3.

METODE MODERNE DE
NSMNARE A
MICROORGANISMELOR

3.1.SISTEMUL AUTOMAT DE NSMNAT N SPIRAL

Metoda de nsmnare n spiral este un sistem automat

de obinere a numrului de celule viabile.
Prin folosirea unui tub capilar cu vrf, se poate distribui
proba lichid n form spiralat pe suprafaa unei plci cu agar
dinspre centru nspre exteriorul plcii aflate n rotaie. Dup ce
lichidul care conine microorganisme este distribuit, placa cu
agar se incubeaz peste noapte la o temperatur adecvat
dezvoltrii coloniilor.
Coloniile aprute de-a lungul traiectoriei spiralei pot fi
numrate fie, manual, fie electronic. Timpul pentru
insmnarea probei este de ordinul a ctorva secunde,
comparativ cu metoda convenional, n care este de ordinul
minutelor.

MODURI DE DISTRIBUIRE A
PROBEI PENTRU MAXIM
EFICIEN

SISTEMUL AVANSAT DE NSMNARE N

SPIRAL AUTOPLATE

A fost special conceput pentru a crete

productivitatea i pentru a mbuntii rezultatele
n cadrul laboratorului de microbiologie.

AVANTAJELE

SISTEMULUI

Acest aparat prezint urmatoarele avantajele:

se elimin nevoia de diluii repetate;
se economisete timp;
se economisesc bani;
are loc automatizarea laboratorului;

Aceast tehnologie unic are drept rezultat

reducerea a din materialele disponibile i
economisirea semnificativ de timp i munc .

Aplica

ii:

n I.A. metoda de nsmnare n spiral este

utilizat ntr-un domeniu larg de
aplicaii,incluznd testri pentru bacterii
patogene i de alterare.
Ceea ce atrage la acest sistem este uurina de
utilizare, mrimea mic, durata mare de
pstrare. Nu este necesar prepararea agarului,
i rezultatele sunt uor de citit.

MOD DE LUCRU

Tubul capilar cu vrf sub form de sering

disperseaz proba n interiorul unei cutii cu agar
aflate n micare de rotaie. Tubul capilar cu vrf
se deplaseaz din apropierea centrului spre
exterior n timp ce placa se rotete, depozitnd
o cantitate de prob din ce n ce mai mic pe
msur ce nainteaz spre exterior. Acest mod
special de nsmnare elimin o serie
considerabil de diluii prin funcionarea
continu, reducnd numrul microorganismelor
plasate de-a lungul traiectoriei spiralei.

3.2. SISTEMUL PETRIFILM

Sistemul Petrifilm este un sistem

ingenios cu nutrieni rehidratabili
corespunztori, integrai ntr-o serie de
filme ntr-o unitate care este puin mai
mare dect o carte de credit.
Ceea ce atrage la acest sistem este
uurina de utilizare, mrimea mic,
durata mare de pstrare. Nu este
necesar prepararea agarului, i
rezultatele sunt uor de citit.
Recent, companiile au introdus un
numrator Petrifilm, la care analistul
trebuie doar s aeze Petrifilmul cu
coloniile n unitate i acesta va numra
automat i va nregistra numrul de
celule viabile pe calculator.

 Rondelele Petrifilm sunt folosite pentru

determinarea numrului de colonii aerobe i
conin nutrieni modificai bil rou violet, ageni
gelifiani solubili n ap rece i indicatorul
tetrazolium care faciliteaz deosebirea coloniilor.
Timpul i temperatura de incubare, precum i
interpretarea rondelelor Petrifilm variaz n
funcie de metod.

AOAC INTERNATIONAL i FDA (Administraia

alimentelor i medicamentelor) definesc coliformii ca
fiind bastonae gram negative care produc acid i gaz
din lactoz n timpul fermentrii metabolice.

coliformi

Forme de bule asociate cu o colonie considerat

coliforma

Mod de utilizare:
Metoda A. Inocularea cu prob lichid
Se aeaz placa Petrifilm pe un nivel al suprafaei, cu partea grilat n
jos. Se desface partea superioar a filmului .
Cu o pipeta perpendicular pe placa de Petrifilm, se pipeteaz 1 mL de
prob n centrul filmului inferior.
Se d drumul prii superioare a filmului.

Se incubeaz plcile cu
partea transparent n sus,
n grmezi de pan la 20 de
plci. Temperatura i timpul
de incubare vor varia n
funcie de metoda i
echipamentul disponibil.
Se dezinfecteaz nainte
de a aruncare, prin tratare
n autoclav sau prin
nmuierea n 20% clor timp
de o 1 or.

Metoda B. Hidratarea i folosirea ca mediu

solid.
Se hidrateaz i se desface fiecare plac
Petrifilm nainte de a trece la urmtoarea plac.
Se urmeaz paii din metoda A, folosind un
mL de ap distilat, mediu de cultur lichid, sau
solui tampon cu pH ntre 6,6 si 7,2 pentru
hidratarea plcii Petrifilm.
Plcile aerobe hidratate pot fi depozitate intrun sistem de refrigerare ntr-o pung sigilat
pn la 14 zile nainte de utilizare.

Petrifilmul hidratat poate fi folosit n mai

multe feluri:

Trasarea dungilor pentru coloniile izolate cu o

ans steril;
Se atinge suprafaa circular cu gel de o
suprafa de interes (degetul, clana uii, partea
superioar a mesei de lucru etc. )
Se iau probe de aer prin redeschiderea filmului
superior;
Coloniile bacteriene de pe plcile de Petrifilm sunt
roii din cauza culorii indicatorului din mediu.
Culoarea roie ajut la distingerea lor de
particulele de praf sau de ali contaminani din
mediu.

3.3. METODA MEMBRANELOR FILTRANTE

Cerinele mereu n cretere ale

consumatorilor privind calitatea i perioada de
valabilitate a alimentelor i buturilor trebuie
permanent satisfcute de ctre productori.

Controlul microbiologic i aseptic joac un rol

important ntr-o astfel de asigurare a calitii.

n industria buturilor rcoritoare,

calitatea microbiologic ,biologic si igienic a
produselor, sunt criterii importante de
performan.

Motivul:

civa microbi sunt deseori suficieni

pentru a altera cantiti mari de
butur

Principiul acestei
metode este bazat pe
concentrarea
microorganismelor din
probe relativ mari, pe
suprafaa unor filtre
membran, urmat de o
incubare a acestora pe
medii de cultur sub
form de cartonae sau
agar.

DESCRIERE

ntr-un suport este montat un filtru membran

cu o porozitate adecvat, iar proba este filtrat
prin acesta. n acest proces, microorganismele din
proba de controlat sunt reinute pe suprafaa
filtrului prin efectul de separare al membranei
acestuia.
Inhibitorii creterii pot fi ndeprtai prin
cltirea suportului cu soluie steril de NaCl dup
filtrare.
Schimbul de produse nutritive i metabolice
are loc prin sistemul poros al filtrului membran.

BENEFICII

Precizie de detectare sporit;

Rezultate cantitative :
- Coloniile vizibile pot fi raportate
direct n volumul de prob.
Documentare :
- Filtrele membran cu coloniile
crescute pe ele pot fi arhivate pentru
documentarea testului efectuat.

V MULUMIM!
Carolea Simona
Catrina Andreea
Ciolpan Ramona