Sunteți pe pagina 1din 50

Microbiologie medical

Microbiologia =

ansamblul de discipline experimentale


care studiaz microorganismele i activitile lor
Microorganism = organisme unicelulare care pot fi puse
n eviden numai cu ajutorul microscopului
(optic sau electronic )
Puse n eviden pentru prima dat de Anton van
Leeuwenhoek (1632-1723)

William G.Morton (1846)


Francesco Redi (1626-1697)
Lazaro Spallanzani (1729- 1799)
Loius Pasteur (1822-1895)
Girolamo Fracastoro (1468-1553) seminaria morbi
Agostino Bassi - muscardina
Robert Koch (1843)
Charles Sdillot (1804- 1833)

Louis Pasteur (1822-1895)

- Descoper natura microbian a proceselor de fermentare


-

anormal a vinului
Face legatura ntre bolile vinului i unele boli infectocontagioase la animale i om
Descoper numeroi ageni etiologici ai acestora
Realizeaz vaccinuri prin inactivarea sau atenuarea
patogenitii unor microorganisme (rabie, antrax, holera
ginilor)

- Pune bazele sterilizrii i metodicii lucrului aseptic.

Robert Koch (1843-1910)


-

A descoperit noi ageni etiologici ai infeciilor la om i animale


(tuberculoz, holer, antrax);
A examinat microorganismele n preparate fixate prin caldur
i colorate cu colorani bazici;
A introdus mediile solide n practica diagnosticului
microbiologic;
A reprodus experimental boli infecioase prin inocularea
agentului etiologic la animale de laborator;
A descris secvene experimentale pentru susinerea relaiei
cauzale ntre un microorganism i manifestrile de boal:
este depistat la toi bolnavii iar distribuia n organism corespunde
leziunilor caracteristice bolii
poate fi izolat n cultur pur i subcultivat pentru a fi studiat
cultura pur inoculat la animalul receptiv reproduce boala cu
leziuni specifice din care poate fi reizolat.

Robert Koch

Louis
Pasteur

Lumea microorganismelor

Microorganisme cu structur celular

eucariote, constituite din celule cu structur evoluat:

fungi i protozoare;
procariote, constituite din celule cu structur primitiv:
bacterii

Entiti acelulare, la limita viului: virusuri, viroizi


Prionii

Conexiuni interdisciplinare
Biochimia
Chirurgia

- Oliver Wendell Holms


- J.F. Semmelweiss
- Joseph Lister
- Alphonse Gurin
- John Tyndall
Morfopatologia
- primul tratat de bacteriologie Bacteriile i rolul lor n etiologia,
anatomia i histologia patologic a bolilor infecioase Victor Cornil, Victor
Babe
Patologia experimental 1901 Ioan Cantacuzino
- 1912 Alexandru Sltineanu

Epidemiologia
Imunologia Ilya Mecinikov
- Emil von Behring
- Shibasaburo Kitasato
Genetica molecular 1944 O.T. Avery

Anatomia funcional a bacteriilor


Semnificaia biologic a structurilor bacteriene structurile celulei bacteriene care controleaz
creterea, multiplicarea, supravieuirea n condiii variate de mediu
Semnificaia taxonomic - structuri importante pentru clasificarea i identificarea bacteriilor
Semnificaia patogenic structuri care le permit s acapareze nveliurile, esuturile, umorile
organismului
Structuri bacteriene inte selective ale efectorilor imunitari sau ale antibioticelor

Celula bacterian :

I. protoplastul bacterian
II. peretele bacterian
III. glicocalixul procariot
IV. organitele de locomoie
V. pilii bacterieni
VI. endosporii bacterieni

Citoplasma
- conine ntr-un sistem coloidal proteine, carbohidrai, lipide,
metabolii cu greutate mic
- se afl permanent n stare de gel i menine poziia structurilor
interne n absena membranelor intracelulare
- n microscopia optic, pe preparatele colorate uzual vedem numai
citoplasma i uneori incluziuni citoplasmatice
- cuprinde nucleoplasma
- ribosomi
- incluziuni
Nucleoplasma
echivalent al nucleului celulei eucariote
nu prezint membran nuclear i nucleol
format dintr-un cromozom unic, o molecul de ADN circular, dublu
catenar, cu lungimea de 1000-2000 m
n microscopia optic este observat numai dup hidroliza ARN-ului, ca un
corpuscul oval, alungit n halter sau V, n funcie de stadiul diviziunii.

Electronomicrografii ale seciunilor ultrafine - apare ca un ghem sau scul de fibre cu


diametrul de 2-6 nm.
In situ cromozomul bacterian este helicat i suprahelicat n jurul unui miez ARN care l
menine n forma compact
Electronegativitatea ADN neutralizat prin proteine (asemntoare histonelor), ioni Mg2+,
poliamine
Ribosomii bacterieni
- prezeni n toat citoplasma cu excepia nucleoplasmei
- constanta de sedimentare 70s
- pot disocia n 2 subuniti: 30s ( ARN16s+20 molecule proteice)
50s (ARN 23s i 5s+30 molecule proteice)
- ARN ribosomal are o mare stabilitate fiind bine conservat n cursul evoluiei poate fi
utilizat drept criteriu de clasificare filogenetic
- pe electronomicrografii apar dispui ca polisomi (ir de ribosomi) n lungul moleculei
de ARNm pe care l citesc i traduc rapid
Incluziunile citoplasmatice
- au caracter de specie
- sunt caractere taxonomice primare

- sunt formate din: - polimetafosfat (Corynebacterium diphtheriae )


- amidon (Clostridium, Neisseria)
- lipide (Pseudomonas)
Membrana citoplasmatic
- lipsit de steroli (bacteriile nu-i sintetizeaz); excepie molicutele, ncorporeaz
colesterolul preformat de celulele eucariote.
- excret enzime hidrolitice necesare digestiei extracelulare.
- are funcii de biosintez.
Mezozomii - invaginaii anfractuoase ale membranei citoplasmatice care i mresc
suprafaa funcional. n mezozomii laterali i au sediul enzimele implicate n
autoreplicarea nucleoplasmei, iar n mezozomii septali enzimele implicate n sinteza
peretelui.
asigur transportul transmembranar prin fosfotransferaza membranar
unicul sediu al citocromilor, enzimelor, componentelor lanului respirator implicate n
transportul de electroni i fosforilarea oxidativ; analog funcional al mitocondriei din
celula eucariot. Mitocondriile sunt descendeni ai bacteriilor endosimbionte.

creterea bacteriilor este posibil numai cnd cel puin 50% din membrana
citoplasmatic este semifluid
poart receptori pentru semnale ale mediului extern atractani, repeleni, feromoni
(sistem molecular de integrare a acestor informaii)
II. Peretele bacterian
- nvelete protoplastul
- este format dintr-o structur de baz + structuri speciale care difereniaz grupe mari
de bacterii
Peptidoglicanul structura de baz a eubacteriilor, grup mare de bacterii din care fac
parte i bacteriile patogene. LIPSETE din peretele:
1. Arheobacteriilor bacterii adaptate la condiii de via extreme (temperatur, salinitate)
i care nu sunt niciodat prezente n corpul uman (nepatogene). Similitudini genomice
i de sintez proteic atest filiaia organismelor eucariote din arheobacterii
2. Molicutelor i al oricrei celule eucariote

este un heteropolimer de dizaharide aminate - N-acetilglucozamina


- N-acetilmuramic
aezate
alternativ n lanuri liniare de galactan i solidarizate ntre ele prin subuniti i puni
peptidice.
- cuprinde protoplastul bacterian ca o plas rigid i rezistent
- sinteza este controlat de enzime situate pe suprafaa extern a membranei
citoplasmatice - transglicozilaze, leag ntre ele 2 aminozaharuri
- transpeptidaze, catalizeaz formarea subunitilor i punilor
peptidice (esenial dipeptidul D-alanin-D-alanin)
- Proteine de legare a penicilinelor (PLP,PBP) denumire generic a enzimelor care
controleaz sinteza.
RIGIDITATEA peretelui bacterian este condiionat de configuraia steric i mrimea
ochiurilor reelei de peptidoglican
Cu EXCEPIA spirochetelor care au perete flexibil, restul bacteriilor au perete rigid care
le confer anumite forme: sferice, bastona, filamentoase i ramificate (actinomicete).
Morfologia bacteriilor mai este caracterizat prin aezarea lor care este condiionat de
modul de nmulire (nmugurire, diviziune, fragmentare)

Poziia planurilor succesive de diviziune, numrul de generaii dup care se separ


celulele surori.
REZISTENA peptidoglicanului protejeaz protoplastul prin echilibrarea presiunii
osmotice foarte mari (5-20atm) din citoplasma bacterian.
Sub aciunea agenilor muralitici (lizozim, penicilin etc.) apar defecte ale peretelui care
duc la hernieri ale protoplastului sau la explodarea acestuia.
Aciunea agentului muralitic n mediu osmotic protector (soluie 20% zaharoz, urin) face
ca protoplastul s rmn integru, dar ia o form sferic indiferent de forma avut
anterior, devine sferoplast dac mai pstreaz urme de perete sau protoplast complet
nud.
Dac agentul muralitic dispare din mediu, sferoplatii revin la forma iniial a bacteriei, dar
protoplatii nu. Este demonstrat autodeclanarea sintezei i asamblrii
peptidoglicanului de ctre resturile de perete.
Bacteriile cu perete defectiv aprute n medii osmotic protectoare sunt numite forme L
(1935, Klineberger Nobel le-a descris la Institutul Lister din Londra)
n cursul terapiei cu peniciline n focarul de infecie pot s apar forme L -infecia se
cronicizeaz.

Figure 3.10b

Peretele bacterian trebuie s se adapteze permanent protoplastului n cretere


- la bacteriile gramnegative enzimele autolitice rup limitat reeaua de peptidoglican i
permit inseria de noi molecule n puncte rspndite aleatoriu pe suprafaa bacteriei
- la bacteriile gram-pozitive inseria se face predominant n vecintatea septului de
diviziune.
Interes medical
- sensibilitatea la lizozim
- interferarea sintezei de ctre peniciline
- antigenitatea
- proprietatea de adjuvant imunologic
STRUCTURILE SPECIALE ale peretelui bacterian
Peretele bacterian condiioneaz colorabilitatea protoplastului n coloraiile difereniale
Gram, Ziehl-Neelsen.
Peretele bacterian de tip gram-pozitiv
- Peptidoglicanul este organizat ntr-o reea tridimensional, cu ochiuri strnse, groas i
omogen.

Unitile tetrapeptidice ale lanurilor glican adiacente sunt legate prin puni transversale
polipeptidice. Sunt variaii importante ale acestor puni interpeptidice de la o specie la
alta. De acidul N-acetilmuramic se leag un peptid scurt de 4 aminoacizi n forma L
sau D (L-alanina, D-acid glutamic, L-lizina, D-alanina).
Structurile speciale asociate:
- Acizii teichoci (teichos-perete) 50% din greutatea uscat a peretelui bacterian,
polimeri hidrosolubili de ribitol sau glicerol fosfai; difereniem acizi teichoici de perete
(legai covalent la peptidoglican) i acizi teichoici de membran (lipoteichoici) legai
covalent de glicolipedele membranei citoplasmatice.
Funcii stabilizeaz i ntresc peretele
- leag Mg2+ i asigur mediul ionic necesar activitilor
enzimatice n membrana celular.
- sunt antigene majore de suprafa utile subtiprii serologice a
bacteriilor grampozitive.
- Acizii teichuronici acid uric+polizaharide neutre
- permit subtiparea lactobacililor, streptococilor.
- Glicolipide

Peretele de tip gramnegativ


- subire
- structur neomogen, complex
- Peptidoglicanul dispus profund, n reea bidimensional lax (15-20% din greutatea
uscat a peretelui). Tetrapeptidul legat la acidul N-acetil muramic difer de gram
pozitivi doar prin acidul diaminopimelic care nlocuiete L-lizina.
Structurile asociate
- Membrana extern format dintr-un film intern, fosfolipidic
film extern, lipopolizaharidic
n ea floteaz diferite molecule proteice:
- porine (Omp A,C,D,F, LamB, Tsx) care penetreaz ambele fee ale membranei i
formeaz pori (acces nutrieni cu molecule mici hidrofile). OmpA porin n cantitate
mare cu molecule lungi, ancoreaz membrana extern la peptidoglican, receptor
pentru bacteriofagi i pilii sexuali.
- proteine de transport (specifice) mai puin numeroase, transport
transmembranar vitamina B12, Fe3+

-Lipoproteinele se leag covalent prin polul hidrofil la peptidoglican, prin polul hidrofob la
membrana extern, solidarizeaz cele 2 structuri.
-Lipopolizaharidul (LPS) hetrepolimerliniar dispus pe suprafaa distal a membranei
externe, are
- segment proximal, lipidul A format din uniti dizaharidice fosforilate de
glucozamin legate prin puni pirofosfat de beta-hidroxiacizi grai cu 10-17 atomi de
carbon (caracteristici pentru grupe mari de bacterii, e.g., beta-hidroximiristic
Enterobacteriaceae)
- miez polizaharidic - partea profund format din glucoz-heptoz i 2-ceto3deoxioctonat (KDO) numit coloana vertebral este comun tuturor bacteriilor
gramnegative. Prin KDO se leag la glucozamina lipidului A. Este antigenul R al
bacteriilor gramnegative, important activator al complementului pe cale alternativ.
- uniti dizaharidice repetate (10-25x). Cel mai frecvent sunt trizaharide liniare, dar
pot fi i tetra sau pentazaharide ramificate. Mascheaz miezul polizaharidic prevenind
activarea complementului. Important antigen al gacteriilor gramnegative, antigenul O,
mparte speciile n grupe serologice,asigur ncrctura electronegativ i hidrofilia
implicate n stabilitatea suspensiilor bacteriene, aspectul neted, lucios, umed al
coloniilor (S, smooth ) i efect antifagocitar.

LPS codificat de mai multe gene


- pot apare mutaii, prin care pierd capacitatea de sintez a antigenului O i a unor
poriuni distale ale miezului, dar niciodat a lipidului A i KDO. Scade ncrctura
negativ i hidrofilia. Mutantele R sunt favorizate de repicri repetate pe medii
artificiale, genereaz clone R care sunt autoaglutinabile, formeaz colonii rugoase R
(rough).
Spaiul periplasmic - aflat ntre membrana citoplasmatic i membrana extern
- conine peptidoglican, lipoproteine, enzime implicate n digestia
extracelular sau inactivarea unor antibiotice, fibrele axiale ale spirochetelor
- avantaje selective acapararea mediilor apoase minimale nutritiv,
chiar n prezena unor substane antibacteriene
Bacteriile grampozitive au nevoie de medii bogate n nutrieni i sunt natural sensibile la
aciunea substanelor antibacteriene, enzimele lor se dilueaz n mediul extracelular.
III Glicocalixul procariot
-nveli, polizaharidic frecvent, mai rar polipeptidic (Bacillus), dispus distal , numai la
unele tulpini bacteriene, nu este caracter taxonomic.

Glicocalixul structurat dens nu poate fi separat prin centrifugare


- structura impenetrabil la particulele de colorani,
n microscopia optic evideniat prin coloraie negativ cu tu de India sau
negrozin (capsula incolor)
Glicocalixul structurat lax (slime) poate fi separat prin centrifugare, penetrat de
particulele de colorani, vizibil la microscopul electronic dup colorare cu
rou ruteniu.
Funcii
Funcioneaz ca ligand la membranele mucoase, celulele eucariote, ntre
procariote avnd rol n:
-nutriia i virulena bacteriilor : citotoxinele i enzimele bacteriene difuzeaz
direct ctre celulele eucariote, prin liza celular nutrienii rezultai ajung direct
ctre bacterie nu se dilueaz n mediu.
IV Organitele de locomoie
- flagelii
- fibrele axiale

Flagelii
- organite filamentoase, lungi (6-20micrometri), flexuoase, cu structura proteic
- Pot fi evideniai preparate microscopice colorate prin impregnare
argentic
preparat umed ntre lam i lamel
- cultivare n geloz moale prin nepare
- Prezena, numrul, dispoziia flagelilor = caractere taxonomice primare
- Proteina flagelilor constitue antigenul H cu specificitate de tip (hauch- cretere
invaziv)
- Microscopia electronic filamentul lung i flexuos articulat pe un
- crlig rigid terminat cu un corpuscul bazal format la
bacteriile gram-pozitive dintr-un inel M flotant n membrana citoplasmatic i unul S
supramembranar. La bacteriile gramnegative apar suplimentar un inel P (n stratul de
peptidoglican) i unul flotant n membrana extern L
- Atractanii i repelenii pentru care exist receptori membranari specifici genereaz un
semnal care este transmis complexului bazal i determin sensul rotaiei inelelor,
apropiere sau ndeprtare.
Fibrele axiale analogi ai flagelilor la spirochete, sunt cuprinse n spaiul periplasmic

Au inserie polar cu extremitatea liber spre poriunea mijlocie a protoplastului.


Treponemele i boreliile mai multe i mai subiri, nrulate n jurul protoplastului.
Leptospirele 2 fibre axiale mai groase ce formeaz un axistil n jurul cruia se
nruleaz protoplastul.
V. Pilii bacterieni
- organite rigide, filamentoase, mai scurte dect flagelii, vizibili numai la microscopul
electronic
- pot fi:
a. pili comuni (fimbriile)
b. pili sexuali.
- codificai plasmidic
- caracter de tulpin
a. dispui peritrichi, funcioneaz ca adezine la receptori specifici ai mucoaselor
b. structuri tubulare prezente n numr redus pe suprafaa bacteriilor gram
negative care poart plasmide numite conjugoni. Implicai n conjugarea bacteriilor
VI. Endosporii bacterieni
- forme de rezisten prin care speciile genurilor Bacillus i Clostridium supravieuiesc n
condiii nefavorabile de mediu

Structurile codificate de gene represate n viaa vegetativ a acestor bacterii:


- protoplastul deshidratat, coninut mare de dipicolinat de calciu, care i confer rezisten
- nveliuri: peretele sporal, cortex gros (peptidoglican sensibil la enzimele autolitice) 2
tunici proteice bogate n cistein i legturi disulfidice, care asigur rezistena la ageni
chimici i radiaii.
n stare deshidratat supravieuiesc ani. Condiiile favorabile (apa, nutieni) semnal care
declaneaz germinarea: activarea unei autolizine a cortexului. Apa i nutrienii
difuzeaz spre protoplastcare crete n volum, rupe nveliurile sporale
Sunt uor observai n microscopia optic.
Importante caractere taxonomice primare.
n coloraia Gram rmn incolori. n coloraia Ziehl Neelsen n rou, bacteria n albastru.

S-ar putea să vă placă și