Sunteți pe pagina 1din 1

LUCRARE DE LABORATOR COLORAIA GRAM

A fost introdus n practica microbiologic de Gram. Se utilizeaz aciunea a doi colorani: fucsin bazic
i violetul de genian, este o coloraie diferenial- difereniaz toate bacteriile n dou grupe: Gram pozitive i
Gram negative, care se bazeaz pe diferenele structural biochimice i biologice, dar n special pe structura
diferit a peretelui celular. Este o coloraie cu valoare taxonomic, descrierea ncepnd cu caracterul Gram.
Materiale necesare: lame, lamele, cultur bacterian, ans bacteriologic, spirtier, ap, soluie de violet
de genian 1%, soluie Lugol, alcool, soluie de fucsin bazic 1% sau safranin, pipette, microscop, aparat de
fotografiat, hrtie de filtru
DESCRIEREA ETAPELOR DE LUCRU
Pentru efectuarea unui preparat fixat cu bacterii care urmeaz a fi examinate, trebuie parcurse urmtoarele
etape: etalonarea celulelor pe suprafaa unei lame de microscop, fixarea frotiului i apoi colorarea. Preparatul
astfel obinut este cunoscut sub denumirea de frotiu.
1. Pe o lam de microscop se pune, cu bucla ansei, o pictur de ap fiziologic. n bucla ansei se recolteaz o
cantitate mic din suspensie sau dintr-o colonie bacterian i apoi se disperseaz omogen n pictura de ap
fiziologic. Frotiul este fixat la flacr.
2.

Se coloreaz cu soluie de violet de genian 1% care se menine pe lam 1-2 minute, apoi colorantul se
scurge i preparatul se spal cu ap. Toate bacteriile se coloreaz n violet.

3. Mordansarea cu soluie Lugol (1:2:300 iod, iodur de potasiu, ap distilat). Soluia se menine pe lam
2-3 minute. Preparatele nu se spal. n timpul acestei operaii iodul formeaz cu violetul de genian un
complex iodat cu greutate molecular mare care la unele bacterii este stabil, la altele este instabil.
4. Decolorarea cu alcool se menine 5- 7 secunde pe lam, apoi se face o splare abundent cu ap pentru a
opri aciunea decolorantului.
5. Recolorarea cu soluie de fucsin bazic 1% sau safranin, 1/10. se menine pe lam un minut.
Preparatul se spal cu ap, i se usc.
6. Se examineaz la microscop. Celulele la care complexul este instabil se decoloreaz i vor fi recolorate cu
fucsin n rou, celelalte rmn colorate n violet.
7. Fotografiaz preparatul la obiectivul 10x i 40 x i anexeaz imaginile obinute n caiet, efectund
analiza acestora.
Interpretarea observaiilor. Dac preparatul este dintr-un amestec de germeni- unele bacterii vor fi
colorate violet- Gram +, altele n rou/ oranj- Gram .
Principiul coloraiei Gram. Coloranii bazici au mare afinitate i reacioneaz cu componentele acide
din citoplasma bacteriilor, iar dup tratarea cu soluia Lugol se formeaz un complex iodat stabil. La Gram
pozitive i instabil la Gram negative care trebuie colorate apoi cu un colorant de contrast pentru evideniere.
Ipoteza acceptat este c un rol esenial n colorare l are peretele celular. Coloraia Gram depinde foarte mult
de vrsta culturii bacteriene. Numai culturile tinere permit o coloraie i o interpretare corect. Pe msur ce
mbtrnesc i schimb comportamentul- bacteriile Gram pozitiv se coloreaz ca i cele Gram negativ.
Bacterii Gram pozitive. Bacilii sporulai- Bacillus subtilis, Bacillus aureus, specii ale genurilor
Staphylococcus, Streptococcus, bacteriile lactice- Lactobacillus.
Bacterii Gram negative. Escherichia coli, Proteus, Salmonella, gonococul- Neisseria, se comport la fel
toate celulele eucariote, cu excepia drojdiilor.