DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRADO DEL AZUL DE METILENO POR

ESPECTROFOTOMETRA-MOLECULAR
OBJETIVOS
Determinar el calibrado del azul de metileno utilizando tres soluciones estndares.
Determinar la longitud de onda del azul de metileno.

FUNDAMENTO TEORICO:
La espectrofotometra es un conjunto de tcnicas analticas cualitativas y cuantitativas. Se
basa en la interaccin de las molculas y las radiaciones electromagnticas la cantidad de
luz absorbida por una sustancia a distintas l es como una huella digital y se llama espectro
de absorcin.
Una radiacin electromagntica se puede describir como un flujo de partculas llamadas
fotones, o bien como una onda propagndose en el espacio. De esta ltima descripcin se
toma el concepto de longitud de onda, definindolo como la distancia entre dos mximos
consecutivos de la onda.
La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura
de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica.
Para descubrir la capacidad de absorcin de una sustancia a distintas longitudes de onda, se
hace un barrido espectral. Cada sustancia tiene su espectro caracterstico, lo que permite
identificar una sustancia en una solucin cuya composicin desconocemos, y esto se suele
emplear en la determinacin de txicos en lquidos biolgicos. Existen dos formas de llevar a
cabo los espectros de absorcin:

Manualmente: se lleva a cabo en un espectrofotmetro de haz simple, se coloca en la cubeta

la solucin y vamos midiendo las absorbancias a distintas longitudes de onda.

Automticamente: se lleva a cabo en un espectrofotmetro de haz doble,

en el que se sita la cubeta con el blanco en una de sus celdas y en la otra resolucin
problema, se programa el aparato para que haga incidir distintas longitudes de onda y este
hace el barrido. Cuando se pretende determinar, espectrofotomtricamente la concentracin
de un soluto de una disolucin, es imprescindible conocer las longitudes de onda a las que se
produce la mxima absorcin. Lo ideal es hacer incidir sobre la solucin un haz de luz con la
longitud de onda en la que se produce la mxima absorcin.
PROCEDIMIENTO:

Pesamos 0.01gr de rojo

de metilo y colocarlo en
fiola de 100ml.

Preparamos las
disoluciones diluciones
de (0.2, 0.6 y 0.9) ppm

Aforamos la fiola con

agua destilada.

0.3 ppm

0.6 ppm

0.9 ppm

RESULTADOS:
Lo que nos muestra la pantalla es la
Absorbancia vs la concentracin

Colocamos la muestra
en las celdas.
Leer la absorbancia.

Graficar la absorbancia vs la concentracin para cada una de las

soluciones

Soluciones

Concentracin

Absorbancia

Solucin 1

0.3 mg/L

0.58

Solucin 2

0.6 mg/L

0.50

Solucin 3

0.9 mg/L

0.39

0.7
0.6
0.5
0.4
Absorbancia

Absobancia

0.3

Linear (Absobancia )
0.2
0.1
0
0.20.30.40.50.60.70.80.9 1
Concentracin

DISCUSIONES:
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de C (concentracin
molar altos),

varia con la concentracin, debido a fenmenos de dispersin de la luz,

agregacin de molculas, cambios del medio, etc. Desafortunadamente esta ley no se

cumple correctamente cuando la concentracin es excesivamente alta debido a la difusin
del haz de luz en el medio o si la intensidad de la fuente luminosa es muy alta ya que se
producen variaciones no lineales en las mediciones. Esto tambin se observa en
concentraciones diluidas de sustancias absorbentes que contienen concentraciones diluidas
de sustancias absorbentes que contienes concentraciones altas de otras especies,
electrolitos en particular. Cuando los iones estn muy cerca de analitos, alteran su
absortividad molar por interaccin electrosttica ocasionando desviaciones de la ley de Beer.

CONCLUSIONES:

1. La absorbancia depende de factores como la absortividad, la concentracin, el espesor

de la celda, longitud de onda, temperatura, velocidad de reaccin, tiempo, no obstante,
el barrido espectral que se obtiene para cada sustancia es nico y se puede utilizar para
identificar sustancias puras o en diluciones de compuestos desconocidos.
2. La absorbancia vara con la concentracin en una relacin lineal, es decir, que a medida
que aumenta la concentracin de la dilucin tambin aumenta la absorbancia.
3. Segn la concentracin vara la absorbancia del compuesto, variado la cantidad del
solvente (siendo agua destilada) se puede disminuir la absorbancia.
4. Se identific que el equipo no presenta una adecuada precisin y exactitud determinado
que las medidas realizadas en este no son confiables.
BIBLIOGRAFIA:
1. Borfost R. y Scholz, M.1964. SpektroskopischeMethoden in der organischen. Chemise.
Berlin
2. Snchez, D. 1995, instrumentacin en bioqumica. Consejo nacional de Ciencias y
Tecnologa (CONCYTEC) lima