Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
1.1
Vasul de cultur
Una i cea mai important component a bioreactorului Biostat A Plus o reprezint vasul
de cultur n care se vor desfura practic toate experimentele.Acesta are un volum util de 5 L i
este realizat din sticl borosilicat (perete simplu nclzit cu manta electric).
Sterilizarea vasului ct i a celorlalte componente se realizeaz la o temperatur de
121C.
Capacul vasului este realizat din oel inoxidabil i prezint orificii de diferite diametre n
care sunt introduse sondele (pentru msurarea unor parametrii ai procesului pH, pO 2,
spum/nivel, temperatur) precum i alte componente pentru controlul procesului (agitator, tuburi
introducere substane, tuburi recoltate, tub evacuare, etc.)
FIGURA 2 Capacul vasului de cultur
1.2
Unitatea de comand
Unitatea de comand este caracterizat de un sistem de control integrat, pompe integrate,
1.3 Agitatorul
Omogenizarea mediului de cultur este realizat cu ajutorul unei palete elicoidale ataate
unui ax, rotit prin intermediul unui motor.
Cel mai important lucru const n faptul ca nainte de utilizare, totalitatea ansamblului s
fie sterilizat.
Agitatorul este format din trei segmente care sunt dispuse coaxial acesta fiind special
conceput pentru versiunea CC (cell culture cultur de celule ) i asigur un amestec uor dar
foarte eficient totodat chiar i la viteze mici aplicnd fore de tiere de intensitate sczut asupra
celulelor.
Recipientele pentru recoltare pot fi sticle sau eprubete sterilizate sau nesterilizate, n
funcie de destinaia probelor. n general, mostrele trebuie luate n recipiente sterilizate, spre
deosebire de surplusul de lichid din vas care poate fi scos i depozitat n orice fel de recipient.
Pentru curare se cltete cu ap distilat dup fiecare utilizare. n cazul n care nu este
folosit pentru o perioad scurt de timp, se plaseaz ntr-un recipient cu ap demineralizat. Dac
perioada de stocare este una ndelungat, electrodul trebuie plasat ntr-un pahar cu soluie 3M
KCl (clorur de potasiu 3 molar).
n cazul n care o astfel de soluie nu este disponibil se poate opta pentru ataarea
cpcelului protectiv din plastic umplut cu soluie electrolit.
Datorit nclzirii n timpul sterilizrii, reaciilor chimice ntre mediu i diafragm sau
depunerilor diferitelor reziduuri, electrozii de pH se uzeaz n timp. O verificare funcional a
acestuia se face ntr-un mod destul de simplu i rapid. Se msoar pH-ul unei soluii etalon (face
parte din pachetul livrat mpreun cu instrumentul de msur) i se compar valoarea indicat
online cu valoarea nscris pe recipientul soluiei etalon folosite ( pH 4 / pH 7 / pH 9 ).
Pentru prima utilizare i dup depozitarea pe termen lung a electrodului de pH n stare
uscat, acesta trebuie s fie reactivat i recondiionat cu atenie; membrana de sticl a electrodului
formeaz un strat subire de gel apos, datorit unei reacii cu apa. Acest strat afecteaz calitatea
msurrilor efectuate efectuate cu ajutorul sondei (timpul de rspuns, panta, alcalinitatea) i, prin
urmare, ar trebui s se regenereze proprietile dup uscarea electrodului.
Reactivarea electrodului se face prin plasarea pentru aproximativ 10 min. ntr-un pahar cu
0,1 - NaOH 1M, apoi pentru aproximativ 10 min. n 0,1 - 1M HCl i, n final pentru aproximativ
15 min. n soluia de depozitare specificat de productor.
nainte de a fi introdus n vasul de cultur, electrodul de pH trebuie calibarat. Detalii
referitoare la acest operaie vor fi prezentate n capitolul urmtor (seciunea Calibrarea
senzorilor).
condiiile prestabilite n cadrul procesului).La un afiaj stabil al valorii msurate se poate calibra
aceast valoare astfel nct ea s reprezinte 100 % pO 2.
1.10
1.11
evacuare
Acestea sunt filtre cu membrane speciale n carcase de plastic. Dimensiunea porilor
membranei este de 0,2 m i asigur alimentarea cu aer steril (sau gaz) a mediului de cultur.Au
o suprafa de 20 cm2 i permit un debit de ieire de 5 l/min la o presiune de 0,1 barg
Membranele filtrelor blocate din cauza umiditii pot fi uscate prin aerarea atent cu aer
curat presurizat. Dac la nivelul membranei a ajuns spum sau mediu de cultur, atunci filtrul
trebuie nlocuit.
Aceste filtre sunt autoclavabile (la o temperatur de 121 C) i pot fi sterilizate de mai
multe ori (aprox. 20 x).
Astfel de filtre sunt necesare pentru urmtoarele conexiuni:
-
1.12
Pentru soluiile corective (acizi, baze, antispumani, soluii nutritive) vasele de cultur tip
Univessel 5 l includ recipiente de 500 ml, autoclavabile, realizate din sticl borosilicat.
La nivelul capacului bioreactorului este instalat un port cvadruplu de alimentare cu soluii
corective.
Ajustarea nivelului n interiorul bioreactorului se face prin intermediul celor trei pompe
peristaltice instalate n partea frontal a unitii de comand a bioreactorului.
1.13
Mantaua electric
sistemului de control DFC. Toate funciile de msurare i control sunt disponibile n acest pachet
software.
n funcie de modelul bioreactorului, interfaa este disponibil fie integrat n unitatea de
comand i control a bioreactorului, fiind accesat de operator prin intermediul unui touchscreen, fie disponibil pe un calculator extern, cum este i cazul bioreactorului folosit n cadrul
acestui proiect.
Funciile standard de msurare i control includ nregistrarea semnalelor msurate,
monitorizarea lor grafic, calibrarea sondelor i contoarelor de dozare i controlul parametrilor de
proces.
Sistemul de monitorizare i control este constituit din dou pri software distincte.
Aplicaia micro-DCU (prezentat n Fig. 11) reprezint prima component a sistemului i
este caracterizat de o interfa grafic ce asigur o imagine de ansamblu asupra procesului.
Simbol
Etichet
Descriere
Buton albastru
Buton verde
Fundal verde
Butonul ,,gol
Indic
navigarea,stnga,
dreapta sus, jos n meniu sau
funcie
Pompa offon
Valv offon
Funciile aplicaiei la care operatorul are acces n orice moment, indiferent de starea
procesului sau meniul n care acesta se afl sunt reprezentate dup cum urmeaz.
Funcia (Simbol/etichet)
MAIN
Scurt descriere
Prezentarea general a bioreactorului:
Aici sunt afiai parametrii de proces ,valorile msurate; totodat ne
ofer posibilitatea de a accesa submeniurile corespunztoare
TREND
operaiei.
Seciunea pentru reprezentare grafic a unor variabile de proces.
Avantajul acestui submeniu este c : ne poate furniza rspunsul a
mai multor parametrii msurai n proces.
CALIBRATION
CONTROLLER
temperatur;(TEMP)
viteza de rotaie a agitatorului;(STIRR)
nivelul pH-ului i al oxigenului dizolvat;
- pompele peristaltice;(AFOAM,LEVEL)
- dozatoarele de gaz.
Aceast funcie cuprinde setrile de baz ale sistemului, cum ar fi
MAINTENANCE
REMOTE OPERATION
bioreactorului.
Permite operarea la distan. ( remote mode ).
Setrile pentru acest mod pot fi vizualizate i modificate din
seciunea Maintenance.
Afieaz alarmele active.
ALARM
folosind simboluri pentru vasul de cultur, elementele de alimentare cu gaze, valve, pompe,
dozatoare, sistemul de antrenare, senzori, balane, etc oferind totodat informaii cu privire la
poziionarea i starea acestor componente. Sunt afiate de asemenea valorile on-line ale
parametrilor ce trebuie urmrii.
Fiecare element funcional are asignat un buton ce permite accesul ntr-un meniu de
opiuni n care pot fi setate referine, se poate modifica modul de funcionare al elementului
respectiv ( oprit, automat, manual ) sau se pot reseta anumite variabile de proces.
n partea superioar a ferestrei sunt prezentate informaii generale (dat, configuraie,
submeniu), iar n partea inferioar sunt poziionate funciile principale ale programului.
Simbol
Etichet
STIRR
Viteza de rotaie
a agitatorului [rpm]
TEMP
Valoarea de msurare
a temperaturii n vasul
de cultur [TEMP]
pH
Valoarea de msurare
a ph-ului[pH]
Descriere
Acces direct la submeniu:
- Introducerea
referinei pentru
viteza de rotaie
- Selectarea modului de operare a
regulatorului pentru viteza de rotaie
Acces direct la submeniu:
Introducerea
temperaturii
nominale
- Selectarea modului de operare a
regulatorului pentru temperatur
Acces direct la submeniu:
- Introducerea referinei de pH
- Selectarea modului de operare a
regulatorului pentru pH
pO2
Valoarea de msurare
a pO2-ului[% pO2]
FO/LE
WEIGH
Greutatea [kg]
ACIDT
BASET
FOLET
SUBST
Acces
la
submeniu
pentru
introducerea valorii regulatorului de
referin i modul de selecie
operaional
distilat, apoi se reintroduce n prima soluie cu pH=7 pentru verificare. Dac este indicat o alt
valoare pH se repet operaiile anterioare.
Pentru calibrarea uneia dintre pompele peristaltice disponibile este nevoie de dou
recipiente, unul plin cu ap, iar cellalt gol (este necesar ca acesta s fie gradat). Se va trece un
tub de silicon prin dispozitivul de pompare, iar extremitile acestuia vor fi introduse n interiorul
celor dou recipiente. La iniierea calibrrii, pompa va porni i va ncepe s livreze ap din
recipientul plin n paharul gradat. La oprirea calibrrii, sistemul afieaz o caset Quantum n
care trebuie introdus cantitatea total de ap livrat (citit cu exactitate de pe paharul gradat).
Folosind aceast valoare, precum i timpul de livrare sistemul calculeaz debitul pompei
respective i l afieaz n program.
Dac debitele specifice ale pompelor sunt cunoscute, ele pot fi introduse direct n meniul
de calibrare.
n cazul supapelor valorile corespunztoarelor cantitilor de gaz livrate pot fi citite direct
de la debitmetre (rotametre) i introduse apoi n meniul de calibrare. Sistemul calculeaz debitul
total de gaz livrat n timpul deschiderii a unei supape. Pentru efectuarea unui calcul corect setarea
debitmetrului trebuie s fie meninut constant.
n timpul procesului, toate contoarele de dozare pot fi resetate, n orice moment, prin
accesarea meniului de calibrare.
Mrimea
Tipul regulatorului
Regulator PID cu ieiri PWM ( pulse-width modulated ).
PWM (k+1) = PWM (k) + PID
Temperatura
Viteza agitatorului
Nivelul pH-ului
(pO2)
Viteza de agitare
Debitul de amestec de gaz
Substratul
Regulator PID cu ieiri PWM.
Debitul de gaz
Spuma
Nivelul
Substratul
Etichet
Afiare
Off
Auto
Mode
Casc
Profile
Manual
Process Value
[PV]
Setpoint
[PV]
OUT
Param
PROFILE
Descriere
Modurile de operare ale regulatorului.
- Regulatorul (i servo controller-ele asignate) nu
opereaz n proces.
- Ieirea este n starea sa definit ( fr ca nici un
element de execuie s fie acionat.)
Regulatorul este activ i comand elementele de
execuie n funcie de referina presetat.
Servo controller-ele sunt trecute n modul
cascade.
- Regulatorul Master livreaz referina
(semnalul) ctre servo controller.
- Nu este permis accesul n meniul servo
controller-ului pentru setarea referinei.
- Reglarea n cascad nu este disponibil pentru
toate regulatoarele prezente.
Regulatorul opereaz dup un profil temporal.
Modul de acces la setarea manual a ieirilor.
Variabila de proces i valoarea sa actual n uniti
fizice (ex. C pentru temperatur, [rpm] pentru
viteza agitatorului, [pH] pentru valoarea pH-ului,
etc)
Referina setat pentru variabila de proces (n
uniti fizice).
Ieirea regulatorului.
Acces la parametrii controller-ului (folosind parola
19).
Meniul pentru definirea profilului de temporizare a
referinelor.
n toate configuraiile, regulatoarele sunt parametrizate astfel nct (n condiii normale de
funcionare) s asigure o comportare stabil a mrimilor de proces pe care le controleaz.
Pentru a adapta un regulator la comportamentul buclei controlate urmtoarele valori
caracteristice pot fi modificate n meniul de parametrizare al regulatorului:
Parametru
Valoare
Descriere
Limita inferioar a ieirii; referina minim pentru servo
controller.
Limita superioar a ieirii; referina maxim pentru servo
controller.
Deadband (zon moarta); Regulatorul rmne inactiv dac
MIN (Minimum)
MAX (Maximum)
DEADB
[PV]
Xp
Cascade
Hyst. time
[Etichet]
m:s