Sunteți pe pagina 1din 9

VALIDAREA

METODELOR
ANALITICE
anul 2 farmacie

Obiectivele chimiei analitice


punerea la punct a procedurilor care
s rspund la 2 ntrebri:
ntrebri:

prezen
prezen a unei specii chimice ntrntr- o prob
analiza calitativ
ct de mult dintrdintr-o anumit specie chimic
se gse
gsete ntrntr-o prob analiza
cantitativ

Pentru a putea fi utilizat n analiza


de rutin,
rutin, o procedur analitic
trebuie s fie VALIDAT
2010 - 2011

UMF Cluj

Validarea
Validarea procedurilor
anali
analitice
tice
Validare .?
Demonstrarea unei
aptitudini

Analitice: Aptitudinea de identificare


sau cuantificare
2010 - 2011

UMF Cluj

Obiectivele procedurilor
analitice i ale validrii
Obiectivul unei proceduri este de a
putea cuantifica ct mai exact posibil
fiecare prob necunoscut pe care un
laborator trebuie s o analizeze.
analizeze.
Obiectivul validrii unei proceduri
analitice este

de a demonstra c aceasta corespunde


utilizrii pentru care a fost prevzut (ICH).
este
este de a da laboratorului
laboratorului i autorit
autorit ilor
garan
garanii suficiente
suficiente c fiecare dintre
msurtorile care vor fi efectuate n rutin
rutin cu
o anumit
anumit procedur vor fi suficient
suficient de
apropiate de adevr".
adevr".

2010 - 2011

UMF Cluj

Obiectivele validrii
... dorim s cuantificm ct mai exact posibil
fiecare dintre cantit
cantitile necunoscute pe care
un laborator le analizeaz

x i T
Suficient de aproapiate,
aproapiate, semnific,
semnific, de
exemplu,
exemplu, c o msurtoare efectuat n
rutin va fi la mai pu
puin de % de valoarea
adevrat
adevrat necunoscut.
necunoscut.

x i T
2010 - 2011

UMF Cluj

Obiectivele validrii (2)


Garan
Garanii nseamn c este foarte probabil c
fiecare msurtoare va fi suficient de
aproape de valoarea adevrat
adevrat
necunoscut

Pr x i T
= probabilitatea
probabilitatea minim
minim c un rez
rezultat
ultat se va
regsi n limitele de acceptan
acceptan
Aceast probabilitate
probabilitate trebuie fixat
fixat a priori
2010 - 2011

UMF Cluj

Terminologia (defini
(definiii)
Procedura de analiz
Procedura de testare
Analit
Matrice
Domeniu de aplicare
Blanc
Valoare de referin
referin acceptat
Standard de etalonare
Standard de validare
2010 - 2011

UMF Cluj

Procedura de analiz sau de


testare
Procedura analitic este o procedur scris
care descrie toate resursele i procedurile
de operare necesare pentru efectuarea
analizei unui analit, adic
adic::

domeniul de aplicare
principiile i/sau reac
reaciile chimice
defini
definiii
reactan
reactani, echipamente
proceduri de operare
exprimarea rezultatelor
teste de conformitate
raportarea testelor

2010 - 2011

UMF Cluj

Analit
obiectul procedurii de analiz.
analiz.
poate fi o entitate:
entitate:

fizic (de ex. activitatea apei)


apei)
chimic (de ex. principiul activ singur sau
ntrntr- o form farmaceutic,
farmaceutic, lipidele totale,
totale,
aspartamul,
aspartamul, plumbul)
plumbul)
biologic (de ex. activitatea ATPATP-metric)
metric)

2010 - 2011

UMF Cluj

Matricea
const n ansamblul tuturor
componen
componenilor unei probe de
laborator, n afara analitului.
Un tip de matrice este definit ca un
grup de materiale sau produse
recunoscute de analist ca avnd un
caracter omogen fa
fa de procedura de
analiz utilizat

2010 - 2011

UMF Cluj

10

Domeniul de aplicare
este combinarea diferitelor tipuri de matrice
cu domeniul de concentra
concentraie al analitului
pentru care se aplic procedura analitic.
analitic.
poate oferi unele avertismente privind
interferen
interferenii cunoscu
cunoscui ai altor anali
analii sau
inaplicabilitatea procedurii pentru unele
matrice sau pentru anumite condi
condiii.
alegerea domeniului de aplicare depind
exclusiv de analistul care este responsabilul
studiului de validare i de cuno
cunotin
tinele pe
care acesta lele-a acumulat n timpul
dezvoltrii metodei.
metodei.

de multe ori este preferabil mpr


mprirea n mai multe
buc
buci a unui domeniu de validare dect utilizarea
unei proceduri prea generale.

2010 - 2011

UMF Cluj

11

Blancul (proba oarb)


oarb)
este un test efectuat n absen
absena
matricei (reactiv blanc) sau pe o
matrice care nu con
conine analitul
prin extindere, rspunsul
instrumental n absen
absena analitului se
nume
numete blanc instrumental.
instrumental.

2010 - 2011

UMF Cluj

12

Valoarea de referin
referin
acceptat
este o valoare care serve
servete drept referin
referin,
este o valoare agreat i rezult din:
din:

o valoare teoretic sau stabilit experimental,


experimental, bazat
bazat
pe principii tiin
tiinifice.
o valoare desemnat sau certificat bazat pe datele
experimentale ale unei organiza
organizaii na
naionale sau
interna
internaionale.
o valoare consensual ob
obinut printrprintr-un studiu n
colaborare
speran
sperana matematic a cantit
cantitii (msurabile
(msurabile)) n cazul
n care punctele anterioare nu sunt aplicabile (de ex.
media unei popula
populaii specifice de msurtori)
msurtori)

2010 - 2011

UMF Cluj

13

Standarde
Standardele de etalonare

sunt probe de concentra


concentra ie cunoscut care
permit stabilirea punctelor curbei de
etalonare
etalonare sau a gamei de etalonare
etalonare

Standardele de validare

sunt probe reconstituie n matrice sau n


orice alt material de referin
referin, pentru
pentru care
valoarea adevrat a fost stabilit prin
consens i care sunt utilizate pentru
validarea unei proceduri de analiz

2010 - 2011

UMF Cluj

14

Criteriile de validare
Specificitate selectivitate
Func
Funcie de rspuns
Linearitate
Precizie (repetabilitate i precizie intermediar)
intermediar)
Exactitatea mediei (trueness n englez)
englez)
Exactitate (accuracy n englez)
englez)
Limit de detec
detecie (LOD)
Limit de cuantificare (LOQ)
Interval de dozare
Sensibilitate
2010 - 2011

UMF Cluj

15

Specificitate selectivitate (1)


Specificitatea unei proceduri de analiz reprezint
capacitatea acesteia de a stabili de o manier
univoc existen
existen analitului n prezen
prezena altor
componen
componeni care pot fi prezen
prezeni.
O procedur de analiz este a
aa-zis specific
specific dac
ofer garan
garania c semnalul msurat provine numai de
la substan

a
de
analizat

i
dac
permite
analiza
substan
cantitativ a unui parametru fizicofizico-chimic sau a unei
grupri func
funcionale a unuia sau a mai multor
substan
substane din prob.
prob.
Specificitatea este proprietatea unei proceduri de
analiz de a urmri exclusiv caracteristicile
analitului, garantnd c rezultatele analizei sunt
generate doar de acesta.

2010 - 2011

UMF Cluj

16

Specificitate selectivitate (2)


Specificitatea este proprietatea unei
proceduri de analiz de a urmri exclusiv
caracteristicile analitului, garantnd c
rezultatele analizei sunt generate doar de
acesta.

selectivitatea/specificitatea se bazeaz
bazeaz pe absen
absena
interferen
interferenilor.

Specificitatea poate fi inerent unei anumite


tehnici (de ex. identificarea prin
spectroscopie IR sau spectrometrie de
mas)
mas)

ea poate fi ob
obinut utiliznd o tehnic de separare
(de ex. cromatografia),
cromatografia), folosind o metod
matematic (de ex. rezolu
rezoluia a dou ecua
ecuaii
simultane) sau biochimic
biochimic (reac
(reacii enzimatice).

2010 - 2011

UMF Cluj

17

Func
Funcia de rspuns
Func
Funcia de rspuns a unei proceduri
de analiz traduce,
traduce, n interiorul unui
domeniu de dozare, rela
relaia care exist
ntre rspuns (semnal) i
concentra
concentraia (cantitatea) de
substan
substan (analit) din proba de
analizat.
Func
Funcia de rspuns monoton cea mai
simpl care exprim aceast corela
corelaie
se nume
numete curb de calibrare
calibrare.
2010 - 2011

UMF Cluj

18

Linearitatea (rezultatelor)
Linearitatea unei proceduri de analiz este
capacitatea acesteia de a ob
obine rezultate
direct propor
proporionale cu cantitatea
(concentra
(concentraia) analitului din prob , n
interiorul unui domeniu de dozare.
Criteriul de linearitate trebuie aplicat
rezultatelor
concentra
concentraie calculat =
f(concentra
(concentraie introdus)
introdus)
i nu rspunsurilor
semnal = f(concentra
(concentraie introdus)
introdus)
2010 - 2011

UMF Cluj

19

Exactitatea mediei
(bias = eroarea
eroarea sistematic)
sistematic)
Exactitatea mediei unei proceduri analitice
exprim ngustimea acordului ntre valoarea
medie ob
obinut dintrdintr-o serie de msurtori
i o valoare care este acceptat fie ca
valoare conven
convenional adevrat,
adevrat, fie ca
valoare de referin
referin acceptat
Msurarea exactit
exactitii mediei se exprim n
termeni de regsire sau de eroare
sistematic (bias)
(bias) absolut
absolut sau relativ.
relativ.
De remarcat c nu trebuie fcut confuzia
ntre exactitatea mediei i exactitatea
procedurii ca atare.
2010 - 2011

UMF Cluj

20

Precizia
Precizia exprim ngustimea acordului
(gradul de dispersie, coeficientul de
varia
variaie) dintre
dintre o serie de msurtori care
provine din mai multe serii ale aceleia
aceleiai
probe omogene (rezultate independente) n
condi
condiii identice date.

Precizia ofer date asupra erorilor ntmpltoare


(aleatoare) i nu are nici o legtura cu valoarea
adevrat.
adevrat.

Precizia poate fi evaluat pe trei nivele:


nivele:

repetabilitatea
precizia intermediar
reproductibilitatea

Msura preciziei este calculat din devia


deviaia
standard a rezultatelor.
2010 - 2011

UMF Cluj

21

Precizia (2)
Repetabilitatea:
Repetabilitatea:

aceea
aceeai procedur,
procedur, pe probe identice, n acela
acelai
laborator, de ctre acela
acelai operator, utiliznd acela
acelai
echipament i ntrntr-un interval scurt de timp.

Precizia intermediar:
intermediar:

aceea
aceeai procedur,
procedur, pe probe identice, n acela
acelai
laborator, de ctre diver
diveri operatori, folosind
echipamente diferite i ntrntr-un interval de timp dat.

Reproductibilitatea:
Reproductibilitatea:

aceea
aceeai procedur,
procedur, pe probe identice, n laboratoare
diferite, de ctre diver
diveri operatori i folosind
echipamente diferite.

2010 - 2011

UMF Cluj

22

Exactitatea
ngustimea acordului dintre rezultatul unei
msurtori i o valoare de referin
referin
acceptat ca fiind adevrat,
adevrat, numit
numit i
valoare conven
convenional adevrat
adevrat.
ngustimea acestui acord exprimat prin
exactitate este rezultatul sumei erorilor
sistematice i ntmpltoare,
ntmpltoare, cu alte cuvinte
eroarea total corespunztoare rezultatului.
rezultatului.
Prin urmare, exactitatea este suma dintre
exactitatea mediei i precizie

2010 - 2011

UMF Cluj

23

Limite de detec
detecie i de
cuantificare
Limita de detec
detecie

cea mai mic cantitate de analit dintrdintr-o


prob care poate fi detectat dar nu poate fi
cuantificat n condi
condiiile experimentale
descrise de procedur

Limita de cuantificare

cea mai mic cantitate de analit dintrdintr-o


prob care poate fi cuantificat (exprimat
(exprimat
printrprintr-o cantitate) n condi
condi iile experimentale
descrise de procedur

2010 - 2011

UMF Cluj

24

Intervalul de dozare
Intervalul de dozare al unei proceduri
analitice este dat de regiunea dintre
nivelul superior i nivelul inferior
(aceste valori sunt incluse n
intervalul de dozare) pentru care
care ss-a
demonstrat c procedura are un nivel
acceptabil al exactit
exactitii (exactitatea
mediei + precizie) i liniarit
liniaritii.

2010 - 2011

UMF Cluj

25

Sensibilitatea
raportul dintre varia
variaia rspunsului
procedurii i varia
variaia cantit
cantitii de
analit.
O procedur este numit sensibil
sensibil
dac o modificare mic a
concentra
concentraiei sau cantit
cantitii de analit
atrage dup sine o varia
variaie
semnificativ a rspunsului.
rspunsului.
Sensibilitatea unei proceduri NU este
capacitatea sa de a detecta
concentra
concentraii mici de analit.
2010 - 2011

UMF Cluj

26