Sub practic bacteriologie nr 11

Diagn de laborator al infeciilor respiratorii superioare

Condiia anatomohistologic a TRS:
Anatomic, TRS ncepe de la nri orif glotic i cuprinde:
Caviti i cornete nazale, sinusuri paranazale, ureche medie, antrum
mastoidian sunt acoperite de un epiteliu respirator, columnar,
pseudostratificat, ciliat, care este dublat de un strat de mucus (=
produs de cel caliciforme i gl seromucoase)
Orofaringe acoperit de un epiteliu malpighian nekeratinizat,
prevzut cu glande de tip mucos (continuare din mucoasa bucal i
continuat pe mucoasa esofagian)
Laringele superior.
Condiia microbiologic:
1. nrile:
-fac tranziia ntre tegum i mucoasa respiratorie a nasofaringelui
-reprez principalul rezervor de Stafilococi (SGN, Sa)
-mai sunt: Corynebacterium spp, Propionibact spp.
2. nasofaringele: microbiot mai complex:
-specii de Streptococ: S viridans, S pn
-specii de Neisserii nepretenioase (subflava, sicca, cinerea, mucosa,
lactamica) sau n meningitidis (purttori sntoi) n colectiviti nchise
-mai pot fi izolai cocobacili/BGN: Moraxella, H infl (mai ales tulpini
necapsulate).
3. orofaringele:> 200 sp, repartizate n diferite nie ecologice (crevase
gingivale, plac dentar, mucoas jugal, lingual, orofaringian, cripte
amigdaliene). Bacteriile anaerobe le domin pe cele aerobe (5-10:1).
-organisme comune/ foarte frecv i n cantit cele mai mari: bacterii anaerobe
(Veillonela, peptostreptococi), bacterii aerobe/facultativ anaerobe (s viridans,
neisserii nepretenioase).
-frecv izolate dar c% mai mici (103-5 UFC/mL): S epidermidis, Haemophylus
spp, bacili difterimorfi, S pn)
-bacterii ce apar rar la persoanele normale, dar rata portajului i cantitile
lor este semnificativ crescut la vrstnici, pers din spital: BGN,
pseudomonade.
1

- terapia cu AB produce apariia disbiozelor: S auriu, bacili coliformi,

psudomonade, levuri.
4. sinusurile paranazale i urechea medie: rmn necolonizate (datorit
eliminrii eficiente prin transport mucociliar a contaminanilor
ocazionali).
Entiti nosologice i condiii etiopatogenice:
Infeciile TRS sunt:
1. faringite;dac este interesat inelul limfatic faringian+ amigdale
palatine= angin
2. nazofaringite
3. rinite
4. sinuzite
5. otite medii
6. laringite i epiglotite.
Lipsa barierelor anatomice permite propagarea inf prin continuitate
consecine:
1. interptrunderea simpt clinice (nazofaringite angine)
2. frecv complicaii dat afectrii sinusurilor, urechii medii, laringe, TRI.
Este posibil propagarea:
-linfatic: rar n inf virale (MNI), frecv n inf bacteriene (limfadenita
cervical streptococic)
-meningean prin tecile limfatice ale nv olfactiv (meningococ).
Patogenii I ptr inf de TRS:
-virusurile cel mai frecv; se vindec spontan, dar favorizeaz suprainf cu
bact din microbiota indigen (prin lezarea epit respirator)
-bacterii (ce det boli grave): Streptococul de gr A, Micoplasma pn,
Corynebacterium diphteriae, H infl serotip b.

Faringitele
Etiologie:
1. viral:
-aduli: rhinovirusurile
-copii: adenovirusurile, HSV-1, coxsachie A
-toate vrstele: gripale, paragripale.
2. bacterian:
-S pyogenes majoritatea faringitelor bacteriene; sunt imp complicaiile
infecioase/postinfec
-Streptococul B, C, G ocazional faringite
-Chlamidia pn
-Mycoplasma pn (10% din faringitele colarilor)
-Corynebacterium diphteriae angin pseudomembranoas
-Arcanobacterium haemolyticum
-gonococi (rap sexuale aberante)
-stomatita/ angina Vincent = determ de asociaii fuso-spirachetozice inf
mixt cu bacterii anaerobe dominat de BGN fusiformi (Fusobacterium
spp, Prevotella spp) i treponeme bucale.
3. fungic n condiii de disbioz, levurile din microbiota orofaringian
(candida albicans) se multiplic excesiv determin stomatit i
faringit mai frecv la nn, prematuri, pacieni debilitai. Zonele
afectate ale mucoasei (jugale, linguale, faringiene) apar puternic
congestive i acoperite cu depozite albe cenuii (ce pot conflua ntr-o
fals mb). Nu exist adenit cervical.
A.Exsudatul faringian
Indicaii:
dg faringitelor i anginelor streptococice (n mod uzual)
confirmarea dg de difterie
dg altor angine bacteriene, fungice i virale
depistarea portajului de S pyogenes i C diphteriae.
Prelevarea probelor:
-necesare: tampon steril, apstor de limb, surs lumin, masc.

-tehnic:
Ex faringian se prelev nainte/dup 3-4 ore de la toaleta gurii sau
dup ingestia de alimente
Se aeaz pac pe scaun cu faa spre sursa de lumin, gtul n uoar
extensie i ceafa sprijinit de perete.
Se deprim baza limbii cu apstorul steril i n timp ce pac pronun
vocala A, se terge ferm cu tamponul amigdalele i peretele posterior
al faringelui (dac exist zone inflamate, ulcerate, cu depozite
purulente i false mb se recolteaz de la acest nivel)
Att la introducerea ct i la extragerea tamponului se evit atingerea
bazei limbii/palatului moale.
Dup recolt se introduce tamponul n tubul protector etichetat
Manevra declaneaz reflexul de tuse e bine de purtat masc.
1.dgn faringitelor i anginelor streptococice (depistarea i identificarea
SBH):
Transportul i conservarea probelor: tamponul faringian tb examin
n max 3 ore dup prelevare dac intervalul nu poate fi respectat tb
transportat pe mediu de conservare mbogire (bulion Todd-Hewitt
cu azid de na i cristal violet).
Metode rapide ptr detect Agenic: truse ptr detectarea SBH direct
din produs (exF): LA sau Elisa, coaglutinare.
Dac rezultatul este + - poate nlocui cultura; dac este -: tb fcut cultura
(exist faringite grave determinate de streptococul C. G).
Cultivarea:
o Medii de cultur:
-medii neselective= agar infuzie de cord/agar tripticaz soia cu 5%
sge de berbec; se prefer ptr c:
-hematiile de berbec conin NAD-az,
enzim care distruge factorul V se inhib creterea speciilor hemolitice de
H infl (ce se pot confunda cu cele ale strept hem)
-pe acest tip de agar sge berbec, lipsete
caracterul hemolitic al E faecalis (acest caracter se manifest pe sge de
cal).
-medii selective:
-geloz sge cu cristal violet: inhib
stafilococii

-agar sge cu sulfametoxazol i trimetoprim

care inhib stafilococii, streptococii viridans, BGN i unele tulpini de SBH
de grup C /G (care sunt S la cotrimoxazol).
-geloz sge cu 3,5% NaCl favorizeaz
izolarea SBH implicai n faringite prin inhibarea bacteriilor contaminante,
mai ales s viridans.
o nsmnarea: se descarc tamponul prin rulare pe toate
feele i apoi se epuizeaz inoculul cu ansa n cele 3 cadrane.
Se neap mediul cu ansa la sfritul fiecrui cadran ptr a
crea condiii microaerofile ptr tulpinile neproductoare de
SLS. n aerobioz, dac nu exist SLS, SLO va imprima
coloniilor aspect hemolitic.
o Incubare:
-aerob, peste noapte la 37C (temostat), 24h
-prelungire pn la 48h dac la I citire a plcilor lipsesc coloniile
hemolitice, caracteristice.
o Citirea culturilor: se examineaz plcile n lumin
reflectat/prin transparen se urmresc colonii mici (0,51mm), transparente/opace i nconjurate de o zon larg de
hemoliz.
Pot fi colonii cu suprafa neregulat (colonii matt), cu suprafa lucioas i
cu relief (col glossy) sau colonii mucoide.
Dac o tulpin este productoare exclusiv de SLO se obs hemoliz doar
n zonele de nepare a mediului.
Identificare:
o Catalaz: + ptr stafilococi, - ptr streptococi,
o Frotiu colorat Gram din cultur
o Testul la Ba: S ptr SBH grup A
o Testul la Tmp
o Identificarea Agenic a grupului: LA ptr B, C, G.
Abgram:
o Natural S la penicilin
Comunicarea rezultatelor:
5

o Prezent Streptococ hemolitic grup A/non A dac:

-identificarea s-a bazat doar pe testul la Ba
-identif grupului Agenic dac s-a fcut LA
La o cretere mai mic de +1 (sub 10 colonii n cadranul 1)= se menioneaz
nr de colonii hem izolate
Dac sunt sub 20 colonii hem pe plac: simplu portaj (angin viral la un
purttor de SBH).
o Absent SBH
o Dac se izoleaz n cantitate mare S auriu, K pn,
Pseudomonas aeruginosa acest lucru reflect disbioz
orofaringian a unor pacieni spitalizai/ cu AB ter. Se
comunic la cerere ptr pac din ATI, chimio, hemopatii
maligne.
2.confirmarea bacterian a anginei difterice vezi teorie.
3.diagn altor angine bacteriene, fungice, virale:
a)faringitele gonococice necesit cerere expres de diagn:
Mo: nu are valoare, datorit numeroaselor neisserii nepretenioase din
microbiota oro-far
Izolare: tamponul faringian se nsm pe:
o Agar Muller-Hinton mbogit cu supliment HYL i selectiv
prin colimicin i lincomicin
o Med Thayer-Martin modificat selectiv prin adaos de
colimicin i vancomicin.
Se incubeaz la 37C, n atm de 5% CO2. Coloniile oxidaz + tb controlate
microscopic nainte de purificarea culturii necesar identificrii (ptr c n
exF mai exist nafar de neisserii i BGN oxidaz+).
b)faringite determinate de Arcanobacterium haemolyticum asemnt cu
angina streptococic + erupie scarlatiniform+ adenit cervical.
Izolare: tamponul faringian se nsm pe AS berbec+ 3,5% NaCl. Se
incub la 37C, cu o I citire la 24h, apoi la 48h: apar colonii mici,
rotunde, discret hem: mo BGP, catalaz neg.
Fiind comensal orofaring, crit de semnif clinic= creterea predom i n
cantitate mare pe placa de izolare.
c)Angina/stomatita Vincent;

-diagn esenial microscopic: prezena pe frotiu Gram a foarte numeroi

bacili fusiformi G neg i spirochete n contextul unei reacii inflamat.
-ptr a exclude posib inf cu S pyogenes se nsm pe GS.
d) Candidoza (mrgritrel jugal, lingual,faringian):
-preparat umed fixat n sol de KOH 10%
-fr Gram
-izolare pe med Sabouraud glucozat.
B. Exsudatele nazal i nazofaringian
Indicaii:
Tamponul nazal
Exsudatul NF
Dg unor viroze respiratorii
Dg tusei convulsive
Depistarea portajului de S
Dg inf cu Mycoplasma pn i
auriu/ Streptococ pyogenes
Chlamidii
Dg viroz respiratorie
Depistarea portajului de S
pyogenes,
bacil
difteric,
meningococ,
Bordetella
pertusis.
Tehnica prelevrii probelor:
Tampon nazal:
-se terge pe rnd vestibulul foselor nazale cu tamponul umezit n sol salin
-ptr dg virale: imediat dup prelevare tb descrcat tamponul (prin agitare
insistent) n med de transport i refrigerarea probelor (4 grade transp n
24-96h; la -70 mai mult).
Exsudatul NF este prelevat pe tampon per-nazal:
-adult: se aeaz pac pe scaun, cu faa spre lumin i ceafa sprijinit de
perete ptr mobilizarea capului. Se introduce tamponul de-a lungul planului
nazal pn la atingerea peretelui posterior al nazofaringelui. Rotim tamponul
uor ptr a se ncrca de exsudat.
-copilul mic: mai bine a se preleva un ExF nainte, ptr a provoca un acces de
tuse (ptr c exsudatul va fi proiectat din CRI n nasofaringe, de unde poate fi
prelevat).
-sugar se recolteaz prin aspiraie nasofaringian ( cu o sond Nelaton
introdus printr-o nar i adaptat la o sering).

Depistarea purtorilor sntoi: n scop epidemiologic.

a)purttori de S auriu: solicitat de epidemiolog doar n focare demonstrate
de stafilococii nosocomiale de la pac/personalul vizat se recolteaz 1
tampon N.
Se nsm pe:
-AS
-med Chapman
Se incub peste noapte, la 37C. Se urmrete apariia coloniilor mari, S, 12mm, rotunde, bombate.
Citirea culturilor:
AS: colonii hemolitice; ex microscopic al fr colorat Gram; testul
coagulazei.
Chapman: colonii galbene; dac nu sunt colonii caracteristice, se
prelungete incub la 48h.
Prelevarea tb repetat de 1-2X la interval de 1 spt, ptr a stabili dac e un
portaj de lung durat/ tranzitorie; dup identificare se exped la lab de
referin ptr lizotiparea culturilor pure de S auriu.
b)purttori de S pyogenes (! Sli de operaie, secii de pediatrie):
-purttorii nazali sunt mai periculoi au un potenial epidemic mai mare
dect cei faringieni.
-se prelev tampon N i exsudat F/NF.
c)purttori de bacil difteric:
-se prelev tampon NF sau exsudat F imersate n OST
d)purttori de meningococ: 5-30% portaj n popul general; 70-80% n
conjunctur epidemiologic.
-Se prelev tampon NF, care se nsm pe AS, geloz ocolat, med HYL
selectiv prin adaos de linco i colimicin.
-se incub la 37C, n atm de 5-10% CO2, cu citirea plcilor la 24/48h
-se urmresc ptr identific coloniile oxidaz +
-dac probele nu se examin imediat este necesar mediul de transport
Amies/Stuart.

e) portaj de H infl serotip b vezi teorie.

Diagn de laborator al infeciilor respiratorii subglotice

Condiia microbiologic a etajului infraglotic al cilor respiratorii: dei
supus frecv contaminrii microbiene prin pulberi i aerosoli contaminani,
etajul infraglotic al TRI rmne necolonizat dat unor eficiente bariere
antimicrobiene :
Filtrarea aerodinamic i sedimentarea
Transportul mucociliar accelerat prin viteza ventilaiei
pulmonare i reflexul de tuse. Eficiena este remarcabil n 1h
sunt eliminate peste 90% din bacteriile depuse pe muc bronic
Transportul alveolo-bronic : particulele de dim sub 5m
depesc mec de filtrare aerodinamic i sedimentare, dar
ajunse n alveolele pulmonare sunt fagocitate de macrofage,
care antrenate n str de mucus broniolar intr n continuare sub
incidena transportului muco-ciliar.
Drenajul limfatic i sangv al microorg care au eludat
fagocitarea de ctre macrofagele alveolare
Bariera chimic superficial : mucus, lizozim, lactoferin
Bariera imunologic format din Ig A secretoare, Ig E mastocite
Etiologie:
Infeciile tractusului respirator inferior intereseaz:
broniile: bronite acute;
parenchimul pulmonar: broniolite, pneumonii
bronhopneumonii, pneumonii interstiiale, abcese.

lobare

acute,

-Microorganisme patogene I (virusuri cu tropism respirator, Mycaplasma

pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila psittaci,
Bordetella pertussis, Coxiella burnetii, Bacillus anthracis, Yersinia pestis
etc.) infecteaza gazde Nreactive.
-O diversitate de microorganisme conditionat patogene infecteaza gazde
cu deficite ale barierelor antiinfectioase:
locale (viroze respiratorii, mai ales gripa, inhalare de pulberi i gaze
9

iritante, BCr, broniectazii)

sau sistemice (imaturitatea barierelor antinfec; neutropenia, hipo- i
agamaglobulinemia, deficite ale imunitatii celulare).
Infectiile TRI sunt:
mai frecvent exogene, contractate pe cale aerogena, dar, posibil,
i orala.
Infectii endogene cu microorganisme din orofaringele normal,
colonizat nosocomial ori disbiotic apar la gazde cu apararea
antiinfectioasa compromisa.
Infec hematogena este posibila i evolueaza ca abcese
pulmonare.
Pneumoniile franc lobare acute i bronhopneumoniile genereaza
bacteriemii i, prin
propagare limfatica retrograda, pleurezii.
Exsudatul i hipersecretia acumulate in lumenul bronic genereazii
expectoratie mai abundenta in bronite, mai redusa in pneumonii, chiar
absenta in pneumoniile interstitiale. Vomica apare in evolutia abceselor
pulmonare.
Spectru etiologic: foaie carte albastr pg 394
1.bronite acute
2.acutizri bronite cr
3.pneumonii domiciliare
4.pneumonii nosocomiale
Prelevarea i transportul probelor:
TRinfraglotic este contaminat, prin impact i sedimentare cu un nr redus de
microorg inhalate, dar rmne necolonizat. Perturbri ale filtrrii
aerodinamice i transportul mucociliar favoriz colonizri
traheo-br
trectoare (viroze resp, intub traheale) sau de durat (Br cr) care pot iniia
infecia.
1.Prelevri uzuale
Probe contaminate cu microbiota TRS pe traiectul de eliminare:
- SPUTA;
- aspirat hipofaringian;
- tampon naso-faringian;
- spltur bronho-alveolar;

10

Contaminarea orofaringiana a sputei i aspiratului hipofaringian face

dificila interpretarea rezultatelor, mai ales in infectiile oporturuste i la
pacienti sub terapie antibacteriana. Un riguros control citologic de calitate al
probelor elimina semnificativ rezultatele fals +.
(I)
Sputa este prelevata curent.
-Probe corespunzatoare calitativ obinem la internarea in spital prin tuse
spontana, profunda i supravegheata.
Periajul simplu al dintilor, clatirea energica a gurii i gargara cu apa fiarta i
racita sunt de dorit inaintea prelevarii. Daca, macroscopic, proba apare
constituita in principal din saliva, insista imediat pentru prelevarea unei noi
probe care sa contina exsudat mucopurulent. In infectiile ac o prob
mucopurulenta cu volum de 1-2 mL este suficienta.
-la tuitorii cronici ptr diagn tbc sau al inf fungice br-pulm, cantit de sput
examinat treb s fie mai mare (ex:toat sputa de la expectoraia matinal
sau cea expectorat n interval de 1-2 h)
-la pac cu tuse slab productiv se pot obine mai uor probe de expectoraie
matinal; stimularea expectoraiei prin inhalare de aerosoli calzi cu sol
salin 10% ofer probe nesadisfctoare ptr diagn inf br-pulm, dar utile ptr
siagn tbc
Probele prelevate in colector steril din plastic, cu gura larga i capac
etan, trebuie etichetate i expediate imediat laboratorului, fara refrigerare,
pentru examinare in interval de maximum 1h.
Criterii de calitate:
-raportul dintre realul produs pat (obiectivat prin nr CI, prez fibrinei) i
contaminarea orofar (obiectivat prin nr de CES) permite stabilirea unor
praguri de calitate acceptat a probelor (ptr diagn inf determ de microorg
condi patogene)
-recepia probei n max 1h de la prelevare (ptr a ncepe examinarea nainte
de nmulirea necontrolat a microorg contaminante)
-prelevarea probei naintea terapiei antimicr
Sputa este mai puin adecvat ptr depistarea corect a:
-Pneumocystis carinii, Asppergillus , C albicans dat mobilizrii
insuficiente prin expectoraie a ac patogeni din focarul br-pulm
-inutilizabil ptr diagn inf cu bact anaerobe din cauza contaminrii massive,
const, a probelor
-C albicans din cauza contaminrii massive a probelor la pac cu disbioz
11

(2) Aspiratia hipofaringiana este indicata la sugari.

(3) Tamponul nasofaringian prelevat pernasal este util numai pentru
depistarea patogenilor primari care nu apartin microbiotei indigene: virusuri
respiratorii, Mycoplasma pneumoniae, chlamidii .
Alte produse patologice (necontaminate): se elimin
incertitudinile create de contaminarea orofar.
-aspirat pleural - trebuie examinat intotdeauna cand este depistat
- hemoculturi - practicate in primele 3 zile de evolutie a pneumoniilor
lobare acute
2.Probe care unteaz contaminarea orofaringian: sunt tehn agresive, ce
implic riscuri ptr pac i ofer probe cu volum redus.
-indicate in infec grave (ex., cele survenite la pacienti din servicii de ATI)
sau pentru a exclude infectia bacteriana n pneumopatii cu multiple optiuni
diagnostiee (neoplasm, embolii pulmonare).
-Contraindicatiile privesc pac cu hipoxemie severa, hemoptizii, diateze
hemoragice. Tratamentul anterior cu antibiotice este o contraindicatie
relativa a procedurii (riscul rezultatelor fals negative). Prelevarile prin
fibroscop cu cateter protejat prin telescopare sunt.valoroase pentru ca ofera
probe necontaminate prelevate tintit din leziuni.
-aspirat pe cateter protejat (prin bronhoscopie);
- aspirat transtraheal
-periajul bronic protejat tinde sa inlocuiasca aspiratia transtraheala. Este de
fapt o biopsie tintita realizata printr-o minuscula perie fixata la extremitatea
unui fir rigid protejat de cateterul teleseopat.
Prelevari bronhoscopice mai putin protejate de contaminarea
orofaringiana sunt:
-aspiratia simpla prin tubul fibroscopului
- spalatura bronho-alveolara realizata prin injectarea urmata de aspiraia
unei mici cantit de solutie izotona calda. prin lumenul fibroscopului.
Sunt utile doar pentru depistarea micobacteriilor, legionelelor, levurilor.
Examenul bacteriologic al sputei n infecii cu microorganisme
oportuniste

12

Examenul de rutin vizeaz ITRI bact ac determinate de patogeni comuni:

pneumococi, H infl, S aureus, Moraxella catarrhalis, BGN aerobi.
Examen macroscopic:
-vscoas, purulent de culoare galben, verzuie, cu striuri de sge
probele cu aspect spumos, apoase sunt calitativ necorespunzatoare
probe respinse de la examinarea microbiologica.
Decontaminarea probei de sputa:
-Se aleg fragmente mucopurulente din care se vor face frotiuri etalate n strat
ct mai subire i uniform
-acestea vor fi splate n 3 bi succesive de ser fiziologic steril(sol salin
izoton). Splarea dezagreg probele fluide.
n probele cu scorul de calitate Q +3, splarea reduce nr contaminanilor cu
10-3, fr a afecta bacteria infectant nglobat n trama fibrinoas a
exsudatului. Splarea decontamineaz probele de sput cu att mai puin cu
ct scorul Q este mai mic. Decontaminarea chimic este rezervat ptr
izolarea micobacteriilor.
Microscopia:
Sunt necesare urmtoarele coloraii:
Gram ptr triajul de calitate al prelevatelor contaminate
(sput, aspirat hipofaringian) i bacterioscopie
Giemsa ptr detalii citologice, depistarea unor fungi
(Histoplasma, pneumocystis carinii)
ZN ptr urmrirea BAR
n situaii speciale se poate face:
Coloraia Dieterle sau imunofluorescen ptr
Legionella
Preparat umed montat n sol de KOH ptr fungi n
inf cr
1.Examen microscopic al frotiului colorat Gram:
a)triajul citologic de calitate al sputei, aspiratului hipofaringian sau
prelevatelor bronhoscopice neprotejate de contaminarea orofaringian.
Cu obiectivul uscat (mrire de 100X) se caut zone bine etalate, cu celule
diapuse n monostrat se determin pe 5-10 cmpuri nr de CI i CES. Pe ac
baz sunt propuse 3 criterii de triaj calitativ al sputelor ptr ex bacteriologic:

13

(1)criteriul grupelor de calitate citologic: 25CI, 10 CES,

fibrin sunt acceptate ptr examinare probele
(2) raportul CI/CES 5 (sunt probe purulente, n care
predomin exsudatul br-pulm, realul produs pat); un rap mai
mic de 5 indic probe nesadisfctoare (nepurulente, cu
contaminare orofaringian masiv)
(3)Scorul de calitate Q
Numr celule per cmp Calificative pentru Calificative pentru
(media pe 5-10 cmpuri)
CI
CES
1-9
0
0
10-24
+1
-1
25
+2
-2
Scorul de calitate Q = suma algebric a calificativelor pentru CI i CES + 1
(calificativ acordat pentru prezena fibrinei)

produs reprezentativ Q 1( sunt acceptate ptr bacterioscopie

i sputocultur numai probele cu Q de cel puin +1)

produs nereprezentativ Q < 1

b) Bacterioscopia cantitativ (numai pentru produsele reprezentative) se
trece la examen microscopic cu imersie(mrire 1000X). Se examineaz ct
mai multe cmpuri bine etalate i corect difereniate tinctorial, cu cel puin 3
CI i la distan de cel puin 3 diametre , n orice direcie, de CES. Pe
asemenea cmpuri se determ nr mediu de bact dintr-o categorie
microscopic

10 bacterii de aceeai categorie microscopic

asociate 3 CI /cmp criteriul asociaiei semnificative a
bacteriilor cu celule inflamatorii;

10 bacterii / cmp semnific 10 6 bacterii/ml

prob ( corespunztor concentraiei din focarul de infecie)
criteriul cantitativ.
i n sput, dar mai ales n fluidul de spltur br, un reper calitativ imp i
uor de identificat sunt celulele ciliate ale epit respir; n context inflamator,
bacteriile asociate cel ciliate capt semnificaie clinic chiar n prezena
unor CES care pot fi de contaminare orofaringian dar i de metaplazie a
epit tr-br.

14

c)Bacterioscopia prelevatelor necontaminate (exsudat pleural,) prezena bact

este semnificativ ca atare, fr a fi necesare relaii cantitative.
2) Examen microscopic al frotiului colorat Giemsa: celulele expectorate
pot fi mprite n:
a)celule inflamatorii: PMN, macrofage, Mo, ly
b)celule de exfoliere:Celule cilindrice ciliate, celule bazale, celule
metaplazice ( metaplazia epit malpighian din pneumoniile cr inflamatorii sau
neoplazii)

Cultivarea probelor:
Mediile de cultur recomandate sunt.
-AS : este minimum indispensabil; permite izolarea majorit bacteriilor
implicate n etiolog ITRI ac, iar o strie de S auriu nsmnat peste
ariile de epuizare a probei, permite, prin fen de satelitism, izolarea i
identificarea n cultur primar a speciilor de Haemophilus.
- AS ocolat: depisteaz hemofilii; este indispensabil ptr izolrile
cantitative
-un mediu diferenial lactozat (Mc C): utilizarea este facultativ
favorizeaz urmrirea BGN reperai microscopic.

Izolarea semicantitativa.
Probele cu contaminare orofaringiana sunt epuizate n 4 cadrane pe
cte:
1 plac cu GS cu striu de Sauriu (sect 4-2)
i una cu geloza-ciocolat,
care sunt incubate numai aerob la 37C (contaminantii anaerobi din
asemenea probe sunt in cantitati enorme i interfereaza izolarea bacteriilor
semnificative clinic).
Doar prelevatele necontaminate le insamantam suplimentar i pe
o a 2a placa cu GS pentru incubare anaerob
Dac dupa 24h de incubare nu apar in cultura bacteriile observate pe
frotiul direct semnificativ asociate CI, placile sunt reincubate pana la 48 ore.
n cazul prelevatelor contaminate identificam i comunicam numai
izolatele predominante i in cantitate mare (cretere cel putin pana in al 3lea
cadran de epuizare) asociate semnifieativ PMN i fibrinei pe frotiul direct
(CD 9-13). Bacteriile asociate (streptococi viridans, stafilococi coagulazonegativi) sunt de contaminare i nu sunt comunicate in buletinul de analiza.

15

lzolarea cantitativa este necesara din prelevatele prin periaj bronic. Este
semnificativ clinic bacteria prezenta in cantitate de cel putin 10 3 UFC in
mililitrul de mediu care scalda periuta de prelevare.
La izolare cantitativa putem recurge i din probele de sputa care au fost
in prealabil omogenizate(fluidifiate) cu N-acetilcisteina. Este semnificativa
clinic bacteria care realizeaza 107 UFC/mL sputa.
Antibiograma se impune pentru toate izolatele clinice semnificative.
Identificare izolatelor i comunicarea rezultatelor:
1)streptococii:
- hemolitici treb difereniai n pneumococi (cu semnif clinic posibil) i
strept viridans (fr semnif cl); sensibilitatea la optochin identific
prezumtiv pneumococii, iar solubilitatea n bil o confirm; de dorit ar fi
reacia de umflare a capsulei sau o aglutinare pasiv.
--hemoliticii treb identif pn la niv grupului Agenic
-cei nehemolitici se nreg ca atare.
Doar n pneum neonatale i cong, streptococii i nehemolitici li se testeaz
capacitatea de hidroliz a hipuratului i creterea pe BE ptr a diferenia
corect strept de gr B i D (care n ac context pot avea semnif cl).
2)Hemofilii treb identif pn la niv de specie pe baza caract de cultur i
necesit nutritive n factori X i V.
3)Neisseriile:
-identif genului: caract micros, de cultur, reac oxidazei +
-colonii alb cenuii, friabile i intens oxidaz +: puternic sugestive ptr M
catarrhalis.
4)Enterobacteriaceae pot det ITRI la gazda imunocomp: K pneumoniae i
tulpini hemolitice de E coli (necesit prelevri ale sputei ce unteaz contam
oro-faring)
5)BGN nefermentativi Pseudomonas aeruginosa
6)stafilococul auriu se comunic; restul se comunic ca staf coag neg.
7)BGP:
-corinebacteriile le nregistrm ca bacili difterimorfi numai pe baza caract de
cultur i microsc
-izolarea din cultur a bacililor antracoizi, calificai obinuit drept
contaminai, treb prudent interpretat la gazda compromis, la care,
16

ocazional, B cereus i B subtilis au fost semnalai ca o cauz de inf

pulmonare.

17