Sunteți pe pagina 1din 15

Trigliceride

Trifliceridele sunt esteri ai glicerinei cu acizii grasi, in care toate


cele trei grupari hidroxilice ale acesteia sunt esterificate

Molecula unei trigliceride prezint trei catene normale formate


din acizi grai monocarboxilici, cu un numr par de atomi de carbon.
Simbolurile R1,R2,R3 reprezinta resturi ale acizilor grasi saturati
sau nesaturati in structura glicerolului esterificat in pozitiile 1, 2, 3.
Cei trei radicali sunt rar identice in structura trigliceridelor.
Obtinerea trigliceridelor:
Reactia de esterificare:
Deci, chiar din definiie rezult c reacia de esterificare st la baza
formrii gliceridelor.Trigliceridele se obtin cand glicerolul este
esterificat cu 3 molecule de acizi grasi identiti sau diferiti, saturati sau
nesaturati.

Trigliceridele sunt sintetizate la nivelul ficatului , din glicerina si


acizi grasi, in urma transformarii zaharurilor, sau a unor carbohidrati.
Aceste substante grase sunt sintetizate de organismul uman din grasimile
din alimente . Acestea sunt extrase apoi din sange si sunt stocate in
organism sub forma tesuturilor adipoase, deci sunt principala forma de
stocare a lipidelor in organism . In tesutul adipos sunt depozitate sub
forma de glicerol, acizi grasi si monogliceride, care sunt convertite in
ficat in trigliceride .
Trigliceridele reprezinta a doua componenta lipidica din ser dupa
colesterol si intra in componenta:
lipoproteinelor cu densitate joasa ( VLDL ) 59 %,
lipoproteinelor cu densitate (HDL) 3 %,
chilomicronilor 81-88 % .
Trigliceridele din tesutul adipos si din celelalte tesuturi reprezinta
cel mai important depozit de rezerve energetice ale organismului
Trigliceridele sunt substane larg rspndite n natur, att n lumea
vegetal, ct i n cea animal, formnd n parte sau n totalitate uleiurile
i grsimile din: uleiurile vegetale, seminele oleaginoase, unt, grsimile
de animale, carnea gras,
Deoarece fac parte din clasa grasimilor, pentru determinarea
gradului de modificare al trigliceridele sunt utilizati urmatorii indicatori
chimice:
a. Indicele de saponificare: reprezinta cantitatea de KOH in
miligrame utilizata la saponificarea gliceridelor si la neutralizarea
acizilor grasi intr-un gram de grasime.
b. Indicele de iod (de nesaturare): indica gradul de nesaturarea al
acizilor grasi in componenta grasimilor si reflecta cantitatea de iod
in grame, echivalenta unui halogen, aditionat de 100 g de grasime.
Aditia halogenilor reprezinta legatura de halogenare a legaturilor
duble a acizilor grasi nesaturati.
c. Indicele Hehner: contine continutul in grame a acizilor grasi
insolubili in apa care se contin in 100 g de grasime.(Acizi grasi

solubili sunt: acid butiric si caproic, iar partial solubili sunt caprilic
si capric.) .De obicei are valoare egala cu 95.
d. Indicele Reicher-Meissel: indica cantitatea in ml a solutiei KOH
0.1n, utilizata pentru neutralizarea acizilor grasi volatili solubili in
apa care se contin in 5.0 g grasime.
e. Indicele de aciditatea: indica cantitatea de acizi grasi liberi
continuti in grasimi.Se exprima prin cantitatea in mg de KOH
necara pentru neutralizarea acizilor grasi liberi prezenti in 1 g
grasime.
Analiza trigliceridelor din sange.
1.Metoda spectofotometrica
Analizele pentru trigliceride sunt, de obicei, efectuate ca parte a
unei examinri generale de lipide, pentru a identifica riscul apariiei de
boli cardiovasculare. Dac pacientul este diabetic, este deosebit de
important efectuarea acestei analize, deoarece cantitatea de trigliceride
crete n mod semnificativ n funcie de nivelul de zahr din snge.
Cantitatea de trigliceride se detrmina in cadrul laboratoarelor din
ser prin metoda spectofotometrica ,colorimetrica enzimatica)
Principiul metodei:
Aceasta metoda se bazeaza pe hidroliza enzimatica a trigliceridelor in
glicerol si acizi grasi liberi (FFA) de catre lipoprotein lipaza (LPL).
Glicerolul este fosforilat de catre acidul adenozin trifosfat(ATP) in
prezenta glicerolchinazei (GK) pentru a forma glicerol-3-fosfatul
(G-3-P) si acidul adenozin difosfat(ADP). Glicerolul-3-fosfatul este
oxidat de glicerofosfat oxidaza (GPO) pentru a forma fosfat
dihidroxiacetona (DHAP) si apa oxigenata (H2O2). H2O2 reacioneaz
cu 4-clorofenol i 4-aminoantipirina n prezena peroxidazei (POD) i
formeaz un colorant quinonic. Intensitatea culorii formate este
proporional cu concentraia de trigliceride din prob i poate fi
msurat spectrofotometric ntre 480 i 520nm.

Reactivi necesari:
R1: Solutie tampon pH 7.4
R2: Substrat:
Lipoprotein lipaza(LPL) 1400 U/l
glicerolchinaza (GK) 1000 U/l
glicerofosfat oxidaza (GPO) 4000 U/l
peroxidazei (POD) 440 U/l

4-aminoantipirina (4-AA) 0.7mmol/l


ATP 0.3 mmlo/l
R3: Standard: glicerol 200 mh/dl (2.28mmol/l)
Stabilitate:
Componentele trusei sunt valabile 30 zile la o temperatura de 2-8
C.In cazul in care reactivul prezinta o absorbanta mai mare de
0.150 la 500 nm opus apei distillate sau in cazul in care nu reuseste sa
mai atinga valorile declarate de serul de control ,acesta se arunca.
Prepararea solutiei de lucru:
Se dizolva un flacon de substrat (R2) intr-un flacon de tampon
(R1), si se agita pana la dizolvarea completa.
Materiale necesare:

Instrumentaia uzual de laborator.


Spectrofotometru UV/VIS
Termostat incubator cu temperatura de 37C
Pipete pentru masurarea reactivilor sau a probelor
Cuve din material plastic sau sticl.
Soluie salin.

Proba:
Se recomand ca probele pentru determinarea trigliceidelor s se
recolteze doar dac pacientul nu a depus efort n ultimele 10 14 ore.
Att serul ct i plasma recoltat pe EDTA se poate folosi pentru
determinarea trigliceridelor.Atunci cnd plasma se recolteaz pe EDTA,
valoarea plasmatic se nmulete cu 1,03 pentru a fi n concordan cu
valoarea seric.
Probele se pot stoca:
- la +4 C pn le 3 zile;
5

- congelate la -20 C pn la cteva sptmni;


- congelate la -70 C pentru perioade ndelungate de timp.
Probele lipemice se recomand a se aduce la 37 C i a se agita puternic
nainte de utilizare, mai ales dac au fost congelate.
Mod de lucru:
Se aduc reactivii si probele la temperatura camerei,apoi se pipeteaza
in tuburile de test cu eticheta
Conditii de
lucru
Se pipeteaza
reactiv
ap
standard
prob

Lungimea de und: 510 nm (ntre 480 520 nm)


Drumul optic(cuva): 1 cm
Temperatura: 37C
Solutie blank standard
proba
2000 l
2000 l
2000 l
20 l
20 l
20 l

Se amesteca si se lasa tuburile timp de 15 min la temperatura camerei


(16-25C) sau 5 minute la 37C.Apoi se citeste absorbanta (A) probelor
si standardului la 500 nm fata de blanc.
Culoarea este stabila timp de 1 ora, la intuneric.
Calculul rezultatului:
Aproba
Astandard

Cstandard mg / dLtrigliceride

Probele cu o concentratie mai mare de 600 mg/dL trebuie diluat 1:2


cu solutie salina si analizate din nou. Se inmultesc rezultatele obtinute cu
2. In cazul in care rezultatele trebuie sa fie exprimate in unitati SI se
aplica formula de calcul :
Mg/dL x 0.0113 = mmol/L

Performantele testului:

Liniaritate:
Metoda este liniar pn la 1000 mg/dl.
Dac valoarea depete 1000 mg/dl, se recomand diluarea
probei 1 + 9 cu soluie salin i repetarea testului, nmulind
rezultatul cu 10.
Sensibilitate
Sensibilitatea testului este de 1 mg/dl.
Interferene
Nu s-au constatat interferene datorate:
hemoglobinei 500 mg/dl
bilirubinei 12 mg/dl

Precizie
ntre probe (n=10)
media (g/dl) SD (g/dl)
CV%
proba 1
108,74
1,82
1,70
proba 2
189,09
1,50
0,80
ntre probe (n=20)
media (g/dl) SD (g/dl)
CV%
proba 1
115,46
3,75
3,30
proba 2
198,16
3,80
1,90
Semnificatia medicala:
Nicelul trigliceridelor din plasma ajuta la diagnosticarea multor
afectiuni metabolice.
Valorile normale ale trigliceridelor sunt:
50 150 mg. Trigliceride /100 ml. SER
valorile normale in functie de sex sunt:
Barbati: 60-165 mg/dL sau 0.68-1.88 mmol/l
Femei: 40-140 mg/dL sau 0.46-1.60 mmol/l

Valori de peste 200 sunt considerate patologice


(sunt prea crescute), fenomen ce se numeste hipertrigliceridemie si
face parte din sindromul metabolic (un grup de afectiuni care cresc
riscul de infarct miocardic, accident vascular cerebral (AVC) si
diabet.

Hipertrigliceridemia are urmatoarele cauze:

obezitatea,
diabetul zaharat slab controlat (adica valorile glicemiei nu sunt
mentinute in valori normale)
hipotiroidismul (glanda tiroida si hormonii sintetizati de aceasta nu
functioneaza bine),
bolile renale,
unele tulburari ale metabolismului lipidic (al grasimilor) mostenite.
Hipertrigliceridemia in sine nu cauzeaza simptome. Daca totusi
tulburarea este cauzata de o boala genetica, atunci individul poate avea
depozite de grasimi la nivelul pielii, numite xantoame.
In cazuri rare, indivizii cu hipertrigliceridemie pot dezvolta
pancreatita (inflamarea pancreasului), ceea ce poate cauza dureri
abdominale bruste, intense, pierderea poftei de mancare, greata , voma,
febra.
Scaderea nivelului de trigliceride se poate realiza prin scaderea in
greutate, consumul limitat de dulciuri si grasimi, reducerea consumului
de alcool si prin activitate fizica

Valorile sczute ale trigliceridelor in serul sangvin se numeste


hipotrigliceridemie, legata de un aport alimentar insuficient de
trigliceride.

Valorile scazute ale trigliceridelor sunt constatate in : infectii cronice,


neoplasme, hipertiroidie,malnutritie, malabsorbtie, hipertiroidism,
medicamente ce scad trigliceridemia .
Pentru cresterea nivelului de trigliceride se administreaza vitamina E.

Aparate utilizate pentru determinarea trigliceridelor:

1. Analizor automat de biochimie ERBA -Smartlab


Viteza de lucru : pana la 120 teste/ora ;
Se pot efectua analize de substrate, enzime, proteine specifice,
medicamente, droguri. ;
Principii de analiza : punct final, cinetica, tehnici mono sau bireactivi, calibrari liniare si neliniare ;
Filtre de 340, 405, 450, 505, 546, 578, 630 si 670 nm;
Citire monocromatica sau bicromatica ;
16 reactivi "on-board;
Recipiente de 27 ml si 7 ml. ;
45 pozitii pentru probe ;
96 celule de reactie din plastic ;
Cuva unica de citire termostatata ;
Volum redus de reactie ;
Amestecare a compusului de reactie cu bratul de pipetare.
2. ANALIZORUL DE BIOCHIMIE METROLAB 2300
Viteza de lucru este de pana la 230 teste/ora;
Poate efectua teste din: ser, plasma, urina sau LCR;
Poate efectua pana la 24 teste simultan pentru o proba;
Incarcarea probelor se face pe un carusel pentru probe
Se pot incarca 48 probe pentru testele de rutina;
Consum de reactivi: 300 500 mL;
Cantitatea de proba folosita: 2100 mL in cuve de 1 mL;
Dilutia probelor si calibrarea se realizeaza in mod automat;
Domeniul de citire este intre 340 750 nm;
9 filtre interferentiale de banda ingusta (340, 405, 450, 505, 550, 590,
650, 700, 750 nm) si un filtru de blocare;
9

Sensibilitate fotometrica 0,0001 Abs


Sistem de detectie: fotomultiplicator
Sursa de lumina: lampa cu halogen (12 V / 20 W);
Consum de putere: 300 W;
Rezultatele pot fi verificate in timpul lucrului prin vizualizarea lor pe
monitor si tiparite automat pe imprimanta .
Dimensiuni: 81 x 40 x 54 cm
Greutate: 40 Kg

3. Analizor automat Biochimie SINNOWA B-300


Viteza de lucru 240 teste/ora;
Poate efectua 64 de analize, standarde si controale;
Precizie de citire 1%;
Analizor cu sistem deschis pentru reactivi;
Sistem de spalare automat;
18 pozitii pentru racirea reactivilor;
100 de metode in memorie;
Sistem de operare WINDOWS;
Soft in diferite limbi, la alegere;
Printer monitor;
Viata indelungata pentru lampa cu halogen;
Precizia de variatie a filtrelor 2nm;
Filtre 340-700nm + 2 locuri libere;
Incubator: temperatura de incubare 37C 0,1C;
Dimensiuni:71*62*36 cm;
Greutate: 35Kg.

4. Analizor de biochimie ERBA


Viteza de lucru: 360 teste/ora;
Reactivi refrigerati: 50 reactivi diferiti "on board" ;
Sistem deschis de reactivi ;
10

Sursa de lumina: lampa halogen de mare precizie ;


50 pozitii probe de rutina + 25 pozitii pentru probe de urgenta
100.000 rezultate in memorie ;
Consum redus de reactivi ;
Nu are nevoie de statie de apa distilata ;
Sistem optic cu retea de difractie - 12 lungimi de unda disponibile
in domeniul 340-750nm.,
Citire simultana la toate lungimile de unda ;
Citire/Interpretate - mono si bicromatica ;
Tuburi primare de 5,7 si 10 ml sau cuve de proba ;
60 cuvete de cuart spalate automat ;
Consum redus de reactivi

BIBLIOGRAFIE:
1. http://www.synevo.ro/500,Ghidul-Serviciilor-Medicale.html
2. http://www.sfatulmedicului.ro
3. http://www.zerocalorii.ro/despre-trigliceride.html
4. http://www.chema.com
5. http://www.linear.ro
6. http://www.hospitex.com
7. http://www.sinnowa.com
8. http://www.transasiabiomedicals.com
9. http://www.imedistribution.ro
10. P. Tatarov,l.SandulachiChimia produselor alimentare,
Facultatea Tehnologie si Management in Industria Alimentara,
Chisinau ,2008
11. Pesce J. A. and Kaplan A. L., Methods in Clinical
Chemistry,The C. V. Mesby Company Washington D. C. 1987.
12.Ministerul Sanatatii, Metode curente de analiza de laborato
clinic, Ed. Medicala. 1982

11

2.Metoda colorimetrica
Trigliceridele din ser se saponifica cu hidroxid de potasiu, eliberndu-se
glicerina(sponificarea, ntr-o oarecare msur are loc n duoden sub
influena srurilor biliare.)
Glicerina se oxideaza apoi la formaldehida care cu fenilhidrazina
formeaza un produs de condensare colorat,fotometrabil.
Rezultatul dozarii reprezinta glicerina din trigliceride plus glicerina
libera preexistent n
ser. Glicerina libera preexinstent se dozeaza n probe paralele, fara
saponificare si
valoarea lui se scade din valoarea glicerinei totale. Restul de proteine,
fosfolipide,
pigmenti etc. Se ndeparteaza din solutie prin absorbtie pe hidroxid de
magneziu.
Reactia de saponificare:
Este reactia ce are loc n tratarea grasimilor cu alcoli puternici, sau
neutralizarea acizilor grasi cu baze, fiind un caz particular al reactiei de
hidroliza.

12

PREZENTAREA TRUSEI
Trusa contine reactivii necesari pentru 50 sau 100 de determinari:
REACTIV 1A : HIDROXID DE POTASIU (4 g. respectiv 8 g. n
pungulita de polietilena etansa)
REACTIV 1B : ALCOOL ETILIC (flacon de 100 respectiv 200 ml.)
REACTIV 1 DE LUCRU se prepara dupa necesitate solutia etanolica
de KOH n proportie de 1 g. KOH cu 25 ml. etanol.
REACTIV 2 : SULFAT DE MAGNEZIU (4 g. respectiv 8 g. n
pungulita de polietilena )
REACTIV 2 DE LUCRU: Se cntaresc 3,7g. respectiv 7,4g. de
REACTIV2 si se dizolva n balon cotat de 100 ml. respectiv 200 ml
cu apa distilata.
REACTIV 3 : METAPERIODAT (1,2 g. respectiv 2,4 g. n
pungulita de material plastic)
REACTIV 3 DE LUCRU Se prepara dupa necesitati solutia
de lucru n raportul: 0,3 g. metaperiodat n 12,5 ml apa distilata.
REACTIV 4 : FENILHIDRAZINA CLORHIDRAT (3,6 g. respectiv
7,2 g. n pungulitade polietilena)
REACTIV 4 DE LUCRU: Se prepara extemporaneu dupa necesitati
solutia de lucru n raportul: 0,360 g. fenilhidrazina clorhidrat n 10 ml
apa distilata.
REACTIV 5 : STANDARD TRIGLICERIDE (1 fiola de 2 ml.) care
contine 1 mg. trioleina / ml.
Proba:
Ser sanguin. (Fara hemoliza masiva, omogenizat nainte de
utilizare si conservat maximum 24 ore la frigider).
TEHNICA DE LUCRU
Se pipeteaza n eprubeta de centrifuga pentru proba gliceina
totala (T), standard (S), martor (M) si proba de glicerina libera (L), dupa
cum urmeaza:

13

a. Saponificare:
REACTIVI
SER
REACTIV 5
REACTIV 1 DE LUCRU

U. M. P
ml. 0.1
ml. ml. 0.5

S
0.1
0.5

M
0.5

L
-

INCUBARE (baia de apa) 1 ora la 30C sau 30 minute la 60C


SER
REACTIV 2 DE LUCRU
AP DISTILAT
REACTIV 1 DE LUCRU

ml.
ml.
ml.
ml.

1.0
3.0
-

1.0
3.0
-

1.0
3.0
-

0.1
1.0
3.0
0.5

Se omogenizeaza si se centrigugheaza la 3000 r.p.m timp de 5 minute.


b. Oxidare
REACTIVI
SUPERNATANT T
SUPERNATANT S
SUPERNATANT M
SUPERNATANT L
ACID SULFURIC 2N*
REACTIV 3 DE LUCRU

U. M.
ml.
ml.
ml.
ml.
ml.
ml.

P
1,0
1,0
0,2

S
0,1
1,0
0,2

M
0,1
1,0
0,2

L
0,1
1,0
0,2

Se omogenizeaza ,iar apoi se lasa in repaus timp de 10 minute la


intuneric.
c . Developarea culorii:
REACTIV 4 DE LUCRU

ml.

0,5

0,5

0,5

0,5

Se omogenizeaza ,iar apoi se lasa in repaus timp de 10 minute la


intuneric.
ACID CLORHIDRIC *

ml.

2,0

2,0

2,0

2,0

Se lasa in repaus 15 minute (pana la 20-30 minute)


Se citesc extinctiile probelor T si L (ET, EL) si a standardului (ES) fata
de martor la = 520 nm. n cuva de 1 cm.
CALCUL
14

mg. TRIGLICERIDE / 100 ml. SER = (ET-EL) / ES


VALORI NORMALE:
50 150 mg. TRIGLICERIDE / 100 ml. SER
OBSERVATII:
Alcoolul etilic folosit trebuie sa fie lipsit de aldehide. Controlul
se face prin pregatirea unei probe oarbe cu toate operatiile de la tehnica
de lucru. Extinctia masurata fata de apa trebuie sa fie sub 0,1. n caz
contrar, se purifica alcoolul (500 ml.EtOH, 5 g. KOH, 5 g. Zn granule se
fierbe o ora cu centrifugare la reflux. Se distileaza, culegnd distilatul
ntre 77 si 88C).
n serul proaspat, concentratia glicerinei libere este aproximativ
100 mg. / 100 ml.
Daca extinctia pentru proba de glicerol total (ET) depaseste 0,7
se reia oxidarea si developarea culorii cu 0,5 ml. supernatant la care se
adauga 0,5 ml. apa distilata.
Rezultatul extinctiei se nmulteste cu 2.

15