fenotipice (ex. motilitatea). n momentul de fa exist baterii de teste i sisteme
comerciale care permit examinarea unei game extinse de caractere biochimice (ex.
galeriile API). Dorim s menionm c pentru fiecare test fenotipic exist o serie de
variaii care sunt prezentate procentual n tabele special dedicate.
11

Un alt aspect foarte util pentru identificare este reprezentat de studierea caracterelor
antigenice folosind seruri cunoscute (preparate pe animale de laborator), cu ajutorul
diferitelor reacii Ag-Ac. Toate enterobacteriile dein Ag O. Enterobacteriile mobile dein
Ag H. Enterobacteriile capsulate dein Ag K. Salmonella typhi prezint i Ag Vi, Yersinia
pestis prezint Ag F1 etc.
Infeciile enterobacteriene sunt destul de variate. Pot fi localizate la nivel digestiv
(dizenterie i sindroame asemntoare dizenteriei, sindroame asemntoare holerei, toxiinfecii alimentare etc), la nivelul tractului urinar, la nivelul aparatului respirator sau la
nivelul sistemului nervos. Infeciile enterobacteriene pot avea i alte localizri sau pot fi
generalizate (de ex. n febra tifoid, febrele paratifoide, pest).
n majoritatea infeciilor produse de enterobacterii diagnosticul este bacteriologic,
direct. n febra tifoid diagnosticul poate fi att bacteriologic ct i imunologic
(serologic).
Datorit faptului c n multe dintre aceste infecii produsul patologic este reprezentat
de ctre materiile fecale, n continuare vom discuta examenul bacteriologic al materiilor
fecale.
Coprocultura
n multe dintre infeciile produse de enterobacterii, care se manifest prin sindrom
diareic, utilizm coprocultura. n cele ce urmeaz vom discuta coprocultura n general, nu
numai din punctul de vedere al unei infecii enterobacteriene.
Boala diareic acut
Boala diareic acut (BDA) a fost i rmne o entitate patologic foarte rspndit la
nivel mondial. Spre exemplu, n ara noastr n ultimii ani, numrul de cazuri de boli
diareice acute a fost de 85.055 n anul 2000, 81.268 n anul 2001 i respectiv 97.317 n
anul 2002, cu o inciden de 446,5 0/0000 n 2002. n aceeai perioad de timp, n fiecare an
au decedat datorit BDA circa 100 de pacieni.
Sindromul diareic include eliminarea a peste 3 scaune n 24 de ore iar scaunele au
consistena diminuat (pn la emiterea unor scaune apoase, cu pierderea a pn la 20-30
litri / zi n holer). Materiile fecale pot avea aspect patologic (apos, mucos, purulent,
sanguinolent etc), culoare modificat, miros particular etc. De regul sindromul diareic
asociaz i alte semne i simptome digestive (dureri abdominale, tenesme, grea,
vrsturi etc) sau generale (febr, stare general alterat etc). Foarte important i
obligatoriu de reinut este c BDA duce la pierderi de ap i electrolii iar intervenia cea
mai important care trebuie avut n vedere este reechilibrarea hidroelectrolitic.
Ageni etiologici
Boala diareic acut poate fi de etiologie infecioas i neinfecioas. n continuare
vom discuta pe scurt etiologia infecioas n general, nu numai cea bacterian sau
fungic. Este de menionat c marea majoritate a BDA infecioase au etiologie viral.
Etiologia bacterian include:
Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli (EPEC / enteropatogen, ETEC /
enterotoxigen, EHEC / enterohemoragic, EIEC / enteroinvaziv, EAEC / enteroagregant,
DAEC / aderent difuz), Klebsiella spp., alte enterobacterii (Yersinia enterocolitica,
Citrobacter spp., Proteus spp. etc.), Vibrio cholerae i ali vibrioni, ali bacili gram
12

negativi (Aeromonas spp., Alcaligenes spp., Pseudomonas spp., etc.) Bacillus cereus,
Campylobacter jejuni, Clostridium perfringens, Clostridium difficile, Clostridium
botulinum, Staphylococcus aureus etc.
Etiologia fungic include:
Candida albicans (la pacieni cu SIDA) etc
Etiologia parazitar include:
Giardia lamblia, Entamoeba hystolitica i Entamoeba coli, Trichinella spiralis,
Cryptosporidium parvum, Strongyloides stercoralis etc.
Etiologia viral include:
Rotavirusurile, virusurile Norwalk i asemntoare virusurilor Norwalk, calicivirusurile,
astrovirusurile, coronavirusurile, enterovirusurile, adenovirusurile etc.
Gruparea agenilor etiologici n funcie de mecanismul patogenic
Att din punct de vedere diagnostic ct i pentru tratament poate fi important
elucidarea tipului de mecanism implicat. Astfel, BDA ar putea fi produse prin:
- mecanism neinflamator, atunci cnd din punct de vedere microscopic n preparatul ntre
lam i lamel nu se evideniaz leucocite (ex. BDA produse de Vibrio cholerae, ETEC,
Clostridium perfringens, Staphylococcus aureus, Giardia lamblia, rotavirusuri, virusuri
Norwalk,Cryptosporidium parvum etc.)
- mecanism inflamator, atunci cnd din punct de vedere microscopic n preparatul ntre
lam i lamel se evideniaz leucocite polimorfonucleare (ex. BDA produse de Shigella
spp., EIEC, Salmonella enteritidis, Vibrio parahaemolyticum, Entamoeba hystolitica etc.)
- mecanism de penetrare, atunci cnd din punct de vedere microscopic n preparatul
ntre lam i lamel se evideniaz leucocite mononucleare (ex. BDA sau sindrom diareic
produs de Salmonella typhi, Yersinia enterocolitica etc).
Dup cum se poate remarca, simpla recoltare a produsului patologic urmat de
realizarea unui preparat nativ i examinarea microscopic a acestuia pot da informaii
importante cu privire la etiologia probabil precum i atitudinea terapeutic de urmat.
Este evident c ntr-o BDA pentru care agenii etiologici sunt virali sau mecanismul
patogenic include aciunea unei toxine este contraindicat administrarea de antibiotice
sau chimioterapice antibacteriene.
Indicaiile coproculturii n bacteriologie:
- atunci cnd este suspicionat o infecie cu Shigella spp., Vibrio cholerae, E. coli
(tipurile patogene), Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica sau Salmonella spp. n
special la pacieni cu vrste extreme sau imunodepresie
- dup circa 1 sptmn de la debutul febrei tifoide etc.
- atunci cnd BDA prezint riscul extinderii la nivelul unei colectiviti (cree, grdinie,
tabere, uniti de alimentaie public, staii de distribuie a apei potabile etc)
- atunci cnd BDA apare la pacieni care au fost tratai cu antibiotice, iar sindromul
diareic persist i dup ntreruperea antibioticoterapiei
- atunci cnd sindromul diareic persist mai mult de o sptmn sau are loc o recdere
- n scopul verificrii strii de sntate a persoanelor care lucreaz n uniti de
alimentaie public (conform normativelor stabilite de ctre ministerul sntii)
- n scop de cercetare etc.
Recoltarea i transportul materiilor fecale
13

Se vor respecta recomandrile menionate la lp., n special faptul c recoltarea p.p.


trebuie s se realizeze nainte de administrarea de medicamente antimicrobiene. Se pot
recolta i examina:
- scaunul emis spontan reprezint produsul patologic utilizat cel mai frecvent. Defecaia
are loc ntr-un recipient de carton sau ntr-un container din material plastic de unic
ntrebuinare (care poate fi apoi decontaminat i eliminat fr probleme). n acelai timp
efectum i examinarea macroscopic a p.p. din punctul de vedere al mirosului, culorii
sau aspectului. Utilizm pentru prelevare linguria recoltorului alegnd poriuni care
permit cu o mai mare ans izolarea agentului patogen (fragmente mucopurulente,
poriuni cu snge, flocoane riziforme etc) sau poriuni diferite dintr-un scaun n care nu se
remarc aspectele menionate anterior. Prelevm o cantitate de aproximativ 1 gram pe
care o suspensionm n mediul de transport (minim 2 ml n cazul scaunelor apoase).
- tamponul rectal este recomandat n cazul unei infecii cronice cu Shigella spp., atunci
cnd suspicionm portajul de Shigella spp. sau Salmonella spp. Tamponul steril se
introduce cu blndee i se preleveaz secreiile de la nivelul mucoasei rectale, prin rotire,
pentru a recolta material din criptele rectale. Apoi introducem. tamponul n mediul de
transport. Pentru a putea nchide recoltorul, tiem n mod corespunztor tija tamponului.
- sonda Nlaton se poate utiliza atunci cnd urmrim recoltarea p.p. de la nivelul
colonului sigmoid. Introducem cu blndee sonda pn la nivelul dorit (circa 10-12 cm la
copil i respectiv circa 15-20 cm la adult), adaptm la cellalt capt al sondei o sering i
aspirm p.p.de la nivel sigmoidian. Introducem p.p. n mediul de transport.
n cazul n care p.p. nu poate fi prelucrat imediat sau n maxim 1 or, utilizm un
mediu de transport, transportul la rece (+4 C) sau transportul n mediu de transport
meninut la 4 C. Cel mai frecvent utilizm mediul Cary-Blair (vezi capitolul 9). Acest
mediu asigur supravieuirea enterobacteriilor patogene timp de 24-48 de ore, inhibnd n
acelai timp multiplicarea florei de asociaie. Atunci cnd este suspicionat infecia cu
V. cholerae, apa peptonat alcalin servete n acelai timp drept mediu de transport i
mediu de mbogire.
Examinarea materiilor fecale
Materiile fecale sunt examinate macroscopic i microscopic. Din punct de vedere
microscopic, de fiecare dat se vor realiza preparate native (ntre lam i lamel).
Materiile fecale sunt suspensionate ntr-o pictur de lugol sau de albastru de metilen 1%
iar preparatul se va examina iniial cu obiectivul 10x, apoi cu obiectivul 40x. Spre
exemplu, evidenierea a peste 40 PMN / cmp, nsoite de macrofage i hematii, conduce
la suspicionarea unei dizenterii bacteriene. Frotiurile colorate pot fi utile n suspicionarea
diagnosticului de enterocolit cu Campylobacter spp. sau al colitei pseudomembranoase,
postantibioticoterapie.
Cultivarea materiilor fecale
n mod obinuit, pentru cultivare vom utiliza 3 medii diferite, respectiv o eprubet cu
bulion selenit acid de sodiu i 2 plci Petri, una cu mediu cu selectivitate sczut (ex.
Mac Conkey) i alta cu mediu cu selectivitate medie (ex. ADCL sau XLD). Aceste medii
selective sunt n acelai timp i medii difereniale.
Alegem fragmente caracteristice din p.p. (mucus, puroi etc) i nsmnm 2-3 anse
n mediul cu bulion selenit (mediu de mbogire n special pentru Salmonella spp.).
14

Realizm o suspensie omogen n mediul lichid. Prelevm o ans (sau o pictur) din
suspensie i o depunem pe mediul MacConkey.
Modul de nsmnare: ntindem p.p. n striuri paralele pe o jumtate de plac, pn
aproape de marginile plcii fr s le atingem. Fr s sterilizm ansa, atingem ultimile
3-4 striuri i dispersm p.p. n alte striuri paralele, perpendiculare pe primele, pe jumtate
din mediul disponibil, pn aproape de marginile plcii fr s le atingem. Atingnd din
nou ultimele 3-4 striuri, dispersm p.p. n mod similar pe mediul nc nensmnat.
Incubm timp de 18-24 de ore la 35-37 C.
n ziua urmtoare, pornind de la tubul cu bulion selenit nsmnm aa cum am
menionat mai sus o plac cu MacConkey i o plac cu ADCL (sau XLD); incubm
aceste plci timp de 18-24 de ore la 35-37 C. Examinm plcile nsmnate precedent n
vederea selectrii coloniilor suspecte.
Pe mediul MacConkey coloniile lactozo-pozitive au dimensiuni de 1-3 mm, sunt
roii, pot prezenta un halou opalescent, de regul sunt de tip S dar pot fi i de tip M.
Coloniile lactozo-negative au dimensiuni de 1-2 mm, nu sunt colorate, sunt transparente,
de regul sunt de tip S.
Pe mediul ADCL majoritatea bacteriilor lactozo-pozitive sunt inhibate; pot aprea
tardiv colonii de dimensiuni mai mici, roii, de tip S. Coloniile lactozo-negative au
dimensiuni de 1-2 mm, nu sunt colorate, sunt semitransparente, de tip S; dac produc H 2S
centrul coloniei este de culoare neagr.
De regul urmrim apariia coloniilor lactozo-negative, iar pentru etapele de
identificare vom repica (fr a atinge mediul de cultur) 3 colonii n cazul n care
pacientul este copil i 3-5 colonii n cazul n care pacientul este adult. n cazul n care nu
exist colonii lactozo-negative, pentru identificare vom repica (fr s atingem mediul de
cultur) 10 colonii la copil i respectiv 10 colonii la adult (dac se consider c
identificarea este necesar, de ex. n izbucniri epidemice de BDA).
Aadar, dup apariia coloniilor izolate pe mediile selectivo-difereniale trecem la
identificarea speciilor implicate patogenic pe baza caracterelor morfo-tinctoriale, de
cultur, biochimice, antigenice, de patogenitate, pe baza sensibilitii la bacteriofagi i
eventual pe baza unor caractere moleculare. Pentru interpretare vom utiliza diferitele
tabele disponibile n tratatele de specialitate sau recomandrile productorilor n cazul
utilizrii unor sisteme comerciale de diagnostic.
Pentru tulpinile considerate a fi implicate patogenic vom realiza studiul sensibilitii
la antibiotice i chimioterapice, de regul prin metode difuzimetrice (antibiograma
difuzimetric standardizat, comparativ, E test).

BIBLIOGRAFIE
1. Popa G.L., Popa M.I., Genul Salmonella, n Popa M.I. (coord.), Microbiologie Medical, vol 1
i 2 - curs UMF Carol Davila, 2010.
2. Popa M.I., Popa G.L., Genul Shigella, n Popa M.I. (coord.), Microbiologie Medical, vol 1 i
2 - curs UMF Carol Davila, 2010.

15