Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Cap 9 1 Pagini 133 147 PDF
Cap 9 1 Pagini 133 147 PDF
Absorbanta (mAU)
60
55
50
45
40
35
9
7
30
25
20
10
11
14
1
56
15
12
10
13
5
0
0
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
T im p (m in )
Semnalul cromatografic este numit pic cromatografic, a crui form red de fapt o
imagine a echilibrelor de distribuie ale moleculelor de analit ntre faza mobil i faza
staionar, care se petrec n coloana cromatografic. Parametrii matematici ai unui pic
cromatografic ideal (picul 5 din Fig. 9.1, apropiat de forma Gauss) sunt dai n figura de
mai jos, care la rndul lor sunt utilizai la determinarea aa-numiilor parametri
cromatografici ai unei separri.[85]
134
Semnal
15
14
13
12
11
Punct de inflexiune
10
9
8
Y0
7
6
w1/2
5
4
3
Y0/2
Y0/10
Linia de baz
w10%
1
0
7.2
7.3
7.4
7.5
tR 7.6
7.7
7.8
7.9
8.0 min
w
Fig. 9.2. Parametrii unui pic cromatografic ideal (de form Gauss).
Y = Y0 e
4( t t R ) 2
ln 2
w1/ 2
(9.1)
Y0
2( t t R ) 2
1+ [
]
w1 / 2
(9.2)
unde, de asemenea: Y0 este nlimea picului pentru t = tR, iar w1/2 este limea picului la
jumtatea nlimii (semi-lime).[87] Forma celor dou funcii nu difer foarte mult, aa
dup cum se poate observa din regresiile respective aplicate unui pic real n figura
urmtoare, prelucrat din cele redate n Fig 9.1.
135
Gauss
65
60
Semnal
55
Semnal
Cauchy
65
60
50
55
50
45
45
40
40
35
35
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
5
0
0
4.3
4.4
4.5
4.6
4.7
4.8
4.9
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
4.3
5.5
4.4
4.5
4.6
4.7
4.8
4.9
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
Fig. 9.3. Modelarea unui pic cromatografic real (punctat gros) prin
funcia Gauss, respectiv prin funcia Cauchy (linie continu).
Pentru un pic simetric de tip Gauss, limea acestuia msurat ntre punctele de
inflexiune este 2. Cum punctele de inflexiune sunt mai dificil de evideniat, se prefer a
se msura limea picului la jumtatea nlimii acestuia, notat mai sus cu w1/2. Intre w1/2
i exista relaia simpl:
(9.3)
w1/2 = 2,35
Aria picului (A) care este o mrime cantitativ, ce depinde de cantitatea de analit
injectat n coloana cromatografic, se obine din integrarea funciei Gauss:[88]
A=
Y0 w1 / 2
2
ln 2
(9.4)
Y0 w1 / 2
2
(9.5)
va integra picul cromatografic. Aceast situaie este ilustrat n figura de mai jos, cu
alegerea greit i corect a punctelor de integrare.
Semnal
Pic
cromatografic
de integrat
Y
X
Linia medie
de baz
tR (min)
Fig. 9.4. Fereastra unei poriuni dintr-o cromatogram n care picul cromatografic
este corect integrat prin alegerea punctelor X i Y n linia media a semnalului de baz
(ales neconstant cu drift).
(9.6)
A pic,i
(9.7)
Qinjectat
analit , i
137
Atunci cnd picul cromatografic crete ca arie, poriunea de arie rezultat prin
integrarea mai puin corect, ilustrat n figura de mai sus, devine nesemnificativ n
raport cu aria acestuia, astfel c n practic nu se mai mrete imaginea semnalului de
fond pentru a gsi punctele corecte de integrare.
De foarte multe ori, forma picurilor este asimetric. In acest caz, alegerea unei
funcii utile n descrierea formei picului cromatografic este mai dificil. De regul,
asimetria se datoreaz unei aa-zise cozi (tailing) a picului cromatografic, care poate fi
n faa picului (pre-tailing) sau n spatele picului (post-tailing).[89]
Simetria unui pic cromatografic (notat cu Sim) poate fi exprimat n mai multe
moduri. Dac aceasta se msoar n punctele de inflexiune a curbei picului redat n Fig.
9.2, Sim devine:
Sim =
'
(9.8)
Simetria poate fi msurat mai exact la jumtatea nlimii picului cromatografic, atunci
cnd w1/2 este mprit de verticala din maximul picului n dou pri: B n partea dreapt
i C n partea stng. In acest caz simetria devine:
Sim =
B
C
(9.9)
(9.10)
(9.11)
t t
t'
k' = R 0 = R
t0
t0
(9.12)
138
( t R , j t R ,i )
0,5 ( w i + w j )
= 2
( t R , j t R ,i )
(9.13)
( w1 + w 2 )
In felul acesta se poate deduce c minimul lui Rs pentru ca cele dou picuri
cromatografice i i j s fie separare n linia de baz este 1. Dac picurile nu sunt
separate, msurarea pentru wi i wj nu poate avea loc. innd cont c: wi = 2w1/2,i i wj =
2w1/2,j, formula rezoluiei devine:
Rs =
t R , j t R ,i
(9.14)
w 1 / 2, i + w 1 / 2, j
t 'R , j
t 'R , i
k' j
k 'i
(9.15)
t R ,i 2
)
i
(9.16)
t R ,i
w 1 / 2, i
)2
(9.17)
Rs =
N k 'i
( ij 1)
4,7 k 'i +1
(9.18)
Ecuaia de baz pentru rezoluia ntre 2 picuri cromatografice inegale ca arie, notate cu i
i j poate fi propus prin modificarea celei de mai sus, n forma:
Rs =
N k'
( ij 1)
4,7 k '+1
(9.19)
, unde k ' este media aritmetic a celor doi factori de capacitate pentru analiii i i j, ki i
respectiv kj. Cu aceste precizri, rezoluia dintre cele dou picuri cromatografice devine:
Rs =
4,7
k 'i
k 'i + k ' j +2
Maximul raportului
k 'i + k ' j
k 'i + k ' j +2
(9.20)
pentru k mare, picurile cromatografice devin foarte largi, cu timp de retenie foarte mare,
uneori greu de integrat. De aceea, valoarea lui k ntre 1 i 20 este considerat ca
acceptabil.
9.3. Teoria talerelor
Aceasta teorie este una dintre cele mai importante teorii n modelarea procesului
cromatografic, iniiat de Martin i Singh i apoi dezvoltat de Said.[91] Teoria talerelor
descrie practic curba de eluie (cromatograma) unui anumit compus chimic. Aceast
teorie propune c un analit participant la un proces cromatografic particip la un echilibru
de repartiie (distribuie) ntre faza mobil i faza staionar, pe o poriune mai mult sau
mai puin ngust din coloana cromatografic. Aceast imagine (modelare) conduce
imediat la o conexiune cu teoria distilrii, care consider c o coloan este structurat
ntr-un numr de celule sau talere, numite n cazul procesului cromatografic talere
teoretice. Fiecare taler are o lungime finit, n care analitul se gsete (staioneaz) un
anumit interval de timp. Cu ct un taler are dimensiunea mai mic, cu att mai eficient
este procesul de partiie al analitului ntre cele dou faze; cu micorarea dimensiunii unui
taler, numrul acestora atribuit unei coloane cromatografice crete. Ca urmare, numrul
de talere teoretice atribuit unei coloane cromatografice a fost identificat cu eficiena
coloanei.
Teoria talerelor arat c limea unui pic cromatografic (dispersia unui pic
cromatografic) este invers proporional cu rdcina ptrat a eficienei, sau altfel spus:
cu ct eficiena este mai mare, cu att picul cromatografic este mai ngust.
Pentru aceasta s considerm echilibrul de repartiie cromatografic a unui analit
X, ntre o faz mobil (notat cu indicele m) i o faz staionar (s):
Xm
Xs
(9.21)
140
Acest echilibru este caracterizat de constanta respectiv de echilibru (K), dat de ecuaia:
K=
[ X]s
[X]m
(9.22)
Prin [X] este notat concentraia analitului X n faza staionar sau mobil indicat prin
indicele respectiv. Prin diferenierea ecuaiei 9.22 se va obine urmtoarea relaie:
d[X ]s = K d[X ]m
(9.23)
Taler p
Taler (p+1)
Faza
staionar
vs
[X]s,p-1
Faza
staionar
vs
[X]s,p
Faza
staionar
vs
[X]s,p+1
Faza
mobil
vm
[X]m,p-1
Faza
mobil
vm
[X]m,p
Faza
mobil
vm
[X]s,p+1
Prin dv se noteaz variaia de volum de faza mobil ce trece din talerul (p 1) n talerul
p, iar dm reprezint variaia de mas de analit din talerul p. Variaia dm reprezint
diferena de mas de analit X, atunci cnd volumul dv de faz mobil iese din talerul (p
1) i intr n talerul p. In acest caz se poate scrie:
dm = ([X]m, p 1 [X ]m, p )dv
(9.24)
(9.25)
(9.26)
141
d[X]m, p
dv
[X]m, p 1 [X]m, p
(9.27)
v m + vs K
Numitorul din aceast ecuaie este definit ca volumul talerului i este notat cu vt. Numrul
de talere () din coloana cromatografic avnd volumul V devine:
=
V
V
=
v t v m + K vs
(9.28)
dV
v m + K vs
(9.29)
= [X ] m,p1 [ X] m,p
(9.30)
[X]0 e p
p!
(9.31)
L
N
(9.32)
nlimea redus a talerului teoretic este dat de raportul H/dp, unde dp este
diametrul particulelor fazei staionare.
9.4. Ecuaia van Deemter
Teoria talerelor red din punct de vedere cantitativ o imagine asupra proceselor
care au loc n coloan i exprim calitatea unei coloane prin numrul de talere teoretice
142
Fig. 9.6. Reprezentarea lrgirii frontului de analit la trecerea prin coloana cromatografic.
(9.33)
Aceast relaie simpl arat c mprtierea zonei este proporional cu lungimea porilor
i rdcina ptrat a numrului acestora.
Din teoria statistic se tie c deviaia standard nu este o mrime aditiv, n cazul
influenei mai multor factori. In schimb, ptratul deviaiei standard este aditiv i este
demonstrat de teoria propagrii erorilor (vezi cap. 1.5):
2 = i2
(9.34)
143
, unde i reprezint deviaia standard pentru fiecare din cele 3 procese discutate ca
influennd lrgirea zonei moleculelor de analit.
Termenul procesului de difuziune obinuit (d) este definit prin ecuaia de
difuziune a lui Einstein:
d2 = 2 D t
(9.35)
t=
L
u
(9.36)
2DL
u
(9.37)
L
dp
(9.38)
Deviaia standard atribuit acestui proces (E) poate fi derivat din ec. 9.33:
E = dp (
L 1/ 2
) = (L d p )1 / 2
dp
(9.39)
L
u
t=
(9.40)
t=
(1 ) L
u
(9.41)
Numrul de desorbii (ndes) care au loc n acest interval de timp va fi dat de intervalul de
timp, dat de relaia 9.41, mprit la 1/k2:
(1 ) L 1
u
k2
n des =
(9.42)
2 (1 ) L 1
u
k2
n des =
(9.43)
In intervalul de timp n care o molecul de solut este n faza staionar, zona central a
frontului solutului se deplaseaz n fa cu lungimea de u/k2. Folosind ec. 9.33 prin
substituia lui l cu u/k2 i n cu expresia de mai sus, se va obine deviaia standard (k)
caracteristic procesului de transfer de mas ntre cele dou faze (contribuia de neechilibru):
k = [
2 (1 ) L u 1 / 2
]
k2
(9.44)
Aceast ecuaie arat c prin creterea vitezei de curgere u (imprimat de faza mobil),
efectele de ne-echilibru cresc, msura acestei creteri fiind dat de k.
Introducnd expresiile lui d, E i k n rel. 9.34 se obine expresia:
2 = L [d p +
2 (1 )
1
u + 2D ]
k2
u
(9.45)
2
L
(9.46)
145
H = dp +
2 (1 )
1
u + 2D
k2
u
(9.47)
Minimul nlimii talerului, Hmin, se stabilete din condiia dH/du = 0 i conduce la expresia
vitezei fazei mobile pentru care valoarea nlimii talerului teoretic este minim:
u =[
k 2 D 1/ 2
]
(1 )
(9.48)
Ecuaia 9.47 este cunoscut ca ecuaia van Deemter i scris n forma simplificat:
H=A+
B
+ Cu
u
(9.49)
Hmin
A
uoptim
u (cm/s)
Reprezentarea grafic a acestei ecuaii este dat n figura de mai sus. Din
aceast dependen a nlimii talerului teoretic (H) determinat din mrimi ale separrii
cromatografice funcie de viteza fazei mobile (u) se stabilete valoarea optim uoptim
pentru care H este minim, i prin urmare separarea are o eficien maxim.
9.5. Semnificaia cinetic i termodinamic a factorului de capacitate
Factorul de capacitate pentru un compus i (ki) este definit ca raportul cantitilor
de analit n faza staionar i faza mobil, la un moment dat. Experimental valoarea sa
este stabilit prin msurarea parametrilor cromatografici de retenie, dai de ec. 9.12. Din
punct de vedere cinetic, acesta poate fi exprimat de ecuaia urmtoare, derivat din
146
n i,s
n i, m
[i]s Vf .s.
= Ki
[i]m Vf .m.
(9.50)
, n care:
ni,s numrul de moli de analit i din faza staionar;
ni,m numrul de moli de analit i din faza mobil;
Vf.s. volumul fazei staionare din coloana cromatografic;
Vf.m. volumul fazei mobile din coloana cromatografic;
- raportul de volume al celor dou faze (Vf.s./Vf.m.);
Ki constanta de echilibru a partiie analitului i ntre faza mobil i faza
staionar.
Din punct de vedere termodinamic trebuie inut cont de relaia general a
constantei de echilibru Ki:
Ki = e
G 0
RT
(9.51)
G reprezint variaia de entalpie liber standard Gibbs pentru transferul speciei i din
faza mobil n faza staionar i la rndul su poate fi scris n funcie de variaie de
entalpie standard (H0) i variaia de entropie standard (S0):
G 0 = H 0 T S0
(9.52)
ln k 'i = ln +
S0 H 0 1
R
R T
(9.53)
147