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Relatrio de Microbiologia
Ala bacteriolgica
Ala de drigaslki
Bquer com lcool 70%
5 placas de petri com gar
5 placas de petri sem meio
6 tubos pequenos vazios
Tubo com cultura da bactria Escherichia coli
Tubo com cultura da bactria Pseudomonas
2 tubos pequenos com meio contendo vermelho de metila(MR)
proskauer(VP)
- 2 tubos pequenos contendo gar SIM
- 2 tubos pequenos com gar lisina de ferro(LIA)
- 4 tubos pequenos com
meio OF para glicose, estando dois dentre estes com
leo mineral
- 2 tubos pequenos com meio OF para manitol, estando um com leo mineral
Mtodos
Testes Bioqumicos
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Ensaio de MR e VP
Primeiramente, ligou-se o bico de bunsen a fim de criar uma zona de segurana microbiolgica.
Flambou-se a ala bacteriolgica, esperou-se esfriar um pouco e mergulhou a mesma no meio de
cultura. Em seguida, abriu-se o tubo de MR, com o auxlio do dedo mnimo, e passou para este tubo
a cultura. O mesmo procedimento foi feito para os tubos VP, a tcnica foi aplicada para ambas as
culturas de Escherichia coli e Pseudomonas.
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Primeiramente, ligou-se o bico de bunsen a fim de criar uma zona de segurana microbiolgica.
Flambou-se a ala bacteriolgica, esperou-se esfriar um pouco e mergulhou a mesma no meio de
cultura. Em seguida, abriu-se o tubo de gar SIM, com o auxlio do dedo mnimo, e passou-se a
alada com a cultura at o fundo do tubo. A tcnica foi aplicada para ambas as culturas de
Escherichia coli e Pseudomonas.
Ligou-se o bico de bunsen a fim de criar uma zona de segurana microbiolgica. Flambou-se a
ala bacteriolgica, esperou-se esfriar um pouco e mergulhou a mesma no meio de cultura. Em
seguida, abriu-se o tubo de gar SIM, com o auxlio do dedo mnimo, e passou-se a ala com a
cultura por cima do meio slido, e posteriormente, colocou-se a mesma alada dentro do gar. A
tcnica foi aplicada para ambas as culturas de Escherichia coli e Pseudomonas.
de meio OF glicose, com o auxlio do dedo mnimo, e passou-se a alada com a cultura at o fundo
do tubo. A tcnica foi aplicada para ambas as culturas de Escherichia coli e Pseudomonas.
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Tcnica de Pour-Plate
Em uma placa de petri com gar, colocou-se 0,1 mL da diluio de 10 -4. Pegou-se uma ala de
drigalski, que estava mergulhada em um bquer com lcool 70%, passou a mesma trs vezes no
fogo e espalhou o lquido por sobre o gar. O procedimento foi repetido, tomando 0,1 mL das
diluies de 10-5 e 10-6 e colocando em quatro placas com gar, sendo duas para cada diluio.
IV) Resultados e Discusso
Resultados: Quantificao Bacteriana
4.1) Resultados: Testes Bioqumicos
Meio
Bactria
Escherichia coli
MP - A parte superior do meio
MR VP
se tornou vermelho
VP - A parte superior do meio
se tornou preta
SIM
LIA
Pseudomonas
MP - No houve alteraes
VP - A parte superior do meio
se tornou preta
No houve alteraes
O meio tornou-se roxo
laranja - amarelado
laranja - amarelado
laranja - - amarelado
Com leo - O meio tornou-se
Meio OF Manitol
laranja
Sem leo - O meio tornou-se
laranja - - amarelado
Figura 1. Meio MR
Dessa forma a E. coli obteve um resultado positivo para o teste pois houve a mudana da
cor do meio para o vermelho(figura 3). Assim, a glicose inicialmente foi convertida a cido
pirvico e este sofreu uma fermentao cida mista, havendo assim a formao de cido. Desta
forma, o pH do meio diminuiu e houve a alterao da cor do indicador para o vermelho. J para a
Pseudomonas, o resultado foi negativo, uma vez que no houve a alterao da colorao(figura 2)
J o teste de Voges Proskauer diferencia os micro-organismos que realizam a fermentao
pela via butilenogliclica da glicose. Nesse teste, quando o cido pirvico passar pela fermentao
pela via butilenogliclica haver a formao de acetona (acetilmetilcarbinol).
Para revelar o resultado do teste, primeiramente, h a adio de KOH. Pois a acetona
oxidada a diacetil, pelo oxignio atmosfrico em ambiente constitudo basicamente por hidrxido
de potssio. Em seguida, h a adio de -naftol, e com isso o diacetil ser convertido h um
complexo vermelho. Dessa forma, o resultado positivo quando houver alterao da colorao do
meio para vermelho(figura 4).
Figura 4. meio VP
Figura 5. VP E. coli
Figura 6. VP Pseudomonas
Com a anlise dos resultados, poderia-se concluir que para ambas as bactrias o resultado
foi negativo, uma vez que no houve a formao da colorao vermelha, a colorao gerada
resultado da mistura dos reagentes utilizados(figuras 5 e 6).
Porm o resultado do teste inconclusivo uma vez que no se h certeza de que os reagentes
estavam em condies adequadas para o uso. Mas na literatura dito que ambas bactricas possuem
resultados negativos, como foi obtido no teste. Porm se a bactria analisada possusse resultado
positivo, poderia se obter atravs do teste um resultado errneo devido condio do reagente.
4.1.2) Meio SIM
O Meio SIM um teste bioqumico com base na motilidade dos micro-organismos e
produo de sulfeto e indol.
A produo de sulfeto permite verificar se a bactria capaz de degradar tiossulfato devido
possuir a enzima tiossulfato redutase. Nesta reduo dos compostos de enxofre, haver a formao
de cido sulfdrico, que incolor, porm este reagir com o indicador que o ferro, formando um
precipitado preto, devido produo de sulfato ferroso. Como pode se observar nas reaes abaixo:
O meio LIA permite verificar se a bactria possui a lisina descarboxilase (LDC). Esta enzima
atua descarboxilando a lisina presente nos aminocidos. O meio contm o indicador prpura de
bromocresol que apresenta colorao amarela em pH abaixo de 5,2 e roxo em pH acima de 6,8.
O meio inicialmente apresenta a colorao amarela, isso ocorre pois o meio contm glicose e com
isso h a fermentao da glicose e consequentemente a produo de cido. Isso far com que o pH
diminua e o meio apresente a colorao amarela.
Para a ao da enzima lisina descarboxilase necessrio que o meio esteja cido, e isso obtido
pela fermentao da glicose. As bactrias que possuem a enzima descarboxilam a lisina com a
formao de amina (cadaverina) que tornar o meio bsico como se pode observar pelo esquema
abaixo:
Como o meio se tornar basico, haver a viragem do indicador e o meio apresentar a colorao
roxa. Portanto, o resultado ser positivo quando o meio apresentar a colorao roxa e negativo
quando este possuir a colorao amarela.
Dessa forma pde-se observar que ambas as bactrias testadas conseguem descarboxilar a lisina, ou
seja, resultado negativo, pois ambas possuam o meio com colorao roxa.
4.1.4) OF Glicose
E. coli e Pseudomonas
respectivamente
4.1.4) OF Manitol
O meio OF contendo manitol, tem por objetivo observar a capacidade de uma determinada
bactria degradar este carboidrato tanto em ambiente aerbio quanto anaerbio (figuras 17 e 18).
4.2) Quantificao
A tcnica de quantificao visa efetuar a contagem total de bactrias numa amostra. Para isto
so feitas diluies em srie da amostra a ser inoculada no meio. No mtodo Pour-Plate uma
alquota de 1ml da amostra com os microrganismos adicionada uma Placa de Petri sem, o meio
de cultura, que ser posteriormente por cima dos microrganismos na placa. Este mtodo favorece o
crescimento de bactrias anaerbias. J na tcnica Spread-Plate uma alquota da amostra
contendo os microrganismos adicionada ao meio de cultura e espalhada com o auxlio de uma ala
de Drigalski.
No mtodo Pour-Plate realizado no foi possvel quantificar o nmero de clulas
microbianas, uma vez que o estas cresceram muito prximas e aglomeradas, sendo portanto
considerado <300.
No mtodo Spread-Plate tambm no foi possvel quantificar o nmero de clulas
microbianas, pelo mesmo motivo citado acima. Portanto, o nmero considerado foi <300.
V) Concluso
No foi possvel obter colnias isoladas em nenhum dos mtodos aplicados e em nenhuma
das diluies efetuadas, sendo assim necessrio mais cuidado em relao a inoculao das placas,
evitando carregar e espalhar excesso de material microbiolgico nesta.