Sunteți pe pagina 1din 9

ASOCIAIA DE ACREDITARE DIN ROMNIA

ORGANISMUL NAIONAL DE ACREDITARE

INSTRUCTIUNEA
PENTRU VALIDAREA METODELOR
UTILIZATE N LABORATOARELE DE ANALIZE MEDICALE

RENAR Cod: I-12

Ediia 1
Revizia: 0
DATA: 11.2007

Exemplar nr.

APROBAT:

ELABORAT:

drd. ing. Cristian Dorin NICHITA


Director General RENAR

Dr. Nicolae Poll


Coordonator
Comitetul Laboratoare Medicale

Pag.1 din 9

VERIFICAT:
ing. Daniela Ionescu
Manager Calitate

Reproducerea integral sau parial a prezentei proceduri n orice publicaii i prin


orice procedeu (electronic, mecanic, fotocopiere, microfilme, etc.), este interzis
dac nu exist acordul scris al RENAR

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE
RENAR COD: I12 Ed. 1

CUPRINS

1. DOMENIU DE APLICARE
2. DOCUMENTE DE REFERIN
3. DEFINIII
4. DESCRIEREA ACTIVITII
5. MODIFICRI FA DE VERSIUNEA ANTERIOAR

Revizia: 0/11.2007

Pagina 2 /9

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE

Revizia: 0/11.2007

Pagina 3 /9

RENAR COD: I12 Ed. 1

1. DOMENIU DE APLICARE
Prezentul document are rol de instruciune pentru validarea metodelor n
laboratoarele de analize medicale, n vederea satisfacerii cerinei 5.4.5. Validarea
metodelor din SR EN ISO/CEI 17025:2005; SR EN ISO 15189:2005 cu privire la
metodele utilizate n laborator de analize medicale.
Acest ghid stabileste directii minime cu privire la modul de validare si la parametrii de
performanta care trebuie evaluati n vederea validrii medodelor utilizate de
laboratoarele de analize medicale.
Un laborator poate s considere ca releveni pentru scopurile proprii si sa evaleze si
alti parametri decat cei prezentati mai jos.

2. DOCUMENTE DE REFERIN
2.1. Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A
Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics
2.2. SR EN ISO/CEI 17025:2005 - Criterii generale pentru competena
laboratoarelor de ncercri i etalonare.
2.3. SR EN ISO 15189:2005 Cerine particulare pentru calitate i competen

3. DEFINIII
3.1. Validarea (SR EN ISO/CEI 17025:2005) - confirmarea prin examinare si
furnizarea de dovezi obiective ca sunt indeplinite cerintele pentru utilizarea
intentionala.
3.2. Validarea metodei (Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose of
Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics)
1. procesul prin care laboratorul isi stabileste caracteristicile de perfomanta si
limitele metodei si prin care identifica factorii care influenteaza aceste
caracteristici precum si gradul de influenta al acestor factori
2. procesul prin care laboratorul verifica daca metoda este adecvata scopului
in care va fil utilizata

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE

Revizia: 0/11.2007

Pagina 4 /9

RENAR COD: I12 Ed. 1

4. DESCRIEREA ACTIVITII
4.1. CONDITIILE IN CARE TREBUIE SA SE VALIDEZE METODELE
4.1.1. Cnd se realizeaz validarea metodei
Un laborator trebuie sa valideze o metoda de lucru atunci cand este necesar sa
se stabilesca daca parametrii de performanta ai acesteia sunt adecvati pentru
rezolvarea problemelor analitice urmarite, cum ar fi:
-

atunci cand laboratorul introduce in lucru o metoda pe care nu a mai utilizat-o


in trecut
atunci cand trebuie implementate imbunatatiri ale metodei ca urmare a
introducerii de imbunatatiri de catre producatorul reactivulului, a schimbarii
echipamentului, a schimbarii producatorului reactivilor etc.
atunci cand metoda este extinsa pentru a fi utilizata si pentru un alt scop decat
cel de pana in prezent (ex. extinderea utilizarii metodei de determinarea a
glucozei din ser la urina)
atunci cand rezultatele controlului de calitate indica o modificare a
performantelor metodei

4.1.2. Stabilirea gradului de extindere al validrii


Gradul de extindere al validarii trebuie sa tina cont de:
- relevanta parametrilor evaluati pentru utilizarea intentionala (ex. pentru
determinari de biochimie poate fi relevanta determinarea limitelor de detectie
ale metodei)
- relevanta parametrilor evaluati pentru a satisface cerintele clientului
- natura modificarilor aduse atunci cand se implementate imbunatatiri ale
metodei
- natura diferentelor atunci cand se compara metode diferite, echipamente
diferite etc.
Chiar si atunci cand se introduc in lucru metode standardizate sau publicate in
literatura de specialitate este necesara o validare pentru a stabili modul in care
laboratorul reuseste sa obtina performanta indicata in referential (standard,
literatura, specificatiile producatorului date in prospectul de lucru etc.)
Validarea trebuie sa fie un echilibru intre costuri, riscuri si posibilitati tehnice.

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE

Revizia: 0/11.2007

Pagina 5 /9

RENAR COD: I12 Ed. 1

4.1.3. Condiiile tehnice n care se realizeaz validarea metodei


Validarea metodei trebuie s se realizeze n urmtoarele condiii:
1) Responsabilul de validare trebuie sa fie o persoana competenta
2) Conditiile de mediu cerute de specificatiile metode (ex. specificatiile date de
producatorul echipamentului, reactivilor, literatura de specialitate) trebuie sa
fie satisfacute
3) Echipamentul de msurare trebuie sa fie in buna stare de functionare, trebuie
sa fie etalonat inainte de validare (cand este cazul) si calibrat corespunzator
4) Reactivii utilizati sunt adecvati lucrului cu echipamentul care urmeaza a fi
utilizat si sunt in termen de valabilitate
5) Materialele de referinta utilizate in procesul de validare trebuie sa fie adecvate
metodei care urmeaza a fi validate (ex. tabelele de valori ale concentratiilor
analitilor serului de control intern au valori specifice analizorului si principiului
chimic ce urmeaza a fi utilizate) si trebuie sa fie in termen de valabilitate

4.1.4. Parametrii validrii


Informatiile folosite pentru a valida metoda pot fi obtinute prin testari in laborator
sau din alte surse (informatii date de producatorul reactivilor/echipamentului,
literatura de specialitate, standarde de metode etc.)
Pot fi evaluati, in functie scopul validarii, urmtorii parametrii:
- limita minima de detectie
- limitele domeniului de masurare
- precizia (repetabilitate/reproductibilitate)
- acuratete (exactitate)
- incertitudinea de msurare
- robustetea metodei
- sensibilitatea
- specificitatea
Modaliti de evaluare a unor parametri de performan:
4.1.4.1. Limita minima de detectie - LD - cea mai mica valoare (concentratie,
cantitate, etc) care poate fi detectata
Aceasta limita se poate considera LD = 0 + 3SD al probei pentru care concentratia
este egala cu limita minima de cuantificare (vezi mai jos)

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE

Revizia: 0/11.2007

Pagina 6 /9

RENAR COD: I12 Ed. 1

4.1.4.2. Limitele de msurare


Limitele de msurare sunt :
a) Limita minima de cuantificare cea mai mica concentratie de analit, diferita
de zero, care poate fi determinata cu un nivel acceptabil al repetabilitatii si al
exactitii
Aceasta limita se determina prin testarea mai multor probe preparate cu
concentratii mici (ex. dilutii diferite ale unui ser de calibrare), apropiate de limita
minima de masurare specificata de producatorul kitului de reactivi. Fiecare proba
este testata de minim 10 ori si se calculeaza pentru fiecare valoarea medie si
abaterea standard.
Se considera ca limita minima de masurare proba cu cea mai mica concentratie si
pentru care abaterea standard are o valoare acceptabila.
Observaii:
1. Daca limita minima a curbei de calibrare este mai mare decat limita minima de
masurare, atunci trebuie acordata atentie modului in care se realizeaza
extrapolarea. In acest caz, daca se utilizeaza un analizor automat, atunci
limita minima de cuantificare pe care o poate obtine laboratorul este data de
limita minima a curbei de calibrare.
2. Daca limita minima a curbei de calibrare este data de valoarea 0 a
concentratiei, atunci limita minima de masurare a analitului va fi foarte probabil
mai mare decat 0 si trebuie determinata de laborator ca mai sus, daca
aceasta limita este relevanta din punct de vedere clinic (exemplu: este
relevant sa se cunoasca limita minima de detectie in cazul markerilor de
diagnostic post operator cum sunt markerii tumorali sau markerii de rejectie a
transplantului)
3. Pentru determinarile calitative, limita minima de detectie este de exemplu
valoarea cut-off, care este indicata in prospectul kitului de reactiv
b) Limita maxim de msurare cea mai mare concentratie de analit care
poate fi determinata fara dilua proba
Observaii :
1) In cazul in care curba de calibrare a analizorului este liniara, atunci
limita maxima de masurare este egala cu limita de liniaritate
(specificata de producatorul kit-ului reactivi).
2) In cazul in care curba de calibrare nu este liniara (ex. determinari
imunologice), atunci atunci trebuie acordata atentie modului in care se
realizeaza extrapolarea. In acest caz, daca se utilizeaza un analizor
automat, atunci limita maxima de masurare pe care o poate obtine
laboratorul este data de limita maxima a curbei de calibrare.

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE

Revizia: 0/11.2007

Pagina 7 /9

RENAR COD: I12 Ed. 1

Not:
Laboratorul trebuie sa arate ca domeniul sau de masurare include domeniul de
referinta biologic (domeniul de valori normale) si acopera valorile patologice
corespunzatoare populatiei de pacienti care se adreseaza laboratorului in mod
obisnuit.

4.1.4.3. Precizie (fidelitate)


Laboratorul trebuie sa stabileasca repetabilitatea si reproductibilitatea pe materiale
de referinta (pentru controlul intern) cu valori cunoscute ale concentratiei analitilor si
pe probe de pacienti - atat probe cu valori normale, cat si probe cu valori patologice
a) Pentru stabilirea repetabilitatii (precizia intra-determinare): laboratorul
masoara mai multe replici ale unei pool de seruri sau material de referin, una
dupa alta, in aceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi, operator, intr-un
interval de timp foarte scurt si va estima abaterea standard.
Abaterea standard obtinuta de laborator trebuie sa fie mai mica sau egala cu cea
specificata de producatorul kitului de reactivi sau al echipamentului (daca aceasta
informatie este disponibila)
b) Pentru stabilirea reproductibilitatii (precizia inter-determinari =
repetabilitate interdeterminari) - laboratorul masoara mai multe replici ale unui
pool de seruri sau material de referin, in aceleasi conditii, cu acelasi
echipament, reactivi, operator, in zile diferite si va estima abaterea standard
Abaterea standard obtinuta de laborator trebuie sa fie mai mica sau egala decat cea
specificata de producatorul kitului de reactivi sau al echipamentului (daca aceasta
informatie este disponibila) si decat cea specificata de producatorul materialului de
referinta utilizat.
4.1.4.4. Exactitate
Laboratorul trebuie sa stabileasca acuratetea (exactitatea) pe materiale de referinta
(pentru controlul intern) cu valori cunoscute ale concentratiei analitilor, atat pe probe
cu valori normale, cat si pe probe cu valori patologice
a) Bias-ul (%) (deplasarea): laboratorul masoara mai multe replici ale
materialului de referinta, in aceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi,
operator, in zile diferite si va estima valoarea medie.
Bias = 100 x (Valoarea medie obtinuta de laborator Valoarea tinta a materialului
de referinta)/ valoarea tinta a materialului de referinta.
Aceasta marime trebuie sa fie mai mica sau egala cu valoarea permisa specificata
de producatorul reactivilor sau analizorului, daca aceasta informatie este disponibila.

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

Revizia: 0/11.2007

Pagina 8 /9

RENAR COD: I12 Ed. 1

Daca valoarea minima permisa a biasului nu este specificata de producator, atunci


laboratorul trebuie sa isi stabileasca propriile criterii.
b) Prin participari la comparari interlaboratoare, laboratorul trebuie sa
identifice care este abaterea rezultatului pe care il obtine fata de valoarea cu care
este comparat. Din analiza rezultatelor la comparari interlaboratore, laboratorul va
stabili daca perfomanta sa in comparatie cu alte laboratoare este acceptabila.
4.1.4.5. Incertitudinea de masurare
Incertitudinea de masurare va fi calculat astfel:
a) Se determin incertitudinea de tip A
Incertitudinea de tipa A este data de abaterea standard obinut n urma a n
msurri realizate pe materialul de referin, n zile diferite:
n

(x
uA = s =

x)

k =1

n 1

unde x este media aritmetic a celor n rezultate notate cu xk.


b) Se estimeaza incertitudinea de tip B:
Sursele pot fi:
- certificatul de etalonare al echipamentului (acolo unde este aplicabil)
uB = u specificat in certificatul de etalonare /k specificat in certificatul de etalonare
- specificatii din literatura sau ale producatorului reactivului, echipamentului (daca
aceste informatii sunt disponibile si daca certificatul de etalonare al analizorului
nu specifica o valoare a incertitudinii pentru analitul respectiv)
- specificatiile materialului de referinta utilizat:
uB = (limita superioara a materialului de referinta limita inferioara a materialului de
referinta)/ 12
c) Se calculeaza incertitudinea compus:

uC = u A2 + u B2
Daca sunt mai multe surse de incertitudine de tip B atunci:

u C = u A2 + u B21 + u B2 2
d) Se calculeaza incertitudinea extins:

RENAR Asociaia de
Acreditare din Romnia
Organismul Naional de
Acreditare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA


METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE
MEDICALE

Revizia: 0/11.2007

Pagina 9 /9

RENAR COD: I12 Ed. 1

U = kuc
Pentru o distribuie normal de probabilitati (Gauss), valoarea k = 1 a factorului de
acoperire corespunde unui nivel de ncredere de 68,27%, valoarea k = 2 corespunde
unui nivel de ncredere de 95,45 % iar valoarea k = 3 corespunde unui nivel de
ncredere de 99,73%.
e) Rezultatul unei msurri a mrimii x va fi exprimat sub forma:
x = x kuc(x) cu nivelul de ncredere corespunztor factorului k ales
Intervalul de incertitudine este exprimat sub forma:
( x - kuUc(x), x + kuc(x)), cu nivelul de ncredere corespunztor factorului k ales
4.1.4.6. Robustea metodei capacitatea metodei de a conduce la acelasi
rezultat atunci cand sunt variati unul sau mai multi parametri de lucru
Laboratorul trebuie sa identifice factorii a caror variatie ar putea afecta rezultatul
masurarii.
Pentru fiecare din acesti factori se investigeaza efectul variatiei deliberate a factorului
asupra repetabilitatii si exactitatii.

4.1.5. Raportul de validare


Raportul de validare trebuie sa contina urmatoarele:
-

prezentarea conditiilor in care a fost realizata validarea (data, responsabil competenta, echipamente certificat etalonare, reactivi, calibratori, materiale
de referinta utilizate loturi, termene de valabilitate, conditii de mediu, etc)

prezentarea cerintelor (de adecvare la scop si de performanta) pe care trebuie


sa le satisfaca metoda

prezentarea rezultatelor obtinute in urma testelor efectuate de laborator (de


preferat sub forma tabelara)

concluzii cu privire la satisfacerea fiecareia dintre cerinte

o declaratie de validitate a metodei

Raportul de validare va face referire la documente si inregistrari relevante.

5. MODIFICRI FA DE VERSIUNEA ANTERIOAR


Acesta este un document nou.

S-ar putea să vă placă și