Sunteți pe pagina 1din 52

UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

3
Catabolismul principalelor tipuri de biomolecule (proteine, polizaharide si
lipide) parcurge in celulele aerobe 4 faze

I hidroliza la unitati de baza:


aminoacizi, monozaharide, acizi
grasi - in citosol

II

III

II scindarea unitatilor de baza


la acetil CoA - in mitocondrie
IV
III oxidarea gruparii acetil la 2
moli de CO2 in ciclul Krebs (in
prezenta NAD+, FAD) in
mitocondrie

IV - refacerea NADH si FADH2 in cadrul catenei transportoare de


electroni mitocondriale (CTEM) proces exergonic cuplat cu
fosforilarea ADP (fosforilarea oxidativa)

zaharoza
lactoza

fructoza
galactoza

Catabolismul glucidelor
Glicogen
glicogenoliza

glucoza

ATP

Hexokinaza/
glucokinaza

Glucozo P

suntul
pentozo P

+
NADPH

glicoliza

Piruvat
Alcool DHaza

Pentozo P

Lactat DHaza

Lactat

Complexul piruvat
dehidrogenazei
Acetil CoA

Etanol
CO2

Ciclul Krebs +
fosforilarea oxidativa
CO2, H2O, ATP

GLICOLIZA
Calea Embden Mayerhof Parnas 10-11 etape enzimatice
Cea mai veche cale metabolica legatura cu fermentatiile
In citoplasma animalelor, plantelor, majoritatii bacteriilor

Viteza maxima in celulele musculare, unde furnizeaza energie (ATP) pt


contractia musculara
Glicoliza aeroba
C6H12O6 + 2NAD+ + 2 (ADP + Pi)

2 PIRUVAT + 2 NADH+ 2 ATP

Glicoliza anaeroba
C6H12O6 + 2 (ADP + Pi)

LACTAT + 2 ATP

Prima faza a glicolizei C6 2 C3 consumatoare de 2 moli ATP cuprinde


5 etape enzimatice:
Glucoza
ATP
1

Hexokinaza/
glucokinaza
Glucozo 6-P

ADP

C6H12O6 + 2 ATP

fosfoglucomutaza

2 GAP + 2 ADP

Fructozo 6-P
3

fosfofructokinaza

ATP
ADP

Enzimele reglatoare catalizeaza


reactii ireversibile 1 si 3

Fructozo 1,6-bisP
4

aldolaza

Dihidroxiaceton P

Gliceraldehid P

DHAP

GAP

96 %

fosfotriozoizomeraza

4%

A doua faza a glicolizei este formatoare de ATP


Coeficienti stoichiometrici X 2 deoarece C6
Reactia 6

GAP

H3PO4

NAD+

R-CHO + NAD+ + H2O R-COOH + NADH+H+

GAP DHaza

NADH

2 C3

Go= 10,3 kcal/mol

1,3-difosfoglicerat

R-COOH + H3PO4 R-CO~OPO3H2 + H2O

1,3-DPG

Go= + 11,8 kcal/mol

ADP

Fosfoglicerat kinaza

ATP

3-fosfoglicerat

Suma a + b

3-PG
8

Go= +1,5 kcal/mol


aproape 0, reactie reversibila

Fosfoglicerat mutaza
2-fosfoglicerat
2-PG

Enolaza

H2O

ADP ATP

Fosfoenol piruvat
PEP

Piruvat
Piruvat kinaza

10

a
b

Suma reactiilor 1 - 6
Glucoza + 2 NAD+ + 2 ATP

Suma reactiilor 6 + 7

2 x 1,3-DPG + 2 NADH+2H+ + 2 ADP + 2Pi

reprezinta o fosforilare oxidativa la nivel de substrat

R-CHO + NAD+ + Pi + ADP


Componenta exergonica

R-COOH + NADH+H+ + ATP


Componenta endergonica

Bilantul total al glicolizei


C6H12O6 + 2 NAD+ + 2 (ADP + Pi)
Etapa exergonica: C6H12O6 + 2 NAD+

2 PIRUVAT + 2 NADH+2H+ + 2 ATP


2 PIRUVAT + 2 NADH+2H+
Go= 47 kcal/mol

Etapa endergonica: 2 ADP + 2 Pi

2 ATP + 2 H2O Go= + 14,6 kcal/mol

Gototal = 47 + 14,6= 32,4 kcal/mol reactie ireversibila


Randamentul glicolizei: = 14,6/47 x 100 = 31 % tinand seama de valorile Go
In realitate randamentul glicolizei ~ 53 % (in functie de valorile G)

10
Reglarea glicolizei
1) La nivelul transportorilor glucozei GLUT
2) La nivelul hexokinazei
3) La nivelul fosfofructokinazei
4) La nivelul piruvat kinazei
1) La nivelul transportorilor GLUT
Glucoza din sange patrunde in celula prin
difuzie facilitata de proteinele transportor
GLUT- codificate de gene distincte, exprimati intr-o maniera tesut-specifica
Glucoza este transportata in sensul gradientului
de concentratie, nu nece
sita energie (ATP)

11

Schema structurii transportorilor GLUT catena polipeptidica


de ~ 500 resturi de aminoacizi, 12
segmente de -helix
sGLUT 1, GLUT 1, GLUT 2,
GLUT 3, GLUT 4, GLUT 5

sGLUT 1 exprimat majoritar in mucoasa intestinala si tubulii renali, cotransporta o molecula de Glc sau Gal impreuna cu 2 ioni Na+. Nu transporta
Fru
GLUT 1 exprimat in multe tipuri celulare (creier, eritrocite, celule endoteliale,
testuri fetale); transporta Glc (cu o inalta afinitate) si Gal. Nu transporta Fru

GLUT 2 exprimat de celule pancreatice, hepatocite, etc; are o mica


afinitate si inalta capacitate de transport; KM ~ 15-20 mM; functioneaza ca
un sensor al glicemiei in celulele pancreatice; transporta Glc, Gal si Fru
Viteza de intrare a Glc proportionala cu nivelul glicemiei
GLUT 4 exprimat de celule musculare si adipocite, sensibil la insulina,
inalta afinitate pentru Glc; KM 5 mM; creste viteza preluarii glucozei
Cand nivelul insulinei in sange
creste, se leaga la IR care induce
translocarea GLUT 4 (si
fosforilarea) din citosol pe
membrana favorizand preluarea
de glucoza de catre celula din
sange (efect hipoglicemiant)
Cand nivelul insulinei scade
transportorii GLUT 4 sunt
translocati de la membrana in
citoplasma

12

A. Transportul glucozei insensibil la insulina (GLUT 1 sau sGLUT1


GLUCOZA

eritrocit

creier
ficat
rinichi

B. Transportul glucozei sensibil la insulina (GLUT-4)

+
muschi
cord

INSULINA
GLUCOZA

+
adipocit

13

Controlul glicolizei la nivelul


enzimelor reglatoare

14

2) Reglarea glicolizei la nivelul hexokinazei


hexokinaza/glucokinaza
Glucoza + ATP

Glucozo 6-P + ADP

Hexokinaza

Glucokinaza

D-Glc,Fru, Man, GlcNH2

D-Glc

Enzima reglatoare

Enzima comuna

Inhibata de Glc-6-P

Neinhibata

+ Muschi

Absenta in muschi

+ Ficat

+++ Ficat

KM 1 x 10-4 M (Glc)

KM 1 x 10-2 M (Glc)

In sange [Glc] 5 mM hexokinaza complet saturata;


cand [Glc] creste - intervine glucokinaza hepatica
In diabet glucokinaza insuficienta!!!

15

Hexokinaza enzima musculara, implicata in glicoliza aeroba sau anaeroba


Glucokinaza enzima implicata in sinteza glicogenului in muschi sau ficat,
atunci cand glicemia este crescuta
Hexokinaza este inhibata de fondul metabolic de glucozo 6-P existent in
muschi; glicoliza de la glicogen fiind mai avantajoasa energetic
glicogen

Glc-6-P

Piruvat

Lactat
16

17

3) Reglarea glicolizei la nivelul fosfofructokinazei


ATP

PFK-2

ADP

La nivelul ficatului, fosfofructokinaza


1 (PFK-1) este:
i) Inhibata de [ATP]mari

hipoglicemie

Fru-6-P

Fru-2,6 P2

ATP se leaga la un situs reglator, diferit


de centru catalitic activ, inhibitia este
reversata de AMP
[ATP]/[AMP] scazut stimuleaza PFK-1,
stimuleaza glicoliza

Pi

ii) Inhibata de [H+] crescuta, formarea excesva de lactat scade pH


sangvin produce acidoza

PS
H2O

PS-fosfataza specifica
iii) Inhibata de [citrat] mari

iv) Activata de Fru-2,6-bis fosfat, creste afinitatea PFK-1 pentru Fru-6-P, scade
efectul inhibitor al ATP, deplaseaza echilibrul T
R
1
Domeniu reglator

32

470

250
PFK2

PS

Enzima bifunctionala
de 55 kDa, cu ambele
activitati PFK2 si PS

Glucagonul (ficat) sau epinefrina (muschi) cresc nivelul cAMP, activeaza


PKA. In ficat aceasta conduce la scaderea [Fru-2,6-P2] si inhiba glicoliza.

PFK-2!
Fru-6-P"
PFK-1"

F-2,6-P2!

+!

Fru-1,6-P2"

glicoliza"

18

In muschi, epinefrina are un efect opus


activeaza glicoliza!!!!!!

Enzima bifunctionala este fosforilata de PKA la nivelul unui rest Ser din domeniul
reglator:
activitatea PS creste
activitatea PFK-2 scade
Hipoglicemie

glucagon

cAMP

PKA

Enzima bifunctionala

Fru 2,6 bis P

Fru 6-P

Scade glicoliza
Hiperglicemie

Insulina scade
nivelul cAMP,
creste nivelul
Fru-2,6 P2.
stimuleaza
glicoliza

Creste glicoliza
19

La nivelul muschilor, fosfofructokinaza este inhibata de concentratii mari de:


ATP, citrat, acizi grasi superiori, H+

4) Reglarea glicolizei la nivelul piruvat kinazei (PyrK)


Constructii tetramerice din monomeri L (liver) ce predomina in ficat, M
(muscle) ce predomina in muschi si A (other tissues)
Hipoglicemie

Glucagon

cAMP

PyrK (L)-OH

PKA

inactiveaza

PyrK (L)-OP

PyrK (L)-OP

ADP
PKA
ATP

PyrK (L)-OH

PEP + ADP

+
20

Fru-1,6-bis P

H2O
Pi
PYR + ATP

ATP, ALA

Efectori alosterici

21

Transformarile piruvatului

1) Transformarea piruvatului in lactat

22

Reactia 11 a glicolizei, catalizata de lactat dehidrogenaza


Izoenzime

Piruvat

L-lactat

Cord Lac
Pyr
H4
Muschi Pyr
M4

Acetil CoA
Lac

Cand ecuatia totala a glicolizei devine:


Glucoza + 2 ADP + 2 P1

2 Lactat + 2 ATP

In ecuatie nu mai intervine NAD+/NADH datorita cuplarii reactiilor 6-11 care


permite refacerea NAD+
In lipsa etapei 11 a glicolizei refacerea NAD+ se realizeaza prin oxidarea
NADH in cadrul CTEM

23
Glucoza

Fermentatia
lactica

Glc-6-P
Fru-6-P
Fru-1,6-P2

DHAP

GAP
NAD+

Lactat

Etanol
11

NADH+
1,3-DPG

3-PG

11
Pyr

2-PG

12

PEP

Acetaldehida

Fermentatia alcoolica

24
Muschi
Contractia musculara necesita mult ATP
care sustine contractia musculara
Lactatul format poate produce dureri
musculare, poate fi transportat in ficat
unde participa la glucogeogeneza
Bacterii lactice
Realizeaza fermentatia homolactica

2) Transformarea piruvatului in etanol

11

25

12

Ecuatia totala a glicolizei este:


C6H12O6 + 2 (ADP + Pi)

2 Etanol + 2 CO2 + 2 ATP

In ecuatie nu mai intervine NAD+/NADH datorita cuplarii reactiilor 6-12


care permite refacerea NAD+
Piruvat decarboxilaza are tiamin pirofosfatul (TPP) ca grupare prostetica
Alte TPP enzime:
Transcetolaza
Componenta A a
piruvat dehidrogenazei

Piruvat decarboxilaza

26

- prezenta la microorganisme
- absenta la om si animale
Alcool dehidrogenaza prezenta la
- drojdii 4

1 Zn2+/mer

- om (ficat) 2

2 Zn2+/mer metabolizeaza alcoolul ingerat

NAD+ NADH

CH3-CH2-OH

NAD NADH

CH3-CHO

ATP

AMP,Pi

CH3-COOH

alcool

aldehid

dehidrogenaza

dehidrogenaza

CO2,H2O,
ATP

CH3-CO~SCoA

acetil CoA
sintetaza

Grasimi

3. Transformarea piruvatului in acetil CoA

27

v.p.20

piruvat

NAD+ CoASH

Complexul piruvat
dehidrogenazei

NADH
Acetil CoA

Va fi discutat ulterior !

CO2

INTRAREA OLIGOZAHARIDELOR, FRUCTOZEI SI


GALACTOZEI IN GLICOLIZA

Invertaza-zaharaza-sucraza

lactaza- galactozidaza

28

29
Fructoza
Adipocit
[Fru] >>> [Glc]

Ficat

ATP

ATP
hexokinaza

[Glc] >>> [Fru]

fructokinaza

Fru 1-P

Fru 6-P

Fru 1-P aldolaza (tip B)

Gliceraldehida

DHAP

ATP

GAP

Gliceraldehid
kinaza

30
galactokinaza

Gal + ATP

Gal-1-P + ADP
uridilil transferaza

Gal 1-P + UDP-Glc

Glc 1-P + UDP-Gal

4-epimeraza

UDP-Gal

UDP-Glc

Fosfoglucomutaza

Glc 1-P
Gal + ATP

Glc 6-P
Glc 6-P + ADP

31

32

Intoleranta la fructoza

Maladie genetica, deficienta in aldolaza tip B, acumulari de Fru 1-P,


bolnavii nu suporta glucide, Fru nu alimenteaza glicoliza
Galactozemie
Maladie genetica, poate lipsi orice enzima din calea de alimentare a
glicolizei cu Gal, mai frecvent uridilil transferaza, Gal nu alimenteaza
glicoliza
Acumularea de Gal toxica
aldozo reductaza

Galactoza

galactitol (toxic, acumulari in ochi, cataracta)

Simptome
Cataracta, crestere lenta, retardare mentala, insuficienta hepatica, voma,
diaree, icter, moarte
Se impune scoaterea Gal (laptelui) din dieta

UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI


CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

Glicogenul
Resturi de -glucoza
Legaturi -1,4 si -1,6
glucozidice
O ramificare la 8-10
resturi glucoza legate
-1,4
Forma de stocare a energiei
metabolice
Structura ramificata care expune
capetele nereducatoare la nivelul
carora actioneaza enzimele
metabolismului glicogenului
Muschi: 1-2 % din greutate
Ficatul: 10 % din greutate

Glicogenul organizat in granule citoplasmatice cu un diametru de 100-400 ,


pe care sunt sorbite enzimele si proteinele neenzimatice implicate in
metabolismul glicogenului.
Dupa masa >10% greutatea ficatul reprezinta glicogen

7
Scindeaza legaturi -1,4
Glicogen fosforilaza

Fosforoliza
Stopeaza actiunea la 5
resturi inaintea ramificatiei

ENZIMELE
GLICOGENOLIZEI

Scindeza legaturi -1,6


Enzima de
deramificare

fosfoglucomutaza

Are 2 activitati catalitice:


hidrolazica si transferazica

Catalizeaza izomerizarea
Glc-1-P Glc-6-P

8
Glicogenoliza in muschi si ficat

Muschi

Glicogen

Glc 1-P

Glc 6-P

Alte tesuturi

Ficat
Glicogen

ATP
contractie

Glicoliza

Glc 1-P

Glc 6-P

Glucoza

Reglarea glicemiei

Glucoza

Glucoza
Insulina

Lipide
Lactat

CO2 + H2O
Fat

Lactat

Glicogen

Glicogen fosforilaza (GP)

Actioneaza la capatul nereducator al


moleculei glicogenului
Reactie reversibila in vitro
Fosforoliza ireversibila in vivo, evita
consumul de energie (ATP), celula
capteaza Glc 1-P
GP din muschii scheletici are structura
2, M 97 kDa, 1 mol PALP/subunitate,
unde PALP catalizator acido-bazic

Glicogen fosforilaza exista in doua forme convertibile a si b

In situsul catalitic
activ este un rest
de Ser per
fiecare monomer

2ATP

2 ADP

Fosforilaza kinaza

GPa (Ser-O-P)

GPb (Ser-OH)
Putin activa

Total activa

AMP
Activator alosteric

2 Pi

2 H2O

Fosfoprotein
fosfataza 1 (PP 1)

10

11
Reglarea activitatii glicogen
fosforilazei
In cazul GP din muschi
Concentratii mari de ATP si
Glucozo 6-P favorizeaza
trecerea GPb intr-o forma total
inactiva T (tense)
Concentratii mari de AMP
stare energetica mica
favorizeaza trecerea GPb
intr-o forma partial activa R
(relaxed)
Activarea GPb de catre AMP are o importanta fiziologica in conditii cu pO2 mici
In cazul GP din ficat
AMP nu activeaza GPb
niveluri mari de glucoza favorizeaza inactivarea GPa, deplasand echilibrul R!T

Fosforilaza kinaza
Fosforileaza Ser-14 din GP si activeaza GPb

12
GPa

In muschii scheletici, enzima are o structura ()4 si are 1200 kDa

- sunt subunitati tinta pentru PKA


- subunitatea catalitica
- calmodulina, se leaga tranzitoriu la enzima si-I confera sensibilitate la Ca2+

Fosforilaza kinaza este activata partial de Ca2+ si total prin fosforilare (PKA)
Impuls nervos

cAMP

Ca2+
Ca2+

Fosf kinaza
inactiva

Fosf kinaza
Partial activa

Hormon

PKA
Fosf kinaza
Total activa

13

Reglarea glicogenolizei la nivelul fosfoprotein fosfatazei 1

14

Exista mai multe Ser/Thr


fosfoprotein fosfataze: PP-1,
PP-2A, PP-2B si PP-2C care
se deosebesc prin specificitate si efectori
PP-1 are:
o subunitate catalitica PP-1c
(37 kDa) si
o subunitate reglatoare
PP-1G (160 kDa)
PP-1G (glycogen binding subunit)creste capacitatea de legare la glicogen,
creste capacitatea catalitica a subunitatii PP-1c
PKA fosforileaza PP-1G previne asocierea cu PP-1c inhiba activitatea PP-1

Epinefrina (adrenalina) semnalizeaza cresterea fluxului glicogenolizei prin


inhibitia PP-1 (doua mecanisme)

Al doilea mecanism:
PKA fosforileaza un
inhibitor al PP-1,
activandu-l.
I-P creste gradul de
inhibitie al PP-1

15

Insulina inhiba glicogenoliza actionand tot asupra PP-1

16

Insulina semnalizeaza la nivelul celulelor insulin sensibile care contin


receptorul IR
IR activat are activitate tirozin kinazica si induce activarea unei protein kinaze
insulin-sensibile care fosforileaza PP-1G la un alt situs, activand PP-1
Insulina stimuleaza reactiile de defosforilare ale glicogen fosforilazei a si
fosforilazei kinazei a

Enzima de deramificare

17

o singura catena polipeptidica de 160 kDa, cu dubla


specificitate: transferaza si -glucozidaza

Actiunea fosforilazei este


stopata cu 5 resturi inaintea
unui punct de ramificatie

Dextrina limita este substratul


transferazei catalizeaza
transferul unui grup de 3
resturi Glc de pe un brat pe
altul

-1,6 glucozidaza scindeaza


legatura -1,6-glucozidazica
conducand la o structura
lineara care poate fi metabolizata total de fosforilaza

Actiunea -1,6 glucozidazica

18

Fosfoglucomutaza

Glicogenoliza este o cale catabolica de scindare a glicogenului la glucozo 6-P

Amplificarea semnalului in
cascada de activare a
glicogen fosforilazei

20