OBIECTIVELE

Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor - sursa energetic pentru sinteza

ATP - ului. Enziniele dehidrogenni.
Lanul respirator (schema). Complexele enzimatice. Acceptorii principali de
electroni i protoni, structura lor chimic.
Potenialul de oxido-reducere a componentelor lanului respirator. Fosforilarea
oxidativ. Locurile de fosforilare. Produsele finale ale oxidrii.
Reglarea intensitii funcionrii lanului respirator. Coeficientul P/O,
controlul respirator.
Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii ageni decuplani. Rolul
biologic al produsului de decuplare, respiraia liber.
Mitocondriile, structura i permeabilitatea selectiv a membranelor pentru diferii
cumpui.. Sistemele-navet de transport al echivalenilor de reducere.
Ipotezele principale, care explic procesele fosforilrii oxidative. Ipoteza lui
Mitchell.
Oxidarea microzomal, rolul citocromului P450 n reaciile de oxido-reducere.
Vitaminele i rolul lor n procesele de oxidare biologic.
Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a acizilor grai nesaturai din
membrane. Sistemele de protecie a celulei de acumilarea radicalilor liberi.

Oxidarea biologic
Oxidarea biologic (OB) reprezint totalitatea

reaciilor de oxido-reducere ce decurg n celule i

esuturi.
Rolul: asigur organismul cu energie
accesibil n form de ATP.
OB are loc prin reacii de dehidrogenare
donarea atomilor de H2 sub form de protoni i
electroni: H22H+ +2 .
Are loc sub aciunea E dehidrogenaze, ale
cror Co sunt NAD+ i FAD

Dehidrogenarea substratelor
NAD dependente. Enzimele
dehidrogenrii.
1.

Izocitrat +NAD alfa-cetoglutarat

+NADH+H
E- izocitratDH
2. Alfa-cetoglutarat +NAD succinil Coa
+NADH+H
E-alfacetoglutaratDH
3.Malat +NAD OA+NADH+H
E-malatDH
4. DOP

Dehidrogenarea substratelor
NAD dependente
Lactat +NAD Piruvat +NADH+H

E-lactatDH
Gliceraldehidfosfat +NAD +H3PO41,3
difosfoglicerat +NADH+H
E- GAP DH
Hidroxiacil CoA +NAD cetoacil Co-A +NADH+H
E-hidroxiacil -CoA DH
Dezaminarea Glu
Oxidarea 3 hidroxibutiratului
Catabolismul alcoolului

SUBSTRATELE FAD dependente

Succinat +FAD Fumarat +FADH2

E- succinat DH
Acil CoA + FAD enoil-CoA+FADH2
E- acil CoA DH
Glicerol 3 P + FAD GAP+ FADH2
NADH+H+ i FADH2 rezultai n reaciile de
oxidare a acestor substrate transfer p i n
lanul respirator.

Lanul respirator (LR).

LR - un ansamblu (complex) de enzime

i sisteme de oxido-reducere, ce
particip la transferul H+ i de la Co
reduse (NADH, FADH2) la O2 cu
formarea H2O.
Este ultima etap a degradrii aerobe.
Este localizat n membrana intern a MC

Funcia LR:
1.Prin transferul protonilor i electronilor

Co se reoxideaz, putnd asigura

dehidrogenri n continuare.
2.Cnd Co se reoxideaz, se elibereaz
energie ce servete la sinteza ATP.

Componentele LR
1.

NADH+H sau FADH2

FPN (NADH DH) - ca Co FMN - preia H2 de la NADH+H

FPs (succinatDH)- ca Co FAD- preia H2 de la FADH2

Componentele LR
3. Coenzima Q

Componentele LR
4. Citocromii

b560, b562, b 566, c1, c, a i a3

STRUCTURA CHIMIC a
citocromului c
CH3
CH3

H3C
N

OOC

CH2 CH2

HC

Fe

CH3
N
CH

CH2
CH2
COO

CH2 protein

CH2

protein

CH3

CH3

Heme c

Componentele LR
5. Proteinele Fe-S
a. ntre FP i CoQ
b. ntre cit b i citc1

[2Fe-2S]

[4Fe-4S]

Schema LR

Potenialul
oxidoreductor
1. Fiecare verig a LR poate exista n 2 forme redus
i oxidat, deci,
Formeaz o pereche oxidoreductoare
1. Fiecare sistem redox (O/R) este alctuit dintr-un
donor i acceptor
2. Caracteristica lor principal este potenialul
oxidoreductor (redox), care se msoar n voli.
3.

El este msura valoric a capacitii de oxidare

sau reducere a compusului

Potenialul redox
Cu ct potenialul redox este mai electronegativ

cu att este mai nalt capacitatea de a ceda ,

i invers,
cu ct potenialul este mai electropozitiv, cu att
este mai nalt capacitatea sistemului de a
adiiona electroni.
Sistemele redox sunt aranjate n ordinea
creterii potenialului de oxido-reducere.

Potenialul oxidoreductor
al verigilor LR
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

NAD+/NADH.H+ -0,32V
FAD/FADH2
-0,05 V
CoQ/CoQH2
+0,04 V
cit.b (Fe3+)/cit.b (Fe2+) +0,12V
cit.c1 (Fe3+)/cit.c1 (Fe2+) +0,22V
cit.c (Fe3+)/cit.c (Fe2+) +0,25V
cit.a (Fe3+)/cit.a (Fe2+) +0,29V
cit.a3 (Fe3+)/cit.a3 (Fe2+) +0,55V
O2/H2O
+0,82V

Potenialul
oxidoreductor
transferul n trepte permite eliberarea energiei n
pachete a crei valoare este n jurul lui 7,3 kcal/mol (ct
necesit sinteza unui mol de ATP din ADP i H3PO4).

4 H+ + 4 + O2 2 H2O + G0
G0 = 52,6 kcal
Cantitatea energiei eliberate
depinde de potenialul redox

Energia liber standard

tiind potenialul redox al fiecrei perechi se pot

calcula modificarea energiei libere standard.

G = -nFE
n-numrul de
F-constanta lui Faraday (23062 cal/Vmol)
E0-diferena de potenial
G = -223062[+0,82-(-0,32)] = -52,6 kcal
7,3 x 3 = 21,9 cal
Randamentul utilizrii energiei libere 42%

Energia liber standard

Torentul de e orientat n direcia

micorrii energiei libere a sistemului

Cu ct e mai mare diferena potenialului
dintre 2 redox perechi cu att mai mare
e diminuarea energiei libere la transferul .

Complexele LR
Nr.de
Proteine

Gruprile
prostetice

Complex

denumirea

Complexul I

NADH
Dehidrogenaza

46

FMN,
Fe-S

Complexul
II

Succinat-CoQ
Reductaza

FAD, cit b560,

Fe-S

Complexul
III

CoQ-cit c
Reductaza

11

cit b562, cit b566,

Fe-S, cit c1,

Complexul
IV

Citochrom
Oxidaza

13

cit a, cit a3, Cu

Complexul I- NADH CoQ reductaz

1mol ATP
Inhibat: rotenon(otrav pentru peti), Na amital
(barbiturat); pericidin (antibiotic)

Complexul II- succinat - CoQreductaza

Variaia de potenial este de 0,07V;
G0 = -3,2 kcal/mol nu se sintetizeaz ATP
Inhibat malonat (inhibiie competitiv)

Complexul III- CoQ- citocrom c

reductaza
G0 = -7,75 kcal se sintetizeaz 1mol de
ATP.
Inhibat antimicina A

Complexul IVCatalizeaz adiia a 4 la O2 molecular (a 2 la O).

citocromoxidaz
O2 + 4 + 4H+ 2H2O

Cderea de potenial de 0,54V.

G = -24,8 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP
Inhibat: CO, ozide, cianide.

Complexele LR
NADH+H+

FMN
Fe-S

CoQ

b, c1
Fe-S
III

FAD
Fe-S
succinat

II

aa3
Cu
IV

O2

Toate componentele LR sunt dispuse n

membrana intern a mitocondriilor.
CoQ i cit c funcioneaz individual, iar celelalte
componente se grupeaz n complexe.

Complexul V ATPsintaz
F0 canal de protoni - strbate membrana

intern a MC, const din 4 tipuri de protein ce

formeaz un sistem de pori transmembranari prin care
trec protonii
F1- partea catalitic - se afl n intregime n
matrixul MC (form de sfer).
a. e alctuit din cinci tipuri de proteine (3),
(3), , , .
b. la acest nivel are loc reacia de condensare a
ADP + Pi ATP+H2O
Inhibat: oligomicin, atractilatul (glicozid)

Mitochondrial ATP Synthase E. coli ATP Synthase

These images depicting models of ATP Synthase subunit
structure were provided by John Walker. Some equivalent
subunits from different organisms have different names.

FOSFORILAREA
OXIDATIV
reprezint sinteza ATP din ADP i

Pi (cuplat cu LR), pe seama

energiei eliberate la transferul
echivalenilor reductori n LR de la
coenzimele reduse la O2.

FOSFORILAREA
OXIDATIV

Deoarece transferul de are loc treptat,

energia se elibereaz n pachete n

trepte .
Pentru a se forma ATP diferena de
potenial trebuie s fie nu mai mic de
0,22V.
Funcionarea cuplat a LR i FO este
asigurat de 5 complexe

Puncte de fosforilare
Locusurile unde are loc sinteza ATP

1.
2.
3.

se numesc puncte de fosforilare.

n LR (lanul respirator) deosebim
3 puncte de fosforilare:
NADH+H----CoQ
Cit b----citc
cita--cita3

Bilanul general n procesele LRFO.

NADH + H+ + O2 + 3ADP +

3Pi NAD+ + 3ATP + 4H2O

FADH2 + O2 + 2ADP + 2Pi

FAD + 2ATP + 3H2O

Ipoteze principale cu privire la

procesele de FO. Ipoteza lui Mitchell
Prin ce mecanism energia eliberat n LR este

cuplat cu formarea ATP?

Teoria chimic, numit i a intermediatorilor
comuni (produi intermediatori macroergici,
precursori de ATP).
Teoria conformaional (energia este preluat de
o protein ntr-o conformaie activ, ce
stimuleaz ATP).
Teoria chemiosmotic (Mitchell, 1961).

Piter D. MItchell
(1920-1992)
Premiul Nobel
n chimie, 1978
pentru teoria chemiosmotic a cuplrii
oxidrii cu fosforilarea
n lanul respirator

Teoria chemiosmotic
postuleaz:

energia care determin sinteza ATP din

ADP i Pi i are originea n gradientul de
protoni ce se stabilete ntre suprafaa
intern i extern a membranei interne
mitocondriale n timpul transportului de
electroni.

Ipoteza lui Mitchell

la transferul electronilor n LR se pompeaz

protonii din matrixul MC n spaiu

intermembranar.
Protonii nu pot reveni napoi deoarece
membrana intern a MC nu este permiabil
apare gradient de protoni
partea extern a membranei interne a MC
pozitiv, dar cea intern negativ

Gradientul de protoni
Gradientul protonilor din matrice n
spaiul intermembranar are 2
componente :

1. Electric (aprnd potenial de

membran - (0,14V)
2 de pH ( pH)
mpreun potenialul electric i
gradientul protonic alctuiesc
potenialul electrochimic - +

Gradientul de protoni
determin FORA PROTON-MOTRICE (p)
p = 2,303(RT/F) pH,
unde: potenialul membranar;
R constanta gazelor;
T temperatura
F constanta Faraday

Ipoteza lui Mitchell

Protonii revin din spaiu

intermembranar n mitocondrii prin

partea F0 (deoarece restul membranei
este impermiabil).
Acest flux de protoni este fora
morice care determin la nivelul
subunitii F1 sinteza de ATP din
ADP+Pi

Membrana
extern a MC

2+
2+
2+

P-sintaza

Membrana
intern a MC

+
+
+
+
+
+

Matrixul MC

2+
2+
2+

DP
34

Mal

OAA Suc Fum

MDH
2H+
2H+
+
NADH
2H+
matrix NAD
FAD
FADH2
C II
SDH

CI

membrana
intern

NADHDH

2e-

2H

spaiul
intermembranar

2H+
O2 H2O

C III

C IV

Cyt bc1

Cyt c ox

+
3H
ATP
H
+

ATPase

QH2

2H

cyt cox cyt cred

2H

H+

2H
2H+
10H+ims/4H+m = 2.5H+ per ATP

3H+

ATP

Datele experimentale ce
confirm:
S-a confirmat generarea gradientului de

protoni n cele 3 puncte ale LR. Anume

gradientul de protoni se utilizeaz la sinteza
ATP.
S-a demonstrat ca pH matrixului mitocondrial
crete, iar cel al mediului extern al membranei
MC scade (acid).
S-a argumentat c transferul H+ din MC n
timpul transportului de i revenirii lor prin
ATP-sintetaza sunt comparabile cu viteza lor
din cadrul FO n MC intacte.

CT de fosforilare
Raportul ntre numrul de moli de ATP produi i

O2 consumat este numit ct de fosforilare

P/O.
De la NADH+H pn la O2 - P/O = 3/1
ramura lung,
De la FADH2 pn la O2 - P/O = 2/1 ramura
medie.
P/O reflect cuplarea transportului H+ i
(respiraia) i fosforilarea (sinteza ATP).
Coeficient indic ce cantitate de P anorganic
(H3PO4) se transform n P organic (ATP) la
transportul unei perechi de H+ i n LR.

Inhibitorii ai
fosforilrii

acioneaz asupra ATP-sintetazei.

Oligomicina blocheaz
ptrunderea H+ prin FO (nchide
canalul) cu ncetul slbete
respiraia ntrerupere.

Inhibitorii
Fosorilrii de
ADP

Oligomycin
Atractyloside

Transportul mitocondrial al ATP

i ADP
ATP/ADP-

translocazei- asigur
transferul ADP din
citozol n MC n
schimbul ATP din
MC- citozol.
Fosfattranslocaza
transfer Pi n MC,
nsoit de deplasarea
ionilor de H2.

ADP + Pi

ATP
ATP4

matrix
lower [H+]

__
++

3 H+

ATP4 ADP3 H2PO4 H+

energy
requiring
reactions

ADP + Pi

higher [H+]
cytosol

Controlul respirator
Organismele vii sintetizeaz ATP n

raport cu necesitatea lui de aceea FO

cuplat cu LR este riguros controlat.
Deoarece LR i FO etapa final a
degradrii G, L, P controlul respirator se
poate efectua att prin compui direct
implicai n LR i FO, ct i prin
intermediatorii degradrii celor 3 clase.

Controlul respirator
Rolul primordial i revine ADP.
1.n lips de ADP rmne blocat F1 din ATP

- sintaz
2. nivelul ADP determin i intensitatea
transferului de protoni prin F0
3.ADP reglator alosteric (+) pentru mai
multe E ce sunt implicate n degradarea G,
L i P.

Controlul respirator
Lipsa de ADP - inhib respiraia i

stopeaz fosforilarea.
La adugarea de ADP crete brusc
consumul de 02 ---- se activeaza
lantul respirator i ADP se fosforileaz
la ATP.

La FO contribue:

1. Integritatea membranei interne a MC

orice leziune duce la pierderea

capacitii de FO (n timp ce transferul
de poate continua).
2. Impermeabilitatea membranei interne
pentru ionii H+ OH- K+ Cl-.

Decuplarea produselor de oxidare i

fosforilare. Ageni decuplani.

FO poate fi decuplat cu ajutorul unor

substane chimice, ce inhib sinteza

ATP dar neafectnd LR ageni
decuplani. La aciunea lor respiraia
crete, iar FO este inhibat.
protonofori
AD
ionoforele

Protonoforii mresc

1.
2.
3.
4.
5.

permeabilitatea membranei pentru

protoni(H+), lichidnd potenialul
transmembranar.
a.g. liberi
2,4 dinitrofenol
salicilaii (antiinflamatoare)
dicumarol (anticoagulant)
T3 i T4 (h.gl.tiroide)

Decuplanii

H+

2,4Dinitrophenol
OH
NO2

O
NO2

H+

NO2

NO2

+ H+

H+

 Ionoforele ei leag i transfer

ionii prin membran:

- valinomicina ( K+) ,
- nigericina ( K+),
- gramicidina A Na+, K+; H+.

Agenii decuplani

mresc termogeneza

Respiraia liber
are loc decuplarea FO de LR i toat

energia este convertit n cldur, care nu

se utilizeaz la executarea funciilor
celulare.
Astfel MC devin o sob, ce produc
cldur. E necesar cnd necesitatea
cldurii este mai mare dect ATP.
n esutul adipos brun MC sunt
specializate la producerea cldurii (nounscui, animale n hibernare)
termogenina.

Respiraia liber
are loc decuplarea FO de LR i toat

energia este convertit n cldur, care nu

se utilizeaz la executarea funciilor
celulare.
Astfel MC devin o sob, ce produc
cldur. E necesar cnd necesitatea
cldurii este mai mare dect ATP.
n esutul adipos brun MC sunt
specializate la producerea cldurii (nounscui, animale n hibernare)
termogenina.

Oxidarea microsomal
Un alt tip de reacii de OB este cel

oxigenazic. Acestea sunt catalizate de

monooxigenaze.
Lanurile monooxigenazice de oxidare
sunt lanuri scurte de transport al H+ i a
cror surs sunt NADPH+H
SH + O2 +NADPH + H S-OH + H2O +
NADP+
reducerea O2 i incorporarea lui n
anumii compui chimici (include un atom
de O, cellalt este redus la H2O).

un asemenea lan este microsomial - localizat

n RE al celulelor hepatice i suprarenale.

Rol esenial l are cit P450 (activatorul O2). El
cuprinde o FP (FAD) la nivelul creia H2 este
disproporionat n H+ i .

Rolul OM
Rolul: plastic i dezintoxicare.
n ficat hidroxilarea medicamentelor,

neutralizarea toxinelor, hormonilor (sunt

eliminai).
n medulosuprarenale sinteza
noradrenalinei i adrenalinei.
n corticosuprarenale sinteza
colesterolului, hormonilor gluco- i
mineralocorticoizi.

Noiune de radicali liberi

La reducerea incomplet a O2 se

formeaz forme reactogene i agresive ale

substanei cum ar fi: superoxidanionul,
peroxidul; radicalul hidroxil sau peroxidul
de hidrogen.

Specii incomplet reduse ale

oxigenului
1.

O2 + O2

(anionul superoxid)

2. O2 + 2H+ + H2O2 (apa oxigenat)

sau
O2 + O2 + 2H+ H2O2 + O2
3. H2O2 + O2 HO + HO + O2
sau
H2O2 + H+ + HO + H2O
(radicalul hidroxil)

Rolul biologic
Sinteza eicosanoizilor
Rennoirea membranelor biologice
Apoptoza
Transmiterea semnalelor intra- i

intercelular

EFECTELE NOCIVE
Denaturarea proteinelor
Modificri n structura nucleotidelor din AN
Peroxidarea lipidelor membranare
Modificarea permeabilitii membranare
Creterea influxului intracelular pentru sodiu, ap i

calciu
Lezarea ADN mitocondrial i afectarea integritii
proteinelor din LR mitocondrial

Speciile reactive ale oxigenului

implicate n patogeneza:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Cancerogenez
Infarct miocardic
Ateroscleroz
Hipertensiune arterial
Diabet zaharat
Artrit reumatismal
et.c.

Sistemul de protecie
antioxidant
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Enzimatic
Catalaz
SOD superoxid dismutaza
Glutation peroxidaza
Glutation-S-transfe-raza
Glutation reductaza
Etc.

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Neenzimatic
-tocoferolul (vit.E)
GSH (glutationul)
Ac. Ascorbic (vit. C)
Polifenolii
Carnozina
Etc.

AO enzimatici
SOD transformarea 2- n 22
2- + 2- + 2+ 22 + 2
Catalaza

222 22 + 2
Glutation reductaza
Glutation peroxidaza

AO enzimatici
H2O2

Glutation peroxidaza

2H2O

2G-SH

G-S-S-G

NADP+

NADPH+H+
Glutation reductaza