Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Coordonator tiinific
Prof. Dr. Octavian Popescu
Cluj-Napoca
2012
CUPRINS REZUMAT
Pag. 1
INTRODUCERE
Pag. 2
CONSIDERAII TEORETICE
Pag. 2
Pag. 2
Pag. 3
(selectiv)
3. Caracterizarea din punct de vedere taxonomic, morfologic, ecologic i
Pag. 3
Pag. 8
Pag. 8
Pag. 9
Pag. 9
Pag. 10
Pag. 11
Pag. 11
Pag. 15
Pag. 17
Pag. 17
Pag. 21
Pag. 22
Pag. 22
Pag. 26
Pag. 27
Pag. 27
Pag. 30
Pag. 32
Bibliografie selectiv
Pag. 33
Pag. 35
CUVINTE CHEIE
Pag. 36
Introducere
Prezentul studiu se nscrie pe direcia de revizuire taxonomic prin metode moleculare
a unor specii de plante al cror statut taxonomic este discutabil. Speciile/subspeciile endemice
sau rare selectate pentru studiu sunt caracterizate de un statut taxonomic incert, ele fiind
considerate, doar pe baza caracterelor morfologice i n absena unor studii genetice, de ctre
diferii autori ca avnd un statut taxonomic fie de specie distinct, fie subspecie sau chiar
varietate a unei alte specii. ntruct diferenele dintre caracterele morfologice care fac
distincia dintre specii/subspecii sunt minore i pot fi urmarea unor polimorfisme individuale
determinate de factorii de mediu i nu a unor diferene interspecifice, s-a considerat oportun
realizarea unor studii de genetic molecular care s contribuie la elucidarea statutului lor
taxonomic. Taxonii problematici selectai pentru studiu sunt urmtorii: Pulmonaria
filarszkyana, Onosma pseudoarenaria, Eritrichium jankae (familia Boraginaceae), Primula
leucophylla i Primula intricata (familia Primulaceae), iar statutul lor taxonomic va fi discutat
prin prisma relaiei lor cu speciile ale cror subspecii sau varieti sunt considerai a fi:
Pulmonaria rubra, Onosma arenaria, Eritrichium nanum i Primula elatior.
Consideraii teoretice
1. Filogenia i analizele filogenetice (selectiv)
Principiul pe care se bazeaz filogenetica este acela c membrii unui grup sau clade
mprtesc o istorie evolutiv comun i sunt mai nrudii ntre ei dect cu membrii altui
grup. Filogenia molecular presupune utilizarea macromoleculelor biologice (proteine, acizi
nucleici) pentru a obine informaii asupra istoriei evolutive a taxonilor i asupra legturilor
lor de nrudire.
Metodele filogenetice de construire a arborilor implic parcurgerea mai multor etape,
ulterior obinerii setului de date: alinierea secvenelor, determinarea modelului de substituie,
construirea arborelui i evaluarea arborelui. Exist dou grupe majore de metode de construire
a arborilor filogenetici, i anume: metode bazate pe distan i metode bazate pe analiza de
caractere. Cele mai cunoscute metode fenetice sunt UPGMA (Unweighted Pair Group
Method with Arithmetic means), NJ (Neighbor Joining) i ME (Minimum Evolution), iar
Fig. 2. Onosma pseudoarenaria n habitatul natural de la Suatu, jud. Cluj (foto: Liviu Filipa).
Eritrichium nanum (denumire popular ochiul arpelui) este o plant rar, cu populaii
srace, care se ntlnete pe stncriile i bolovniurile calcaroase expuse la soare din etajul
alpin i subalpin (fig. 3). Se ntlnete n Alpi Centrali i de Sud i n Carpaii de S-E (Chater,
1972).
Variabilitatea acestei specii este destul de discutat, unii autori considernd
subspeciile genului drept specii separate sau varieti. Flora Europaea (Chater, 1972) i
Fig. 3. Eritrichium nanum subsp. nanum n habitatul natural din Piatra Iorgovanului (stnga; foto: Dana uteu) i
n Munii Ciuca (dreapta; foto: Liviu Filipa).
Primula intricata (P. elatior subsp. intricata) se ntlnete n pajitile umede din
regiunea subalpin i alpin, n Munii Pirinei, Alpi i peninsula Balcanic (Nyrdy i
Guuleac, 1960). n Romnia, este o specie rar care habiteaz n Munii Bucegi i Munii
Brsei (Beldie, 1979; Nyrdy i Guuleac, 1960).
Difer de P. elatior prin bracteele mai lungi, lobii corolei mai profund emarginai iar
capsula este de lungimea caliciului (10-12 mm, spre deosebire de P. elatior unde capsula
ntrece cu mult caliciul) (Nyrdy i Guuleac, 1960).
Statutul ei taxonomic este nc dezbtut, unii autori o consider o specie distinct
(Grenier i Godron, 1853; Nyrdy i Guuleac, 1960; uteu i colab., 2011), alii o consider
o varietate a P. elatior (Pax i Knuth, 1889), iar alii o consider drept o subspecie a P. elatior
(Ldi, 1927; Ciocrlan, 2000; Valentine i Kress, 1972; Beldie, 1979; Wright Smith i
Fletcher, 1947).
Contribuii personale
4. Materiale i metode (selectiv)
Strategia de recoltare a materialului biologic
Materialul biologic folosit la analize a fost recoltat din mai pn n septembrie, ntre
anii 2006-2010 din mai multe locaii. S-a ncercat recoltarea unui numr de minim 5 indivizi
din fiecare populaie, care au fost introdui imediat n tuburi pline cu silicagel. n paralel, au
fost recoltate i vouchere care au fost folosite la determinarea fr dubii a speciei colectate.
Ulterior, aceste vouchere au fost puse la presat n ierbar. Adiional, n cadrul analizei speciilor
P. elatior - P. leucophylla - P. intricata s-a folosit i material de ierbar provenit din colecia
Herbarului Cluj-Napoca aflat n incinta Grdinii Botanice Alexandru Borza.
Extracia ADN-ului
S-a realizat prin mai multe metode, i anume: un protocol adaptat dup Doyle i Doyle
(1987, 1990), un protocol adaptat dup Mengoni (Mengoni i colab., 2000) i prin utilizarea
unui kit comercial: DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen).
Analiza microsateliilor cloroplastici
S-a bazat pe utilizarea a ase amorse dintre cele descrise de Weising i Gardner
(1999): ccmp 2, ccmp 3, ccmp 4, ccmp 6, ccmp 7 i ccmp 10. Aceast analiz a fost utilizat
doar pentru testarea polimorfismului n cazul unor populaii aparinnd genurilor Onosma i
Pulmonaria. Interpretarea rezultatelor s-a realizat prin analiza prezenei sau absenei benzilor
corespunztoare amplificrii cu fiecare amors n parte din gelul de poliacrilamid.
Analiza PCR-RFLP
Analiza PCR-RFLP s-a realizat pe trei regiuni din genomul cloroplastic: trnD-T, trnCD i psbA-trnS (dup Demesure i colab., 1995). Aceast analiz a fost utilizat doar pentru
testarea polimorfismului n cazul unor populaii aparinnd genurilor Onosma i Pulmonaria.
Interpretarea rezultatelor s-a realizat prin analiza prezenei sau absenei benzilor
corespunztoare amplificrii cu fiecare amors n parte din gelul de poliacrilamid.
Analiza AFLP
Analiza AFLP s-a realizat la toi indivizii din unele populaii din genurile Primula,
Eritrichium i Onosma. Pentru diferitele genuri de plante luate n lucru s-au folosit combinaii
diferite de amorse sugerate n literatura de specialitate. Scoringul fragmentelor a fost realizat
cu programul GeneMapper v.4.0 (Applied Biosystems) pentru a produce o matrice bazat pe
prezen/absen. Cu ajutorul scriptului n platforma R, AFLPdat, (Ehrich, 2006) s-au estimat
8
Fig. 5. Dendrogram la genul Pulmonaria, construit prin metoda ME, pe baza secvenelor ITS1, rpL16, trnG,
trnL, rpl32-ndhF, psbD-trnT, trnD-E i trnH-psbA.
11
Fig. 6. Dendrogram la genul Onosma, construit prin metoda ME pe baza secvenei ITS1.
Fig. 7. Dendrogram la genul Onosma, construit prin metoda ME, pe baza secvenelor rpL16, trnG, trnL, rpl32ndhF, psbD-trnT, trnD-E, trnT-L, rps16-trnK i trnH-psbA.
12
Onosma
pseudoarenaria
Cod
populaie
Ors-OV
BC-OVs
CD-OA
LD-OA
Cb-OP
C-OP
Del-OP
GS-OP
Go-OP
IC-OP
OM-OP
PH-OP
Sf-OP
S-OP
Proporia
markerilor variabili
0,0660
0,1718
0,1762
0,0748
0,2334
0,2951
0,2070
0,2290
0,1277
0,1938
0,1806
0,1806
0,2731
0,1497
Diversitatea
genetic
0,0440
0,0845
0,0819
0,0352
0,1002
0,1353
0,0845
0,1027
0,0851
0,0886
0,0809
0,0771
0,1490
0,0722
Indicele de
raritate (DW)
21,1819
192,8069
28,2933
59,9596
17,7642
29,4634
19,3396
30,9598
5,3400
31,9461
21,0883
44,7643
12,1602
16,4296
Pe baza matricei AFLP a fost generat un arbore Neighbor Joining (fig. 8).
Fig. 8. Dendrogram la genul Onosma, construit prin metoda NJ, pe baza matricei AFLP.
13
0.16
Coordinate 2
11%
0.12
0.08
0.04
0
-0.04
-0.08
-0.12
-0.16
-0.2
-0.36 -0.3 -0.24 -0.18 -0.12 -0.06
Coordinate 1
0.06 0.12
36%
Fig. 9. Rezultate PCO utiliznd indicele euclidean la genul Onosma pe baza matricei AFLP (negru O.
pseudoarenaria, verde O. viridis, mov O. arenaria, albastru O. visianii).
Procentul de variaie
63,68083
36,31917
FST
0,63681
n cazul n care s-au definit trei grupuri, primul corespunznd speciei O. visianii, al
doilea corespunznd speciei O. viridis (toate cele patru populaiile) i al treilea fiind un grup
comun O. arenaria i O. pseudoarenaria, s-au obinut rezultatele evideniate n tabelul 3.
Procentul de variaie
51,95108
25,69971
22,34921
14
FST
0,77651
Procentul de variaie
48,31
24,38
FST
0,72692
27,30
Fig. 10. Dendrogram la genul Eritrichium, construit prin metoda ME pe baza secvenei ITS1.
Din cele 13 regiuni cloroplastice selectate s-a reuit amplificarea i secvenierea doar a
nou regiuni: rpL16, trnG, trnL, rpl32-ndhF, psbD-trnT, trnD-E, trnT-L, rps16 i trnH-psbA,
cu o lungime concatenat de aproximativ 5800 nucleotide, care au fost utilizate pentru
construcia de arbori filogenetici. Arborii au fost construii prin metodele ME (fig. 11), ML,
NJ, UPGMA.
Fig. 11. Arbore de consens 50% la genul Eritrichium, construit prin metoda ME, pe baza secvenelor rpL16,
trnG, trnL, rps16, rpl32-ndhF, psbD-trnT, trnD-E, trnT-L i trnH-psbA.
Analiza AFLP
Parametrii determinai cu scriptul AFLPdat: locii polimorfi, diversitatea genetic a lui
Nei i indicele de raritate sunt prezentai n tabelul 5.
18
Specia
Populaia
Eritrichium
jankae
GH-EJ
C-EJ
ALPI-EN
PC-EN
CZ-EN
CG-EN
BO-EN
Rei-EN
Eritrichium
nanum
Proporia markerilor
variabili
0,3957
0,5294
0,2459
0,3636
0,4759
0,3957
0,3689
0,2566
Diversitatea
genetic
0,2228
0,2852
0,1345
0,1903
0,3172
0,1803
0,1786
0,1381
Indicele de
raritate (DW)
25,7616
24,0836
94,9871
42,2113
18,4224
62,1173
39,5904
24,4530
Pe baza matricei AFLP a fost generat un arbore Neighbor Joining (fig. 12).
Fig. 12. Dendrogram la genul Eritrichium, construit prin metoda NJ, pe baza matricei AFLP.
19
Procentul de variaie
53,48
9,60
FST
0,63086
36,91
Procentul de variaie
29,9
15,4
FST
0,42897
54,7
Fig. 13. Rezultate PCO la genul Eritrichium pe baza matricei AFLP (negru populaiile de E. nanum i E.
jankae din Carpai, ptrat albastru populaiile de E. nanum din Alpi).
20
22
Fig. 14. Dendrogram la genul Primula, construit prin metoda ME, pe baza secvenelor rpL16, psbD-trnT i
trnH-psbA.
Primula elatior
Primula
leucophylla
Populaia
Ap-PE
Fg-PE
Pos-PE
Pcra-PE
Roc-PE
Rot-PE
Cear-PE
Tatr-Kob-PE
Tatr-Pol-PE
Tatr-Lil-PE
Alp-Pass-PE
Jul-PE
Alp-Alt-PE
Alp-Gross-PE
Ciuc-PL
Gho-PL
Clp-PL
Clt-PL
Proporia markerilor
variabili
0,1630
0,1545
0,2489
0,1888
0,2060
0,1673
0,1931
0,2017
0,2060
0,2017
0,1416
0,0944
0,1373
0,2017
0,1759
0,1330
0,0472
0,1201
23
Diversitatea
genetic
0,0781
0,0746
0,1270
0,0892
0,0987
0,0815
0,0969
0,0978
0,0995
0,1101
0,0695
0,0429
0,0660
0,1021
0,0866
0,0652
0,0472
0,0575
Indicele de
raritate (DW)
18,4976
25,3190
58,5491
20,7056
17,1952
14,0721
11,6968
21,5133
20,0620
21,0011
19,3688
17,8315
16,3522
17,0290
21,8210
14,7325
3,7617
15,6667
Fig. 15. Dendrogram la genul Primula, construit prin metoda NJ, pe baza matricei AFLP.
Rezultatele AMOVA obinute n cazul cnd nu se definete niciun grup sunt trecute n
tabelul 9.
Tabelul 9. Rezultatele AMOVA fr definirea grupurilor la genul Primula.
Sursa variaiei
ntre populaii
n cadrul populaiilor
Procentul de variaie
44,67
55,33
FST
0,44669
n cazul n care s-au definit dou grupuri pe criterii taxonomice, primul corespunznd
populaiilor de Primula elatior i al doilea corespunznd populaiilor de Primula leucophylla,
s-au obinut rezultatele evideniate n tabelul 10.
Tabelul 10. Rezultatele AMOVA cu definirea a dou grupuri pe criterii taxonomice la genul
Primula.
Sursa variaiei
ntre grupuri
ntre populaiile din cadrul grupurilor
n cadrul populaiilor
Procentul de variaie
14,94951
35,20986
49,84062
FST
0,50159
n cazul n care s-au definit trei grupuri pe criterii biogeografice, primul corespunznd
populaiilor de Primula elatior din Alpi, al doilea corespunznd populaiilor de P. elatior din
24
Procentul de variaie
18,73280
30,21576
51,05144
FST
0,48949
n cazul n care s-au definit patru grupuri att pe criterii taxonomice ct i pe criterii
biogeografice, primul corespunznd populaiilor de Primula elatior din Alpi, al doilea
corespunznd populaiilor de P. elatior din Tatra, al treilea corespunznd populaiilor de P.
elatior din Carpaii de S-E i al patrulea corespunznd populaiilor de Primula leucophylla, sau obinut rezultatele evideniate n tabelul 12.
Tabelul 12. Rezultatele AMOVA cu definirea a patru grupuri pe criterii biogeografice i
taxonomice la genul Primula.
Sursa variaiei
ntre grupuri
ntre populaiile din cadrul
grupurilor
n cadrul populaiilor
Procentul de variaie
21,79270
25,79792
FST
0,47591
52,40938
Analiza Principal Coordinate (PCO) s-a realizat pe baza matricei AFLP. Cnd se
utilizeaz indicele euclidean se obin rezultatele prezentate n figura 16 - stnga, iar cnd se
utilizeaz indicele Simpson se obin rezultatele prezentate n figura 16 - dreapta.
Fig. 16. Rezultate PCO pe baza indicelui euclidean (stnga) i pe baza indicelui Simpson (dreapta) la genul
Primula pe baza matricei AFLP (negru - populaiile de P. elatior din Carpaii de S-E, cruce albastr - populaiile
de P. elatior din Tatra, ptrat albastru - populaiile de P. leucophylla, romb verde - populaiile de P. elatior din
Alpi).
25
27
Fig. 17. Dendrogram la Primula intricata, construit prin metoda ME, pe baza secvenelor ITS1, trnL i trnHpsbA.
Analiza AFLP
Pe baza matricei AFLP a fost generat un arbore Neighbor Joining (fig. 18).
Fig. 18. Dendrogram la Primula intricata, construit prin metoda NJ, pe baza matricei AFLP.
28
Populaia
Diversitatea
genetic
Primula elatior
Ap-PE
Fg-PE
Tatr-Kob-PE
Jul-PE
Alp-Gross-PE
Proporia
markerilor
variabili
0,2356
0,2101
0,2675
0,1337
0,29298
0,1133
0,1031
0,1324
0,0611
0,1490
Indicele de
raritate
(DW)
32,6641
54,4281
63,3665
27,9473
32,3495
Primula leucophylla
Clt-PL
0,1401
0,0700
26,6714
Primula intricata
Alp-Pass-PI
0,1337
0,0687
167,1520
Procentul de variaie
67,7
32,3
FST
0,67701
n cazul n care s-au definit dou grupuri pe criterii taxonomice, primul corespunznd
populaiilor de Primula elatior i Primula leucophylla i al doilea corespunznd populaiei de
Primula intricata, s-au obinut rezultatele evideniate n tabelul 15.
Tabelul 15. Rezultatele AMOVA cu definirea a dou grupuri pe criterii taxonomice la
populaiile genului Primula, utilizate n studiul speciei Primula intricata.
Sursa variaiei
ntre grupuri
ntre populaiile din cadrul
grupurilor
n cadrul populaiilor
Procentul de variaie
58,93
22,36
FST
0,81298
18,71
n cazul n care s-au definit trei grupuri pe criterii taxonomice, primul corespunznd
populaiilor de Primula elatior, al doilea corespunznd populaiei de Primula intricata i al
treilea corespunznd populaiei de Primula leucophylla s-au obinut rezultatele evideniate n
tabelul 16.
29
Procentul de variaie
43,92
30,53
FST
0,74457
25,55
Fig. 19. Rezultate PCO pe baza indicelui Simpson pentru populaiile genului Primula, utilizate n studiul speciei
Primula intricata pe baza matricei AFLP (negru - populaiile de P. elatior din Carpai, ptrat mov - populaiile
de P. elatior din Alpi, triunghi albastru - populaia de P. leucophylla, romb verde - populaia de P. intricata din
Alpi).
32
Bibliografie selectiv
1. Ball, P. W., Riedhl, H., 1972. Onosma. In: Tutin, T. G., Heywood, V. H., Burges, N. A., Valentine, D.
H., Walters, S. M., Webb, D. A., (edit.), Flora Europaea, III. University Press, Cambridge.
2. Beldie, A., 1967. Flora i vegetaia Munilor Bucegi. Ed. Academiei Republicii Socialiste Romnia,
Bucureti.
3. Beldie, A., 1979. Flora Romniei. Determinator ilustrat al plantelor vasculare II. Ed. Academiei
Republicii Socialiste Romnia, Bucureti.
4. Borza, A., 1947. Conspectus florae Romaniae. Regionumque affinum. Tipografia Cartea
Romneasc, Cluj.
5. Chater, A. O., 1972. Eritrichium. In: Tutin, T. G., Heywood, V. H., Burges, N. A., Valentine, D. H.,
Walters, S. M., Webb, D. A., (edit.), Flora Europaea, III. University Press, Cambridge.
6. Ciocrlan, V., 2000. Flora ilustrat a Romniei. Pteridophyta et Spermatophyta. Ed. Ceres, Bucureti.
7. Ciocrlan, V., 2009. Flora ilustrat a Romniei. Pteridophyta et Spermatophyta. Ed. Ceres, Bucureti.
8. Cohen, J. I., Davis, J. I., 2009. Nomenclatural changes in Lithospermum (Boraginaceae) and related
taxa following a reassessment of phylogenetic relationships. Brittonia, 61:101-111.
9. Comes, H. P., Kadereit, J. W., 2003. Spatial and temporal patterns in the evolution of the flora of the
European Alpine System. Taxon, 52:451-462.
10. Demesure, B., Sodzi, N., Petit, R. J., 1995. A set of universal primers for amplification of polymorphic
non-coding regions of mitochondrial and chloroplast DNA in plants. Molecular Ecology, 4:129-131.
11. Dihoru, G., Negrean, G., 2009. Cartea roie a plantelor vasculare din Romnia. Ed. Academiei Romne,
Bucureti.
12. Doyle, J. J., Doyle, J. L., 1987. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf
tissue. Phytochemical Bulletin, 19:11-15.
13. Doyle, J. J., Doyle, J. L., 1990. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus, 12:13-15.
14. Ehrich, D., 2006. AFLPdat: a collection of R functions for convenient handling of AFLP data.
Molecular Ecology Notes, 6:603-604.
15. Eidesen, P. B., Alsos, I. G., Popp, M., Stensrud, ., Suda, J., Brochmann C., 2007. Nuclear vs. plastid
data: complex Pleistocene history of a circumpolar key species. Molecular Ecology, 16:3902-3925.
16. Excoffier, L., Lischer, H. E. L., 2010. Arlequin suite ver 3.5: A new series of programs to perform
population genetics analyses under Linux and Windows. Molecular Ecology Resources, 10:564-567.
17. Freeland, J. R., 2005. Molecular Ecology. John Wiley & Sons, Chichester.
18. Grenier, J. C. M., Godron, D. A., 1853. Flore de France, ou Description des Plantes qui Croissent
Naturellement en France et en Corse, J.B. Baillire, Paris.
19. Grinescu, I., 1960. Eritrichium. In: Svulescu, T., (edit.), Flora Republicii Populare Romne, VII. Ed.
Academiei Republicii Populare Romne, Bucureti.
20. Grinescu, I., Nyrdy, E. I., 1960. Onosma. In: Svulescu, T., (edit.), Flora Republicii Populare
Romne, VII. Ed. Academiei Republicii Populare Romne, Bucureti.
21. Guuleac, M., 1960. Pulmonaria. In: Svulescu, T., (edit.), Flora Republicii Populare Romne, VII. Ed.
Academiei Republicii Populare Romne, Bucureti.
22. Hall, T. A., 1999. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program
for Windows 95/98/NT. Nucleic Acids Symposia Series, 41:95-98.
23. Hammer, ., Harper, D. A. T., Ryan, P. D., 2001. PAST: Paleontological Statistics Software Package
for Education and Data Analysis. Palaeontologia Electronica, 4(1):9.
24. Huson, D. H., Bryant, D., 2006. Application of phylogenetic networks in evolutionary studies.
Molecular Biology and Evolution, 23(2):254-267.
25. Jacquemyn, H., Honnay, O., Galbusera, P., Roldn-Ruiz, I., 2004. Genetic structure of the forest herb
Primula elatior in a changing landscape. Molecular Ecology, 13:211-219.
26. Kimura, M., 1980. A simple method for estimating evolutionary rate of base substitution through
comparative studies of nucleotide sequences. Journal of Molecular Evolution, 16:111-120.
27. Kolarik, V., Zozomov-Lihov, J., Mrtonfi, P., 2010. Systematics and evolutionary history of the
Asterotricha group of the genus Onosma (Boraginaceae) in central and southern Europe inferred from
AFLP and nrDNA ITS data. Plant Systematics and Evolution, 290:21-45.
28. Ldi, W., 1927. Fam. Primulaceae, In: Hegi, G., (edit.), The Illustrate flora of Central Europe (in
German), 5(3). Carl Hanser, Mnchen.
33
34
Pag. 1
Pag. 3
Pag. 5
Pag. 6
Pag. 6
Pag. 11
Pag. 17
Pag. 18
Pag. 19
Pag. 19
Pag. 21
Pag. 33
Pag. 39
Pag. 39
Pag. 41
Pag. 45
Pag. 49
Pag. 52
Pag. 54
Pag. 61
Pag. 62
Pag. 63
Pag. 63
Pag. 73
Pag. 78
Pag. 78
Pag. 79
Pag. 82
Pag. 84
Pag. 85
Pag. 91
Pag. 96
Pag. 99
Pag. 99
Pag. 99
Pag. 99
Pag. 99
Pag. 108
Pag. 110
Pag. 111
Pag. 112
Pag. 112
Pag. 112
Pag. 113
Pag. 127
Pag. 132
Pag. 136
Pag. 137
Pag. 138
Pag. 138
Pag. 151
Pag. 155
Pag. 160
Pag. 161
Pag. 161
Pag. 161
Pag. 169
Pag. 174
Pag. 176
Pag. 180
Pag. 181
Pag. 181
Pag. 182
Pag. 187
Pag. 191
Pag. 193
Pag. 194
Pag. 196
Pag. 226
Cuvinte cheie
Pulmonaria, Onosma, Eritrichium, Primula, plante endemice, plante rare, markeri moleculari,
taxonomie molecular, AFLP, ADNnr, ADNcp.
36