RECONOCIMIENTO E

IDENTIFICACIN DE MANCHAS
DE SEMEN EN DIFERENTES
SOPORTES DE INTERS FORENSE

Kattya Lpez Tmara

RECONOCIMIENTO E
IDENTIFICACIN DE MANCHAS
DE SEMEN EN DIFERENTES
SOPORTES DE INTERS FORENSE
Primera edicin digital

Octubre, 2013
Lima - Per

Kattya Lpez Tmara

PROYECTO LIBRO DIGITAL

PLD 0638

Editor: Vctor Lpez Guzmn

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Lima - Per

PROYECTO LIBRO DIGITAL (PLD)

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(papers) de las profesoras y profesores de las universidades peruanas sean convertidos en libro digital
y difundidos por internet en forma gratuita a travs de nuestra pgina web. Los recursos
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su accesibilidad (se puede leer en cualquier parte que tenga electricidad),
su difusin globalizada (mediante internet nos da una gran independencia geogrfica),
su incorporacin a la carrera tecnolgica y la posibilidad de disminuir la brecha digital (inseparable de
la competicin por la influencia cultural),
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Que las profesoras y profesores, y estudiantes logren una familiaridad con el uso de estas nuevas
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El libro digital bien elaborado, permitir dar un buen nivel de conocimientos a las alumnas y alumnos
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educacin actualmente es muy deficiente tanto por la infraestructura fsica como por el personal docente.
E l p e r s o n a l d o c e n t e j u g a r u n r o l d e t u t o r, f a c i l i t a d o r y c o n d u c t o r d e p r o y e c t o s

de investigacin de las alumnas y alumnos tomando como base el libro digital y las direcciones electrnicas recomendadas.
Que este proyecto ayude a las universidades nacionales en las acreditaciones internacionales y
mejorar la sustentacin de sus presupuestos anuales en el Congreso.
En el aspecto legal:
Las autoras o autores ceden sus derechos para esta edicin digital, sin perder su autora, permitiendo
que su obra sea puesta en internet como descarga gratuita.
Las autoras o autores pueden hacer nuevas ediciones basadas o no en esta versin digital.

Lima - Per, enero del 2011

El conocimiento es til solo si se difunde y aplica
Vctor Lpez Guzmn
Editor

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

FACUTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE BIOLOGA

Informe de Prcticas Pre Profesionales I

RECONOCIMIENTO E IDENTIFICACIN DE MANCHAS DE

SEMEN EN DIFERENTES SOPORTES DE INTERS FORENSE.

Autor: Kattya Lpez Tmara.

Asesor: Alcides Guerra Santa Cruz.
Asesor externo: Violeta Rojas Maldonado.
Lugar de ejecucin: Laboratorio de Biologa Forense de la Direccin de
Criminalstica del Per.

Lima Per
2013

RECONOCIMIENTO E IDENTIFICACIN DE MANCHAS DE SEMEN EN

DIFERENTES SOPORTES DE INTERS FORENSE.
RESUMEN: El estudio de manchas de semen tiene gran importancia en la
criminalstica, ya que constituye una prueba precisa y til en una correcta
investigacin mediante una serie de normas o protocolos estandarizados; este
estudio est asociado directamente a Crmenes de ndole Sexual. El objetivo
del presente trabajo es el reconocimiento e identificacin de las manchas de
semen a travs de una mejor tcnica de tincin. Se evalu ocho tipos de
soportes, entre fibras de algodn y fibras sintticas en el Laboratorio de
Biologa Forense de la Direccin de Criminalstica del Per, aplicando el
Mtodo Directo para manchas de semen con las coloraciones Gram y Cristal
violeta. Se logr el reconocimiento de las manchas de semen en los diferentes
soportes y se determin que ambas tcnicas de tincin pueden ser utilizadas
en la Prueba de certeza (microscopa) teniendo en cuenta que la tincin Gram
permite una mejor visualizacin y diferenciacin de otros tipos de clulas y/o
bacterias.
Palabras claves: Espermatozoide, Semen, coloracin Gram, coloracin Cristal
violeta.
ABSTRACT: The sperm stains study has great importance in forensic science,
as it is an accurate and useful test in a correct research through a series of
standards or standardized protocols, this study is directly associated with sexual
crimes. The aim of this work is the recognition and identification of sperm stains
through improved staining technique. We evaluated eight types of media, from
cotton fibers and synthetic fibers in the Forensic Biology Laboratory Forensic
Directorate of Peru, using the direct method for sperm stains with crystal violet
and Gram stains. Recognition achieved sperm stains on different media and
determined that both staining techniques can be used in certain test
(microscopy) considering that Gram staining allows better visualization and
differentiation of other cell types and / or bacteria.
1

Key words: Spermatozoa, sperm, Gram staining, Crystal violet staining.

INTRODUCCIN
La violencia sexual es uno de los problemas ms graves de salud pblica, de
justicia social y derechos humanos, sexuales y reproductivos en Amrica Latina
y Per. Se la define como la realizacin de todo acto sexual sin consentimiento
ni deseo por parte de la vctima. Implica el uso de la fuerza y produce graves
consecuencias fsicas, psicolgicas y sociales (IPAS Bolivia, 2008). Adems,
hay un intercambio de materiales tales como pelos, fibras y fluidos biolgicos,
siendo los ms frecuentes los restos de semen y de saliva (Manual de
Criminalstica de la Polica Federal de Argentina, 2008).
Segn el Instituto Nacional de Estadstica e Informtica (INEI), durante todo el
2012 se registraron unos 5,222 casos de ultraje, la mayora de los cuales tuvo
como vctima a una menor de edad. Para darnos una idea de la magnitud del
problema, hasta marzo del 2013, el Programa Nacional contra la Violencia
Familiar y Sexual del Ministerio de la Mujer atendi 1,190 denuncias de ultraje.
De este total, 878 correspondieron a nias y adolescentes. Es decir, el 73% de
los casos.
El presente trabajo tiene como finalidad mejorar las tcnicas de reconocimiento
y tincin de las muestras que son remitidas al laboratorio con el fin de
identificar la presencia de los espermatozoides utilizando diferentes soportes
de telas, donde se encuentra un 90% de casos relacionados con hechos de
delitos sexuales, ya sea en las prendas o en los lugares donde ocurrieron los
hechos; con menor costo, menor tiempo empleado y mayor eficacia;

esto

servir de apoyo a la labor pericial del Departamento de Biologa Forense de la

Polica Nacional.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

En el laboratorio de Biologa Forense de la Direccin de Criminalstica del Per
llegan muestras relacionadas con delitos en contra de la Libertad Sexual
(violacin), las mismas que son analizadas. Se observan manchas de semen
en diferentes tipos de soporte y muchas veces con abundante contaminacin
bacteriana. En la actualidad se trabaja con una sola tcnica de tincin para la
diferenciacin de espermatozoides humanos, que en muchos casos debido a
la alta contaminacin bacteriana en la muestra y la mala conservacin de sta,
la observacin al microscopio es muy dificultosa; es por ello que se busca
determinar la mejor tcnica de tincin en los diferentes soportes.
OBJETIVOS
OBJETIVO PRINCIPAL
Reconocimiento e identificacin de las manchas de semen a travs de una
mejor tcnica de tincin.
OBJETIVO ESPECFICO
Diferenciar las manchas de semen en diferentes soportes con una vista
macroscpica (Prueba de Orientacin).
Determinar la mejor tcnica de tincin en la observacin de espermatozoides
humanos (Prueba de certeza).
JUSTIFICACIN
La Espermatologa forense como ciencia auxiliar de la Criminalstica se
encarga de la identificacin del esperma para eso debemos conocer su
morfologa y bioqumica. La importancia se basa en la bsqueda de evidencia
biolgica (espermatozoides) en muestras que pueden ser de contenido vaginal,
ropa interior, regin perianal, entre otras superficies.
3

MARCO TERICO
1. Esperma
Se denomina esperma, semen o lquido seminal, al producto de la secrecin
del aparato genital masculino, que aparece en el hombre despus de la
madurez sexual, cuya funcin especfica estriba en la fecundacin. Menos
del 10% del volumen total del semen corresponde a los espermatozoides, el
otro 90% al lquido seminal (James S., 2005).
1.1. Valor criminalstico
Del minucioso estudio ordenado del semen o esperma, podrn
obtenerse conclusiones importantes para la investigacin del hecho.
Surgir as, si realmente hay semen en las muestras analizadas y si
dicho resto biolgico es humano. Asimismo, se determinar si hubo
eyaculacin interna y con ella penetracin. El elemento fundamental en
la

identificacin

de

esta

secrecin

est

en

el

hallazgo

del

espermatozoide, clulas cuyas caractersticas en el humano son las

siguientes:
1.1.1. Cabeza: Es de forma ovoide vista de frente y piriforme de perfil;
mide de 4-5 micras de longitud. Contiene el ncleo haploide
cubierto por el acrosoma y un par de centriolos detrs del ncleo.
El acrosoma contiene enzimas como la hialuronidasa y la
acrosina que facilitan la penetracin del espermatozoide al
ovocito.
1.1.2. El segmento intercalar: Regin que une la cabeza con la cola y
que contiene la carga mitocondrial que provee la energa
necesaria (ATP) para la movilidad del espermatozoide. Es de
forma cilndrica, mide 5 micras de longitud.
1.1.3. Cola: Da la movilidad al espermatozoide. Tiene una longitud de
40-50 micras de longitud.
2.2. Composicin qumica del esperma
La mayora del lquido en el semen se compone de las secreciones de

los

rganos

reproductivos

masculinos.

Contiene

cido

ctrico,

aminocidos libres, fructosa, enzimas, fosforilcolina, prostaglandina,

potasio y zinc (11).
46 al 80 % del lquido es producido por las vesculas seminales.
13 a 33 % por la glndula de la prstata.
5 % de los testculos y el epiddimo.
2-5 % de las glndulas uretrales y bulbouretrales.
2. Manchas de semen
2.1. Caracteres macroscpicos del esperma
2.1.2. Color y aspecto: Al estado fresco se presenta como un lquido
filante, blanco lechoso, ligeramente amarillento, que al secarse se
forma amarillo franco y de aspecto acartonado. Colocado en una
placa tiene el aspecto heterogneo, con pequeos grumos,
opaco, hacindose transparente, homogneo al licuarse.
2.1.3. Olor: Sui gneris, que en la especie humana recuerda al castao
comestible o al desmanche (leja). Su intensidad depende del
tiempo de abstinencia que tiene la persona.
2.2. Bsqueda de manchas seminales
En la prctica lo frecuente es hallarlo al estado seco, en diversos
materiales que con frecuencia se remiten al Laboratorio Criminalstico,
en casos de investigacin de los delitos sexuales, estos soportes son:
las prendas de vestir de la vctima, del acusado o de ambos, de los
sospechosos de haber cometido el ultraje; envan tambin hisopos o
liquido del lavado vaginal de aquella, o exudados diversos de la misma
(vaginal y rectal), en oportunidades por el contrario se requiere recurrir al
lugar de los hechos, en busca de rastros en muebles, alfombras, pisos,
etc.; y otros aparentes para llevar a efecto el acto sexual, toallas,
pauelos,

papel

higinico,

preservativos,

otros

(Manual

de

Criminalstica, 2012).

Se debe buscar pelos arrancados, restos biolgicos en las uas (sangre,

piel, etc.) que puedan corresponder al autor, tambin pelos de pubis,
sobre los orificios naturales (vulva, boca, ano) de la vctima.
2.3. Aspectos de las manchas segn el soporte
2.3.1. Sobre la piel: Forman dbiles pelculas brillantes, de aspecto
barnizado.
2.3.2. Sobre telas absorbentes (ropas de cama, ropa interior, pauelos,
tejidos de algodn en general, papel higinico): el aspecto
conocido de mapa geogrfico, siendo irregulares de color
grisceo, bordes limpios almidonados al tejido.
2.3.3. Sobre telas no absorbentes (lanas, terciopelo, nylon): formando
escamas o pelculas brillantes.
2.4. Problemas que plantean las manchas de esperma en criminalstica
2.4.1. Naturaleza espermtica de la mancha.
2.4.2. Especie animal a la que pertenece el esperma
2.4.3. Cantidad de esperma contenido en la mancha
2.4.4. Identidad gentica del semen por ADN.
2.5. Anlisis de manchas seminales
2.5.1. Pruebas de Orientacin
Las pruebas de orientacin tienen mayor utilidad cuando se trata
de localizar el vestigio entre las ropas de la vctima, en
superficies grandes tales como sbanas, mantas o entre
manchas dubitadas recogidas del lugar de los hechos. El papel
de una prueba de orientacin recae ms en su habilidad para
descartar la presencia de semen en una mancha cuestionada
que en la de indicar la presencia de semen. Es necesario un
examen visual exhaustivo y minucioso de las distintas prendas.
Una de las tcnicas que se utiliza es:

2.5.1.1. Luz

ultravioleta:

Bajo

la

accin

de

radiaciones

ultravioletas, las manchas de semen presentan una

fluorescencia directa que si bien no es especfica, pues
existen otros materiales

que producen similar efecto,

constituyen un recurso til, para localizar manchas

sospechosas.
2.5.1.2. Fosfatasa cida: Es una enzima fosfomonoesterasa no
especfica, se encuentra en niveles altos en el semen,
proviene de las clulas epiteliales de la glndula
prosttica. El nivel de la actividad de la fosfatasa cida es
500 a 1000 veces ms alta en el semen humano que en
otros fluidos o secreciones corporales (Gutman AB &
Gutman EB., 1941). La deteccin de la fuerte actividad de
la fosfatasa cida es considerada como un rpido y
confiable

indicador

de

la

presencia

de

semen

(Sensabaugh GF., 1979; Riisfeldt O., 1996).

2.5.2. Pruebas Microscpicas
El mtodo ms utilizado actualmente, es la observacin de
espermatozoides

al

microscopio.

Se

han

detectado

espermatozoides mviles en lquido de lavado vaginal hasta 24

horas despus de la violacin e inmviles 100 das despus de
ocurrido el hecho en manchas secas.
2.5.3. Otros mtodos
2.5.3.1. Electroforticos: E. Villanueva y J.A. Gisbert-Calbuig,
proponen

mtodo

bidimensional

sobre

papel,

combinacin de electroforesis y cromatografa, lo que

permite separar la espermina de los aminocidos del
semen y obtener una separacin sumamente interesante
de estos ltimos, que puede considerarse de relevante
valor para la identificacin de dicho humor.
2.5.3.2. Mtodos enzimticos: el esperma tiene una elevada
cantidad de fosfatasa acida, no hallada hasta ahora en

ningn otro material orgnico natural sea animal o

vegetal. La fosfatasa cida prosttica produce la hidrlisis
de la fosforil colina en cido fosfrico y colina. Esta
enzima acta entre un pH 4.5 5.
3. Tcnicas de tincin
Los espermatozoides son demasiado pequeos para observarse a simple
vista, es por ello que la criminalista utiliza diferentes mtodos de tincin, y
luego realiza una observacin al microscopio. Se conoce que el nmero de
tcnicas de tincin para los espermatozoides es variado y mltiple,
describiremos las tcnicas que utilizaremos:
3.1. Tincin Gram: Desarrollada por el Doctor Gram en 1984, La es usada
para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaos,
morfologas celulares y reaccin Gram (color). A nivel del laboratorio es
til como test para un rpido diagnstico presuntivo de agentes
infecciosos, tanto en muestras como en cultivos en crecimiento, y
adicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clnica. Las
bacterias se tien Gram positivas (+), Gram negativas () o no se tien
debido a sus diferencias en la composicin de su pared y arquitectura
celular (Rodrguez, E. et al,2005). Adems, es una coloracin muy til
para el anlisis de evidencia de espermatozoides. Involucra varios
pasos:
a. Tincin inicial: Las clulas se tien con cristal violeta, el cual es el
colorante primario. En este paso todas las clulas se tien de
morado.
b. Mordiente: Se adiciona yoduro (lugol) que reacciona con el cristal
violeta y forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este punto todas
las clulas continan de color morado.
c. Decoloracin: Se adiciona un solvente no polar, el cual acta lavando
el complejo cristal violeta-yoduro de las clulas Gram negativas. De
esta manera las bacterias Gram positivas continan moradas y las
Gram negativas quedan incoloras. Este es el paso critico de esta

tincin, pues si se exagera, decolora las Gram positivas y si se hace

muy dbil no decolora a las Gram negativas.
d. Contra tincin: Se vuelve a teir con safranina o fucsina, de manera
que las bacterias Gram negativas, que haban sido decoloradas, se
tien de rosado a fucsia segn el colorante empleado; en tanto, las
bacterias Gram positivas no se afectan con la contra tincin y
permanecen moradas debido a lo intenso de esta coloracin.
3.2. Tincin Cristal Violeta: En la forma pura, el violeta de cristal se
presenta como lustrosos cristales azul verdosos que funden a 137
Celsius. Son solubles en agua, etanol, dietilenglicol, y dipropilenglicol.
ANTECEDENTES
La identificacin de fluido seminal constituye un viejo problema en
Criminalstica. En 1826, Olliver dAngers y Barruel informaron sobre un caso de
agresin sexual donde se sospechaba que ciertas manchas en la ropa de la
vctima fueron hechas intencionalmente con grasa de origen animal. Los
expertos analizaron las ropas con respecto a su solubilidad en agua,
naturaleza, color y conducta en alcohol absoluto. Ambos concluyeron que la
mancha era de semen. En aquella poca los investigadores se guiaban solo
por estos parmetros.
En 1827, Orfila, inform de una serie de test qumicos para la identificacin de
fluido seminal basados en la apariencia de las manchas, cambios de color y
consistencia obtenidos mediante la accin del calor e inmersin en agua, olor
emitido por la mancha humedecida, y la conducta del extracto acuoso frente a
un nmero de reactivos y tratamientos. Las manchas seminales fueron
comparadas con otros tipos de secreciones vaginales, y con manchas de
mucus nasal y saliva. Asever que era muy difcil, si no imposible, encontrar
clulas intactas en extractos de manchas, y que los procedimientos qumicos
deberan ser empleados siempre.

En 1839, Devergie, public un trabajo en el cual haba encontrado clulas de

esperma en manchas seminales de 10 meses, y afirm que la confirmacin de
la presencia de espermatozoides en una mancha era un criterio ms cierto para
diagnstico de manchas seminales que los mtodos qumicos. En ese mismo
ao, Bayard public un extenso documento acerca del uso del microscopio en
el examen de manchas seminales para comprobar la presencia de
espermatozoides. En 1879, Brouardel revis las tcnicas para la identificacin
de manchas seminales, recomendando el uso del microscopio como la tcnica
principal.
Ninguno de los test no morfolgicos usados durante la mayor parte del siglo
XIX han sobrevivido. La mayora de las autoridades empezaron a confiar ms
en la deteccin de clulas de esperma para la identificacin de manchas
seminales alrededor de 1840. El test Florence para la identificacin de
manchas seminales fue introducido en 1896.
Pollack en 1948 estableci una distincin entre "aspermia" y "azoospermia". La
primera condicin se caracteriza por una ausencia total de espermatozoides en
la eyaculacin. La eyaculacin de una persona que sufre de aspermia, segn
Pollack, no se debe llamar semen. El trmino "azoosprmico" se refiere a
cualquier muestra seminal en el que los espermatozoides maduros no estn
presentes.
Desde entonces no se ha generado ningn reporte de trabajos de investigacin
sobre manchas de semen en diferentes soportes de telas empleando el Mtodo
Indirecto para manchas de semen. Por ello, este trabajo de investigacin
recobra importancia dentro del mbito criminalstico y sirve como fuente
informativa para los peritos forenses del Laboratorio de Biologa Forense de la
Direccin Criminalstica del Per, permitindoles arrojar resultados ms
confiables.

10

MATERIAL Y PROCEDIMIENTO
Obtencin de la muestra
El trabajo de investigacin se realiz en la Direccin de Criminalstica del Per
(DIRCRI), en la sede de la Av. Arambur. Las muestras de semen fueron
donadas por pacientes del Laboratorio de la Clnica Ramn Castilla en el mes
de Marzo, las cuales se conservaron refrigerndolas.
Materiales y Reactivos
Centrifuga

Suero fisiolgico

Estufa

Aceite de inmersin

Microscopio ptico

Reactivo Cristal violeta

Baguetas

Reactivo Lugol

Tijera, pinzas

Reactivo Safranina

Marcador indeleble

Alcohol acetona

Lminas portaobjetos
Procedimiento para la preparacin de la muestra
El volumen de semen en cada tubo de ensayo fue de 3 ml (teniendo ocho tubos
de ensayo en total), el cual fue depositado sobre toda la superficie de cada tipo
de soporte; la medida de los retazos de telas utilizadas como soportes fue de
10 x 10 cm. Se inici trabajando con muestras diluidas encontrando que la
mejor visualizacin para nuestro trabajo es con muestras puras, es por ello que
el desarrollo del trabajo se basa principalmente en manchas puras de semen
(10 muestras por cada tipo de tela). Dado que es imposible simular en el
laboratorio todos los soportes sobre los cuales puede haber una mancha de
semen, pues las escenas delictivas son tan variables y tras valorar todas las
posibilidades, se seleccionaron los tipos de materiales de telas como se
muestra en la Tabla 1, siguiendo un criterio lgico y de frecuencia de
presentacin en nuestro entorno inmediato.

11

Tipo de soporte
Felpa
Tela algodn 20 al 1 (algodn de punto
blanco)

Nmero

Similitud con las prendas remitidas al

de tela

laboratorio de Biologa Forense

Tela 1
Tela 2

Toallas, medias, mantas, abrigos, chaquetas,

faldas, ropa infantil, bolsos y cortinas.
Polos de material de algodn ms grueso,
pantalones buzos.
Polos, parte delgada de la entrepierna de una

Tela de algodn blanco

Tela 3

Tela popelina gruesa nacional

Tela 4

Elaboracin de vestidos, camisas, tapicera.

Tela de gasa corrugada

Tela 5

Forro de vestido.

Tela de algodn piqu rayado

Tela 6

Polos, shorts, faldas.

Tela 7

Blusas, cafarenas, faldas.

Tela 8

Faldas, pantalones.

Tela de seda pesada sinttica color

verde
Tela sinttica azul

trusa o calzoncillo.

Tabla 1: Diferentes tipos de soportes y su similitud con las prendas remitidas al

laboratorio de Biologa Forense.
Una vez seco el semen, las muestras fueron guardadas en sobres de papel
para su transporte en el laboratorio durante 2 meses, teniendo cuidado de no
doblar, enrollar o someter a friccin la parte manchada.
Pruebas de Orientacin
Ya en el laboratorio, el mtodo de estudio ha sido el habitual en el caso de
manchas de semen:
1. Observacin macroscpica de las manchas de semen haciendo uso del
tacto, si es que la muestra se encuentra acartonada o no y el olor.
2. Luz ultravioleta: permite hacer una primera aproximacin a la deteccin de
manchas de semen, mediante la exposicin de la prenda, o soporte a
analizar, podemos hacer visibles manchas invisibles al ojo humano. Se
suelen utilizar unas gafas de color anaranjado (filtro), para poder ver mejor la
posicin de la mancha. Longitud de onda de 400 nm.

3. Reactivo Fosfatasa cida: indicio para argumentar la presencia de semen

cuando la actividad de la enzima es extraordinariamente elevada. Si la
reaccin es positiva la coloracin ser violeta.
Pruebas de Certeza
Microscopa: Bsqueda de espermatozoides completos (cabeza y cola) y/o
espermatozoides incompletos (solo cabezas).
Transcurrido dos meses, se realiz el estudio de las muestras de manchas
de semen, en donde, cada muestra pura se ti mediante la coloracin
Gram y Cristal violeta (usada actualmente en el laboratorio de Biologa
Forense) para determinar la mejor tcnica de tincin en la observacin de
espermatozoides humanos. La tcnica empleada fue la siguiente:
1. Se observa el aspecto de la mancha de semen impregnada en el soporte
(acartonado, pelculas brillantes, mapa geogrfico, etc.).
2. Se corta la zona con restos de manchas de semen con una medida de
1.5 cm x 1.5 cm como mximo (depende de cada tipo de soporte).
3. Se embebe con suero fisiolgico (1mL) y se deja macerar por
aproximadamente 20 minutos (depende del tipo de soporte) para
desprender el semen de la tela.
4. Se retira el retazo de tela del tubo de ensayo.
5. Centrifugamos a 2500 rpm por 3 minutos.
6. Eliminar el sobrenadante.
7. Extender el sedimento y fijarlo al calor.
8. Teir con cristal violeta por 1 minuto, luego enjuagar la lmina con agua
corriente.
9. Secar al calor y observar al microscopio.
Procedimiento para la Tincin Gram:
Colorear con cristal violeta por 1 minuto segn la concentracin de la
muestra obtenida (47 segundos si la mancha de semen est muy
concentrada).
Enjuagar con agua corriente.
Decantar con Lugol por 1 minuto.

 Agregar alcohol acetona hasta que ya no escurra ms lquido azul.

Lavar con agua para quitar residuos el colorante y secar la lmina.
Agregar safranina por 40 segundos.
Enjuagar la lmina con agua y dejar secar.
Finalmente, se observ al microscopio con una resolucin de 100X utilizando
aceite de inmersin y se hizo el recuento de formas completas (cabeza y cola)e
incompletas (solo cabezas) de espermatozoides humanos en 10 campos.
RESULTADOS
Durante los periodos de Marzo del 2013 a Junio del 2013 se ha realizado el
estudio de manchas de semen puro en ocho diferentes tipos de soportes (10
muestreos por cada tipo de tela), donde cinco de ellas son de material de
algodn en diferentes texturas (algodn delgado y grueso) y tres de ellas
sintticas como se muestra en la Tabla 1. Luego de realizar el Mtodo Directo
para manchas de semen (Manual de Criminalstica PNP, 2012), empleando las
tinciones Gram y Cristal violeta. Se obtuvo los siguientes resultados:

Figura 1: Pruebas de Orientacin. En el lado izquierdo, tela de material de

algodn blanco impregnado con semen, expuesto a la luz ultravioleta con
una longitud de onda de 400 nm. En el lado derecho, prueba de la
Fosfatasa cida sobre una tela sinttica impregnada con semen. Reaccin
positiva (coloracin violeta), es decir, la actividad de la enzima es
extraordinariamente elevada.

1. Estudio macroscpico: Tela de material de felpa de 10 cm x 10 cm con

dos cortes de 1.5 cm x 0.5 cm y 0.5 cm x 0.5 cm. Transcurrido los dos
meses, las manchas de semen se tornaron amarillentas en la superficie
del soporte, siendo fcil el reconocimiento de las manchas de semen en
dicho soporte.
2. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 35 en la tincin Cristal violeta y 130 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 2: Imgenes de tela de material de felpa impregnadas con semen

en diferentes lados de sta. En la parte inferior del lado izquierdo; gran
cantidad de espermatozoides completos (cabeza y cola) teidos con la
coloracin Gram y al lado derecho; cabezas de espermatozoides
humanos teidos con la coloracin Cristal violeta.

1. Estudio macroscpico: Tela de material de algodn de punto blanco

de 10 x 10 cm con dos cortes de 1.5 cm x 0.5 cm y 1 cm x 0.5 cm.
Transcurrido los dos meses, las manchas de semen se tornaron de un
color amarillento intenso en toda la superficie del soporte, de fcil
reconocimiento al ojo humano por ser de una tela blanca.
2. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 64 en la tincin Cristal violeta y 77 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 3: Imgenes de tela de material de algodn de punto blanco

impregnadas con semen en diferentes partes de sta. En la parte inferior
del lado izquierdo; un espermatozoide completo (cabeza y cola) teido
con la coloracin Gram y al lado derecho; espermatozoides incompletos
(solo cabezas) teidos con la coloracin Cristal violeta.

1. Estudio macroscpico: Tela de material de algodn blanco de 10 cm x

10 cm con dos cortes de 1.5 cm x 0.5 cm y 1 cm x 0.5 cm. Transcurrido
los dos meses, las manchas de semen se tornaron de un color
amarillento intenso y acartonado en la superficie del soporte, de fcil
reconocimiento al ojo humano por ser una tela blanca.
2. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 39 en la tincin Cristal violeta y 94 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 4: Imgenes de tela de material de algodn blanco impregnadas

con semen en diferentes partes de sta. En la parte inferior del lado
izquierdo; gran cantidad de espermatozoides incompletos (cabezas)
teidos con la coloracin Gram y al lado derecho; espermatozoides
humanos completos (cabeza y cola) e incompletos (solo cabezas)
teidos con la coloracin Cristal violeta.

1. Estudio macroscpico: Tela de popelina gruesa nacional color amarillo

de 10 cm x 10 cm con dos cortes de 1 cm x 1 cm y 0.8 cm x 1 cm.
Transcurrido los dos meses, las manchas de semen en la superficie del
soporte son imperceptibles al ojo humano pero al ser colocadas a contra
luz se observan ligeras manchas amarillas oscuras, adems de estar
acartonadas, siendo tedioso su reconocimiento al ser una tela de color.
3. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 44 en la tincin Cristal violeta y 24 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 5: Imgenes de tela de popelina gruesa nacional color amarillo,

impregnadas con semen en diferentes partes de sta. En la parte inferior
del lado izquierdo; espermatozoides humanos completos (cabeza y cola)
e incompletos (solo cabezas) teidos con coloracin Gram y en el lado
derecho; espermatozoides completos teidos con la coloracin Cristal
violeta.

1. Estudio macroscpico: Tela de material de gasa blanca corrugada

(seda) de 10 cm x 10 cm con dos cortes de 1.4 cm x 0.5 cm y 1 cm x 0.9
cm. Transcurrido los dos meses, las manchas de semen en la superficie
del soporte se tornaron ligeramente amarillentas, brillantes, acartonada y
almidonada al tejido, siendo tedioso su reconocimiento.
2. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 60 en la tincin Cristal violeta y 151 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas
(cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 6: Imgenes de tela de material de gasa corrugada (seda) color

blanco, impregnada con semen en diferentes partes de sta. En la parte
inferior del lado izquierdo; espermatozoides completos (cabeza y cola) e
incompletos (solo cabezas) teidos con la coloracin Gram y en el lado
derecho espermatozoides teidos con la coloracin Cristal violeta.

1. Estudio macroscpico: Tela de material de algodn piqu rayado de

10 cm x 10 cm con dos cortes de 1.5 cm x 0.4 cm y 1 cm x 0.7 cm.
Transcurrido los dos meses, las manchas de semen se tornaron
ligeramente amarillentas y acartonadas en la superficie del soporte, de
fcil reconocimiento al ojo humano y al tacto.
2. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 75 en la tincin Cristal violeta y 40 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 7: Imgenes de tela de material de algodn piqu rayado,

impregnado con semen en diferentes partes de sta. En la parte inferior
del lado derecho; formas incompletas de espermatozoides (cabezas)
teidas con coloracin Gram y en el lado derecho; formas completas
(cabeza y cola) e incompletas (solo cabezas) de espermatozoides
teidas con coloracin Cristal violeta.

10

1. Estudio macroscpico: Tela de material de seda pesada sinttica,

color verde de 10 cm x 10 cm con dos cortes de 1.5 cm x 0.8 cm y 1.5
cm x 1 cm. Transcurrido los dos meses, las manchas de semen tenan
un aspecto conocido como mapa geogrfico, color grisceo, acartonado,
almidonado en los bordes y presentaba pelculas brillantes, siendo fcil
su reconocimiento.
2. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 28 en la tincin Cristal violeta y 29 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 8: Imgenes de tela de material de seda pesada sinttica de

color verde agua, impregnadas de semen en diferentes partes de sta.
En la parte inferior del lado izquierdo; predominancia de formas
incompletas de espermatozoides (cabezas) teidos con la coloracin
Gram y en el lado derecho; espermatozoide completo (cabeza y cola) e
incompleto (solo cabezas) teido con la coloracin de Cristal violeta.

11

1. Estudio macroscpico: Tela de material sinttico color azul de 10 cm x

10 cm con un corte de 1.5 cm x 1 cm, el cual fue cortado por la mitad.
Transcurrido los dos meses, las manchas de semen no eran
reconocidas a simple vista pero mediante el tacto tenan un aspecto
acartonado, sin presentar un color caracterstico. Por lo tanto fue difcil
su reconocimiento por las caractersticas de la tela.
2. Estudio microscpico: Se emple el Mtodo Directo para manchas de
semen ya descrito, obteniendo 10 en la tincin Cristal violeta y 11 en la
tincin Gram de formas completas (cabeza y cola) e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos respectivamente.

Figura 9: Imgenes de tela de material sinttico color azul, impregnados

con semen en diferentes partes de sta. En la parte inferior del lado
izquierdo; gran cantidad de formas completas (cabeza y cola) e
incompletas (cabezas) de espermatozoides teidos con la coloracin
Gram y en el lado derecho; espermatozoide completo teido con la
coloracin Cristal violeta.

12

Tela 1: Felpa
Tela 2: Algodn de punto blanco
Tela 3: Algodn blanco
Tela 4: Popelina gruesa nacional
Tela5: Gasa corrugada (seda)
Tela 6: Algodn piqu rayado
Tela 7: Seda pesada sinttica
color verde
Tela 8: Sinttico color azul

Figura 10: Nmero total de espermatozoides en los diferentes tipos

de soportes (telas) teidos con la coloracin Gram y Cristal violeta.

Tincin Cristal violeta

El

Tincin Gram

ncleo de los espermatozoides se

El ncleo de los espermatozoides se colorea

colorea de color violeta intenso mientras

de color rosa-violeta intenso mientras que el

que el resto de la cabeza y la cola con un

resto de la cabeza y la cola con un color

violeta de menor intensidad.

rosa de menor intensidad.

No hay una buena discriminacin entre los

Buena

discriminacin

entre

los

espermatozoides y las clulas epiteliales ya

espermatozoides y las clulas epiteliales ya

que todo se tie de un solo color.

que se tien de diferente color.

No hay diferenciacin de otros tipos de

clulas y/o bacterias.
Rapidez de la tcnica.
Bajo costo por utilizar solo un reactivo.

Permite diferenciar otros tipos de clulas y/o

bacterias, sean Gram positivas o Gram
negativas.
La tcnica requiere ms tiempo.
Alto costo por utilizar cuatro reactivos como
Cristal violeta, Lugol, Alcohol acetona y
Safranina.

Tabla 2: Cuadro comparativo entre la Tincin Cristal violeta y Tincin Gram.

13

DISCUSIN
Las violaciones sexuales son un delito frecuente en Amrica Latina. El Per es
uno de los pases con ms altas tasas de denuncias por violaciones sexuales
de la regin y en donde la violencia sexual es un fenmeno extendido en todos
los sectores econmicos, grupos de edad y espacios urbanos y rurales (Mujica,
2009).
Dado que los estudios de semen se realizan principalmente en base a la
presencia de espermatozoides, es importante destacar que para muchos
peritos forenses, la nica prueba irrefutable de presencia de semen en la
muestra es la observacin microscpica de formas completas (cabeza y cola) o
incompletas (solo cabezas) de espermatozoides humanos. Por otro lado, la
contaminacin con que generalmente se encuentran las muestras que llegan al
laboratorio pueden ser confundidas con esporas y bacterias, por ello es
necesario un examen visual exhaustivo y minucioso de las distintas prendas, ya
sea por la luz ultravioleta, la cual nos permite una primera aproximacin en la
deteccin de manchas de semen o mediante el reactivo de la fosfatasa cida
como se muestra en la Figura 1 (Pruebas de Orientacin).
El reconocimiento es fcil en manchas de semen de reciente data, pero se
complica al transcurrir el tiempo. La tincin de las cabezas de espermatozoides
en la coloracin Cristal violeta y Gram se debe a que los reactivos utilizados en
ambas coloraciones son colorantes bsicos, es decir, tienen gran afinidad por
elementos celulares cidos, esto explica el color de las cabezas de
espermatozoides en ambas tinciones. En la Figura 10, se muestra el nmero
total de espermatozoides en los diferentes tipos de soportes teidos con la
coloracin Gram y Cristal violeta. Las telas de material de algodn (1, 2, 3) de
diferentes texturas como se muestra en la Tabla 1, muestran mayor cantidad
de formas completas (cabeza y cola)e incompletas (solo cabezas) de
espermatozoides humanos en la coloracin Gram, de igual forma la tela
sinttica 5 (gasa corrugada).A pesar del tipo de soporte, se observa que la tela

14

4 (popelina gruesa nacional) y tela 6 (algodn piqu rayado) de material de

algodn con diferente textura y color presentan un mayor nmero de formas
completas (cabeza y cola)e incompletas (solo cabezas) de espermatozoides
humanos con la coloracin Cristal violeta. En la tela 7 (seda pesada) y 8 (rit
sinttico) hay una ligera diferencia en el nmero de espermatozoides entre
ambas coloraciones, siendo mayor en la coloracin Gram. Independientemente
del tipo de soporte, sea fibra de algodn o fibra sinttica es posible el
reconocimiento de las manchas de semen con una vista macroscpica, a
travs del tacto (si la muestra esta acartonada) y olor; adems dichas telas
permiten la absorcin de semen, teniendo en cuenta que las fibras de algodn
absorben mucho mejor que las sintticas. Este resultado es sumamente
importante porque a pesar del tiempo en el cual la muestra ha sido guardada
para su posterior anlisis (2 meses), an se conservan formas completas
(cabeza y cola)e incompletas (solo cabezas) de espermatozoides humanos;
esto es apoyado por los estudios realizados en el Manual de Criminalstica de
la PNP en el 2012, en el cual se han detectado espermatozoides mviles en
lquido de lavado vaginal hasta 24 horas despus de la violacin e inmviles
100 das despus de ocurrido el hecho en manchas secas.
El Mtodo Directo para manchas de semen empleado por el Laboratorio de
Biologa Forense, basndose en el Manual de Criminalstica de la PNP del ao
2012; el tiempo de tincin con Cristal violeta es de 1 minuto segn su protocolo
pero al realizar el proceso, el tiempo de tincin depende de la concentracin de
la muestra, de tal forma que si la muestra en la lmina portaobjeto, luego del
secado est muy concentrado, se da un tiempo de 47 segundos para la tincin
con Cristal violeta y 40 segundos para el reactivo de safranina utilizada en la
tincin Gram.
La tcnica de tincin que actualmente se utiliza en el Laboratorio de Biologa
Forense para determinar la presencia de espermatozoides es la tincin Cristal
violeta, utilizada por la rapidez de la tcnica y bajo costo para la Institucin de
la Polica Nacional del Per. Sin embargo, la tincin Gram permite diferenciar

15

otros tipos de clulas y/o bacterias sean Gram positivas o Gram negativas de
gran inters forense debido a que indican una alta contaminacin de la muestra
por lo que la persona poseedora de dicha muestra puede estar infectado(a) con
alguna enfermedad de transmisin sexual como gonorrea, siendo diferenciadas
de las dems clulas. Adems, permite una mejor visualizacin debido a que la
cabeza del espermatozoide se tie de dos colores (violeta y rojo) por lo que es
ms sencillo de diferenciar y menos probable de confundirlos con esporas o
levaduras como lo menciona un estudio realizado en el Laboratorio de Biologa
del Instituto Nacional de toxicologa y Ciencias Forenses de Sevilla, Espaa
sobre agresiones sexuales.
A pesar del tiempo que se emplea en la tincin Gram y un costo ms elevado
de sus reactivos en comparacin con el reactivo Cristal violeta, ambas tcnicas
pueden ser utilizadas para determinar la presencia o no de espermatozoides en
la Prueba de Certeza. Sin embargo, la tincin Gram presenta grandes ventajas
como se muestra en la Tabla 2, lo cual ayudara a los peritos forenses a no
solo centrarse en la presencia o no de espermatozoides sino tambin en poder
diferenciar otros elementos de inters biolgico con seguridad y con esto poder
determinar si hubo Delito contra la Libertad Sexual o Intento de violacin.
CONCLUSIONES
El estudio de manchas de semen tiene gran importancia en la criminalstica, ya
que constituye una prueba precisa y est asociada a crmenes de ndole
sexual.
Dado que es imposible simular en el laboratorio todos los soportes sobre los
cuales puede haber una mancha de semen, se seleccionaron los tipos de telas
de las prendas ms frecuentes que son remitidas al laboratorio como son las
fibras de algodn y fibras sintticas. Por todo lo expuesto, se logr el
reconocimiento de las manchas de semen en los diferentes soportes y se
determin que ambas tcnicas de tincin pueden ser utilizadas en la Prueba de
certeza teniendo en cuenta que la tincin Gram permite una mejor visualizacin
y diferenciacin.

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