Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Teza Rezumat PDF
Teza Rezumat PDF
FACULTATEA DE BIOLOGIE
TEZA DE DOCTORAT
REZUMAT
RSPUNSUL GLIAL LA LITIU I APA MINERAL
LITINIFER MARIA DE LA MALNA-BI
RELEVANA ACESTUIA N TERAPIA MANIACO-DEPRESIEI
Conductor tiinific:
Prof. Dr. Lotus Meter
Doctorand:
Constantin Munteanu
Bucureti
2009
Constantin Munteanu
2009
INTRODUCERE........................................................................................................................................................ ......................................3
TULBURAREA BIPOLAR................................................................................................................................................................................14
Introducere ......................................................................................................................................................................................................... 15
Definiia bolii ..................................................................................................................................................................................................... 16
Neurobiologia afeciunii bipolare ....................................................................................................................................................................... 21
Maniaco-depresia i semnalizarea intracelular ................................................................................................................................................. 30
Aspecte genetice ale maniaco depresiei........................................................................................................................................................... 31
Ritmurile circadiene i tulburarea bipolar......................................................................................................................................................... 34
Modelarea matematic a psihozei bipolare II printr-un oscilator armonic.......................................................................................................... 36
Diagnostic........................................................................................................................................................................................................... 38
Evoluia clinc a maniaco-depresiei ................................................................................................................................................................... 41
Morbiditate, mortalitate i comorbiditate ........................................................................................................................................................... 42
Tratament i profilaxie ....................................................................................................................................................................................... 43
LITIU ................................................................................................................................................................................................................. 44
Introducere ......................................................................................................................................................................................................... 45
Proprietile fizice i chimice ale ionilor de litiu ................................................................................................................................................ 47
Litiul ca element secundar n organism .............................................................................................................................................................. 50
Transportul ionilor de litiu prin membrana celular. .......................................................................................................................................... 53
Litiul i activitatea electric a membranei celulare............................................................................................................................................. 56
Litiul i ciclul fosfo-inositidic ............................................................................................................................................................................ 58
Litiul i GSK-3 ................................................................................................................................................................................................. 62
Aciunea litiului asupra altor ci de semnalizare ................................................................................................................................................ 65
Implicarea litiului n neuroprotecie. .................................................................................................................................................................. 66
Litiul i neurotransmitorii ................................................................................................................................................................................ 67
Efectele litiului n embriogenez. ....................................................................................................................................................................... 68
Influena litiului asupra ritmului circadian ......................................................................................................................................................... 69
Litiul i expresia genic...................................................................................................................................................................................... 73
Proprieti clinice ale litiului .............................................................................................................................................................................. 77
Efecte secundare adverse ale litiului................................................................................................................................................................... 82
CELULA GLIAL ............................................................................................................................................................................................ 83
Introducere ......................................................................................................................................................................................................... 84
Caracterizarea celulelor gliale ............................................................................................................................................................................ 85
APA MINERAL LITINIFER MARIA ......................................................................................................................................................... 92
MATERIALE I METODE ............................................................................................................................................................................... 97
Determinarea proprietilor chimice i fizice ale apei minerale............................................................................................................................98
Cultura primar de celule gliale........................................................................................................................................................................ 101
Tratamentul cu clorur de litiu ......................................................................................................................................................................... 101
Testarea apelor minerale litinifere Maria de la Malna-Bi.............................................................................................................................. 101
Obinerea preparatului MARIASOL ................................................................................................................................................................ 102
Tratamentul culturilor de celule gliale cu preparatul MARIASOL................................................................................................................... 102
Microscopia n contrast de faz ........................................................................................................................................................................ 103
Coloraia May-Grunwald-Giemsa i coloraia cu hematoxilin-eozin............................................................................................................ 103
Evidenierea imunohistochimic a proteinelor (Van Noorden,1986)................................................................................................................ 104
Dozarea proteinei celulare cu Amido-black (Sheffield et all 1987).................................................................................................................. 106
Dozarea proteinelor prin Metoda Bradford....................................................................................................................................................... 107
Analize biochimice........................................................................................................................................................................................... 108
Analiza statistic............................................................................................................................................................................................... 111
Electroforeza SDS-PAGE................................................................................................................................................................................. 111
Western blotting ............................................................................................................................................................................................... 112
REZULTATE I DISCUII ............................................................................................................................................................................ 114
Obinerea, cultivarea i caracterizarea morfologic a culturilor de celule gliale .............................................................................................. 115
Efectele litiului asupra morfologiei culturilor de celule gliale.......................................................................................................................... 138
Efectele apei minerale MARIA asupra morfologiei culturilor de celule gliale................................................................................................. 161
Efectele preparatului MARIASOL asupra morfologiei culturilor de celule gliale..............................................................................................195
Analize biochimice ale culturilor de celule gliale tratate cu apa minerala MARIA, litiu i soluii saline de diferite concentraii .................... 225
Analiza profilului electroforetic al celulelor gliale dup tratament................................................................................................................... 242
Modificri induse de litiu i apa mineral MARIA asupra expresiei lamininei ................................................................................................ 265
Modificrile induse de litiu i apa MARIA asupra expresiei vimentinei .......................................................................................................... 270
Modificrile induse de litiu i apa MARIA asupra expresiei SHIP2 ................................................................................................................ 276
Modificrile induse de litiu i apa MARIA asupra expresiei GFAP................................................................................................................. 281
Modificrile induse de litiu i apa MARIA asupra expresiei GSK-3 .............................................................................................................. 298
Tratamentul cu litiu i apa mineral MARIA a culturii de celule gliale modificata patologic prin ritmicitate metabolic indus.....................309
CONCLUZII .................................................................................................................................................................................................... 330
BIBLIOGRAFIE................................................................................................................................................................................................ .333
2009
Constantin Munteanu
INTRODUCERE
Litiul strnete un deosebit interes tiinific pentru c, dei are o structur att de simpl, o
chimie uor de analizat i proprieti fizice bine stabilite, pleiada de efecte asupra sistemelor
biologice prin influenarea numeroaselor procese celulare i moleculare i mecanismul su de
aciune nc neelucidat genereaz un mister pe care tiina modern ncearc s l descifreze.
Observaia c litiul poate fi gsit n apele minerale utilizate n nsntoire a dus la ideea c
litiul ar putea fi responsabil de vindecarea celor ce utilizau aceste ape (Fieve, 1984). Rspndirea
larg i comercializarea haotic a srurilor de litiu n poiuni i ape minerale, mai ntotdeauna la
concentraii neadecvate, pentru o varietate de boli, au contribuit la deziluzia general asupra
ipotezelor medicale empirice privind rolul terapeutic al litiului (Lenox i Watson, 1994).
Srurile de litiu au fost folosite prima dat terapeutic n 1850, n ameliorarea simptomelor
gutei, reumatismului, litiazei renale. n 1949, Cade are meritul de a fi descoperit efectul sedativ al
srurilor de litiu n starea de agitaie maniacal, dar terapia este nsoit de frecvente cazuri de
intoxicaie. n perioada anilor 60 s-a artat c litiul previne recurenele att maniacale ct i
depresive. Acest efect profilactic a fost mai nti demonstrat ntr-un studiu deschis, utiliznd
metoda oglinzii, i mai apoi (dup 1970) confirmat printr-un numr de studii controlate placebo
- dublu orb. Profilaxia litiului a fost similar eficace la pacienii bipolari i unipolari. n 1967, se
determina valoarea terapeutic a litemiei, situat n intervalul: 0,5-1,5 mEq/l.
Studii in vivo i in vitro au demonstrat c litiul exercit multiple efecte asupra semnalizrii
receptor mediate prin neurotransmitori, transportului ionic, cascadelor de semnalizare, reglrii
hormonale, ritmicitii circadiane i expresiei genice (Cyrus et all, 2006).
Din pcate, mecanismele moleculare responsabile pentru toate aceste efecte sunt nc un
subiect de dezbatere. Mecanismele biochimice ale aciunii litiului apar ca fiind multifactoriale i
inter-corelate cu funcionarea mai multor enzime, hormoni i vitamine, ca i cu factori de cretere
i transformare (Schrauzer, 2002).
MANIACO DEPRESIA
Afeciunea bipolara este o afeciune psihiatric sever, comuna, caracterizat prin asocierea
unor episoade depresive cu episoade recurente maniacale sau mixte. Simptome cognitive,
comportamentale i psihice apar ntotdeauna n timpul episoadelor afective, iar rata de suicid n
afeciunea bipolar este printre cele mai ridicate dintre toate bolile psihiatrice.
Manifestrile comportamentale i fiziologice ale tulburrilor bipolare sunt complexe i
trebuie privite nu numai din perspectiva schimbrilor de dispoziie ale pacienilor, dar i din
prisma constelaiei de simptome (manifestri) neurovegetative psihomotorii. Pato-fiziologia este
cu certitudine mediat de o vast reea de interconexiuni ale circuitelor neuronale permise de
neurotransmitori de la nivel limbic, striatal i fronto-cortical, i din acest punct de vedere,
interaciunea sistemelor de neurotransmitori colinergici, catecolaminergici i serotoninergici
reprezint un candiat sustenabil pentru investigaii.
O adevrat nelegere a tulburrilor bipolare trebuie s conceptualizeze neurobiologia
acestora la diferite nivele fiziologice: molecular, celular, sistemic i comportamental.
n general, orice leziune a creierului este, mai degrab, determinant pentru inducerea unei
depresii, dar leziuni care induc mania se produc frecvent n lobii temporal i frontal, iar
subcortical, la nivel talamic i caudat.
Mai muli cercettori au sugerat c pacienii cu tulburri afective au ventriculi cerebrali
mai mari dect n cazurile normale, un aspect mult mai evident la pacienii cu schizofrenie.
Mrirea ventricular este o caracteristic a pierderilor celulare, aa cum ar fi neurodegenerarea
observat n cazul maladiei Alzheimer, sau alterri ale circuitelor neuronale.
3
Constantin Munteanu
2009
2009
Constantin Munteanu
Constantin Munteanu
2009
Mecanismul molecular de aciune al litiului nu este cunoscut. Exist mai multe ipoteze
privind aciunea litiului la nivel molecular. Fiecare ipotez implic o enzim int, asupra creia
litiul exercit o aciune direct. Aceste enzime sunt exprimate pe suprafee ntinse, folosesc un ion
metalic pentru cataliz i sunt inhibate de ctre litiu ntr-o manier necompetitiv prin nlocuirea
unui cation bivalent (Klei i Phiel, 2001).
Una dintre enzimele int este inozitol monofosfataza. Aceast enzima este implicat n
regenerarea inozitolului (Klein i Phiel, 2001).
Monofosfataza ocup o poziie cheie n mecanismul homeostatic al inozitolului deoarece se
afl la confluena a dou ci distincte implicate n meninerea nivelelor intracelulare de inozitol:
refacerea inozitolului datorit scindrii activate a inozitidelor i o cale separat pentru sinteza de
novo a inozitolului din glucoz (Fig. 2).
Srurile de litiu inhib necompetitiv enzimele ceea ce nseamn c se leag numai de
complexul enzim-substrat (Berridge et all, 1989).
Tratamentul cu litiu produce schimbri similare activrii ectopice a cii de semnalizare
Wnt (Klein i Melton, 1996; Klein i al., 1997; Klein i Phiel, 2001). Enzima considerat ca int a
aciunii litiului este glicogen sintetaz-kinaza 3 (GSK-3). Litiul inhib direct enzima in vivo i in
vitro.
Calea de semnalizare Wnt este implicat n formarea mezodermului la vertebrate, inducia
neural i n modelul de formare al membrelor. Componentele cii de semnalizare sunt: ligandul
Wnt, receptorul Frizzled i mediatorii intracelulari: dishevelled, GSK-3 i -catenin (Hedgepeth
et all, 1997).
Litiul i realizeaz funcia antiapoptotic prin intermediul cii de semnalizare mediat de
protein Kinaza B (Akt). Akt este o serin-treonin kinaz i o proto-oncogen ce prezint un
domeniu de legare a fosfolipidelor utilizat pentru ancorarea acestora la membrana plasmatic.
Ritmuri circadiene (zilnice) exist la toate eukariotele i sunt dirijate de oscilatori biologici
endogeni, auto-ntreinui; n absena unor intervenii de timp externe, ritmul se va derula cu o
perioad de aproape 24 h. Perioada circadian a activitii locomotorii a mamiferelor este
controlat de un ceas circadian localizat n nucleul suprachiasmatic hipotalamic. n condiii de
sincronizare, toate ritmurile circadiene au periodicitate identic dar au amplitudini i peak-uri de
timp diferite (acrofaze).
Tratamentul cronic (dar nu i acut) cu litiu prelungete perioada de oscilaie la aproape toate
sisteme biologice studiate, inclusiv specia uman. Efectele litiului n condiii de sincronizare sunt
specific variabile, cu ntrzieri sau avansuri semnificative ale fazelor. Efectele depind de asemenea
de momentul aplicaiei sale, astfel, administrarea hidroxibutiratului de litiului seara timp de 10 zile
stabilizeaz ritmurile circadiene la obolan, n contrast cu o administrare n cursul dimineii (
Ikonomov i Manji, 1999).
Baza biochimic pentru ritmicitatea circadian nu a fost nc descris pentru orice organism,
i nici nu s-au gsit explicaii pentru mecanismul prin care oscilatorul primete informaii din
mediu prin semnalul luminos albastru.
Metabolismul fosfo inositolic a fost propus ca o componenta potenial att a oscilatorului
circadian ct i a foto-transduciei luminii albastre (Lakin-Thomas, 1993).
Sindromul maniaco-depresiv i durerea de cap cluster sunt tulburri nervoase periodice;
exist dovezi care leag litiul i de iniierea altor procese ritmice normale.
Comportarea organismelor uni-i pluricelulare este corelat cu funcionarea ceasurilor
biologice intrinseci. ntr-adevr, aciunile litiului n schimbarea frecvenelor de oscilare a
sistemelor fiziologice sugereaz c ciclul fosfoinositidic este parte a mecanismului de reglare a
ceasurilor biologice (Berridge et all, 1989).
2009
Constantin Munteanu
CELULA GLIAL
Proliferarea celular este un proces cheie n timpul dezvoltrii neurale i de asemenea joac
un rol important n rspunsul regenerativ al esutului nervos lezat.
n timpul embriogenezei, proliferarea glioblatilor i diferenierea lor n cteva tipuri de
celule gliale pare a fi strns coordonat cu dezvoltarea neuronilor. Astroglia direcioneaz
migrarea i creterea neuronilor spre inte i determin ce tip de neuron va deveni celul cerebral
neangajat. n timpul dezvoltrii postnatale timpurii a creierului de roztor, proliferarea glial
continu la un nivel semnificativ dup ce proliferarea neuronal a fost stopat.
La organismele mature, dou tipuri de glie, celulele Schwann din sistemul nervos periferic i
oligodendrocitele din creier i mduva spinrii produc tecile de mielin care nconjur neuronii i
permit propagarea rapid a impulsului electric. Alt tip de glie, microglia servete ca celul imun a
creierului. Aceste celule sunt parteneri intimi cu neuronii din vecintate asigurnd nutrienii
cruciali pentru sntatea neuronilor i ajut la transmisia semnalelor neuronale prin ndeprtarea
ionilor i neurotransmitorilor din spaiul sinaptic (Aschner et all, 1999).
Celulele gliale formeaz majoritatea elementelor celulare din sistemul nervos. Aceste celule
se mpart n 3 grupe care au funcii specifice diferite n creier:
1) astrocitele care formeaz o reea de filamente n creier, particip la formarea barierei
hematoencefalice i reglez mediul intern;
2) oligodendrocitele, celule formatoare de mielin;
1) celulele microgliale (denumite de ali autori mezoglia sau celule Hortega) care sunt
celule imunoefectoare intrinseci ale creierului (Alarcon et all, 2005).
APA MINERAL LITINIFER MARIA
factor natural terapeutic
Apa mineral medicinal cunoscut sub denumirea Maria este mbuteliat n staiunea
balneoclimateric Malna-Bi. Staiunea Malna-Bi este situat n defileul care desparte Munii
Bodoc de Munii Baraolt, la cca 22 Km de Sf. Gheorghe. Climat fr amplitudini termice mari,
temperatura medie anual este de 70 C iar cantitatea medie anual de precipitaii de 600 mm.
Formarea staiunii dateaz nc din anul 1759, iar dupa 1865 renumele su ajunge si peste hotare.
Sub aspect hidrologic, n zona Malna exist dou orizonturi acvifere suprapuse, unul
inferior cantonat n sistemul fisural i zonele fracturate ale formaiunilor calcaroase-gazoase de
vrst cretacic i altul superior n depozitele acoperitoare granulare de vrst policen i
cuaternar. Hidrostructurii policen-cuaternare i aparin sursele Ileana, Mioara, Bile Reci, Baia
Cald, forajele nr.8 i 9 ISPIF, exploatabile n scopuri terapeutice, n timp ce, de hidrostructura din
depozitele cretacice sunt legate sursele Maria, Principal, forajele 2, 1, 4, i 10-11, 801-802
utilizate pentru mbuteliere.
Apa mineral Maria este o ap bicarbonatat, clorurat, sodic, carbogazoas, hipoton,
utilizat pentru cur intern i mbuteliere.
Apa mineral medicinal Maria este mbuteliat nc din anul 1904, de cnd a fost
recomandat la tratarea diferitelor boli digestive, cum ar fi afeciuni ale tubului digestiv (gastrite
cronice hiperacide, ulcere gastrice i duodenale, colite cronice, constipaia cronic), aciuni
hepatobiliare (dischinezia biliar, hepatita cronic, pancreatita cronic, colecistita cronic
necalculoas sau calculoas), boli asociate: nevroz astenic, migren, tulburri afective.
Apa medicinal Maria de la Malna-Bi, cu un coninut de 8,03 mg litiu la litru, va fi
utlizat n cercetri clinice i experimentale n tratamentul migrenei i tulburrilor afective,
afeciuni care nu au intrat n spectrul terapeutic al apei pn n prezent.
7
Constantin Munteanu
2009
MATERIALE SI METODE
Determinarea proprietilor chimice i fizice ale apei minerale
1. Determinarea clorului s-a fcut printr-o metod volumetric n mediu de HNO3 (pentru
a nlesni disocierea clorurilor) n prezena indicatorului de alaun de fier. Se adaug dup necesitate
o soluie de azotat de argint n exces, care se titreaz cu sulfocianur de amoniu.
Cl- (din ap) + AgNO3(exces) AgCl(precipitat) + NO3AgNO3(surplus) + NH4SCN AgSCNH + NH4NO3
NH4SCN + Fe (NH4)2(SO4)2 FeSCN +2(NH4)2SO4
2. Determinarea bromului (Br-)
Bromul, detaat din combinaiile sale de oxidani este dozat colorimetric cu ajutorul
specolului.
3. Determinarea iodului se realizeaz volumetric, n prezena urmtorilor reactivi:
carbonat de sodiu, acid clorhidric, perhidrol, sulfur de carbon, tiosulfat de sodiu.
Reaciile care au loc:
2I- +H2O2I2
2I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6
4. Determinarea compuilor cu azot (ionul amoniu, amidogenul, ionul nitric)
Metoda se bazeaz pe titrarea amoniacului rezultat din distilarea probei n diferite faze prin
titrarea succesiv a apei cu carbonat de magneziu i aliaj Dervada. Se folosete aparatul Aubin.
Dup distilarea fiecrei faze, dozarea se face n prezen de rou de metil i surplus de H2SO4 care
se titreaz cu NaOH.
5. Determinarea ionului nitros (NO2-)
Metoda const n dozarea colorimetric a compusului de culoare roie care rezult n urma
dizolvrii unei amine aromatice cu azotii n mediu acid.
6. Determinarea ionului sulfuric (SO42-)
Se realizeaza prin metoda gravimetric. Aceast metod se bazeaz pe precipitarea ionului
SO42 cu clorur de bariu (BaCl2) n exces n mediu de HCl.
7. Determinarea ionului bicarbonic (HCO3.-)
Pentru determinarea ionului HCO3.- se folosete metoda volumetric n prezena indicatorului
de metilorange. Se titreaz cu o soluie de acid clorhidric.
HCO3- (din ap) + HCl CO2 + H2O + Cl8. Determinarea ionilor de sodiu, potasiu i litiu
Pentru determinarea acestor ioni se folosete metoda flamfotometric (analiza cantitativ
spectral).
9. Determinarea ferului (Fe2+) se face dup reducerea Fe3+ la Fe2+.
Reactivi folosii: soluie de ortofenantrolin dizolvat n alcool etilic, clorhidrat de
hidroxilamin, soluie tampon de acetat de amoniu, acid clorhidric, amoniac concentrat.
Determinarea Fe2+ se face spectrofotometric.
10. Determinarea ionilor de Ca2+ i Mg2+ - se realizeaz prin metoda complexo-metric.
Aceast metod se bazeaz pe proprietatea pe care o are sarea disodic a acidului etilen-diaminotetracetic, numit i complexan III, de a da combinaii complexe cu cationii srurilor de calciu i
magneziu.
11. Determinarea substanelor oxidabile
Metoda se bazeaz pe oxidarea acestora cu permanganat de potasiu, n mediu acid sau bazic
n funcie de coninutul de cloruri al apei.
Reactivi necesari: permanganat de K, soluie de acid sulfuric, acid oxalic.
2009
Constantin Munteanu
12. Determinarea CO2- dozarea dioxidului de carbon se face prin metoda volumetric.
Reactivi necesari: NaOH, fenoftalein, acid clorhidric. Reaciile care au loc: CO2 + H2O + NaOH
Na2CO3 + H2O
NaOH(surplus) + HCl NaCl + H2O
13. Determinarea acidului metasilicic (H2SiO3)
Acidul metasilicic se determin colorimetric.
Reactivi folosii: soluie de sare Mohr, molibdat de amoniu, soluie tampon de acetat de
amoniu.
14. Metode fizice de analiz a apelor minerale
Densitatea apei minerale se determin cu ajutorul balanei Morh-Westphal, cu care de
msoar fora arhimedic pe care lichidul o exercit asupra unui plutitor cu volum constant.
Deoarece densitatea este influenat sensibil de temperatur este necesar corelarea cu acest
parametru a densitii apei minerale.
Conductivitatea, exprimat n S/m, TBS (totalul de substane dizolvate) exprimat n mg/L i
salinitatea se determin cu ajutorul conductivimetrului.
Determinarea pH-ului se face cu ajutorul unui pH-metru.
Cultura primar de celule gliale
Pentru a obine cultura primar de celule gliale s- au folosit pui de obolan de 1-4 zile.
Dup decapitare, creierul a fost plasat n soluie tampon fosfat salin (TFS) pe ghea. Dup
ndeprtarea meningelui, creierul a fost pasat printr-un nytex de 60 m (McCarthy et all, 1980).
Celulele au fost crescute n mediu Dulbeccos Modified Eagles Medium cu 4500mg/l glucoz, 25
mM HEPES, 100 U/ml penicilin, 100 g/ml streptomicin i 50 g/ml neomicin. Mediul a fost
suplimentat cu 15% ser fetal de viel. Dup 24 ore s-a schimbat mediul de cultur pentru a
ndeprta celulele moarte i resturile celulare. Ulterior schimbarea mediului s-a efectuat la fiecare
3 zile. Celulele au fost cultivate pe plci Petri de sticl cu diametrul de 50 mm (Schott).
Tratamentul cu clorur de litiu
Pentru toate experimentele, tratamentul cu sruri de litiu al culturilor celulare s-a fcut n
mod continuu, acestea fiind adugate n mediul de cultur la concentraiile specificate ncepnd
din ziua a 6-a a culturii de celule gliale.
Clorura de litiu (Sigma) a fost dizolvat n DMEM la o concentraie de 20 mM pentru a
obine soluia stoc i s-a pstrat la 40C. Soluiile de lucru (1mM i 2mM) au fost obinute prin
diluarea soluiei stoc cu mediu de cultur.
Testarea apelor minerale litinifere Maria de la Malna-Bi
Testarea eficaciti apelor minerale bogate n litiu s-a realizat prin compararea celulelor
gliale martor, cultivate n mediu de cultura standard, cu cele cultivate n mediu cu apa mineral
litinifer MARIA, sau n prezena de clorur de litiu de diferite concentraii. Caracterizarea
comportamentului celulelor gliale n prezena apelor minerale i a clorurii de litiu s-a realizat att
din punct de vedere morfologic ct i imunohistochimic. Pentru evaluarea imunohistochimic s-au
folosit o serie de markeri pentru celulele gliale de tipul GFAP, vimentin si laminin, precum i o
enzim a crei activitate este modificat n prezena litiului, de tipul GSK-3.
Simularea artificial a compoziiei apei MARIA i evaluarea efectelor acestei soluii saline
asupra morfologiei culturilor de celule gliale
Verificarea ipotezelor privind efectele apei minerale Maria de la Malna-Bi a fost
realizat experimental prin utilizarea unei soluii saline avnd o compoziie ionic asemntoare
celei a apei minerale. Astfel, utiliznd datele obinute n Bultinul de analize al apei Maria, se
prepar o soluie stoc concentrat 100X ce conine 0,287 g % NaCl, 0,65 g %, KCl, 2,9 g % CaCl2
i 1,17 g % MgCl2X6H2O.
9
Constantin Munteanu
2009
10
2009
Constantin Munteanu
ANIONI
Clor
Brom
Iod
Nitric
Sulfuric
Bicarbonic
Cl
BrINO3SO4HCO3-
CATIONI
mg
1.009,1
2.,9
0,7
9,9
25,1
5202,0
Sodiu
Potasiu
Litiu
Amoniu
Calciu
Magneziu
Fier
Mangan
Na+
K+
Li+
NH+
Ca2+
Mg2+
Fe2+
Mn2+
2263,8
70,5
8,03
0,7
212,6
28,3
2,2
0,1
98,441
1,803
1,152
0,039
5,304
1,164
0,039
0,002
H2SiO3
HBO2
NH2
O2
21,5
372,2
7,0
2,4
0,275
8,492
0,437
0,150
CO2
748,0
17,000
9239,0
231,477
Acid metasilicic
Acid metaboric
Amidogen
Subst. Organice
Dioxid de carbon
determinat n laborator
Mineralization
98,441
1,803
1,152
0,039
5,304
1,164
0,039
0,002
114,455
-
228,909
24,503
0,763
0,087
0,008
2,301
0,306
0,024
0,001
0,233
4,029
0,076
0026
m eq. %
24,866
0,032
0,017
0,139
0,457
74,489
100,000
86,009
1,575
1,007
0,034
9,269
2,033
0,070
0,003
100,000
-
100
11
Constantin Munteanu
2009
Fig. 19 Spaiul steril din boxa de lucru a Laboratorului Culturi Celulare, INRMFB
Sacrificarea puilor de obolan Wistar de 2 pn la 4 zile are loc prin decapitare i plasarea
extremitii cefalice ntr-un vas Petri de 10 cm diametru.
2009
0 zile
3 zile
6 zile
10 zile
Constantin Munteanu
1 zi
2 zile
4 zile
5 zile
7 zile
11 zile
13
8 zile
12 zile
Constantin Munteanu
2009
Fig.37. Cultura martor dupa 10 zile de cultivare. Se observa astrocite cu numeroase prelungiri
citoplasmatice. Coloratie Hematoxilina-eozina. X400.
14
2009
Constantin Munteanu
15
Constantin Munteanu
2009
LITIU 2 mM ziua 7
LITIU 2 mM Ziua 8
LITIU 2 mM Ziua 9
LITIU 2 mM Ziua 10
LITIU 2 mM Ziua 11
LITIU 2 mM Ziua 15
16
2009
Constantin Munteanu
Constantin Munteanu
2009
M50-ziua 7
M25-ziua 7
M25 + Li 1 mM-ziua 7
M50-ziua 8
M25-ziua 8
M25 + Li 1 mM-ziua 8
M50-ziua 9
M25-ziua 9
M25 + Li 1 mM-ziua 10
M50-ziua 10
M25-ziua 11
M25 + Li 1 mM-ziua 11
M50-ziua 11
M25-ziua 12
M25 + Li 1 mM-ziua 12
18
2009
Constantin Munteanu
Simularea artificial a compoziiei apei MARIA i evaluarea efectelor acestei soluii saline
asupra morfologiei culturilor de celule gliale
Verificarea ipotezelor privind efectele apei minerale Maria de la Malna-Bi a fost realizat
experimental prin utilizarea unei soluii saline avnd o compoziie ionic asemntoare celei a apei
minerale. Astfel, utiliznd datele obinute n Bultinul de analize al apei Maria, se prepar o
soluie stoc concentrat 100X ce conine 0,287 g % NaCl, 0,65 g %, KCl, 2,9 g % CaCl2 i 1,17
g % MgCl2X6H2O. Sunt astfel refcute concentraiile ionilor de Na+, K+, Ca2+ i Mg2+ care
corespund unei proporii de 50 % a apei minerale Maria n mediu, concentrat de 100X.
Celulele gliale cultivate n prezena soluiei saline cu compoziia chimic descris mai sus,
reprezint modelul experimental pentru verificarea ipotezelor privind rolul acestor elemente
chimice n mbuntirea parametrilor de cretere i dezvoltare a celulelor gliale in vitro.
Dup 72 de ore de la tratamentul cu soluie salin S 50%, cultura de celule gliale ajuns n
ziua a 7-a nu prezint modificri morfologice semnificative fa de martor. Spre deoseibire de
tratamentul cu litiu 2 mM, care provoaca vacuolizarea celulelor i primele apecte morfopatologice,
n acest caz nu se observ caractere patologice la nivelul celulelor gliale. Se observ o cretere n
lungime a prelungirilor celulare. Crete de asemenea nivelul interconexiunilor ntre celule.
Al doilea tratament cu soluie salin S 50% administrat n ziua a 7-a nu modific
morfopatologic celulele gliale, aa cum se ntmpl n cazul tratamentului cu litiu sau ap mineral
Maria, observate dup 24 de ore, respectiv n ziua a 8-a a culturii de celule gliale. Prelungirile
celulelor gliale nu sunt mai lungi i mai groase, ca n cazul tratamentului cu litiu, ceea ce
demonstreaz c acest efect poate fi atribuit litiului i nu altor elemente chimice din apa Maria.
Culturile de celule gliale aflate n a 9-a zi de cultivare i dup al treilea tratament cu soluie
salin S50% ating stadiul de confluen al monostratului de celule gliale, fiind acoperit ntrega
suprafa de cultivare furnizat de vasul de cultur Petri. Acest fapt conduce la limitarea
diviziunilor celulare la un nivel care s permit compensarea resorbiilor celulare ce se produc ca
urmare a necesitilor de plasticitate i meninerea astfel a monostratului.
Dup 3 zile de la tratamentul cu soluie salin S 25%, cultura de celule gliale ajuns n ziua a
7-a nu prezint modificri morfologice semnificative fa de martor. Spre deoseibire de
tratamentul cu litiu 2 mM, care provoaca vacuolizarea celulelor i primele apecte morfopatologice,
n acest caz nu se observ nimic patologic la nivelul celulelor gliale. Se observ o cretere n
lungime a prelungirilor celulare. Crete de asemenea nivelul interconexiunilor ntre celule.
Multiplicrile celulare se produc cu o rata asemntoare cazului martor, la nivelul insulelor
celulare formate i mai puin n afara acestora. Spaiile interinsulare sunt foarte reduse, dnd
aspectul de preconfluen. n ziua a 7-a se aplic al doilea tratament cu soluie salin S25%.
Culturile de celule gliale aflate n a 9-a zi de cultivare i dup al treilea tratament cu soluie
salin S25% ating stadiul de preconfluen al monostratului de celule gliale, fiind acoperit o mare
parte din suprafaa de cultivare furnizat de vasul de cultur Petri. Acest fapt conduce la
echilibrarea numrului de diviziuni celulare la un nivel care s permit compensarea resorbiilor
celulare ce se produc ca urmare a necesitilor de plasticitate.
Tratamentul culturii de celule gliale cu soluie salin S 25% + Li 1mM determin modificri
morfologice foarte asemntoare cazului de tratament cu 1mM LiCl. Spre deoseibire de
tratamentul cu litiu 2 mM, care provoaca vacuolizarea celulelor i un apecte pronunat
morfopatologic, n acest caz nu se observ dect o frecven mai mare a resorbiilor celulare. Se
observ o cretere n lungime a prelungirilor celulare. Multiplicrile celulare se produc cu o rata
asemntoare cazului martor, la nivelul insulelor celulare formate i mai puin n afara acestora. n
ziua a 7-a se realizaz al doilea tratament al culturii cu S 25% i Li 1mM.
19
Constantin Munteanu
2009
S50 ziua 7
S25 ziua 7
S50 ziua 9
S25 ziua 9
S50 ziua 11
S25 ziua 11
S50 ziua 13
S25 ziua 13
S50 ziua 15
S25 ziua 15
20
2009
Constantin Munteanu
LDH elib.
2,889531
26,27214
15,76703
9,137031
7,37804
20,52034
17,03169
18,39938
13,71274
30
25
20
15
10
5
0
1
S1
Concluzii
Concentraiile de LiCl (0,6-1,2mM) indicate n literatura de specialitate ca avnd
rol terapeutic n sindromul maniaco-depresiv scade nivelul LDH intracelular i deci favorizeaz
morfologia normal a celulelor gliale.
In cazul celulelor gliale tratate cu LiCl 2mM i cu 50% apa mineral Maria apare o
cretere semnificativ a LDH eliberate, fa de tratamentul cu 1 mM LiCl observndu-se chiar
dublarea cantitii eliberate dup 20 de zile de tratament.
Modificarea nivelului de creatinina
Tabelul 9. Determinarea creatininei n mediu de cultur
PROBA
1 Martor
2 Maria 50%
3 Maria 25%
4 Maria 25% + Li 1mM
5 Li 1mM
6 Li 2mM
7 S50%
8 S25%
9 S25% + Li 1mM
0,04
0,035
0,03
0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
0
1
S1
Concluzii
Apa mineral Maria folosit la prepararea mediilor de cultivare reduce cu 25 i
respect 50 % nivelului iniial de creatinin n funcie de concentraia de ap utilizat de 25 i 50%.
Activitatea metabolic sczut a celulelor se reflect n cazul tratamentului cu ap Maria prin
decalajul dintre diferena nivelului de creatinin a martorului i nivelul de creatinin a culturilor
tratate cu ap Maria;
Modificarea nivelului fosfatazei alcaline
Tabelul 10. Determinarea fosfataze alcaline din mediu de cultur
PROBA
1 Martor
2 Maria 50%
3 Maria 25%
4 Maria 25% + Li 1mM
5 Li 1mM
6 Li 2mM
7 S50%
8 S25%
9 S25% + Li 1mM
Media difernelor nivelurilor de fosfataz alcalin din Fig. 99 Diferena nivelului de fosfataz alcalin
mediul de cultur fa de mediul de tratament
fa de blanc n culturile de celulele gliale
18,1500
35
30
2,6125
25
10,8625
20
22,8250
15
10
33,8250
5
32,1775
0
1
2
3
19,1125
4
5
6
S1
7
20,9000
8
9
26,2625
21
2009
Constantin Munteanu
PROBA
1 Martor
2 Maria 50%
3 Maria 25%
4 Maria 25% + Li 1mM
5 Li 1mM
6 Li 2mM
7 S50%
8 S25%
9 S25% + Li 1mM
2,4625
0,3880
1,4975
0,9950
1,8015
1,0780
1,7985
1,7425
2,3240
2.5
2
1.5
1
0.5
0
1
S1
Concluzii
Apa mineral Maria determin diferene foarte mici ale nivelului de uree n mediul de cultur fa de
blank, ceea ce arat un nivel foarte sczut al catabolismului.
In cazul celulelor gliale tratate cu LiCl 1mM i n cazul tratamentelor cu soluie salin, diferena nivelului
de uree este uor mai mic dect la martor.
PROBA
1 Martor
2 Maria 50%
3 Maria 25%
4 Maria 25% + Li 1mM
5 Li 1mM
6 Li 2mM
7 S50%
8 S25%
9 S25% + Li 1mM
0,0875
0,1165
0,1740
0,0870
0,0880
0,0880
0,1165
0,1745
0,1745
0,2
0,15
0,1
0,05
0
1
S1
Concluzii
Apa mineral Maria folosit la prepararea mediilor de cultivare crete nivelului iniial de colesterol n funcie de
concentraia de ap utilizat de 25 i 50%, diferena de nivel fiind aproape dubl n cazul Maria 50%;
In cazul celulelor gliale tratate cu LiCl 1mM, apa mineral Maria 25% + Li 1mM i LiCl 2mM diferena
nivelului de colesterol este identic cu ce din cazul martor;
Soluia salin crete de asemenea diferena dintre nivelul iniial i cel din mediu de cultur;
Salinitatea mediului de cultur este principalul factor care modific nivelul colesterolului.
Media difernelor nivelurilor de trigliceride din Fig. 102 Diferena nivelului de trigliceride
mediul de cultur fa de mediul de tratament fa de blanc n culturile de celulele gliale.
1 Martor
2 Maria 50%
3 Maria 25%
4 Maria 25% + Li 1mM
5 Li 1mM
6 Li 2mM
7 S50%
8 S25%
9 S25% + Li 1mM
1,275
10,758
2,562
0,8695
2,5535
1,641
3,374
5,107
1,7295
12
10
8
6
4
2
0
1
Concluzii
S1
9
22
2009
Constantin Munteanu
S1
Concluzii
Apa mineral Maria la concentraia de 50% i LiCl 2mM au ca efect distrugerea majoritii
celulelor gliale ceea ce demonstreaz nivelul apropiat de 0 al activitii transaminazice.
Soluia salin cu care au fost tratate celulele gliale a dus la o cretere marcant a activitii
transaminazice, maximul de activitate fiind constatat la tratamentul cu soluie salin S25%.
Modificri ale coninutului de magneziu
Tabelul 11. Determinarea magneziului
PROBA
1 Martor
2 Maria 50%
3 Maria 25%
4 Maria 25% + Li 1mM
5 Li 1mM
6 Li 2mM
7 S50%
8 S25%
9 S25% + Li 1mM
Media difernelor nivelurilor de Mg din mediul Fig. 103 Diferena nivelului demagneziu fa de blanc
de cultur fa de mediul de tratament
n culturile de celulele gliale
0,305
0,35
0,221
0,3
0,25
0,295
0,2
0,22
0,15
0,255
0,1
0,05
0,315
0
0,315
1
2
3
S1
4
5
0,29
6
7
8
9
0,315
Concluzii
Diferena dintre nivelul de magneziu al mediului prelulat din cultura de celule fa de cel
preparat iniial se situeaz ntre 0,2 i 0,3 mg/dl, fiind determinat de aportul de magneziu provenit
din esutul nervos prelevat de la puii de obolan Wistar utilizai n experiment.
Modificri induse de apa mineral MARIA, clorura de litiu i soluia salin asupra profilului
proteic al culturilor de celulele gliale
Celulele gliale martor i cele tratate cu apa MARIA (50%, 25% i 25% + Li 1mM),
clorur de litiu (1 mM i 2 mM) i respectiv soluie salin (50%, 25% i 25% + Li 1mM) au fost
omogenizate n tampon Laemmli pH 6,8.
Determinarea proteinelor din omogenatul celular a fost realizat prin metoda Bradford.
Rezultatele obinute n urma calibrrii reactivului Bradford (Sigma) sunt urmtoarele:
PROBA
1- cultur martor de 12 zile
2- cultur de 12 zile tratat cu 50% ap mineral Maria
3- cultur de 12 zile tratat cu 25% ap mineral Maria
4- cultur de 12 de zile tratat cu 25% ap mineral Maria i LiCl 1mM
5- marker de greutate moleculara Sigma
6- cultur de 12 de zile tratat cu LiCl 1mM
7- cultur de 12 de zile tratat cu LiCl 2mM
8- cultur de 12 de zile tratat cu solutie salina corespunztoare coninutului de mediu cu 25%
ap mineral Maria
9- cultur de 12 de zile tratat cu solutie salina corespunztoare coninutului de mediu cu 50%
ap mineral Maria
10- cultur de 12 de zile tratat cu solutie salina corespunztoare coninutului de mediu cu 25%
ap mineral Maria + LiCl 1mM
23
2009
Constantin Munteanu
B
1
10
10
Fig. 104 Schiele electroforetice ale proteinelor din omogenatele celulelor gliale tratate cu apa MARIA, litiu i soluie
salin (A- nemarcat B cu marcarea benzilor)
1 3 1 4
1 1
1 0
1 9
2 0
1 5
1 2
1 7
1 6
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,5
0 ,6
0 ,7
0 ,8
0 ,9
Track 2 Cultura de celule gliale tratata cu apa minerala MARIA 50% de 14 zile
6
1
7 8
2
4
20
12
1 81 9
13
1011
1 4 1 51 6 1 7
MARTOR (
) - MARIA 50% (
)
Fig. 110 Comparaie ntre profilul electroforetic al martorului
i al culturii de 14 zile tratat cu Maria 50%
MARIA 50% (
) - MARIA 25% (
)
Fig. 111 Comparaie ntre profilul electroforetic al
culturii de 14 zile tratat cu Maria 50 % i cel al
culturii de 14 zile tratat cu Maria 25 %
MARIA 50% (
) - Li 2 mM (
)
Fig. 113 Comparaie ntre profilul electroforetic al culturii de 14
zile tratat cu Maria 50 % i cel al culturii de 14 zile tratat cu
Maria 25 % + Li 1 mM
0 ,0
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,5
0 ,6
0 ,7
0 ,8
0 ,9
Track 3 Cultura de celule gliale de 14 zile tratat cu apa minerala MARIA 25%
1 3
17
14
26
27
2
8
15
12
9
11
10
67
5
20
21
19 22
13
16
0,3
0,4
24
18
23
25
0,0
0,1
0,2
0,5
0,6
0,7
0,8
MARTOR (
) - MARIA 25% (
)
Fig. 116 Comparaie ntre profilul electroforetic al martorului
i al culturii de 14 zile tratat cu Maria 25 %
0,9
Track 4 Cultura de celule gliale de 14 zile tratat cu apa mineral MARIA 25% i LiCl 1mM
14
12
1 2
7
5 6
13
10
16
22
11
17
15
18
9
20
23
21
0 ,0
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,5
0 ,6
0 ,7
0 ,8
0 ,9
24
MARTOR (
) - MARIA 25% + Li 1 mM (
)
Fig. 119 Comparaie ntre profilul electroforetic al
martorului i al culturii tratat cu Maria 25 % i Li 1 mM
2009
Constantin Munteanu
12
21
20
6
1
10
11
1 41 5
13
19
16
17
0 ,0
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,5
22
18
0 ,6
0 ,7
0 ,8
MARTOR (
0 ,9
) - Li 1 mM (
4 6
5
12
7
2
10
14
15
13
11
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
MARTOR (
) - Li 2 mM (
)
Fig. 125 Comparaie ntre profilul electroforetic al martorului
i al culturii de 14 zile tratat cu Li 2 mM
0,9
14
12
16
13
7
10
5 6
18
11
21
17
15
MARTOR (
) - S 50% (
)
g. 127 Densitograma omogenatului celular la o cultur de 14
Fig.
128
Comparaie
ntre
profilul
electroforetic
al
martorului
tratat cu S 50 %
i al culturii de 14 zile tratat cu S 50 %
0 ,0
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,5
0 ,6
0 ,7
0 ,8
0 ,9
12
4
5
6 7
1 61 7
14
13
11
10
18
23
19
15
24
0 ,0
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,5
0 ,6
0 ,7
0 ,8
0 ,9
R f d i st a n c e d o w n t ra c k
MARTOR (
) - S 25% (
)
Fig. 131 Comparaie ntre profilul electroforetic al
martorului i al culturii de 14 zile tratat cu S 25 %
Track 10- Cultura de celule gliale de 14 zile tratat cu soluie salin (25%) i LiCl 1 mM
23
1 2
4 5
0,0
0,1
8 9
22
21
12
10
1516 17
14
11
20
18 19
13
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
24 25
0,8
0,9
MARTOR (
) - S 25% i LiCl 1 mM (
)
g. 133 Densitograma omogenatului celular la o cultur de 14 Fig. 134 Comparaie ntre profilul electroforetic al martorului
tratat cu S 25 % + Li 1 mM
i al culturii tratat cu S 25 % + Li 1 mM
Rf di stance down track
Concluzii
Cantitatea total de proteine se reduce la jumtate fa de martor n cazurile Maria 50% i Li 2mM;
Tratamentul cu apa Maria 50% i cel cu 2 mM Li determin creteri ale expresiei acelorai pick-uri ceea ce arat c o
parte din efectele apei Maria sunt determinate de prezena litiului;
Tratamentul cu apa Maria 25% i Li 1mM determin o cretere marcat a pick-urilor de 200, 180, 50 i 47 KDa,
observndu-se un grad ridicat de suprapunere a profilului electroforetic al omogenatului obinut n acest caz cu cel al tratamentului
cu 50% apa Maria;
25
Constantin Munteanu
2009
26
2009
Constantin Munteanu
27
Constantin Munteanu
2009
TRACK
PROBA
Cantitate
MARTOR
0,18 g
4,33
MARIA 50%
0,05 g
1,75
MARIA 25%
0,15 g
9,11
MARIA 25% + Li 1 mM
0,13 g
5,22
Li 1 mM
0,16 g
5,11
Li 2 mM
0,16 g
8,74
S 50%
0,2 g
5,05
S 25%
0,2 g
3,26
S 25% + Li 1 mM
0,12g
3,51
10
8
6
S1
7
28
2009
Constantin Munteanu
Analiza prin imunodetecie Western blotting a expresiei GSK-3 induse de litiu i apa
MARIA la culturi de celule gliale de 14 zile
TRACK
MARTOR
0,3 g
7,23
0,5
MARIA 50%
0,1 g
3,82
0,4
MARIA 25%
0,36 g
11,53
0,3
MARIA 25% + Li 1 mM
0,41 g
16,57
0,2
Li 1 mM
0,46 g
14,69
0,1
Li 2 mM
0,33 g
16,36
S 50%
0,37 g
9,5
8
9
S 25%
0,27 g
4,42
S1
8
S 25% + Li 1 mM
0,37 g
10,6
Fig. 203 Graficul expresiei GSK-3 pentru fiecare caz al culturii de celule gliale de 14 zile
Detecia imunohistologic a expresiei SHIP2 la culturile de celule gliale tratate cu litiu
i apa mineral MARIA
Inozitol fosfat polifosfatazele sunt enzime care modifica poziia gruprilor fosfat de la
nivelul fosfatidilinozitolilor, ceea ce are ca efect generarea mesagerilor secundari, ca raspuns la
semnale extracelulare.
Celulele gliale martor prezinta o reacie imunohistochimica intensa pentru SHIP2,
observndu-se localizarea cortical a proteinei (Fig.204).
29
Constantin Munteanu
2009
Concluzii generale
2009
Constantin Munteanu
Bibliografie selectiva
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
Alberts B., Bray D., Lewis J., Raff M., Roberts K., Watson J.D. (1994) Molecular biology of the cell, IIIrd
ed. Garland Publ. New York and London.
Angst J. Do Many Patients with Depression Suffer From Bipolar Disorder?, Canadian Journal of
Psychiatry, Vol. 51, No. 1, p: 3-5, 2006;
Arenander A.T., De Vellis J. (1994) Development of the nervous system. In: Basic neurochemistry:
Molecular, cellular and medical aspects, 5th ed. Ed. by Siegel G.J. et al., Raven press, New York: 573-606.
Berridge M.J., Downes C.P., Hanley M.R. (1989) Neural and developmental actions of lithium: A unifying
hypothesis. Cell 59: 411-419.
Bhat N.R. (1995) Signal transduction mechanisms in glial cells. Dev. Neurosci. 17: 267-284.
Birch N.J. (1999) Inorganic pharmacology of lithium. Chem. Rev. 99: 2659-2682.
Chang C.M.J., Jones C.R. (1998) Chronic lithium treatment decreases brain phospholipase A2 activity.
Neurochem. Res. 23: 887-892.
DMello S.R., Anelli R., Calissano P., (1994) Lithium induces apoptosis in immature cerebellar granule cells
but promotes survival of matue neurons. Experimental Cell Research 211, 332-338;
Daugherty D., Roque-Urrea T., Roque-Urrea J., Snyder J., Wirkus S., Porter M.A. Mathematical Models of
Bipolar Disorder, 1-24, 2004;
Del Rio E., Shinomura T., van der Kaay J., Nicholls D.G., Downes C.P. (1998) Disruption by lithium of
phosphoinositide signalling in cerebellar granule cells in primary culture. J. Neurochem. 70: 1662-1669.
Detera-Waldeigh S.Lithium-related genetics of bipolar disorder. Ann. Med. 33, 2001
Gorgos C. (1985) Vademecum n psihiatrie. Ed.Medical. Bucureti: 561-565.
Grafe P., Reddy M.M. (1983) Effects of lithium on electrical activity and potassium ion distribution in the
vertebrate central nervous system. Brain Res. 279: 65-76.
Harwood A.J. Lithium and bipolar mood disorder: the inositol-depletion hypothesis revisited, Molecular
Psychiatry, Vol.10, 117-126, 2005;
Ikonomov O.C., Manji H.K. Molecular Mechanisms Underlying Mood Stabilization in Manic-Depressive
Illness: The Phenotype Challenge, American Journal of Psychiatry, Vol. 156, 1506-1514, 1999;
Jope R.S. (1999) A bimodal model of the mechanism of action of lithium. Mol. Psychiatry 4: 21-25.
Klein P.S., Melton D.A. (1996) A molecular mechanism for the effect of lithium on development. Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 93, 8455-8459;
Lenox R.H., Hahn C.G. (2000) Overview of the mechanism of action of lithium in the brain: Fifty-year
update. J. Clin. Psichiatry 61, 5-15;
Lenox R.H., Wang L. Molecular basis of lithium action: integration of lithium-responsive signaling and
gene expression networks, Molecular Psychiatry, Vol. 8, 135-144, 2003;
Manji H.C., Potter W.Z., Lenox R.H. (1995) Signal transduction pathways. Molecular targets for lithiums
actions. Arch. Gen. Psychiat. 52: 531-543.
Manji H.K., Drevets W.C., Charney D.S. The cellular neurobiology of depression, Nature Medicine, Vol.7,
Nr.5, 541-547, 2001;
Manji H.K., Moore G.J., Chen G. Bipolar disorder: leads from the molecular and cellular mechanisms of
action of mood stabilisers, British J. of Psychiatry, 178, 107-119, 2001;
McCarthy K., DeVellis J. (1980) Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat
cerebral tissue. J Cell Biol.85: 890-902.
Nonaka S., Hough C., Chuang D.M. (1998) Chronic lithium treatment robustly protect neurons in the central
nervous system against excitotoxicity by inhibiting N-methyl-D-aspartate receptor-mediated calcium influx.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 2642-2647.
Oakley p.W., Dawson A.H., White I.M. (2000) Lithium: Thyroid effects and altered renal handling. Clinical
Toxicology 38, 333-337;
Phiel C.J., Klein P. (2001) Molecular targets of lithium action. Annu. Rev Pharmacol. Toxicol. 41, 789-813;
Reiser G., Duhm J. (1982) Pathways for transport of lithium ions in neuroblastoma x glioma hybrid cells at
therapeutic concentrations of Li. Brain Res. 252: 247-258.
Schrauzer G.N. Lithium: Occurrence, Dietary Intakes, Nutritional Essentiality, Journal of American
College of Nutrition, Vol.21, Nr.1, 14-21, 2002;
Timmer R.T., Sands J.M. (1999) Lithium intoxication, J. Am. Soc. Nephrol 10, 666-674;
Williams R.S.B., Harwood A.J.-Lithium therapy and signal transduction, TiPS, 21, 2000;
Zamfirescu Gabriela, Meter Radu - Celulele gliale componente eseniale ale sistemului nervos, Editura
Academiei Romne, Studii i cercetri de BIOLOGIE, Seria Biologie Animal, Tomul 50, nr.1, p.65-74,
Bucureti, 1998;
31