Citologie i Histologie

Practic

2010

Scopul cursului

Familiarizarea cu noiunile de
baz ale citologiei
Aspectele normale
Modificrile inflamatorii
Tumori

Citologia clinic: absent din

curricula medical din Romnia
Criteriile de malignitate celular
Corelarea noiunilor citologice cu
cele histologie i patologie
Aplicarea lor n diagnosticul
patologic
Acumularea noiunilor: patologia
chirurgical
Clinicianul: utilizarea informaiilor
pe care le primete de la patolog
buletinul histopatologic
buletinul citologic

Patologia chirurgical i nonpatologii

Acurateea rezultatului
depinde att de clinician
ct i de patolog
Cunoaterea de ctre
patolog a datelor clinice,
paraclinice i uneori a
procedurilor terapeutice
Avizai asupra limitei
specialitii lor

Raportul patologic
Document medical important
Descrierea concis a aspectelor macro/microscopice
relevante pentru caz
Se vor evita descrierile microscopice exhaustive
Se va evita jargonul histologic: nu are consecine clinice
Concentrat pe
diagnostic,
elemente de prognostic,
elemente cu importante n aplicarea terapie

Important colaborarea clinician-patolog!

Componentele raportului
Date clinice, relevante
pentru cazul respectiv si
care au implicaii n stabilirea
diagnosticului.
Decrierea macroscopic

localizare,
mrime,
culoare,
dimensiuni,
greutate

De preferin a se evita
comparaii plastice (ct o
cirea)

Componentele raportului

Diagnosticul histopatologic:
cel mai important capitol;
ex: Carcinom ductal infiltrativ
(varianta clasic) G2, pT2N1MX,

cod ICD-O:

Cateva precizri:
pentru clinician n majoritatea
cazurilor inutil
clinicianul este neinteresat de
tipul nucleilor, caracterul
citoplasmei

Comentarii: diagnostic diferenial,

interpretare, elemente prognostice
i cu impact terapeutic
Prezent: se merge pe utilizarea
unor fie standardizate (de raport
patologic) pentru fiecare organ i
tip de leziune (n special tumorale)

Biopsia
Fragmentul prelevat pentru
examinarea microscopic
Incizional:
prelev doar o parte din
leziune
Are rol diagnostic

Excizional:
prelevat ntreaga leziune
cu strat de esut normal
Are i rol terapeutic

Prelevare: cu bisturiul rece,

cauterul, acul, endoscopic
Atenie la cauter!

Recoltare
Fragmente multiple: se trimit
toate
Strivire cu pensa,
incluzionarea incorect:
artefacte
Fixarea imediat, fr
manipulare de ctre chirurg
La multe cazuri sunt necesare
metode adiionale (speciale)
Atenie: cand se dorete
examen extemporaneu nu se
pun piesele n solutii fixatoare

Examenul intraoperator
(extemporaneu)

Pentru examenul extemporaneu

nu se pun fragmentele n fixator
Important/dificil
Dureaza n medie 15 minute
Utilitatea examenului
extemporaneu:
Stabilirea diagnosticului iniial (n
special pentru tumori) care va
influena managementul actului
operator
Evaluarea limitelor de excizie

Diagnosticul microscopic
sofisticat este inutil
Fals negative: erori de
interpretare, absena elementelor
diagnostice
Diagnostic de certitudine este
ntotdeauna cel de la parafin

Prelucrarea primar
Laborator n proximitatea slii
de operaie
Specimen proaspt, trimis
imediat
Transport: container de plastic
NU se adaug lichide!
ntrzierea trimiterii: pstrare la
4 C (ore, nu zile)
Implica urmatoarele etape:

fixare
incluzionare
sectionare
colorare

Fixarea
Este necesar pentru a prevenii autoliza; pstreaz structurile
tisulare
Fixatorul universal: se obine prin diluia formaldehidei
(concent 37%) : 1 parte formaldehid n 9 pri ap distilat)
rezultnd formalina:
Formalina: reprezint soluia de 4% formaldehid
Timpul optim de fixare: 24 ore
Volumul de fixator: 10x volumul piesei

Caracteristici:
compatibil cu majoritatea coloraiilor speciale
permite pstrare specimenelor perioade ndelungate
Excepie: cand se dorete efectuarea imunohistochimiei (IHC): timpul
maxim de fixare 48 ore

Retracia: datorat esutului muscular, nu formalinei (e.g.

Biopsii colice, retracie 57%)
Alte soluii fixatoare: Zencker (B5), Bouin, Carnoy
Volumul de fixator: 10x volumul piesei

Fixarea - proceduri
T camerei
4 C (formalina nghea la
-3 C)
Viteza de penetrare a
fixatorului: 1 mm/h
Biopsia: 1,5/0.3 cm
Microunde: 300 MHz-300
GHz, 55 C, 1-2 min
(poate induce artefacte)

Incluzionarea
Se realizeaz prin utilizarea
parafinei (devine lichida la 56
grade C)
Pentru piesele operatorii este
foarte important identificare
marginilor piesei de
rezecie/excizie
obligatoriu se pun fragmente din
margini

n cazul proliferrilor tumorale

foarte important: relaia cu
limitele fragmentului tisular
examinat
obligatoriu fragment din zona de
maxim invazie (identificat
macroscopic)

1. orientarea

2. msurarea

3. Marcarea marginilor cu cerneal

4. specimenul, evaluarea ,marginilor

Coloraii speciale
Coloraia hematoxilineozin HE este coloraia
uzual
Informaii interpretate de
patolog/citolog
Foarte important cum se
realizeaz aceast
coloraie

Majoritatea pieselor
necesit doar seciuni
colorate HE
n anumite situaii sunt
necesare alte coloraii.

Metode de colorare
Morfologice (HE, tricrome)
Histochimice (PAS, AA, AT)
Histoenzimologice

Imunohistochimice
Metode cantitative

Citologice
Coloraia Papanicolaou (PAP),
Albastru policrom Tanin (APT)Drgan,
May-Grunwald-Giemsa (MGG)

Metode histochimice

Reacia PAS: glicogen,

glicoproteine, fungi, parazii,
mucine neutre
Impregnri argentice
fibre de reticulin
celule neuroendocrine
neuroni i celule gliale

Coloraii pentru microorganisme

(Giemsa pt helicobacter pylori)
Coloraii pentru amiloid (rou de
Congo)
Coloraii pentru fibre elastice
(orcein)
Coloraii pentru mucine: albastru
alcian (AA), sau AA-PAS
Sialomucine : AA+ la pH 2,5 i
negative la 0,5
Sulfomucine : AA+ la ph 0,5 i 2,5

Histoenzimologie
Aplicare considerabil
redus
Tehnici complexe
Necesit material
proaspt
Enzimele pot fi
identificate i IHC
Aplicare:
Miopatii
Megacolon (Ach-aza)
Seria mieloid:
cloroacetat esteraza
Fosfataza acid

Imunohistochimia

Esenial calitatea procesrii

primare
Important acurateea tehnicii
Necesar standardizarea
procedurilor
Preparate control
Stabilirea indicaiilor :
n special pentru tumorile slab
difereniate
tumori cu origine neprecizat
evaluarea ratei de proliferare
evaluarea receptorilor

Panel de anticorpi:
Imunofenotipizare primar
Imunofenotipizare secundar

Semnaleaz diferenierea celular

tisular
Pre de cost relativ crescut
Utilizare limitat n citologie

HER-2/neu

ChrA

ER

Ki67

Imunohistochimia
metode cantitative
Msurarea obiectiv a
aspectelor
microscopice
identificate prin IHC
Utilizare:
Aprecierea indexul
proliferativ: Ki67
Densitatea celulelor
pozitive pentru receptori
hormonali (ER, PR, AR
etc)

Valoare prognostic
pentru rata de succes
la terapia adjuvant.

Microscopia electronic
Utilizat n general pentru
cercetare
Identificarea histogenezei i
diferenierii
Patologia renal, tegumentar
Contribuie diagnostic:

Tu celule granulare
Tu teac nerv periferic
Histiocitoz Langerhans
Mezoteliom
Carcinoid
Carcinom cu celule mici

Limitele ME
Examinarea de
fragmente foarte mici
Absena criteriilor de
mare specificitate
Erori de interpretare:
esut non-neoplazic inclus
Dificulti de evaluare
spaial

Cursul urmtor:

Diagnosticul citologic.
Buletinul citologic.
De unde facem citologie?
Cum se efectueaz un frotiu?
Criteriile de malignitate celular.
Clasificarea Papanicolaou a frotiurilor.