SNGELE

Leucocitele

Leucocitele
Terminologie
Metode: frotiul, citometria n flux
Exist
5 tipuri de leucocite:
Exist

neutrofile, eozinofile, bazofile,

limfocite, monocite
r, durat
de via

Num
Num
durat
via
,, func
funcie
Morfologie clasic
i ultrastructur

clasic
ultrastructur

ri ale num
rului,
Modific
Modific
num

ii n
morfologiei i tinctorialit
tinctorialit
ii
cursul unor boli

Terminologie
-, leuco
- (Gr. leukos) - alb
leuko
leuko
leuco
(Gr. polys
) - mai multe
poli
poli
polys
- (Gr. morphe
) - form

morfo
morfo
morphe
form
(lat. granula
) - particul
de mici dimensiuni
granula
granula
granula
particul
(cytos) (Gr. kytos) - celul

cit
cit
celul

Terminologie
(Gr. chemo
chemotaxie
chemotaxie
chemo + taxis
taxis, aranjament) orientare a unei celule de-a lungul unui gradient de
sau mi
carea n direc
concentra
oncentraie chimic
chimic
mi
direcia gradientului

leucopenie (leucocit + Gr. penia

rcie) - reducerea
penia, s
s

rului de leucocite
num
num
leucemie (Gr. leukos
leukos, alb + emia, derivat de la haima
haima,

snge)

Tehnica frotiului
:
Colora
Coloraia uzual
uzual
MAY GRUNDWALD
GIEMSA

Ingrediente:

COLORANTI bazici
albastru de metilen
azurul de metilen
COLORANT acid
eozina

Examenul
electronomicroscopic

Citometria n flux

Leucocitele
Leucocitele, aflate numai n tranzit

n spa
spaiul vascular
Sunt popula
populaii celulare heterogene
Func
uncia lor: n esuturi

Morfologie clasic
i ultrastructur

clasic
ultrastructur

mai apropiate de modelul

conceptual de celul

celul

Leucocitele
r:
Num
Num
4-11 x 109/l = 4-11 x106/ml = 4.500 - 10
10..000 celule /l
5 popula
populaii principale
Propor
= formula leucocitar

Proporie relativ
relativ
leucocitar
Neutrofile: 40-75%
Eozinofile: 3%
granulocite
Bazofile: 0,5%
Limfocite: 25-50%
agranulocite
Monocite: 1-5%

Modificri ale formulei

leucocitare
z
Leucocito
Leucocitoz
Splenectomie
Boli inflamatorii
Leucemii
Stress
Arsuri
tratament cu: epinefrina
Dup
Dup
epinefrina,, aspirina
aspirina,, heparina
heparina,, corticosteroizi
Leucopenie
a m
duvei osoase hematogene
Insuficien
Insuficien
m
Lupus eritematos
Boli hepatice
Antibiotice, barbiturice,anticonvulsivante, diuretice, citostatice

Neutrofilele
Num
r:
Num
3000-6000/
3000-6000/ll adult

: 40-75%
Propor
Proporie relativ
relativ
Dimensiuni:
10-12 m pe frotiu

Nucleu:

heterocromatic, ff
r nucleoli
forma de potcoav
, cel. tt
nr
potcoav
2-5 lobi nucleari, uni
unii prin filamente
corpusculul Barr = apendice nuclear

Citoplasma abundenta, roz portocalie

Granule: fine
unele roz-portocalii
altele violet

N/C:
1:1

Durata de via

via
::
6 ore n s
nge
s
1-4 zile n esuturi

Morfologia neutrofilului

May-Grunwald-Giemsa
+TEM

Neutrofilele
Distribu
Distribuie:
neutrofile circulante
neutrofile marginalizate n vecinatatea endoteliului

capilarelor i venulelor postcapilare.

Stadiul de evoluie:
Forme celulare finale, difereniate
Ultrastructural:
detalii privind distribuia granulelor

Granulele neutrofilului

Granulele azurofile lizozomi

Mieloperoxidaz, defensine
Fosfataz acid, proteina bactericid care
crete permeabilitatea
glucuronidaz, serin proteaze, elastaza,
catepsina G

Granulele neutrofilului
Granulele specifice secundare
Fosfataz alcalin
Lizozim
Lactoferin
Cathelicidin

Granule ter
teriare
Catepsina
Gelatinaz

Neutrofilele - microfagocite
St
Stri func
funcionale:
a) celulele inactive
inactive,,
b) celulele activate (celule anterior inactive), care comportamentul prin:
i schimb
schimb
agregare
degranulare
ini
iniierea produc
produciei de agen
ageni oxidan
oxidani.

Etapele distrugerii unui

microorganism
1. Identificarea microorganismelor
2. Ingestia
3. Distrugerea, liza microorganismului
4. Prelucrarea materialului rezultat

.
din liz
liz

Neutrofile - SEM

Funcia neutrofilelor
eaz
neutrofilel
Factori care activ
activeaz
eaz
neutrofilelee:
me
Microorganis
Microorganisme
Factori chemotactici n concentra
concentraie mare
mare::
oligopeptide N-formilate

frac
fraciunea C5a a sistemului complementului

leucotriena B4 (LTB4), produs al oxid rii acidului

arahidonic

IL8

interferonul gamma

Neutrofilele funcie
Etape:
1. marginalizarea n capilar i endoteliul postcapilar
2.

migrarea prin peretele vasului (colagenaz

(colagenaz ), apoi
prin membrana bazal
bazal trec subendotelial

3.

migrare p n la locul eliber rii factorilor

chemotactici

Identificarea microorganismelor
pentru migrarea prin
Adeziunea la suprafe
suprafe e - necesar
necesar
esuturi la locul unui proces inflamator.
Mecanisme
Mecanisme::
etapa selectin dependent (captura)
adeziunea integrin-dependent
Molecule de adeziune:

glicoproteine de suprafa
(ex. CD 11/CD 18) ce se leag

suprafa
leag
de alte proteine de suprafa : ICAM - (Inter Cellular
Adhesion Molecule), exprimate pe:
Fibroblaste
Epitelii
Endoteliile vasculare

Interaciunea cu
endoteliul

Familii de receptori de adeziune

Integrine
Integrine
Caderine
Caderine
Selectine
Selectine
Imunoglobuline
Imunoglobuline

Molecule de adeziune

Ingestia

Opsonizare
Opsonizare:: acoperirea unei particule cu o protein
, recunoscut
de receptorii neutrofilului ca
plasmatic
plasmatic
recunoscut
semnal pentru ingestie.

Opsonine
Opsonine:: proteine capabile s opsonizeze inte
tre neutrofile
pentru ingestia de c
c
anticorpi din clasa IgG
componenta C3b a complementului

area particulei la receptori

Ata
Ata
receptoriii neutrofilului
Fc receptori
Receptorii C3 care recunosc frac
ea C3b.
fraciun
iunea

Digestia
Mecanisme:
Degranularea = procesul prin care membrana

cu membrana
unei granule fuzioneaz
plasmatic , rezultatul fiind eliberarea
con
coninutului granulei
- n compartimentul transmembranar vezicula
fagocitic
(granulele azurofile se
degranuleaz exclusiv n veziculele de
.)
fagocitoz
fagocitoz
- n mediul exterior al celulei
Respiratory burst cu producerea de radicali
liberi superoxid i acid hipocloros

Capcanele extracelulare
ale neutrofilului
Zychlinsky "Neutrophil Extracellular Traps Kill

Bacteria Science 2004

Neutrofilele elibereaz o re ea de fibre de

cromatina i serin proteaze care se elibereaz

extracelular
Distrug microbii idependent de mecanismul
fagocitozei
Intervin asupra microbilor chiar i n interiorul
vaselor sanguine

Neutrofilele funcie

Eozinofilele
duva osoas
hematogen
- cel. stem
Origine: m
m
osoas
hematogen
Distribu
Distribuia:
n s
nge
s
n esuturile ce posed o interfa epitelial cu

mediul:
ap. respirator
ap. digestiv
.
ap. genito-urinar, por
poriunea inferioar
inferioar
l; 1-3
% din leucocite
Num
Num
rul: - 450/
450/
1-3%
pentru o celul
circulant
exist
300 n esuturi
celul
circulant
exist
Durata de via
via

::
mai mare dec
t a neutrofilelor
dec
pt
mni
n esuturi : s
s
pt

Eozinofilele
Criterii de diagnostic:
m
Diametru : 12
12
Raport nucleo-citoplasmatic: 1:1
Forma nucleului: 0-2 lobi nucleari,

arareori 3-4 (filamente de 0,5 m

ntre lobii nucleari) (,,
(,,n desag
desag)
Pozi ia nucleului: central sau
excentric
Nucleoli: absen
abseni
Citoplasm
a: citoplasm
itoplasma
citoplasm abundent
abundent ,
roz
prezente,
distribuite
Granule:
uniform, eozinofile

Morfologia eozinofilului

May-Grunwald-Giemsa
+TEM

Eozinofilele - ultrastructur
Primare
lizozomi

Granulele specifice
structuri ce con in un miez
cristaloid (diferit n func ie de
specie).
miezul cristaloid - nglobat ntr-o
sau fin granular
.
matrice amorf
amorf
granular

Compoziia granulelor
Primare
hidrolaze lizozomale
aril sulfataze

glucuronidaz
glucuronidaz
acid

fosfataz
fosfataz
acid
histaminaza

ribonucleaz
ribonucleaz

Secundare
proteine cationice
Proteina bazic
bazic principal
principal
( Major basic protein =
MBP)
Peroxidaz
Peroxidaz
Proteina cationic
a
eozinofilelor
Neurotoxina

Eozinofilele - funcie
Aprarea mpotriva unor organisme
ce nu pot fagocitate, mai ales parazi
parazii
helmintici, multicelulari
i liz
bacterian

agocitoz
liz
bacterian
Fagocitoz
(func
r importan
in vivo)
(funcie ff
importan

Reac
eacia de respingere a grefelor
Mecanism: - utilizarea granulelor proteice

cationice citotoxice

Eozinofilele - funcie
nso
de:
Infec
Infecia parazitar
parazitar
nsoit
it
terea nivelelor serice de IgE
a) cre
cre
b) cre
terea num
rului de eozinofile
cre
num
fenomene date de sinteza de limfokine:
Cele dou
dou
a) IL 3
b) IL 5;
: activarea mastocitelor, care duce la
Etapa intermediar
intermediar
cre

terea
produc

iei
cre
produc de IgE i eliberarea de factor
chemotactic pentru eozinofile.
Unii parazi
parazii : acoperi
acoperii cu IgE i IgG.
=> eliberare de proteine cationice i
Eozinofilele ader
ader
.
peroxidaz
peroxidaz

Eozinofilele - funcie
pentru organismul
activarea eozinofilelor poate fi toxic
toxic
:
gazd
gazd
ic,
N BOLILE ALERGICE, inclusiv astmul bron
bron
eozinofilele elibereaz
mediatori lipidici (leucotriena C4) i
elibereaz
factor activator plachetar, care pot declan
a:
declan
- contrac
chiului neted vascular
contracia mu
mu
- modificarea permeabilit

ii vasculare
permeabilit
ii
- cre
terea secre
cre
secreiei de mucus
- eliberarea de mediatori din mastocite i
bazofile
Func
Funcii bazate pe cooperarea cu alte celule (limfocitele) n curs de investigare.

Astmul bronic

Eozinofilele i LT

Bazofilele

Origine: celulele stem din m duva osoas

hematogen
hematogen
Celulele cu propriet i asem n toare cu
mastocitele din esutul conjunctiv
l; aproximativ 100 milioane
Num
15-20/
Numr: 15-20/

Durata de via
scurt
via:: scurt
celular
final
, nu se
Stadiul de evolu ie: - form
form
celular
final
mai divide

Bazofilele
Criterii de diagnostic
m
Diametru
Diametru:: 12-15
12-15
N/C
/C:: 1:1
Forma nucleului
nucleului:: incomplet
de trifoi
segmentat, n frunz
frunz
trifoi
Pozitia nucleului
nucleului:: central sau
excentric
Aspectul nucleului
nucleului:: heterocromatic
Nucleoli
:
absen
Nucleoli: abseni
azofil

Citoplasma
Citoplasma:: abundenta, b
bazofil
azofil
Granule
Granule:: prezente
neuniforme
culoare albastru nchis / negru
hidrosolubile

Morfologia bazofilului

Bazofilele ME +
histochimie
Compozi
Compoziia granulelor
granulelor:

Ultrastructur
Ultrastructur
complex Golgi
pu
puine mitocondrii
R.E. ceva mai abundent

t n alte leucocite
dec
dec
particule de glicogen
Granule : - specifice, sunt
rotunde sau ovale,
aproximativ 0,5 m, acoper

acoper
nucleul
electronodense

histamin

histamin

heparin
heparin
date care s
arate
nu exist
exist
s
prezen
prezena hidrolazelor
lizozomale comune

Mastocite

Bazofilele - funcie
din totalul leucocitelor: tendin
propor
proporie mic
mic
tendina de a le
considera neimportante
degranularea lor rapid
rapid: consecin
consecine severe
la anumi i indivizi, anumite antigene pot induce

formarea unei clase distincte de imunoglobuline - IgE

Bazofilele au receptori pentru IgE n membrane

Bazofilele - funcie
Consecutiv unei expuneri la antigen, IgE se

acumuleaz
mastocitelor

pe suprafa a bazofilelor i

Re-expunerea individului la acela i antigen poate

duce n decursul a c teva minute la legarea

antigenului de IgE de pe bazofile sau mastocite,
urmat de degranularea rapid , cu eliberare de
HISTAMIN
i al
HISTAMIN
ali mediatori.
Se poate precipita o criz de astm bron ic sau

urticarie, cea mai grav

put
grav consecin
consecin
putnd fi ocul
anafilacti
anafilacticc.

Limfocitele
Origine:
mduva osoas
osoas
Origine Celulele stem din m
Num r: 1500-3000/ l; 5-10 miliarde n circula ie,

rganism
2x1012 n ntregul oorganism
Distribu
Distribuie
nge
n ss
n organe limfoide specializate
Durata de via

via
::
, ntruc
t cea mai mare parte sunt continuu
lung
lung
ntruc
recirculate

Limfocitele
Particularitate
Particularitate::
recircula ia limfocitelor depinde de interac iunile

specifice ntre suprafa a celular limfocitar i

suprafa a unor celule endoteliale din vasele organelor
limfoide
migr rile : ghidate de receptori de pe limfocite i
liganzi pentru ace
ace ti receptori (contra-receptori) de pe
celulele endoteliale.
Stadiul de evolu ie celulele capabile de diferen
diferen iere i
proliferare.

Limfocitele

Criterii de diagnostic
Diametru
Diametru::
limfocite mici 6-8 m
limfocite mari 12 m
limfocite medii : 10 m

N/C
N/C:: 4:1 (3:1)
Forma nucleului
nucleului::

rotund sau
indentat, excentric
Aspect
de
Aspect:: tahicromatic ,,,, n pat
pat
cerneal
cerneal
Nucleoli
Nucleoli:: de regul
regul absen
abseni
Citoplasm : inel perinuclear,
bazofil, ,,albastru cer senin

senin
Granule
Granule:: de regul
regul absente.

Limfocitele
Ultrastructur
Ultrastructur
Stare de repaus : complex Golgi foarte redus, o pereche de centrioli,
cteva mitocondrii
nu se pot deosebi limfocitele T, de limfocitele B
Stare activat
activat:
celulele B (stadiu final plasmocit): sunt pline cu structuri ale R.E.R. (sintez

(sintez

de Ig);
celulele T : relativ pu
puin RER, dar con
conine numero
numeroi ribozomi liberi.

Popula
Populaii de limfocite
Criterii de diferen
difereniere:

M.O. nu

M.E. numai n stare activat

activat
Metode imunocitochimice: identificarea unor markeri specifici de

suprafa
suprafa
..

Morfologia limfocitului

Limfocite - funcie
Sistemul imun : compus din milioane de clone (familii) de
limfocite. Limfocitele fiec
fiecrei clone posed
posed un receptor de
suprafa unic
Acest receptor permite legarea unui determinant
antigenic specific.
Clase mari de limfocite:
duv
B produse n m
m
duv, sintetizeaz
sintetizeaz anticorpi
T produse n timus : particip
particip la rr spunsuri mediate
celular.
Memorie imunologic
i toleran
imun
imunologic
toleran
imun
n evolu
evoluia limfocitelor 3 stadii:

- celule ,,naive
,,naive

- celule ,,cu memorie

memorie

- celule ,,activate
,,activate

Limfocit B - SEM

Limfocite T - SEM

Limfocitele - funcie
Limfocite naive

lnire cu Ag
Prima nt
nt

Proliferare

Activare

Limfocite cu memorie

Limfocitele

B - funcie

Lipsa de r spuns fa de structurile proprii: toleran

.
imunologic
imunologic
Mecanisme: - distrugerea clonelor ,,autoreactive
,,autoreactive/ inactivarea
Reactivarea unor clone autoreactive : boli auto-imune.
Anticorpii (imunoglobulinele)
= molecule sintetizate de limfocitele B diferen iate n
plasmocite.
= molecule ce posed
un situs de recunoa
posed
recunoa tere a antigenului
specific i regiuni care pot activa complementul i fagocitele
(care posed
receptori pentru Ac)
posed
Fiecare plasmocit sintetizeaz
sintetizeaz un singur tip de anticorp
anticorp..

Anticorpii
Anticorpul este plasat de

plasmocit pe suprafa
suprafaa sa ca
un receptor..
de Y
- form
form
- 4 lan
lanuri polipeptidice
- 2 grele;
oare
- 2 u
u

5 clase de Ig: Ig A, Ig D, Ig E,

Ig G, Ig M, fiecare cu lan
lan uri
grele specifice.

Limfocitele

T - clase

Limfocite T citotoxice CD8

+ lizeaz
direct celule infectate (mai
CD8+
lizeaz

ales cu virusuri)
+ faciliteaz
producerea de
Limfocite T ajut
ajut toare (helper) CD4
CD4+
faciliteaz
anticorpi de cctre limfocitele B i determin
macrofagele ss
ingere
determin
i ss distrug
distrug bacterii;
recunosc antigenul prezentat de
Limfocite NK natural killer
killer
CD1a
Limfocite T supresoare LT reglatoare - n timus
Limfocite cu memorie

Limfocitele

T - funcii

Receptorii LT recunosc fragmente de proteine care sunt

expuse pe suprafa
suprafa a celulelor gazd
gazd n asociere cu molecule
(MHC)..
ale sistemului major de histocompatibilitate (MHC)
Exist
2 clase MHC:
Exist

clasa I, exprimate pe aproape toate celulele nucleate;

clasa II, exprimate numai celulelor ce interac

cu limfocitele
interacioneaz
ioneaz
T.

Limfocitele Tc: funcii

Lizeaz
direct celulele int
izeaz
int infectate.
Mecanisme:
inducerea

apoptozei (moarte celular

celular programat
programat)
Etape mecanism I:
perforin : ce
eliberarea unei proteine denumit
i formeaz
polimerizeaz
polimerizeaz
formeaz canale transmembranare;
eliberare prin exocitoz
exocitoz local
local;
p trundere a unor proteaze ce provoac
provoac proteoliza unor
inducerea mor
molecule i provoac
provoac
morii celulare programate;

Limfocitele Tc: funcii

Etape mecanism II:

activarea unui receptor de suprafa

suprafa
;;
semnalizare
programat
=> moarte celular
membranari.

via receptori

Limfocitele Tc CD8 : funcii

Limfocitele

Th: funcii

limfocitele B i macrofagele.
Activeaz
Activeaz
Mecanism: activarea LTh necesit
2 semnale:
necesit

a) complexul proteine ale clasei II a sistemului major

de histocompatibilitate;
b) un semnal al celulei care prezint
antigenul.
prezint
Consecin
Consecina activ
activrii:

a) stimularea propriei prolifer

ri prin secre
prolifer
secreia de IL-2
b) activarea celulelor int
prin secretarea de molecule
int
.
semnal i molecule legate de membran
membran

Limfocitele Th CD4:
funcii

Limfocitele i eozinofilele

Monocitele
Origine
Origine:: Celula stem din m
mduva osoas
osoas
l; 2-3 miliarde n sange
r: 300-500/
Num
Num
300-500/
Distribu ia n organism si durata de

viata
nge 12-48 de ore
n ss
n esuturi: macrofage tisulare
Stadiul de evolu
evoluie
ie:
de diviziune
- capacitate limitat
limitat
- capacitate limitat de diferen iere:
MACROFAG
- nu exist dovezi ale re-circul rii lor
trecerea n esutul conjunctiv.
dup
dup

Monocitele
Particularitate: - monocitele mprumut
mprumut o varietate

de caracteristici morfologice tinctoriale n esuturi;

poart markeri de suprafa care faciliteaz
identificarea lor cu ajutorul unor anticorpi
monoclonali ndrepta
ndreptai mpotriva acestor markeri
- aceea
aceeai markeri se afl
afl pe suprafa
suprafaa:
macrofagelor conjunctive
macrofagelor alveolare
celulelor Kupffer hepatice

Monocitele
Criterii de diagnostic
Diametru : 12-20 m
N/C: 2:1 sau 1:1
Forma nucleului: plicaturat
plicaturat (cerebriform
(cerebriform ) sau alungit
alungit , n
form

de
potcoav

,
central
sau
excentric
form
potcoav
Aspect: form reticular , n tabl de ah (alternan
)
hetero/encromatin
hetero/encromatin
Nucleoli: absen
abseni
Citoplasma: - abundent , bazofil , albastru nchis ( cerul
)
nainte de furtun
furtun
Granula
Granula ii: foarte fine (granule primare) palide, roz, pr
pr foase,
dispersate, la limita de rezolu
rezoluie a M.O.

Morfologia monocitului

May-Grunwald-Giemsa
+TEM

Ultrastructura monocitului
Nucleul:

este mai pu in
dec
t n limfocite
condensat
condensat
dec
nucleoli vizibili
Citoplasma:
mici complexe Golgi
cteva cisterne ale R.E.
particule de glicogen dispersate
num r moderat de ribozomi
liberi
granule dense corespunz nd
granulelor azurofile, vizibile la
M.O.
cromatina

Monocitele - histochimie
Citochimic::
granulele reac ioneaz pozitiv pentru hidrolazele

acide, caracteristice lizozomilor.

Monocitele - funcie
Rol func ional: comun pentru sistemul fagocitelor

mononucleare
secre
secreie
ingestie
interac
interaciune cu limfocitele
Secre
Secreia:
substan
substane proteice
neproteice

Starea funcional a monocitului

Repaus

Lizozim
IL-1
Leucotriene

activat

Celul
Celul
activat

Lizozim
Proteaze neutre

Elastaz
Elastaz

Colagenaz
Colagenaz
Activator de plasminogen
Superoxid

Monocitele - funcie
Ingestia
Material ingerat:
celule senescente, detritusuri celulare
eritrocitele senescente macrofagele
splenice
material str in (non-self): bacterii i
splin
produ
produi de degradare ((splin
splin, ficat
ficat))
proteine denaturate, fragmente proteice,
proteine formate ,,in vivo (factori de
coagulare)
Mecanismele ingestiei
- pinocitoz
pinocitoz
- fagocitoz
fagocitoz

Monocitele

de neutrofile
Particularit
Particularit
ii fa
fa
Monocitele se pot ata a via mai multe tipuri de molecule de

adeziune
Pot fagocita proteinele opsonizate at
t cu IgE cc
t i cu IgG.
at
Deplasarea: ca urmare a unor factori chemotactici limfocitari

- pot fagocita bacterii ff

r opsonizare
Receptori pentru manoz
manoz
prealabil
prealabil.
Liza propriu-zis
propriu-zis: prin oxidan
oxidani de tip radical hidroxil
Pot distruge particule cu localizare intracelular
- dar fagocitul
intracelular

trebuie ss fie activat.

Interaciunea cu limfocitele
Etape:
ingestia unei particule purt
purttoare de Ag
degradarea particulei n peptide mici
transferarea pe suprafa
suprafa a fagocitului, care exprim
exprim complexul
major II de histocompatibilitate, legat de acesta
legarea limfocitului T care poart
poart un receptor adecvat
secre
secreia de mediatori de cctre ambele celule:
limfocitele T - limfokine :
gama interferon
factor chemotactic pentru monocite
mononuclearele
monokine - stimuleaz proliferarea
limfocitelor T
prin promovarea secre
IL-1;
secreiei de interleukin
interleukin 2
TNF (tumor necrosis factor).

Receptori i molecule de adezivitate

ale monocitului

Macrofagele - funcie

Macrofage funcie