Mdulo 5

ANTIBIOGRAMAS

Testagem da resistncia de isolados bacterianos a antibiticos. Mtodo da

difuso em agar com discos (tcnica de Kirby-Bauer)

Tocar com uma ansa em quatro ou cinco colnias bem isoladas, de aparncia
semelhante e transferir o crescimento assim obtido para um tubo contendo 5 ml de caldo
nutritivo. Incubar o tubo a 35 C durante 24 h. Ajustar a turvao do meio, com caldo
nutritivo esterilizado, at igualar a dum padro McFarland 0,5 (correspondente a 106
clulas/ml). Inundar as placas com Agar de Mueller-Hinton com a suspenso. Esperar cerca
de 30 min para que o agar absorva algum do lquido. Deitar fora o excesso para um gobl
com lixvia (trabalhar com luvas). Secar bem as placas (1 2h). Os discos so aplicados por
meio de pina esterilizada ou aplicador. Aplicam-se 6 discos por placa, com intervalos
suficientes para que no haja sobreposio das respectivas zonas de inibio (devem estar
a, pelo menos, 15 mm da borda da placa e com um espaamento de, pelo menos, 20 mm
entre eles). Para cada isolado, preparam-se duas placas, totalizando assim 12 discos por
placa. Deixa-se secar as placas durante mais 30 min. Incuba-se a 35 C, por 16 18 h.
Medem-se as zonas de inibio por meio duma craveira digital, arredondando as leituras
at ao milmetro, incluindo o dimetro do disco. As medies devem ser feitas a olho nu,
por visualizao da parte de trs da placa, com boa iluminao, contra um fundo negro
no reflector. Para a interpretao dos resultados, consultar as tabelas disponibilizadas na
aula.